托泊替康为主的联合化疗方案治疗恶性血液病21例分析

目的 探讨治疗难治或复发恶性血液病的联合化疗方案,评价托泊替康治疗恶性血液病的有效性和毒性。方法 以托泊替康为主,联合阿糖胞苷、安吖啶或环磷酰胺治疗2l例难治或复发的急性白血病、非霍奇金淋巴瘤(NHL)和高危骨髓增生异常综合征(MDS)患者。所有患者均接受1个疗程的拯救化疗。结果 完全缓解9例(42．9％),部分缓解4例(19．0％),1个疗程总有效率达61．9％。所有患者均出现严重的骨髓抑制,急性白血病粒细胞缺乏持续中位时间为12．6d,NHL为7．5d。有16例应用粒细胞集落刺激因子(G-CSF)治疗。全部患者均需成分输血支持治疗。有15例患者出现发热及感染,脏器毒性反应轻微。结论 以托泊替康组成的联合化疗对难治或复发恶性血液病的治疗有显著效应,毒性反应轻微。     

托泊替康与伊立替康单药治疗老年小细胞肺癌的疗效观察

目的：观察托泊替康（TPT）和伊立替康（CPT－11）单药治疗老年小细胞肺癌的疗效及安全性。方法：50例老年小细胞肺癌患者,随机分为两组,分别给予TPT 1．2mg／m2静脉点滴第1～5天;CPT－1165mg／m2第1天和第8天静脉点滴化疗,3周一个化疗周期,共进行2～6周期。治疗开始后随访6～20个月,记录两组患者的白细胞计数、延迟性腹泻、肝功能、血小板计数、贫血等资料,评价近远期疗效,观察二者在疗效和安全性方面的差异。结果：两组患者在完全缓解（CR）、部分缓解（PR）、稳定（SD）、进展（PD）、客观缓解率（ORR）、无进展生存期（PFS）和总生存期（OS）等方面无统计学差异（P＞0．05）;TPT组白细胞减少比例（64％）高于CPT－11组（32％）,有统计学差异（P＝0．048）,而CPT－11组延迟性腹泻发病率（64％）显著高于TPT组（20％）,差异具有统计学意义（P＝0．004）。结论：托泊替康和伊立替康单药治疗老年小细胞肺癌的近远期疗效无差异,伊立替康组骨髓抑制轻于托泊替康组,但胃肠道不良反应比托泊替康重。     

盐酸托泊替康治疗复发性晚期卵巢癌18例临床分析

目的 观察托泊替康（Topotecan)单药及联合用药对复发卵巢癌患者的疗效和毒性。方法 18例晚期上皮性卵巢癌患者分为3组：（1）单药组：Topotecan 1.2mg/m^2,静脉滴注,连续5d,30min内,每21d重复;6例次,14个疗程。（2）双药组：Topotecan 0.7mg/m^2静脉滴注,连续5d,30min内;顺铂20mg/m^2第2,3,4天,每28d重复;共4例次,7个疗程。（3）三药联合组：Topotecan 0.7mg/m^2静脉滴注,连续4d;紫杉醇100mg/m^2第1天静脉滴注,3h;顺铂20mg/m^2静脉滴注,第2,3,4天,每28d重复;共12例次,27个疗程。全组共18个疗程,平均2．7个疗程。结果 18例中,部分缓解3例（单药治疗1例;三药联合2例,其中1例为单药失败后改三药联合）,稳定5例,进展10例,有效率16．7％。主要不良反应为Ⅲ-Ⅳ度白细胞减少10例（55．6％）,发生在16个（33．3％）疗程;Ⅲ-Ⅳ度血小板减少6例（33．3％）,发生在8个（16．7％）疗程;Ⅲ度红细胞减少6例（33．3％）,发生在8个（16．7％）疗程上。结论 Topotecan系晚期卵巢癌经铂类及紫杉醇类药物治疗失败后的有效药物。单药Topotecan治疗失败后,可试用三药联合。     

