大鼠肝卵圆细胞增殖模型的重建及免疫组织化学定位

目的:拟改良常用的大鼠肝卵圆细胞增殖模型Solt-Farber建模方法,并对肝卵圆细胞的生物学特性和免疫组织化学定位进行分析。方法:实验于2004-09/2005-09在华中科技大学同济医学院完成。①分组:选用体质量180g左右的雄性SD大鼠120只,随机分为5mg/kg2-乙酰氨基芴处理组,20mg/kg2-乙酰氨基芴处理组及空白对照组,每组40只。②造模及给药:对Solt-Farber造模方法进一步改进:5mg/kg,20mg/kg2-乙酰氨基芴处理组分笼饲养1周后通过胃管灌喂2-乙酰氨基芴,1次/d,连续3d,按20mg/kg剂量给予,第4天行2/3肝切除(手术当日不灌喂2-乙酰氨基芴),第5天继续灌喂,剂量分别按5mg/kg,20mg/kg给予,术后连续灌喂7d。空白对照组除给予生理盐水灌喂外,不予以其他任何处理。③分别于术后第2,5,8,11,14天处死大鼠。观察大鼠肝脏标本的大体变化,留取肝组织行苏木精-伊红染色,免疫组化染色观察肝卵圆细胞增殖情况和肝卵圆细胞定位。结果:①5mg/kg,20mg/kg2-乙酰氨基芴处理组大鼠术后肝脏均表现为明显充血,肝脏边缘圆钝。从术后第5天起处死的大鼠肝脏表面可见针尖样细小颗粒,呈局灶性,偶见肝脏有小出血点。②5mg/kg,20mg/kg2-乙酰氨基芴处理组大鼠肝组织内可见明显的卵圆细胞增殖。两组肝卵圆细胞增殖数量比较差异无显著性(P>0.05)。空白对照组大鼠肝组织内未见到肝卵圆细胞。③肝卵圆细胞形态学特征:细胞体积小于肝细胞,体积相当于肝细胞的1/4～1/3;细胞大小及体积不均一,差异较大;形态多为卵圆型,多排列成小腺管样结构或成簇或散在分布。④肝卵圆细胞OV6,CK19,AFP,C-kit,CD34染色呈阳性。结论:①采用术前短时间大剂量,术后长时间小剂量的实验设计方案可以使建立模型所需时间进一步缩短,动物的耐受性明显好转,增殖效果却同样理想,证明大鼠肝卵圆细胞增殖模型改进成功。②在肝卵圆细胞主要位于肝实质细胞和胆管上皮细胞相结合部或其附近。     

大鼠肝部分切除后肝细胞再生及肝星状细胞α-平滑肌肌动蛋白表达变化与肝细胞生长因子的干预作用

背景:肝细胞的再生主要受细胞因子的整体控制,肝细胞生长因子在肝细胞的再生过程中发挥着重要的作用,但其对肝星状细胞再生替代的研究较少.目的:观察肝细胞生长因子对大鼠肝部分切除后肝细胞再生及肝星状细胞α-平滑肌肌动蛋白表达的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-11/2007-05在河南省组织再生重点实验室完成.材料:选用健康SD雌性大鼠52只,体质量(200±20)g,用于制造肝切除动物模型.肝细胞生长因子由北京生物药业有限公司提供.方法:将52只大鼠按随机数字表法分为3组,假手术组(n=12)打开腹腔,重新关腹.术后第2天腹腔注射生理盐水1 mL/d;肝部分切除组(n=20)行肝部分切除,术后第2天腹腔注射生理盐水1 mL/d;肝细胞生长因子组(n=20)肝部分切除术后第2天腹腔注射肝细胞生长因子12mg/(kg·d),1次,d.主要观察指标:各组分别于术后第1,2周末采血行血清学检测;取肝组织行苏木精-伊红及α-平滑肌肌动蛋白免疫组化染色,并行电镜观察.结果:52只大鼠全部进入结果分析.①与假手术组相比,术后第1周肝部分切除组血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性升高,总蛋白含量降低,肝再生指数降低(P＜0.05),肝细胞生长因子组上述指标明显改善(P＜0.05).②术后第1,2周各组肝组织α-平滑肌肌动蛋白表达灰度值相近.③术后第1周肝细胞生长因子组肝细胞内的粗面内质网、线粒体均明显增多.第2周后各组肝细胞超微结构无明显差异.结论:应用外源性肝细胞生长因子可以改善大鼠肝部分切除后的肝功能,促进肝细胞增殖,但在肝部分切除术后2周内对肝星状细胞无明显影响.     

