负载食管癌抗原的DC诱导特异性CTL对食管癌细胞体外杀伤作用观察

目的观察负载食管癌抗原的树突状细胞（DC）活化的特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTLs）对食管癌细胞的体外杀伤作用。方法冻融法获取食管癌细胞抗原,联合应用粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）、白细胞介素4（IL-4）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导培养外周血DC并负载肿瘤抗原,激活自体T淋巴细胞,制备特异性CTLs。将其加入食管癌细胞中培养48 h,用MTT法检测食管癌细胞裂解率,ELISA法检测γ干扰素（γ-IFN）水平。结果负载食管癌抗原的DC激活的CTLs表现出对食管癌Eca109细胞的特异性杀伤作用,γ-IFN水平为（1 625±37.55）pg/ml;而对A549细胞仅有微弱的杀伤作用,γ-IFN水平为（169.04±13.81）pg/ml。未负载食管癌抗原DC刺激的CTLs对食管癌细胞几无杀伤作用。结论负载食管癌抗原的DC激活的CTLs在体外对食管癌细胞能产生高效而特异性的杀伤作用。     

树突状细胞疫苗治疗慢性乙型肝炎的临床观察

形成慢性乙型肝炎的重要原因之一是树突状细胞（DC）功能缺陷。已知DC是功能最强的抗原递呈细胞，也是惟一能激活初始型T淋巴细胞的抗原递呈细胞，在T淋巴细胞介导的细胞免疫中起重要作用。当用特异性病毒抗原负载DC时，有可能通过诱导抗原特异细胞毒性T淋巴细胞（CTL）活性而特异性杀伤表达病毒抗原的靶细胞。     

人肺癌抗原诱导的有核细胞抗肿瘤免疫应答

机体对肿瘤细胞的攻击主要通过T细胞特异性杀伤来实现，如何有效激活针对肿瘤特异性杀伤细胞，是实现肿瘤主动免疫治疗的关键，细胞毒性T细胞（CTL）的激活首先需要识别肿瘤特异性抗原，即T细胞受体（TCR）、CD8分子识别肿瘤细胞表面的MHCⅠ类分子与肿瘤抗原肽形成的复合物.     

人类免疫缺陷病毒感染中的特异性细胞毒T淋巴细胞反应(一)

特异性细胞毒T淋巴细胞（Cytoxic T　Lympho-cyte,CTL）是一类可以杀伤表达特异性抗原靶细胞的T细胞亚群。CTL是抗细胞内感染（病毒、单核细胞增多性李斯特菌等）、急性同种异型移植物排斥反应和杀伤肿瘤的重要效应细胞[1]。 大多数CTL表达CD8分子,由其TCRαβ识别源于细胞内合成的外源抗原肽。该抗原肽自身MHC-I类分子形成复合物,在靶细胞表面上表达。近年的研究发现,HIV特异性CD8 T淋巴细胞是机体抗HIV的最主要的免疫细胞。这类细胞与被病毒感染的细胞特异性结合后,可以分泌各种细胞因子,杀死靶细胞。在艾滋病病毒感染的急性期,患者血浆病毒     

树突状细胞调节和细胞因子诱导的杀伤细胞的抗肿瘤机制及其在结直肠癌治疗中的应用前景

利用细胞因子诱导树突状细胞（dendritic cell，DC）和细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine induced killer，CIK细胞），以肿瘤抗原冲击DC，将经过抗原冲击的DC和CIK细胞按一定比例混合进行共培养，得到一种新的免疫效应细胞群，即DC调节和细胞因子诱导的杀伤细胞（DCIK细胞）。DCIK细胞具有识别和特异性杀伤恶性细胞的作用，打破了放化疗“敌我不分”的状况。DCIK细胞不但存活率高，增殖能力强．而且对肿瘤细胞具有特异性杀伤能力，为肿瘤免疫治疗开创了一条新的途径。     

细胞免疫治疗在血液肿瘤中的研究进展

生物治疗是肿瘤除手术及放化疗以外的第4种治疗模式,其中包括细胞因子治疗、诱导分化治疗、单克隆抗体治疗、过继性免疫细胞治疗及基因治疗。细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）目前为一大研究热点,是过继性免疫细胞中的一种具有增殖活性强、     

