双抗原夹心法检测抗HIV-1/2总抗体方法的建立和评价

目的 进一步提高HIv感染诊断试剂的敏感性。方法 以人工合成的HIv—1 gp41．1(sP1)、gp41．2(sP2)、gp120(sP3)、P24(sP4)和HIV—2gp36(sP5)5条多肽，采用双抗原夹心酶链免疫吸附试验(ELISA)原理，以sP1、sP3、sP4和sP5混合包被酶标板作为因相抗原，辣根过氧化物酶标记sp1、sp2、sP4和sP5多肽为标记物，建立了检测抗HIV—1／2总抗体的双抗原夹心ELISA法。结果 检测卫生部药品生物制品检定所第2代40份质控参比血清，其特异性和灵敏度均为100％，高于间接ELISA法(特异性为90％，灵敏度为65％)。检测210份其他病种患者血清均为阴性，与雅培HIVAB试剂比较检测如份健康献血员血清和88份HIv感染者血清，符合率为100％。结论 本方法特异性强、敏感性高，操作简便，适用于献血员的筛选和临床HIv感染的检测。     

HIV-1/2抗体和P24抗原联合检测试剂盒的研制与评价

目的研制HIV-1／2抗体和P24抗原联合检测酶免疫试剂盒并评价其实用性。方法联合使用基因工程HIVI／2型抗原和抗HIVP24单克隆抗体包被酶联反应板，以辣根过氧化物酶标记的HIVI／2型抗原和生物素化的兔抗HIVP24抗体作为标记物，研制了联合检测HIVI／2抗体和P24抗原的ELISA诊断试剂，并对其特异性、敏感性、稳定性等进行评价和临床考评。结果检测P24抗原质控品的灵敏度可达0．2ng／ml；与雅培公司试剂比较检测78份AIDS患者血清和85份正常人血清、对照检测中国药品生物制品检定所研制的HIV参比血清，特异度和灵敏度均为100％。临床考核检测12051份各种血清，灵敏度为100％（543／543），特异度为99．48％（11448／11508）。试剂在37℃放置6d后，试验结果无明显差异。结论本试剂盒具备特异度强、敏感度高、稳定性好、操作简便等优点，可以一步检出HIV特异性抗体和HIVP24抗原，缩短了HIV感染的检测窗口期，适用于HIV感染的实验室诊断和流行病学调查。     

重组抗原Em18双抗原夹心酶联免疫吸附试验法检测泡球蚴抗体的建立及初步评价

目的 建立双抗原夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测泡状棘球蚴抗体的方法.方法 重组抗原Em18(rEm18)作为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记rEm18抗原为检测抗原,建立检测人血清中泡状棘球蚴抗体的双抗原夹心ELISA方法;应用方阵滴定法对包被抗原、酶标抗原等条件进行优化,并对该系统的灵敏性、特异性、重复性进行初步分析评价.结果 rEm18最佳包被浓度为2.5μg/mL,HRP标rEm18稀释度为1∶800.灵敏度为92％(46/50),特异性为94％(47/50),假阴性率为8％ (4/50),假阳性率为6％ (3/50),批内变异≤9.55％,批间变异≤14.79％,与Em2-ELISA试剂盒检测结果有良好的一致性.结论 本研究成功建立了快速检测泡球蚴特异性抗体的ELISA法,其可以用于人泡球蚴病的早期诊断.     

检测抗丙型肝炎病毒总抗体的双抗原夹心法的建立

以丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）结构区和非结构区基因工程表达抗原及人工合成多肽包被酶标板，用辣根过氧化物酶标记抗原，建立了检测血清中抗－ＨＣＶ总抗体的双抗原夹心法。与普遍采用的检测抗－ＨＣＶＩｇＧ的间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）比较，其灵敏度（１∶１２８）稍高于间接法（１∶６４），特异性相同，均为１００％。该法可同时检测抗－ＨＣＶ各类抗体，使检出率提高１０％。     