大鼠肝卵圆细胞体外分离培养和向肝细胞的诱导分化

背景:肝卵圆细胞具有强大的自我更新复制及在一定的条件下克隆增殖并分化为成熟肝细胞的能力,既可在体外用丁构建生物人工肝的生物材料部分,也可以进行体内移植,还可为组织工程提供种子细胞,在治疗肝病方面具有广阔的前景.目的:建立成年Wistar大鼠肝卵圆细胞增殖模型,行体外分离和培养肝卵圆细胞,探索体外诱导其分化为肝细胞的可行性.设计:观察性实验.单位:南方医科大学南方医院消化病研究所.材料:实验于2003-12/2006-02在南方医院消化病研究所实验室完成.36只三四个月龄,体质量约150～200 g的健康雄性Wistar大鼠,南方医科大学实验动物中心提供.方法;将雄性Wistar大鼠行乙硫氨酸灌喂和2/3肝切除.采用两步法灌注和Percoll密度梯度离心法分离纯化肝卵圆细胞,行体外培养并添加肝细胞生长因子、肿瘤抑制因子M和成纤维细胞生长因子4诱导其分化.主要观察指标:肝卵圆细胞和诱导分化细胞的鉴定.结果:①体外分离每只模型大鼠肝脏中可获得约1.34×108L-1肝卵圆细胞,细胞为圆形、椭圆形或多角形,约为正常肝细胞1/6～1/3,核质比例大,2周后可呈克隆样增殖生长.②激光扫描共聚焦显微镜显示,肝卵圆细胞胞浆和胞膜表达干细胞标志Thy-1及C-kit.③免疫细胞化学检测其原始细胞标志甲胎蛋白呈阳性表达.肝卵圆细胞能稳定传代,肝卵圆细胞在肝细胞生长因子、肿瘤抑制因子M和成纤维细胞生长因子4刺激下细胞形态逐渐发生改变,细胞伸展且体积渐增大,贴壁能力减弱,诱导14d后分化细胞Alb明显阳性表达,且随着诱导时间的延长,其阳性率逐渐升高.④细胞化学方法显示诱导分化细胞胞浆G-6-P染色呈棕黑色沉淀,PAS染色呈红色颗粒.结论:乙硫氨酸灌喂联合2/3肝切除可复制成年Wistar大鼠的肝卵圆细胞增殖模型.胶原酶灌注结合Percoll密度梯度离心分离纯化可获得满意的肝卵圆细胞.大鼠肝卵圆细胞能在体外传代培养,在一定条件刺激下可诱导分化为肝细胞.     