树突状细胞激活的肿瘤浸润性淋巴细胞抗胃癌活性的研究

目的　树突状细胞 (DC)是目前已知的功能最强的抗原提呈细胞 (APC) ,可以向包括肿瘤浸润性淋巴细胞 (TIL)在内的T淋巴细胞提呈抗原 ,并诱发细胞毒T淋巴细胞 (CTL)反应。该文探讨树突状细胞激活的肿瘤浸润性淋巴细胞体外对胃癌细胞 (SGC 790 1 )的杀伤活性。方法　从胃癌患者外周血获取DC ,应用粒 /巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)、白介素 4(IL 4)和肿瘤抗原激活DC ,然后用DC激活TIL ,观察TIL在体外对自体胃癌细胞和人胃癌细胞株细胞的杀伤活性。结果　DC激活的TIL具有很高的对自体胃癌细胞杀伤活性 ,杀伤率为 (89.39± 3 .0 5) % ,明显高于未经DC激活的TIL、CD激活的T淋巴细胞和未经DC激活的T淋巴细胞对自体胃癌细胞的杀伤率 [杀伤率分别为 (54 .37±1 .50 ) % ,(53 .92± 1 .46) %和 (3 .55± 0 .2 5) % ]。而它们对SGC 790 1细胞的杀伤活性则相对较低。结论　胃癌患者外周血DC能诱导TIL产生高效而特异的抗胃癌免疫     

树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞抗肿瘤效应研究

树突状细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)是肿瘤免疫治疗的两个重要部分,DC是人体内专职抗原递呈细胞,CIK是高效肿瘤杀伤细胞,前者识别病原,启动获得性免疫系统,后者通过发挥自身细胞毒性与分泌性细胞因子杀伤肿瘤,两者联合可以更好的杀伤肿瘤细胞,被认为是肿瘤过继免疫治疗的新希望。     

免疫检查点抑制剂在骨髓增生异常综合征/急性髓系白血病治疗中的作用机制及应用研究进展

骨髓增生异常综合征（MDS）和急性髓系白血病（AML）是临床常见的髓系肿瘤,约30%的高风险MDS最终将进展为AML,免疫微环境失调被认为是MDS和AML的关键致病因素。免疫检查点（IC）作为一类免疫抑制分子,在免疫细胞上表达,可以抑制免疫细胞的激活。肿瘤细胞可能会利用这些检查点分子,逃脱机体的免疫监视与杀伤,发生免疫逃逸,加速肿瘤细胞转移。免疫检查点抑制剂可阻断IC与其配体结合,抑制肿瘤免疫逃逸作用,提高免疫系统对肿瘤细胞的杀伤力,从而达到治疗目的。程序性死亡受体1/细胞程序性死亡配体1、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4、淋巴细胞激活基因3、T淋巴细胞免疫球蛋白和黏蛋白3、白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B及整合素相关蛋白抑制剂的开发为MDS/AML的治疗提供了新的思路,可以为MDS/AML的免疫治疗提供有意义的借鉴。     

负载肿瘤抗原的DC体外诱导抗肿瘤免疫反应的实验研究

目的 研究自体及同种异体树突状细胞(DC)体外负载肿瘤抗原后刺激T淋巴细胞增殖及诱导抗肿瘤免疫反应的能力.方法 利用细胞因子诱导人骨髓单个核细胞生成DC,尼龙毛柱法分离T淋巴细胞,3H-TdR掺入法检测负载肺癌细胞凋亡小体的自体及同种异体DC体外刺激T细胞增殖反应,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测负载肺癌细胞凋亡小体的自体及同种异体DC刺激的T细胞对肺癌细胞和乳腺癌细胞系MCF-7的杀伤作用.结果 骨髓细胞诱生的自体及同种异体DC负载肿瘤抗原后,均具有刺激T淋巴细胞增殖的能力,负载肿瘤抗原的自体及异体DC激活的T淋巴细胞后均可杀伤两种靶细胞,T细胞对MCF-7的杀伤力明显低于对患者肺癌细胞的杀伤力. 结论人自体或异体DC体外负载细胞性肿瘤抗原后,可有效地刺激T淋巴细胞的增殖,产生特异性肿瘤杀伤作用.     