双抗体夹心ELISA法检测相思子毒素

目的：建立相思子毒素（abrin）的酶联免疫检测方法, 为abrin临床诊断、中毒治疗、法医学鉴定等应用领域提供技术基础和参考依据.方法：采用双抗体夹心ELISA法来检测微量abrin.结果：该法检测abrin线性范围为0.25 ～125 μg/L, 线性回归方程为Y=0.51015X＋0.4153（r=0.9880, n=10,P＜0.0001）, 检测下限为0.25 μg/L.不同浓度蓖麻毒素（ricin）、葡萄球菌肠毒素B（SEB）对检测结果基本无干扰.该法能用于abrin毒素污染水样、土样、食品、血液等模拟样品的分析, 相对标准差为3.52% ～4.86%, 具有较好的重现性.结论：成功地建立了双抗体夹心ELISA法检测abrin, 将多克隆抗体的强富集能力和单克隆抗体（mAb）的特异性结合起来, 提高检测的灵敏度和特异性, 可适用于各种微量abrin样品的分析.     

合成肽抗原抗人免疫缺陷病毒1/2型抗体酶联试剂盒的研制

根据人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）的基因结构和氨基酸序列，采用固相法合成了ＨＩＶ－１ｇｐ４１（ＳＰ１）、ｇｐ１２０（ＳＰ２）、ｐ２４（ＳＰ３）和ＨＩＶ－２ｇｐ３６（ＳＰ４）的４条多肽，混合包被酶标板做为固相抗原，采用间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），建立了检测抗－ＨＩＶ－１／２ＩｇＧ抗体的酶联诊断试剂盒。检测卫生部药品和生物制品检定所提供的４１份质控参比血清，其特异性、敏感性均为１００％，变异系数小于１０％。检测１８６份其它病种病人血清均为阴性，与华怡、巴斯德、金豪等公司的ＨＩＶ诊断试剂比较检测了９０份ＨＩＶ感染者和１４０份正常人血清，除与华怡试剂的阴、阳性及总符合率分别为９９２９％（１３９／１４０）、９８９０％（９０／９１）和９９５７％（２２９／２３０）外，其余均为１００％。３７℃放置４天后试剂的检测结果不受影响。     

检测抗伤寒杆菌抗体的双抗原夹心ELISA法

<正>目前肥达氏试验结果仍作为伤寒的诊断依据,缺点是敏感性低和特异性差。国内学者对此曾作改进,但仍欠理想。我们应用超声粉碎法制备的伤寒杆菌可溶性抗原,建立了双抗原夹心ELISA法用于检测血清中抗伤寒杆菌抗体,现报告如下。     

新型冠状病毒抗原检测双抗体夹心ELISA方法的建立

目的:探索即时、快速、准确的新型冠状病毒(2019-nCoV)抗原检测方法,提高新型冠状病毒感染者检出率,并建立2019-nCoV的S蛋白特异性检测方法。方法:本研究利用ELISA方法对前期研发的2019-nCoV基因工程单克隆抗体(mAb)进行配对检测,从中挑选出最优检测抗体组合,建立了新型冠状病毒抗原检测双抗体夹心...     

丙型肝炎病毒抗体双抗原夹心法化学发光检测的应用

目的 探讨丙型肝炎病毒抗体双抗原夹心法化学发光检测的应用.方法 利用重组融合HCV抗原分别标记生物素及吖啶酯,建立起双抗原夹心法化学发光检测试剂盒,与间接法同时检测了866例阴性标本,440例阳性标本,3套BBI阳转血清盘.结果 双抗原夹心法与间接法灵敏度分别为100％、100％,特异性分别为99.9％、98.7％,特异性差别1.2％(95％可信区间:0.5％～2.1％),BBI阳转血清相对敏感性系数为-1.33.结论 双抗原夹心法特异性及早期感染检测能力优于间接法,将会成为丙型肝炎病毒抗体检测的主要方法.     

双抗原夹心法ELISA在检测抗肾综合征出血热总抗体中的应用

目的建立可以检测不同来源血清中抗汉坦病毒抗体的简单、灵敏的方法。方法汉坦病毒核蛋白重组表达纯化后，同时作为捕获作用的固相抗原和检测作用酶标记抗原，建立检测血清中抗汉坦病毒总抗体的双抗原夹心法ELISA法，并与常用的IFA法进行比较分析。结果检测不同血清时特异性为100％，敏感性高于IFA法4～8倍。且不需考虑更换检测试剂，不同来源的血清样本对检测结果没有明显的影响。结论本方法操作简单，成本低，具有较高的敏感性和特异性，适合用于汉坦病毒感染的监测、调查和临床诊断以及宿主动物间病毒感染流行的调查与监测。     