肝硬化部分切除后肝再生及结构变化

背景：肝脏自身具有强大的再生能力,临床资料显示大部分肝癌患者合并有肝硬化,切除肿瘤后肝脏质量可逐渐恢复,提示硬化的肝脏仍具备修复潜能。目的：尝试用肝部分切除方法诱导小鼠硬化肝组织内具再生能力的细胞增殖,观察再生肝脏的结构变化。方法：使用CCl4皮下注射方法制备小鼠肝硬化模型。对肝硬化小鼠行肝部分切除,于切除后1,3,5,7,10,14及21 d取小鼠肝组织并称质量。观察比较肝部分切除后不同时间小鼠再生肝组织的结构变化;评估肝再生率;免疫组化方法分析肝星形细胞标志分子结蛋白及肝星形细胞活化标志分子α-平滑肌肌动蛋白的表达变化;5-溴脱氧尿核苷标记技术对增殖细胞进行定性、定位。结果与结论：肝硬化小鼠肝部分切除后第1,3,5,7,14,21天肝再生率分别为6.58%,22.03%,21.39%,29.05%,45.22%,50.98%。苏木精-伊红染色和Masson染色显示CCl4注射8周后呈早期肝硬化病理改变,肝部分切除后肝组织结构逐步改善。免疫组化结果显示肝部分切除后第1天再生肝组织内结蛋白表达减少,但第3天至第14天呈上升趋势,21 d则明显减少;肝再生过程中各时间点α-平滑肌肌动蛋白表达依时递减。5-溴脱氧尿核苷阳性细胞在肝部分切除后1-7 d主要为肝细胞,肝部分切除后14-21 d阳性细胞定位于肝血窦内皮及窦腔内。结果表明早期肝硬化小鼠大部肝切除后3 d出现明显的再生反应,并逐步恢复正常的肝组织结构。     

胚胎干细胞源性肝干细胞肝内移植对宿主肝功能的影响及安全性评估

背景:体外诱导胚胎干细胞分化为肝细胞已有不少成功的报道,但其体内移植后能否有效整合入宿主肝板、在肝内能否进一步生长分化并表达肝细胞功能以及成瘤的风险等情况目前还不清楚.目的:应用治疗性肝再生模型进行胚胎干细胞源性肝干细胞肝内移植, 观察其在肝组织替代、体内的生长分化及成瘤性情况.设计:随机对照动物实验.单位:中山大学附属第二医院小儿外科.材料:选用BALB/c小鼠24只为受体,鼠龄6～8周,体质量20～ 35 g,雌雄不拘购自广州市实验动物中心.实验所用胚胎干细胞源性肝干细胞由作者所在课题组诱导胚胎干细胞分化而成.小鼠胚胎干细胞株E14由本院干细胞中心提供.方法:实验于2006-07/2007-06在中山大学附属第二医院干细胞研究中心完成.将24只小鼠随机分为2组:肝再生模型 干细胞移植组和肝切除 干细胞移植组,每组12只.前组分两次按50 mg/kg剂量腹腔内注射倒千里光碱(retrorsine) ,间隔2周,第2次注射4周后行70%肝部分切除制造肝损伤;然后经门静脉分别移植1×105羟基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)荧光标记的细胞入小鼠肝内进行胚胎干细胞源性肝干细胞移植.后组在行70%肝部分切除制造肝损伤模型后进行胚胎干细胞源性肝干细胞移植.主要观察指标:荧光显微镜下观察移植细胞组受体鼠肝脏内分布、整合与体内生长分化情况.2周后行白蛋白荧光免疫组化(双荧光染色)、血清白蛋白水平检测其功能状况.将胚胎干细胞源性肝干细胞注入治疗性肝再生小鼠肝内,将未分化的胚胎干细胞移植入小鼠腋区皮下作为对照,观察胚胎干细胞源性肝干细胞体内成瘤情况.结果:①肝干细胞在受体鼠肝内生长情况:CFDA SE标记的胚胎干细胞源性肝干细胞肝内移植1周,受体小鼠肝实质内可见散在绿色荧光分布.2周后,肝实质内绿色荧光分布区域明显扩大,且可见类似肝索样结构排列.②肝功能:共焦白蛋白荧光免疫组化(双荧光染色)结果表明,受体小鼠肝组织内可见标记细胞表达白蛋白阳性信号(呈黄色荧光),肝再生模型 干细胞移植组和肝切除 干细胞移植组血清白蛋白水平则无明显差异(P > 0.05).③肝干细胞移植安全性:6周内未见畸胎瘤形成,而将未分化的胚胎干细胞移植入小鼠腋区皮下6周后则可见畸胎瘤形成.结论:胚胎干细胞源性肝干细胞移植入治疗性肝再生模型小鼠肝内后可有效在肝内能进一步生长分化并部分表达肝细胞功能;且此移植安全性较好.     