体外负载冻融抗原的脐血树突状细胞诱导的抗肝癌效应

目的评价体外应用肝癌细胞冻融抗原负载的脐血树突状细胞（DC）所诱导的抗肝癌效应。方法采集健康足月剖宫产孕妇胎盘端脐血,分离脐血单个核细胞（CBMNC）及T淋巴细胞,用GM-CSF、IL-4及TNF-α联合诱导CBMNC分化为DC,观察形态学变化并以流式细胞术鉴定,选培养的第3天以肝癌细胞冻融抗原负载的CBMNC-DC,以负载抗原的DC刺激自体淋巴细胞活化为自体细胞毒性T淋巴细胞（CTL）,并用CTL对肝癌细胞进行杀伤,MTT法测定活化的自体淋巴细胞的相对数量和CTL对肝癌细胞的杀伤率。结果体外负载肿瘤冻融抗原的脐血DC可诱导显著的自体效应淋巴细胞增殖及抗肝癌效应。结论体外负载抗原的脐血DC可诱导显著的抗肝癌效应,是具有临床应用前景的肝癌疫苗。     

急性髓性白血病细胞体外诱导脐血细胞毒性T淋巴细胞增殖及抗白血病作用的研究

目的研究体外培养急性髓性白血病树突状细胞（AML-DC）,并利用该细胞联合细胞因子诱导脐血产生细胞毒性T淋巴细胞（CTL）,观察CTL对急性白血病细胞的杀伤效应,探讨从AML．DC体外诱导产生CTL的可行性。方法从急性髓性白血病细胞诱导AML—DC,联合细胞因子体外诱导脐血T细胞活化及增殖,流式细胞术检测培养前后的T淋巴细胞亚群变化,利用LDH试剂盒检测诱导后T细胞对相应急性白血病细胞的杀伤活性。结果可从人AML细胞中诱导出AML-DC,脐血T细胞在体外经过诱导培养后可获得增殖,T淋巴细胞比例较培养前明显增高,其中在AML—DC诱导组中,CD3^＋T淋巴细胞亚群比例达到（79．7±3．70）％,该T淋巴细胞对相应急性白血病细胞的杀伤效率最高达（48．35±12．75）％,与培养前及培养后无AML—DC刺激组相比,经过特异诱导培养的T细胞对相应白血病细胞杀伤作用大大加强（P〈0．05）。结论AML—DC联合细胞因子可以诱导活化脐血白血病细胞特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）,该细胞能对相应白血病细胞产生特异性杀伤效应。     

负载胰腺癌抗原的树突状细胞疫苗诱导T淋巴细胞抗肿瘤效应的研究

培养树突状细胞(DC),反复冻融法裂解培养的负载胰腺癌细胞(PC-3),提取细胞抗原,致敏DC,获得负载胰腺癌抗原的DC疫苗后诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的生成,MTT法检测CTL对不同肿瘤细胞的杀伤作用.发现负载PC-3细胞抗原的DC疫苗能诱导产生肿瘤特异性的CTL,其对PC-3细胞具有明显地杀伤效应,而对人乳腺癌细胞MCF-7、人肝癌细胞7721细胞杀伤作用弱.认为负载胰腺癌抗原的DC疫苗能够诱导高效而特异地CTT杀瘤活性,为将来DC疫苗在胰腺癌的免疫治疗中提供了实验依据.     