拓扑替康作为二线化疗药物在卵巢癌化疗中的药物敏感性实验

背景与目的：晚期卵巢癌的治疗通常采用肿瘤细胞减灭术辅以化学治疗,常用的一线化疗方案为含顺铂的联合化疗,但绝大多数晚期卵巢癌容易复发,并产生耐药,本研究通过药物敏感性实验评价拓扑替康在复发性和对顺铂耐药的卵巢癌患者中应用的临床价值。方法：采用三磷酸腺苷生物发光法对41例新鲜卵巢癌组织标本(其中9例为复发癌组织标本)进行药敏实验,药物采用顺铂和拓扑替康,分别配制成1倍血浆峰值浓度。结果：41例卵巢癌组织标本中,对拓扑替康敏感的比率(80．5％)高于顺铂(51．2％),在21例对顺铂耐药的卵巢癌组织标本中有18例对拓扑替康敏感。结论：拓扑替康可以作为一种较好的二线化疗药物用于卵巢癌患者的化疗,特别是在对顺铂耐药的情况下。     

托泊替康联合奈达铂治疗宫颈癌引起急性肾功能衰竭1例分析

对1例化疗期间出现急性肾功能衰竭的宫颈癌病例进行分析,讨论在应用托泊替康联合奈达铂化疗过程中出现的严重不良后果.托泊替康与奈达铂联用有增加奈达铂肾毒性可能.因样本有限,普遍性有待进一步证实.     

适形放疗联合托泊替康化疗治疗铂类耐药的复发卵巢癌临床观察

  目的   观察三维适形放疗联合托泊替康化疗治疗铂类耐药复发卵巢上皮癌的疗效及不良反应。   方法   回顾性分析2008年6月至2011年6月山东省肿瘤医院收治的铂类耐药复发卵巢上皮癌患者42例,其中三维适形放疗联合托泊替康化疗22例（放化疗组）,单药托泊替康化疗20例（单纯化疗组）。放化疗组以15MV X线行三维适形照射,1.8~2.0 Gy/次/d,5次/周,总剂量45~65Gy,平均中位剂量为52.5 Gy。于放疗开始后第1周行托泊替康化疗2.0 mg/m2,第1、8、15天给药,每28天重复。单纯化疗组于第1周开始行托泊替康化疗4.0 mg/m2,第1、8、15天给药,每28天重复。   结果   放化疗组、单纯化疗组中位随访时间分别为18.5（2~37.7）个月、10.8（1.5~29.6）个月;总缓解率分别为42.1%（8/19）、11.1%（2/18）;临床获益率分别为68.4%（13/19）、22.2%（4/18）,两组比较有显著性差异（P < 0.05）。中位疾病无进展期分别为9.8、6.6个月,两组比较有显著性差异（P < 0.001）。中位生存期分别为19.7、12.5个月,两组比较有显著性差异（P < 0.05）。Ⅲ度消化道反应发生率分别为26.3%（5/19）、16.7%（3/18）;Ⅲ~Ⅳ级血液学毒性发生率分别为21.1%（4/19）、22.2%（4/18）,两组比较无显著性差异（P>0.05）。   结论   三维适形放疗联合托泊替康化疗对铂类耐药复发卵巢上皮癌有较好的疗效,且不良反应轻微,可作为复发患者的补救治疗措施。      

Notch3增强三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞对顺铂的敏感性

目的: 探讨干细胞相关因子Notch3在三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞对顺铂化疗敏感性中的作用。方法: 用Lipofectamine 2000试剂转染乳腺癌MDA-MB-231细胞并用G418筛选稳定转染细胞系,根据转染质粒不同分为MDA-MB-231-PCLE组(对照组)和MDA-MB-231-N3ICD组(过表达Notch3组),应用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测不同组间Notch3表达的差异;用CCK8法检测各组MDA-MB-231细胞对顺铂敏感性的差异;同时利用Lipofectamine 2000转染Notch3的小干扰序列,根据转染序列不同分为T47D-NC(对照组)和T47D-siNotch3(Notch3敲减组);采用免疫印迹检测Notch3表达改变后凋亡相关因子caspase-3的表达情况。结果: 与对照组比较,高表达Notch3后三阴性乳腺癌对顺铂的敏感性增加(P<0.05),同时caspase-3的表达随着Notch3的增加而增加,而在高表达Notch3的乳腺癌T47D细胞中,敲减Notch3的表达使caspase-3表达减少。结论: 高表达Notch3可以增加三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞对顺铂的敏感性,从而增强患者化疗疗效。     