胚胎干细胞源性肝干细胞肝内移植对宿主肝功能的影响及安全性评估

背景：体外诱导胚胎干细胞分化为肝细胞已有不少成功的报道，但其体内移植后能否有效整合入宿主肝板、在肝内能否进一步生长分化并表达肝细胞功能以及成瘤的风险等情况目前还不清楚。 目的：应用治疗性肝再生模型进行胚胎干细胞源性肝干细胞肝内移植．观察其在肝组织替代、体内的生长分化及成瘤性情况。 设计：随机对照动物实验。 单位：中山大学附属第二医院小儿外科。 材料：选用BALB／c小鼠24只为受体，鼠龄6～8周，体质量20～352，雌雄不拘购自广州市实验动物中心。实验所用胚胎干细胞源性肝干细胞由作者所在课题组诱导胚胎干细胞分化而成。小鼠胚胎干细胞株E14由本院干细胞中心提供。 方法：实验于2006-07／2007-06在中山大学附属第二医院干细胞研究中心完成。将24只小鼠随机分为2组：肝再生模型＋干细胞移植组和肝切除＋干细胞移植组，每组12只。前组分两次按50mg／kg剂量腹腔内注射倒千里光碱（retrorsine），间隔2周，第2次注射4周后行70％肝部分切除制造肝损伤；然后经门静脉分别移植1×10^5羟基荧光素乙酰乙酸（CFDA-SE）荧光标记的细胞入小鼠肝内进行胚胎干细胞源性肝干细胞移植。后组在行70％肝部分切除制造肝损伤模型后进行胚胎干细胞源性肝干细胞移植。 主要观察指标：荧光显微镜下观察移植细胞组受体鼠肝脏内分布、整合与体内生长分化情况。2周后行白蛋白荧光免疫组化（双荧光染色）、血清白蛋白水平检测其功能状况。将胚胎干细胞源性肝干细胞注入治疗性肝再生小鼠肝内，将未分化的胚胎干细胞移植入小鼠腋区皮下作为对照，观察胚胎干细胞源性肝干细胞体内成瘤情况。 结果：①肝干细胞在受体鼠肝内生长情况：CFDASE标记的胚胎干细胞源性肝干细胞肝内移植1周，受体小鼠肝实质内可见散     

CK19及C-kit蛋白在DEN诱发大鼠肝癌过程中的表达及意义

目的观察在大鼠诱发性肝癌中肝脏组织中细胞角质素19(CK19)及C-kit(CD117)蛋白的表达,探讨其在肝癌发生发展过程中的意义。方法利用二乙基亚硝胺(DEN)制备诱发性大鼠肝癌模型,在此模型的基础上,HE染色观察肝组织的形态学变化,免疫组织化学法检测CK19及C-kit蛋白的表达。结果根据肝组织形态学变化将诱癌过程分为肝细胞损伤期、肝细胞增生-硬化期和肝细胞癌变期。胆管上皮、卵圆细胞、癌周组织中的细胞和少量癌细胞上均可见CK19蛋白阳性表达;C-kit蛋白表达在卵圆细胞,并随着诱癌的进行出现向肝小叶内穿插的现象。结论 CK19及C-kit蛋白标记的卵圆细胞是大鼠DEN诱发性肝癌发生发展的启动细胞。     