树突状细胞体外诱导抗肝癌免疫

目的应用树突状细胞（ＤＣ）在体外诱导高效而特异抗肝癌免疫．方法自肝癌患者外周血中分离ＤＣ;以粒／巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭＣＳＦ）及白介素４（ＩＬ４）联合刺激ＤＣ;以人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２肿瘤细胞的肿瘤相关抗原（ＴＡＡ）激活ＤＣ;ＤＣ诱导自体Ｔ淋巴细胞增殖、分化为细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ）;检测ＣＴＬ及其上清液对ＨｅｐＧ２肿瘤细胞、ＬＯＶＯ肿瘤细胞及ＨＯＳ８６０３肿瘤细胞的细胞毒作用．结果经人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２肿瘤细胞的ＴＡＡ激活并经ＧＭＣＳＦ及ＩＬ４联合刺激后,肝癌患者外周血ＤＣ能够诱导自体Ｔ淋巴细胞增殖分化为ＣＴＬ,该ＣＴＬ及其上清液对ＨｅｐＧ２肿瘤细胞均有高效而特异性的杀伤作用（杀伤率分别为９２％±１０５％和４１％±８９％）．结论肝癌患者外周血ＤＣ体外能够诱导高效而特异抗肝癌免疫．提示ＤＣ作为一新概念上的抗肿瘤疫苗可能在肿瘤治疗及预防中发挥重要作用．     

负载酸洗脱食管癌抗原肽的脐血树突状细胞对CTL杀伤活性的影响

分离脐血中的单个核细胞,以酸洗脱食管癌抗原肽负载获得分化成熟树突状细胞（DCs）,检测其对特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL）的诱导和体外杀伤效应的影响。结果发现,负载食管癌抗原肽的脐血DCs诱导的CTL对酸洗前食管癌细胞株T.Tn的杀伤率显著高于酸洗后组和各对照组（P均〈0．05）,而对无关肿瘤细胞株Hep2无显著杀伤作用。认为负载食管癌抗原肽的脐血DCs体外可诱导CTL产生特异性杀伤效应。     

树突状细胞诱导的肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞对裸鼠人肝癌转移的预防和治疗

目的探讨肿瘤抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对裸鼠人肝癌转移模型LCI-D20的治疗作用。方法从健康人外周血单个核细胞中诱导树突状细胞,用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素-4刺激活化,经人肝癌细胞株MHCC97-H肿瘤抗原致敏后,诱导肿瘤抗原特异性CTL,经腹腔注射,以自然杀伤样T淋巴细胞(CIK)和磷酸盐缓冲液为对照,研究其对LCI-D20肝癌治疗和预防转移作用。结果肿瘤抗原特异性CTL组、CIK 组和对照组肝癌肿块重量、血清甲胎蛋白含量、肝癌肝内转移率和存活期依次为(1．11±0．63)g、(1．12±0．36)g 和(2．68±0．53)g;(52．1±9．7)μg／L、(48．6±5．2)μg／L和(82．2±7．2)μg/L;16．7％、16．7％和58．3％; (79．0±5．0)d、(73．3±7．0)d和(52．3±5．2)d。对照组与前两组比较差异均有统计学意义(P值均<0．01)。结论肿瘤抗原特异性CTL可以预防LCI-D20模型肝癌发生转移,延长动物存活时间。     

增强疫苗诱导的细胞毒性T淋巴细胞抗肿瘤免疫反应的调控

肿瘤疫苗诱导的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）应答在肿瘤治疗中发挥至关重要的作用.目前,疫苗研究的目标之一是诱导持久的CTL反应,从而实现介导肿瘤抑制的效果.为实现该目标,必须实现以下步骤：首先,为了更好启动疫苗所诱导的CTL的抗肿瘤免疫反应,树突状细胞（DCs）必须捕获来自外源的肿瘤抗原.紧接着,负载肿瘤抗原的DCs在淋巴器官中激活CTL.随后,活化的CTL细胞进入肿瘤微环境中发挥其职能作用,在这个过程中,很多负调控信号抑制该免疫反应.最后,CTL介导的细胞毒作用必须克服肿瘤细胞诱导的耐受性.     