乙型肝炎病毒e抗原的纯化及其在人血清抗体检测中的应用

目的方法利用ＺｈｏｕＪｉａｎ教授提供的重组质粒ＤＮＡｐＢＶ２２０／ｅＡｇ，转染ＤＨ５α细胞，经３０℃培养３小时，４２℃培养６小时温度诱导后，提取乙型肝炎病毒ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）。经ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ层折纯化后免疫打点分析，收集阳性蛋白。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，考马斯亮蓝Ｇ２５０染色，显示为单一的蛋白带，用免疫印迹法（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）和免疫打点（ｌｍｍｕｎｏｄｏｔ）法，确定表达产物的特异性。将纯化的ＨＧｅＡｇ用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和免疫条。方法基检测人血清中的相关抗体。结果经４９例乙型肝炎病毒ｅ抗体（ＨＢｅＡｂ）阳性病人血清检验证实了其特异性。结论免疫条方法较ＥＬＩＳＡ方法更敏感、特异。     

两种不同方法检测HIV抗体结果的比较

目的 对化学发光和酶联免疫法(ELISA)检测HIV抗体的方法进行评价,比较检测结果的差异,为HIV初筛的方法的选择和临床应用提供参考.方法 以HIV抗体确认实验结果为金标准,对3000例我院就诊的患者同时应用两种方法检测,对两结果进行比较,评价两种检测方法筛查HIV感染者的特异性、灵敏度.结果 ELISA检测法阳性率为0.93％,特异性为99.93％,灵敏度为89.66％,化学发光法阳性率为1.03％,特异性为99.93％,敏灵度为100％.结论 两种方法均适合HIV的初筛,都具有较高的特异性,化学发光法的灵敏度要优于ELISA方法.     

灵敏的甲状腺微粒体抗体酶联免疫吸附分析的建立

甲状腺微粒体抗体（ＴＭＡｂ）或称甲状腺过氧化物酶抗体（ＴＰＯ－Ａｂ）已广泛用于人类甲状腺自身免疫性疾病的诊断，但粗提的人甲状腺微粒体制备物含有残留的甲状腺球蛋白（ＴＧ）和其它膜抗原，影响方法的灵敏度，我们采用亲和层析的方法，得到纯度较高的ＴＭ抗原，建立了灵敏的ＴＭＡｂ－ＥＬＩＳＡ。该方法的批内变异系数为３．２±０．０１％（ｎ＝８０），批间变异系数为８．３±０．０２％（ｎ＝８）；临床甲亢病人的阳性率为８０．０％（ｎ＝４６），与国内同类放免试剂盒相比，对Ｇｒａｖｅｓ病的阳性检出率提高２０％（ｎ＝２０），桥本氏甲状腺炎的阳性检出率提高１１．７％（ｎ＝２６）。     

Development of an ELISA for nitrazepam based on a monoclonal antibody

We report the production of a specific monoclonal antibody against Nitrazepam (NZP). First, the hapten 7-aminonitrazepam (7-ANZP) was synthesized, then the hapten was coupled with bovine serum albumin and ovalbumin by the diazotization method, and used as immunogen and coating antigen. Factors affecting binding, ionic strength, pH, and methanol concentration in phosphate-buffered saline, were optimized. The monoclonal antibody had a satisfactory IC₅₀ of 0.2 ng/mL for NZP. The cross-reactivities with other analogs were all lower than 0.1% except for 23% with 7-NZP, which suggested that the enzyme-linked immunosorbent assay method possessed high specificity. The recoveries were in the range of 84–95%, indicating that the method could be applied for the detection of NZP in urine.     