连接蛋白/缝隙连接细胞间通讯对大鼠肝卵圆细胞增殖调控作用

背景:缝隙连接蛋白介导的缝隙连接细胞间通讯(gap junction intercellular communication,GJIC)是细胞间最重要的信息交流形式.目的:验证CX/GJIC 对卵圆细胞的增殖调控作用.方法:Wistar 大鼠分为4 组.对照组正常饮食;2-AAF/PH 组按改良Solt-Farber 法建立卵圆细胞增殖动物模型;苯巴比妥组予以苯巴比妥饮水7 d,第8 天按2-AAF/PH 组建模,苯巴比妥饮水持续至实验结束;三七总皂苷组按2-AAF/PH 组建模时予以三七总皂苷25 mg/(kg·d)腹腔内注射,并持续实验结束.结果与结论:造模后肝脏连接蛋白呈时空特异性表达,先下调后逐渐恢复,连接蛋白43 表达于卵圆细胞,先升高后逐渐恢复;采用苯巴比妥改变大鼠2-AAF/PH 模型肝脏的连接蛋白32、连接蛋白43 时空表达模式后,可下调肝脏的GJIC,减少卵圆细胞与偶联细胞间GJIC,解除卵圆细胞生长抑制,促进卵圆细胞的增殖;三七总皂苷可以增加大鼠2-AAF/PH 模型肝脏的连接蛋白32 表达、滞后连接蛋白43 的表达,增加卵圆细胞与偶联细胞间GJIC,使卵圆细胞增殖峰低、滞后、持续时间长;通过下调大鼠2-AAF/PH 模型肝脏的GJIC,可使卵圆细胞增殖早、增殖水平高;上调GJIC 使卵圆细胞增殖峰低、滞后、持续时间长,CX/GJIC 可以调节体内卵圆细胞的增殖、分化过程.     

不同性别肝大部切除小鼠的肝再生

背景:各种病因所致的肝硬化及肝癌发病率存在明显的性别差异.肝受损或手术后肝脏均可通过其自身强大的再生能力进行代偿,但肝再生过程中不同性别肝细胞的再生状况是否存在差异尚不清楚.目的:比较肝大部切除后不同性别小鼠肝脏再生能力是否存在差别.方法:采用不同性别成年昆明小鼠行肝脏大部切除,称量手术切除的肝组织,并于术后1,3,5,7,10,14 d取再生肝组织,称量后常规制作组织切片备用,取材前2 h腹膜下注射5一溴脱氧尿核苷50 mg/kg.观察比较不同性别小鼠再生肝组织的结构变化、细胞形态,以及术后各时间点肝再生率、肝组织5一溴脱氧尿核苷的标记指数.结果与结论:苏木精一伊红染色切片镜下结果显示,肝脏大部切除后各时间点不同性别小鼠肝组织结构无明显差别.不同性别小鼠肝大部切除后各时间点肝再生率及5一溴脱氧尿核苷标记指数差异均无显著性意义(P>0.05).提示肝大部切除后不同性别小鼠肝的再生能力无明显差别.     

连接蛋白/缝隙连接细胞间通讯对大鼠肝卵圆细胞增殖调控作用

背景：缝隙连接蛋白介导的缝隙连接细胞间通讯（gap junction intercellular communication,GJIC）是细胞间最重要的信息交流形式。目的：验证CX/GJIC对卵圆细胞的增殖调控作用。方法：Wistar大鼠分为4组。对照组正常饮食;2-AAF/PH组按改良Solt-Farber法建立卵圆细胞增殖动物模型;苯巴比妥组予以苯巴比妥饮水7d,第8天按2-AAF/PH组建模,苯巴比妥饮水持续至实验结束;三七总皂苷组按2-AAF/PH组建模时予以三七总皂苷25mg/（kg？d）腹腔内注射,并持续实验结束。结果与结论：造模后肝脏连接蛋白呈时空特异性表达,先下调后逐渐恢复,连接蛋白43表达于卵圆细胞,先升高后逐渐恢复;采用苯巴比妥改变大鼠2-AAF/PH模型肝脏的连接蛋白32、连接蛋白43时空表达模式后,可下调肝脏的GJIC,减少卵圆细胞与偶联细胞间GJIC,解除卵圆细胞生长抑制,促进卵圆细胞的增殖;三七总皂苷可以增加大鼠2-AAF/PH模型肝脏的连接蛋白32表达、滞后连接蛋白43的表达,增加卵圆细胞与偶联细胞间GJIC,使卵圆细胞增殖峰低、滞后、持续时间长;通过下调大鼠2-AAF/PH模型肝脏的GJIC,可使卵圆细胞增殖早、增殖水平高;上调GJIC使卵圆细胞增殖峰低、滞后、持续时间长,CX/GJIC可以调节体内卵圆细胞的增殖、分化过程。     