结核杆菌热休克蛋白70-乙型肝炎表面抗原诱导特异性免疫反应

目的 研究体外构建结核杆菌热休克蛋白和乙型肝炎表面抗原复合物(HSP70-HBsAg)诱导针对乙型肝炎表面抗原特异性免疫反应能力,为该复合物的临床应用奠定基础。 方法 考察体外构建HSP70-HBsAg复合物是否能引起小鼠的体液和细胞免疫;将复合物负载树突状细咆(D C),D C激活同源的T淋巴细胞产生细胞毒性T淋巴细胞(CTL),检测其杀伤HepG2-S细胞的能力。 结果 HSP70-HBsAg复合物能引起小鼠的体液免疫和细胞免疫;HSP70-HBsAg和HBsAg均可诱导CD 81 T淋巴细胞的特异性CTL,而前者的诱导效果更强。 结论 体外构建的HSP70-HBsAg蛋白复合物具有免疫原性,HSP70可以增强抗原蛋白诱导特异性免疫反应的能力,HSP70～HBsAg有望作为蛋白疫苗用于临床慢性乙型肝炎的免疫治疗。     

HepG2细胞抗原对脐血CD34^＋造血干细胞诱导分化的树突细胞免疫功能的影响

背景：树突细胞（DC）是体内功能最强的抗原呈递细胞,可激活初始型T细胞,生成辅助性T细胞和杀伤性T细胞。DC具有特异性呈递肿瘤抗原的能力,在肿瘤免疫中发挥重要作用。目的：探讨HepG2细胞抗原对脐血CD34^＋造血干细胞诱导分化的DC免疫功能的影响。方法：分离培养脐血CD34^＋造血干细胞后,加入细胞因子组合诱导生成DC并将其分成HepG2细胞抗原负载组和对照组．以流式细胞仪测定DC生成率和免疫表型,以酶联免疫吸附测定（ELISA）检测干扰素-γ（IFN-γ）含量,以MTT法检测细胞毒性T淋巴细胞（CTL细胞）对HepG2细胞的杀伤作用。结果：DC生成率为60．2％±9．4％。与对照组相比,HepG2细胞抗原负载组DC免疫表型CD1a^＋／CD40^＋、CD83^＋／CD86^＋、CD14^＋／HLA-DR^＋比例显著增高（57．6％±5．4％对33．2％±6．0％、32．5％±3．9％对26．0％±2．8％、38．1％±2．6％对29．1％±2．1％,P〈0．01）;IFN-γ含量呈时间依赖性增高;CTL细胞对HepG2细胞的杀伤作用显著增强（43.3％±11.3％对13．9％±4．6％,P〈0．01）。结论：应用HepG2细胞抗原孵育脐血CD34^＋造血干细胞可诱导分化成熟DC,DC可促进异基因淋巴细胞活化分泌IFN-γ,并产生特异性CTL细胞,杀伤肝癌HepG2细胞。     

肿瘤全抗原致敏的恶性胸水中肿瘤浸润免疫细胞的体外抗癌作用

目的 观察恶性胸水中肿瘤浸润免疫细胞中浸润树突细胞(TIDC)和肿瘤浸润T淋巴细胞(TIL)经过IL-2活化负载CALU-6腺癌细胞肿瘤全抗原后的体外抗癌作用.方法 分离恶性胸水单个核细胞(PEMCs),采用两步贴壁法获得非贴壁细胞,TIDC及TIL是其主要功能细胞成分.SP法检测TIL亚群的数量及免疫功能,SP法S-100蛋白染色检测TIDC.IL-2活化肿瘤浸润免疫细胞并负载CALU-6肿瘤细胞全抗原,MTT法分别检测活化的免疫细胞对CALU-6和GLC-82腺癌细胞的体外杀伤作用.结果 IL-2活化培养7 d后TIDC和TIL数量明显增加.恶性胸水肿瘤浸润免疫细胞(主要包括TIL和TIDC)经过CALU-6腺癌细胞肿瘤全抗原负载后,相同浓度对于CALU-6腺癌细胞杀伤明显,而对于GLC-82腺癌细胞无明显杀伤作用,两者比较差异具有显著意义(P<0.01).结论 IL-2同时活化肿瘤微环境中TIL及TIDC,使其由一种无功能或功能低下状态恢复免疫监视功能,有效地负载肿瘤抗原,协同TIL等其他免疫细胞可以有效杀伤肿瘤细胞.活化恶性胸水免疫细胞自体回输治疗恶性胸水具有临床应用前景.