三七三醇皂苷对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

【摘要】目的探讨三七三醇皂苷（PTS）对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞（RGC）的保护作用及机制。方法SD大鼠随机分为对照组、糖尿病组及治疗组,糖尿病组及治疗组腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病动物模型,治疗组给予PTS50mg·kg-1·d-1灌胃,1个月后免疫荧光组化双标检测Nogo受体与RGC特异性标志物Brn3a的共存情况,Western blot检测视网膜Nogo受体表达,试剂盒检测视网膜丙二醛（MDA）含量,HE染色观察RGC数量。结果Brn3a与Nogo受体于视网膜内大量共存。与对照组相比,糖尿病组视网膜Nogo受体表达上调,MDA含量增加,RGC数量减少（均P＜0.001）;与糖尿病组相比,治疗组视网膜Nogo受体表达减少,MDA含量降低,RGC数量增加（P＜0.001）。结论PTS可能通过抑制糖尿病大鼠视网膜RGC内Nogo受体的表达,抑制视网膜氧化应激,从而保护糖尿病视网膜RGC。     

抑制NGR对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的 探讨抑制Nogo蛋白受体(NGR)对糖尿病(DM)大鼠视网膜神经节细胞(RGC)的保护作用.方法 尾静脉注射1％链脲佐菌素50 mg/kg建立30只SD大鼠DM模型,分别向双侧眼球玻璃体腔内注射NGR小干扰RNA(siRNA)病毒10μl(A组,10只)、病毒稀释液10μl(B组,10只)和病毒阴性对照液10μl(C组,10只);另取10只正常SD大鼠(D组),同法注射病毒稀释液10μl.12周后,免疫组化法检测NGR在视网膜中的定位,Western blot检测NGR的表达,DNAladder检测各组细胞凋亡情况.结果 NGR主要表达于RGC.与D组相比,B、C组NGR表达明显上调(P＜0.01),A组表达无明显变化(P＞0.05).B、C组RGC呈现明显的DNA ladder带,而A、D组未见明显DNA ladder带.结论 抑制NGR的表达可减少DM的RGC凋亡.     

三七皂苷对大鼠持续性高眼压视网膜神经节细胞保护的实验研究

目的 探讨三七皂苷（PNS）对大鼠持续性高眼压下视网膜神经节细胞损伤的保护作用及机制.方法 健康SD大鼠80只随机分为四组,正常对照组、0.9%氯化钠溶液组、单纯用药组和联合用药组.采用烙闭巩膜上静脉联合术后结膜下注射5-FU（5-氟尿嘧啶）的方法制作大鼠持续性高眼压模型,所有大鼠定期测量并记录眼压.4周、8周、12周、16周、20周后分别处死大鼠,摘取眼球,TUNEL法检测视网膜神经细胞（Retinal ganglion Cells,RGCs）凋亡;AgNOR染色检测RGCs的活性;免疫组织化学检测视网膜节细胞层半胱氨酸蛋白酶-9（caspase-9）的表达.结果 术后眼压维持在（36.55±2.27）mm Hg为4周至20周左右;视网膜神经节细胞层TUNEL阳性细胞数与正常对照组差异有统计学意义;正常对照组和联合用药组RGC8细胞核内银染颗粒数比较差异无统计学意义（P〉0.05）;各组视网膜神经节细胞层caspase-9蛋白的表达较正常对照组明显增强.结论PNS对持续性高眼压导致的视网膜神经节细胞损伤有较显著保护作用.联合降眼压药控制眼压,PNS对大鼠视网膜神经节细胞的保护作用更突出.PNS能抑制视网膜神经节细胞Caspase-9的表达从而保护大鼠视网膜神经节细胞.     

半胱氨酸蛋白酶-3及-9表达上调介导糖尿病大鼠心肌细胞凋亡及抗氧化剂α-硫辛酸的保护作用

目的探讨天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白酶（caspase）表达上调对高血糖诱导的心肌细胞凋亡的影响及抗氧化剂α-硫辛酸的防治效果。方法链脲佐菌素（STZ）建立糖尿病大鼠动物模型,实验动物分为糖尿病组、对照组、α-硫辛酸组,分第4周、第8周、第12周3个阶段进行观察。免疫组化染色测定糖尿病大鼠心脏caspase-3、-9mRNA和蛋白质表达的变化。结果糖尿病组第4周、第8周、第12周大鼠心脏caspase-3、-9mRNA和蛋白质表达均高于对照组（P〈0．05）,随病程延长两者表达增加（P〈0．05）,两者表达变化趋势一致;与糖尿病组比较,α-硫辛酸组在各时间段Caspase-3、-9mRNA和蛋白质表达均下降（P〈0．05）。结论高血糖可以诱导caspase-3、-9表达的增加从而导致心肌细胞的凋亡,抗氧化剂可以下调caspase-3、-9表达,减弱心肌细胞的凋亡。     