Hepatic stellate cells contribute to progenitor cells and liver regeneration

Retinoid-storing hepatic stellate cells (HSCs) have recently been described as a liver-resident mesenchymal stem cell (MSC) population; however, it is not clear whether these cells contribute to liver regeneration or serve as a progenitor cell population with hepatobiliary characteristics. Here, we purified HSCs with retinoid-dependent fluorescence-activated cell sorting from eGFP-expressing rats and transplanted these GFP⁺ HSCs into wild-type (WT) rats that had undergone partial hepatectomy in the presence of 2-acetylaminofluorene (2AAF) or retrorsine, both of which are injury models that favor stem cell–based liver repair. Transplanted HSCs contributed to liver regeneration in host animals by forming mesenchymal tissue, progenitor cells, hepatocytes, and cholangiocytes and elevated direct bilirubin levels in blood sera of GUNN rats, indicating recovery from the hepatic bilirubin–handling defect in these animals. Transplanted HSCs engrafted within the bone marrow (BM) of host animals, and HSC-derived cells were isolated from BM and successfully retransplanted into new hosts with injured liver. Cultured HSCs transiently adopted an expression profile similar to that of progenitor cells during differentiation into bile acid–synthesizing and –transporting hepatocytes, suggesting that stellate cells represent a source of liver progenitor cells. This concept connects seemingly contradictory studies that favor either progenitor cells or MSCs as important players in stem cell–based liver regeneration.     

不同胎龄小鼠胎肝干细胞的性状比较

背景：胎肝干细胞具有比骨髓干细胞更强的增殖分化能力和更低的免疫原性和免疫活性,逐渐受到关注,目前多数研究集中在成体肝干细胞,对小鼠胚胎肝干细胞的研究较少。目的：比较不同胎龄小鼠胎肝干细胞的生物学性状,探讨胎肝发育过程中干细胞的变化。方法：采用机械分离结合酶消化法及差速贴壁法分离培养不同胎龄（13．5d,16．5d,19．5d）的小鼠胎肝干细胞,对原代细胞形态,生长状态及表面标记物进行观察比较。结果与结论：胎龄13．5d组胎肝干细胞形态均一,生长状态良好,干细胞特性明显,白蛋白和细胞角蛋白19基本无表达,提示胎肝干细胞处于相对原始的未分化阶段。随胎龄增加,胎龄16．5d,19．5d组胎肝干细胞形态差异渐大,生长状态渐次,白蛋白和细胞角蛋白19阳性表达率增加。提示胎肝干细胞逐渐向具有肝细胞和胆管细胞标志的双显型干细胞方向转化。     