沉默 AQP-5 对人结肠癌HT-29细胞的增殖、凋亡及其化疗敏感性的影响

目的： 探讨小干扰RNA（small interference RNA,siRNA）沉默水通道蛋白-5（aquaporin-5, AQP-5 ）的表达对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡及化疗药敏感性的影响。 方法： 以合成的AQP-5-siRNA序列转染HT-29细胞,采用Western blotting检测AQP-5-siRNA的转染效率,磺酰罗丹明（sulphorhodamine B, SRB）染色法检测各组细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测HT-29细胞的凋亡。分光光度法检测HT-29细胞caspase-3活性,real-time PCR和Western blotting检测AQP-5-siRNA转染后HT-29细胞中 PCNA和P53 在mRNA和蛋白水平的表达。选用5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）和顺铂（cisplatin,DDP）刺激AQP-5-siRNA转染细胞,SRB染色法检测细胞的增殖抑制率,以金正均法计算两药联合作用的Q值。 结果： 与NC-HT-29细胞相比,AQP-5-siRNA-HT-29细胞中AQP-5蛋白的表达显著下降（P<0.05）。SRB检测显示,AQP-5-siRNA-HT-29细胞的增殖抑制率显著增加\[（9.23±0.51)% vs 0,P<0.05\]。流式细胞术检测显示,AQP-5-siRNA-HT-29细胞的凋亡率显著升高\[（1081±1.32)% vs (0.99±0.18）%, P<0.05\];caspase-3活性显著升高\[（0.19±0.03） vs （009±0.01）, P<0.05\]。Real-time PCR和Western blotting结果显示,AQP-5-siRNA-HT-29细胞中PCNA mRNA和蛋白表达明显下降（P<0.05）,同时,P53 mRNA和蛋白表达明显上升（P<0.05）。AQP-5-siRNA+5-FU组细胞的增殖抑制率显著高于AQP-5-siRNA组和5-FU组\[（44.93±2.28)% vs (9.11±0.32）%、（25.68±1.71）%,均P<0.05\],AQP-5-siRNA+DDP组细胞的增殖抑制率显著高于AQP-5-siRNA组和DDP组\[（39.01±1.76)% vs (9.11±0.32）%、（18.47±1.25）%, P<0.05\],而且,AQP-5-siRNA与5-FU或DDP联用的Q值分别为1.38和1.51,均表现为协同作用。 结论： AQP-5-siRNA能抑制HT-29细胞增殖、促进其凋亡、并提高HT-29细胞对5-FU和DDP的化疗敏感性。     

小剂量依托泊甙对结肠癌细胞衰老的影响

目的:观察依托泊苷(etoposide, VP-16)对结肠癌细胞衰老的影响.方法:0～8 μg/mL VP-16作用结肠癌LS-174T细胞后,采用CCK-8(cell counting kit-8, CCK-8)法检测细胞增殖情况,FCM检测细胞凋亡及细胞周期改变,衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence-associated β-galactosidase,SA-β-gal)染色检测细胞衰老情况,Western 印迹法检测p53、p16、RB、p21WAF-1/CIP1和E2F1蛋白的表达.结果:VP-16可以抑制结肠癌LS-174T细胞的增殖,且呈浓度依赖性;大剂量(2和4 μg/mL) VP-16可以促进结肠癌细胞凋亡;小剂量(1 μg/mL)VP-16作用后,结肠癌细胞呈现典型的大而扁平的衰老形态,SA-β-gal染色阳性,细胞周期阻滞于G2/M期.Western 印迹法检测结果显示,小剂量VP-16可以促进p21WAF-1/CIP1蛋白表达,抑制E2F1蛋白表达,而对p53、p16和RB蛋白表达无影响.结论:大剂量VP-16可促进结肠癌细胞凋亡;小剂量VP-16可促进结肠癌细胞衰老,其作用机制可能与VP-16促进细胞p21WAF-1/CIP1蛋白表达及抑制E2F1蛋白表达有关.     