细胞酶联免疫吸附试验在检测噬菌体阳性克隆中的应用和改进

目的：通过对影响细胞ELISA的关键条件和步骤进行优化和改进，以降低实验假阳性率，提高敏感性。方法：THP-1细胞接种96孔培养板，分别用脂多糖（LPS）刺激或不刺激作为处理组和对照组，将通过噬菌体展示技术筛选获得的噬菌体分别与处理组及对照组细胞作用，洗脱未结合的噬菌体，加入HRP标记的抗M13单克隆抗体，分别用酶标仪和Kodak IS 2000R数码成像系统检测细胞与短肽的结合情况。并针对细胞的特性，在细胞的准备、固定、孵育和洗涤等关键步骤进行改进。结果：酶标仪和数码成像系统检测分别得到6个和8个可与细胞高亲和力结合的阳性噬菌体克隆，经过免疫荧光实验证实数码成像系统检测得到的8个阳性克隆均与细胞结合，并且数码成像系统多次测量值具有很好的重复性。结论：本方法为蛋白质与完整细胞的亲和活性研究提供了有效的实验方案，具有较好的应用前景。     

两种ELISA 试剂盒对我国单采血浆中水痘-带状疱疹病毒中和抗体滴度的测定和比较

目的采用两种不同的检测抗水痘一带状疱疹病毒（VZV）中和抗体间接ELISA法试剂盒,对我国单采血浆中vZv特异性免疫球蛋白（VZIG）的效价进行测定,比较两种试剂盒测定结果的相关性和血浆筛查的适用性,并分析利用国内单采血浆研发生产VZIG的可行性。方法随机选取182份单采血浆样品,100倍稀释后,使用Virion／Serion和VaccZyme／BindingSite两种商品试剂盒同时对样品进行测定,根据评估系统公式或曲线方程计算每份样品中VZIG的效价;采用Pearson乘积矩相关性方法对两种试剂盒的线性关系进行统计学分析。结果（1）VZIG高于10IU／ml的血浆样品数量为13份（7％,Vifion）和16份（9％,VaccZyme）;②两种试剂盒检测结果之间的直线线性关系数R2为0．62（P〈0．0001）,变异系数为4％;（3）Virion与VaccZyme的工作范围有不同,前者对于低效价（0．2—0．4IU／m1）样本的测定具有很好的灵敏度,而VaccZyme适用于高效价血浆样本（〉150IU／ml）的检测。结论Virion与VaccZyme结果具有一致性和相关性;两种试剂盒的工作范围略有差异,VaccZyme较Virion更适用于高效价VZIG原料血浆的检测,可用于普通献浆员单采血浆中VZV中和抗体的筛查。     

乙肝表面抗原吖啶酯化学发光定量免疫分析方法的建立

目的建立一种定量检测乙肝表面抗原(HBsAg)的化学发光免疫分析方法并评估其性能。方法利用双抗体夹心法实验原理,用吖啶酯标记多抗,用生物素标记两株单抗,通过磁颗粒链霉亲和素-生物素系统分离固相和液相完成检测。结果本方法的检测限为0.05IU/mL,线性范围为0.05~150IU/mL,可溯源至国际标准品,批内变异小于5%,总变异小于8%,浓度高达106IU/mL的强阳样本未出现HOOK效应;5套阳转盘对雅培Architect、西门子centaur和强生VITROS发光试剂相对敏感系数分别是3、0、-3;国家参考盘检出达标;与雅培Architect比较,2000例临床样本检测灵敏度为99.77%,特异性为100%,一致性达99.95%。结论本研究建立的HBsAg定量检测试剂,各项指标均满足临床检测的要求,灵敏度高,特异性好,适合临床推广应用。     

Monoclonal antibodies to immunoglobulin G4 induce histamine release from human basophils in vitro

Monoclonal murine antibodies to human IgE, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, and IgA1 were prepared and their abilities to stimulate histamine release from human peripheral blood leukocytes were investigated. As expected, anti-IgE caused 8% to 76% histamine release from the leukocytes of each of 14 nonallergic donors. In one subject anti-IgE alone had no effect, but a 15% histamine release did occur after the subsequent addition of a goat anti-mouse IgG antiserum to crosslink cell-bound anti-IgE molecules. Anti-IgG4 alone caused 5% to 59% histamine release from the cells of four of 14 donors. Subsequent challenge with goat anti-mouse IgG caused an additional release of up to 15% of the basophil histamine, but only from leukocytes of donors responsive to anti-IgG4 alone. No histamine release was detected after stimulation by monoclonal antibodies to IgG1, IgG2, IgG3, IgM, or IgA1. The results of this study indicate that monoclonal antibodies to IgG4 as well as to IgE can stimulate human peripheral blood leukocytes to release histamine. These observations support the theory that antigen-IgG4 interactions can stimulate histamine release from human basophils.