Antagonism of the chemokine Ccl5 ameliorates experimental liver fibrosis in mice

Activation of hepatic stellate cells in response to chronic inflammation represents a crucial step in the development of liver fibrosis. However, the molecules involved in the interaction between immune cells and stellate cells remain obscure. Herein, we identify the chemokine CCL5 (also known as RANTES), which is induced in murine and human liver after injury, as a central mediator of this interaction. First, we showed in patients with liver fibrosis that CCL5 haplotypes and intrahepatic CCL5 mRNA expression were associated with severe liver fibrosis. Consistent with this, we detected Ccl5 mRNA and CCL5 protein in 2 mouse models of liver fibrosis, induced by either injection of carbon tetrachloride (CCl4) or feeding on a methionine and choline-deficient (MCD) diet. In these models, Ccl5-/- mice exhibited decreased hepatic fibrosis, with reduced stellate cell activation and immune cell infiltration. Transplantation of Ccl5-deficient bone marrow into WT recipients attenuated liver fibrosis, identifying infiltrating hematopoietic cells as the main source of Ccl5. We then showed that treatment with the CCL5 receptor antagonist Met-CCL5 inhibited cultured stellate cell migration, proliferation, and chemokine and collagen secretion. Importantly, in vivo administration of Met-CCL5 greatly ameliorated liver fibrosis in mice and was able to accelerate fibrosis regression. Our results define a successful therapeutic approach to reduce experimental liver fibrosis by antagonizing Ccl5 receptors.     

Hepatic oval (stem) cell expression of endothelial differentiation gene receptors for lysophosphatidic acid in mouse chronic liver injury

Growth factor lysophosphatidic acid (LPA) regulates cell proliferation and differentiation and increases motility and survival in several cell types, mostly via G-protein-coupled receptors encoded by endothelial differentiation genes (EDG). We show herein that hepatic oval (stem) cell proliferation, induced by 3,5-diethoxycarbonyl-1,4-dihydrocollidine (DDC) in a mouse model of chronic liver injury, was associated with the expression of LPA1, LPA2, and LPA3 receptor subtypes; only LPA1 receptor protein was detectable in normal liver by western blot. In the injured liver, enhanced LPA1 receptor was identified predominantly in oval cells along the portal tract, proliferating ductular epithelial cells, and small cells, which were located in the nearby parenchyma and formed clusters. Interestingly, the LPA1 receptor was co-expressed in DDC-treated livers with the stem cell antigen SCA-1, suggesting that this receptor may be associated with bone marrow-derived progenitors. All three receptors for LPA were detected mostly in small cells in the vicinity of the portal tract, and co-localized with the A6 antigen, a marker of ductular oval cells. In addition, hepatic levels of endogenous LPA were significantly higher in DDC-fed mice compared to normal animals. We propose that the expression of diverse LPA receptors may be a necessary part of the mechanism responsible for activation of oval cells during liver injury. As a result, LPA and its analogs may represent critical endogenous mediators, which regulate survival, increase motility, and modulate proliferation and differentiation of hepatocyte progenitors in regenerating liver.     

异种肝前体细胞移植治疗急性肝损伤大鼠

背景：成体肝前体细胞可在受体肝脏内定植并分化为肝细胞。不过,异种肝前体细胞移植能否促进急性肝损伤的恢复,脾脏微环境能否促进移植物的存活和向肝细胞分化,尚没有研究。目的：评价异种肝前体细胞移植治疗急性肝损伤的作用;监测移植肝前体细胞在大鼠脾脏实质内的定植及向肝细胞的分化。方法：体外培养雄性小鼠来源的肝前体细胞系肝上皮样前体细胞。通过CCl4腹腔注射联合2/3肝切除构建急性肝损伤大鼠模型,进行肝上皮样前体细胞脾脏移植。在肝切除后1,5,14和21 d,苏木精-伊红染色观察肝脏病理改变,全自动生化分析仪监测血清转氨酶变化,PCR反应检测脾脏组织Y染色体特异性序列Sry,脾脏CK-19和Alb免疫组织化学追踪移植肝上皮样前体细胞的植入和肝细胞分化。结果与结论：肝上皮样前体细胞可在体外长期培养,保持增殖能力和双向分化潜能。肝上皮样前体细胞脾脏移植后,肝损伤大鼠肝细胞肿胀明显减轻,丙氨酸转氨酶和天门冬氨酸转氨酶下降更明显。移植后1,5,14和21 d,脾脏DNA中均能检测到Sry序列。在整个实验期间CK-19阳性细胞在大鼠脾脏实质内始终存在。Alb阳性细胞在移植后5 d在脾脏实质中出现,随后阳性细胞数逐渐增多。实验表明,移植肝前体细胞能在大鼠脾脏实质中植入,并分化为肝细胞,能有效促进CCl4腹腔注射联合2/3肝切除诱导的大鼠急性肝损伤的修复过程。     

The plastic liver: differentiated cells,stem cells,every cell?