PI3K抑制剂与化疗联合对人结肠癌HT-29细胞生长抑制的观察

目的:研究磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)特异性抑制剂与化疗联合对人结肠癌HT-29细胞生长的抑制作用。方法:将对数生长期的HT-29细胞分为4组培养:空白对照组(培养液)、单药组(LY294002)、两药联合组(L-OHP+5-FU)和三药联合组(LY294002+L-OHP+5-FU)。LY294002、5-FU和L-OHP浓度分别为20、80和20μg/mL。收集培养8h的细胞,流式细胞仪检测凋亡率和细胞周期。收集培养24、48和72h的细胞,MTT法测定细胞增殖抑制率。免疫细胞化学SP法检测PI3K表达,倒置生物显微镜下观察和照像。结果:与对照组相比,三药联合组、两药联合组和单药组的细胞生长速度明显减慢,不同药物处理后细胞生长曲线呈现不同趋势。三药联合组PI3K蛋白表达率为(19.13±4.37)%,低于单药组(69.42±8.64)%和两药联合组(38.26±6.71)%,P<0.05。三药联合组细胞凋亡率为(27.50±2.53)%,高于两药联合组(9.93±3.58)%和单药组(5.77±2.21)%,P<0.01。结论:PI3K抑制剂和化疗药物L-OHP、5-FU联合使用对结肠癌细胞的抑制作用强于单独使用LY294002或化疗药物。     

PEI-RGD/125I(αV)ASODN 的制备及其对肝癌HepG2细胞侵袭力的抑制

目的：探讨以PEIRGD(polyethyleneimineArgGlyAsp)为转染载体的125I(αV)ASODN投递在体外对HepG2肝癌细胞侵袭力的影响。方法:125I标记整合素αV亚基的ASODN,以聚乙烯亚胺衍生物PEIRGD为载体制备PEIRGD/125I(αV)ASODN复合物,通过受体介导方式转染进入HepG2细胞,利用Boyden小室侵袭模型检测复合物对HepG2细胞侵袭力的影响。结果:(1)125I(αV)ASODN的标记率为（73.78±4.09）%,放化纯度为（96.68±1.38）%,37 ℃放置48 h后的放化纯度仍>90%,表明其稳定性良好;(2) HepG2细胞对PEIRGD/ 125I(αV)ASODN的摄取于4 μl/2 μg时达到峰值\[（12.77±085）%\],之后明显降低,故选择2 μl/1 μg作为PEIRGD/ 125I(αV)ASODN对HepG2细胞的作用剂量;(3)相对于其他实验组和对照组,PEIRGD/ 125I(αV)ASODN组显著降低了HepG2细胞的侵袭能力（P<0.01）。结论:以PEIRGD为载体投递 125I(αV)ASODN能有效抑制HepG2细胞的侵袭力。     

沉默ATF5对卵巢癌细胞顺铂敏感性影响的研究

目的:探讨显性负抑制人转录激活因子5(ATF5)对卵巢癌细胞SKOV-3顺铂敏感性的影响。方法:采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测不同卵巢癌细胞系ATF5的表达。采用脂质体介导法将真核表达质粒pLeGFP-C1-NT-Azip-ATF5和pLeGFP-C1分别转染SKOV-3细胞,同时设空白对照组;于转染后24h给予不同浓度的顺铂作用48h,通过MTT法测定细胞增殖抑制率;转染后24h给予4μmol/L顺铂作用0、12、24和48h,通过流式细胞术和蛋白质印迹法分别检测细胞凋亡和Bcl-2蛋白的表达。结果:ATF5在3种卵巢癌细胞系中均有不同程度的表达,其中SKOV-3细胞系表达最高;显性负抑制SKOV-3细胞内源性ATF5的功能联合顺铂作用后,与非特异性转染组和空白对照组相比,特异性转染组细胞增殖明显受抑制,顺铂的IC50由5.4μmol/L下降为3.6μmol/L;顺铂作用24h,特异性转染组细胞凋亡率显著升高,约为非特异性转染组3倍,抗凋亡基因Bcl-2蛋白表达明显下降,P<0.05。结论:显性负抑制ATF5的表达可明显增强卵巢癌细胞系SKOV-3对顺铂的化疗敏感性,其协同顺铂诱导细胞凋亡的机制可能与Bcl-2的下调相关。     