The liver is capable of full regeneration following several types and rounds of injury, ranging from hepatectomy to toxin-mediated damage. The source of this regenerative capacity has long been a hotly debated topic. The damage response that occurs when hepatocyte proliferation is impaired is thought to be mediated by oval/dedifferentiated progenitor cells, which replenish the hepatocyte and ductal compartments of the liver. Recently, reports have questioned whether these oval/progenitor cells truly serve as the facultative stem cell of the liver following toxin-mediated damage. In this issue of the JCI, Kordes and colleagues use lineage tracing to follow transplanted rat hepatic stellate cells, a resident liver mesenchymal cell population, in hosts that have suffered liver damage. Transplanted stellate cells repopulated the damaged rat liver by contributing to the oval cell response. These data establish yet another cell type of mesenchymal origin as the progenitor for the oval/ductular response in the rat. The lack of uniformity between different damage models, the extent of the injury to the liver parenchyma, and potential species-specific differences might be at the core of the discrepancy between different studies. Taken together, these data imply a considerable degree of plasticity in the liver, whereby several cell types can contribute to regeneration.     

In liver fibrosis,dendritic cells govern hepatic inflammation in mice via TNF-α

Hepatic fibrosis occurs during most chronic liver diseases and is driven by inflammatory responses to injured tissue. Because DCs are central to modulating liver immunity, we postulated that altered DC function contributes to immunologic changes in hepatic fibrosis and affects the pathologic inflammatory milieu within the fibrotic liver. Using mouse models, we determined the contribution of DCs to altered hepatic immunity in fibrosis and investigated the role of DCs in modulating the inflammatory environment within the fibrotic liver. We found that DC depletion completely abrogated the elevated levels of many inflammatory mediators that are produced in the fibrotic liver. DCs represented approximately 25% of the fibrotic hepatic leukocytes and showed an elevated CD11b⁺CD8^– fraction, a lower B220⁺ plasmacytoid fraction, and increased expression of MHC II and CD40. Moreover, after liver injury, DCs gained a marked capacity to induce hepatic stellate cells, NK cells, and T cells to mediate inflammation, proliferation, and production of potent immune responses. The proinflammatory and immunogenic effects of fibrotic DCs were contingent on their production of TNF-α. Therefore, modulating DC function may be an attractive approach to experimental therapeutics in fibro-inflammatory liver disease.     

肢体缺血后处理促进缺血性脑损伤大鼠内源性神经干细胞的增殖

背景：远程肢体缺血预处理应用到脑缺血-再灌注损伤领域的研究已有一些报道,但肢体缺血后处理应用于该领域报道很少。目的：观察肢体缺血后处理对缺血性脑损伤大鼠侧脑室旁神经干细胞增殖的影响。方法：利用改良线栓法制作局灶性脑缺血大鼠模型,将30只造模成功的SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组15只。实验组行远程肢体缺血后处理,对照组不做处理。2组大鼠分别于造模后5,10,15d处死取脑,处死前1d每隔8h腹腔注射50mg／kg5-嗅脱氧尿嘧啶核苷1次,共3次。应用免疫组织化学方法检测梗死灶区大鼠脑组织5嗅脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞数。结果与结论：与对照组比较,实验组脑再灌注损伤程度呈现不同程度减轻,行为学评分降低（P〈0．05）。实验组各时间点梗死灶周边皮质的5-嗅脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞数明显多于对照组（P〈0．05）。提示局灶性脑缺血造模后的肢体缺血后处理可以改善大鼠行为学表现,促进了内源性干细胞的激活增殖,对缺血性脑损伤有保护作用。