拓扑替康诱导卵巢癌细胞自噬的实验研究

目的:检测拓扑替康(TPT)对卵巢癌OVCAR3细胞的增殖抑制作用,观察TPT诱导OVCAR3细胞自噬现象,初步探讨其发生的可能机制。方法:采用不同浓度的TPT处理卵巢癌OVCAR3细胞,MTT法测定TPT对OVCAR3细胞增殖的抑制作用,吖啶橙(AO)染色观察酸性小体(AVO)形成,MDC荧光染色检测自噬囊泡。免疫印迹法检测TPT对OVCAR3细胞LC3-Ⅱ和Beclin1蛋白的影响。结果:TPT对OVCAR3细胞生长有显著的抑制作用,且此作用呈明显的剂量依赖性,IC50为0.057μg/mL。TPT可诱导OVCAR3细胞产生AVO。MDC荧光染色显示,TPT可诱导OVCAR3细胞产生自噬囊泡。采用0.05μg/mL TPT处理OVCAR3细胞24h后,免疫印迹法显示,随着时间的推移LC3-Ⅱ和Beclin1蛋白水平表达个逐渐增加,提示TPT诱导的OVCAR3细胞自噬可能与Bec-lin1蛋白有关。结论:TPT对OVCAR3细胞有显著的抑制作用,TPT可以诱导OVCAR3细胞发生自噬,TPT诱导OVCAR3细胞自噬可能与Beclin1蛋白上调有关。     

Raf激酶抑制蛋白增强卵巢癌细胞的化疗敏感性

摘 要　目的：探讨Raf激酶抑制蛋白（Raf kinase inhibitor protein,RKIP）对卵巢癌SKOV-3细胞化疗敏感性的影响。方法：以脂质体法将含有人全长RKIP基因的真核表达质粒pcDNA3.1-ssRKIP转染入SKOV-3细胞中,Western blotting检测SKOV-3细胞中RKIP蛋白的表达。不同浓度顺铂作用转染后的SKOV-3细胞,MTS法观察RKIP基因转染对顺铂处理后SKOV-3细胞增殖的影响,流式细胞仪检测RKIP基因转染对顺铂诱导SKOV-3细胞凋亡及细胞周期的影响。结果：pcDNA3.1-ssRKIP转染的SKOV-3细胞RKIP表达明显升高。不同浓度顺铂处理细胞24、48、72 h后,RKIP基因转染细胞增殖抑制率显著高于对照细胞（P<0.05）。用2.5 μg/ml顺铂作用SKOV-3细胞24 h后,RKIP转染细胞的凋亡率为（10.86±0.73）%,明显高于未转染细胞的（4.27±0.67）%和空质粒转染细胞的（4.02±0.43）%（P<0.01);在无顺铂作用情况下,RKIP转染细胞的凋亡率为（3.11±0.78）%,仍然高于未转染细胞的（1.51±0.13）%和转染空质粒细胞的（1.97±0.46）%（P<0.01)。细胞周期检测结果显示,RKIP转染细胞G0/G1期的比例下降,S期的比例增加,转染的SKOV-3细胞发生S期阻滞。结论：RKIP基因的转染可以增加卵巢癌SKOV-3细胞对化疗药物顺铂的敏感性。     

Demethylzeylasteral (ZST93) inhibits cell growth and enhances cell chemosensitivity to gemcitabine in human pancreatic cancer cells via apoptotic and autophagic pathways

The overall 5‐year survival rate of patients with human pancreatic cancer remains less than 8% because of its aggressive growth, early metastasis and resistance to conventional chemoradiotherapy. It is essential to develop innovative and effective therapeutic agents to improve its prognosis. Demethylzeylasteral (ZST93) is a novel triterpenoid monomer extracted from the xylem of Tripterygium roots. Our study aimed to assess the effects of ZST93 on cell proliferation and its role in the chemosensitivity to gemcitabine in human pancreatic cancer cells. The effects of ZST93 on cancer cell proliferation, cell cycle distribution, apoptosis and autophagy were evaluated in various human pancreatic cancer cell lines, and the antitumor effects of ZST93 alone and in combination with gemcitabine were identified in a xenograft mouse model. The results showed that ZST93 could inhibit the proliferation of pancreatic cancer cells and arrest cell cycle at G0/G1 phase by regulating the expression of Cyclin D1 and Cyclin A2. Moreover, ZST93 killed pancreatic cancer cells through two different mechanisms: inducing autophagic cell death at low concentrations and apoptotic cell death at high concentrations. Furthermore, ZST93 could enhance the chemosensitivity of pancreatic cancer cells to gemcitabine both in vitro and in vivo through modulation of the cross talk between autophagy and apoptosis. ZST93 is a potential therapeutic agent for developing novel therapeutic strategies in human pancreatic cancer.     

c-erbB-2-siRNA对结肠癌HT-29细胞放射敏感性影响的研究

目的:观察单纯放射及放射联合应用siRNA对细胞增殖、细胞周期、凋亡和放射增敏性的影响.方法:分别用X射线单纯放射和放射合并转染c-erbB-2-siRNA质粒的结肠癌细胞(分别分为3组pGenesil-erbB-2实验组、阴性质粒对照组和转染试剂对照组),MTT法、平板克隆形成实验检测细胞增殖和放射敏感性,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡.结果:6、8GyX射线照射组较0、2和4 Gy组的吸光度A值分别为0.314±0.035、0.117±0.009和0.721±0.044、0.608±0.018、0.584±0.041,6、8 Gy组显著低于0、2和4 Gy组,P=0.000 1;放射合并c-erbB-2-siRNA组在0、2、4、6和8 Gy照射组的吸光度A值分别为0.741±0.024、0.611±0.071、0.538±0.041、0.245±0.029和0.117±0.011,均显著低于其他两组,P=0.000 1.4、6、8组和0、2 Gy组G2/M期细胞数分别为12.19±0.41、15.02±0.38、18.56±0.94及6.50±0.43、5.26±0.71,前者显著高于后者,P=0.000 1;4 Gy X射线照射合并c-erbB-2-siRNA组、转染试剂对照组及阴性质粒对照组G0/G1期细胞数分别为79.93±0.79、69.34±1.17和69.40±0.84,实验组显著高于其他两组,P=0.000 1.0、2、4、6和8 GyX射线照射诱导HT-29细胞发生凋亡的无明显差别,P=0.065;4 Gy X射线照射合并c-erbB-2-siRNA组、阴性质粒对照组和转染试剂对照组的细胞凋亡率分别为19.21±3.54、6.82±0.74和7.56±0.35,实验组显著高于其他两组,P=0.000 1.放射合并c-erbB-2-siRNA组的放射增敏比为1.283和1.242,均＞1.结论:放射联合应用c-erbB-2-siRNA对结肠癌HT-29细胞具有抑制细胞增殖、诱导凋亡和放射增敏作用.     

DNMT3a通过STAT3及RAD51影响胰腺癌细胞对奥沙利铂敏感性的研究

目的:检测DNMT3a在胰腺癌细胞中的表达及对奥沙利铂（oxaliplatin,OXA）敏感性的影响,探讨DNMT3a对胰腺癌细胞奥沙利铂敏感性影响的机制。方法:MTT法检测奥沙利铂对人胰腺癌Panc-1细胞的增殖影响,及下调DNMT3a对Panc-1细胞奥沙利铂敏感性的影响。Western blot检测siDNMT3a对DNMT3a蛋白表达的影响,检测奥沙利铂及下调DNMT3a对γ-H2AX、RAD51、p-STAT3和STAT3蛋白表达的影响。流式细胞仪检测奥沙利铂及联合下调DNMT3a对Panc-1细胞凋亡的影响。结果:奥沙利铂能够以浓度依赖方式抑制胰腺癌Panc-1细胞的增殖。奥沙利铂能够引起DNA损伤、γ-H2AX上调及RAD51增高,同时引起STAT3通路的一过性活化。下调DNMT3a表达能够明显增加Panc-1细胞对奥沙利铂的敏感性,抑制STAT3一过性活化,并抑制RAD51表达,促进DNA损伤,进而增加奥沙利铂诱导Panc-1细胞的凋亡。结论:下调DNMT3a表达能够通过抑制STAT3活化及增加DNA损伤增加胰腺癌细胞对奥沙利铂的敏感性,DNMT3a有望成为胰腺癌新的治疗靶点。