番石榴叶总三萜改善糖尿病大鼠视网膜损伤的作用机制研究#br#

目的　探讨番石榴叶总三萜（TTPGL）对糖尿病大鼠视网膜损伤的影响及相关机制。方法　雄性SD大鼠50只,按55 mg/kg腹腔一次性注射链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病模型。模型诱导成功后,大鼠编号后按照随机数字表法分成5组：糖尿病组（DM组,生理盐水灌胃）、TTPGL低剂量组（TTPGL-L组,50 mg/kg灌胃）、TTPGL中剂量组（TTPGL-M组,100 mg/kg灌胃）、TTPGL高剂量组（TTPGL-H组,200 mg/kg灌胃）及二甲双胍组（Met组,10 mg/kg灌胃,阳性对照）,另取10只正常雄性SD大鼠作为对照组（CON组,生理盐水灌胃）。每日1次连贯干预12 周后,免疫荧光染色检测视网膜神经胶质酸性蛋白（GFAP）表达,Western blot检测视网膜核转录因子-κB（NF-κB）、肿瘤坏死因子（TNF）-α蛋白相对表达量,HE染色检测视网膜神经节细胞（RGC）密度。结果　干预12周后,与CON组相比,DM组血糖明显升高,视网膜GFAP、NF-κB及TNF-α蛋白表达明显增加,RGC密度明显降低（均P＜0.05）。与DM组相比,TTPGL-M组、TTPGL-H组及Met组GFAP、NF-κB及TNF-α蛋白表达明显降低,RGC密度明显增加（均P＜0.05）,而DM组与TTPGL-L组之间上述指标差异无统计学意义（P＞0.05）。结论　TTPGL对糖尿病状态下RGC损伤具有保护作用,其机制可能与降血糖、下调视网膜GFAP表达和抑制炎症反应有关。     

银杏叶提取物对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞凋亡的作用观察

目的 观察银杏叶提取物（EGB）对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞凋亡的影响,探讨EGB防治糖尿病性视网膜病变的作用机制. 方法 选择健康成年Wistar 大鼠50只, 随机分成正常对照组、模型组、低剂量EGB组、中剂量EGB组、高剂量EGB组.腹腔内注射链脲佐菌素（STZ） 诱发大鼠糖尿病.低、中和高剂量EGB组分别给予EGB溶液50 ,100和200 mg·kg^-1·d^-1,灌胃给药,模型组和正常组均灌胃等体积0.9%氯化钠溶液,均连续12周.制备大鼠视网膜石蜡切片行末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记 （TUNEL） 法, 检测视网膜神经节细胞凋亡指数（AI）,并对染色结果行计算机图像分析.电镜观察各组神经节细胞的超微结构变化. 结果 模型组大鼠神经节细胞AI比正常对照组显著增加（P＜0.01), 中、高剂量EGB组神经节细胞AI与模型组比较明显减少（P＜0.01),低剂量EGB组神经节细胞AI与模型组比较差异无显著性（P＞0.05）.中、高剂量EGB组神经节细胞超微结构的损害明显减轻. 结论 EGB可以通过抑制视网膜神经节细胞的凋亡来减轻糖尿病性视网膜病变.     

自由基在视神经损伤后的毒性作用及氨基胍对其影响

目的观察氨基胍（aminoguaniding,AG）在兔视神经损伤后对视网膜超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量的影响,研究对视网膜神经节细胞（retinalganglioncell,RGC）的保护性作用机制。方法健康成年大耳白兔66只,随机分为正常对照组、损伤对照组和损伤治疗组,损伤组按损伤后ld、3d、7d、14d、21d分5组,每组6只。损伤组采用同一反向动脉夹夹闭视神经法制作动物模型。伤后2min耳缘静脉注射2％AG溶液（损伤治疗组）及等量0．9％氯化钠溶液（损伤对照组）,测定视网膜组织中SOD、MDA的含量。结果正常视网膜组织中含有一定量的MDA、SOD,视神经损伤后MDA含量逐渐升高,而SOD活力逐渐下降,至伤后14d时达到高峰,同一时间点损伤对照组和损伤治疗组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论兔视神经损伤后,AG通过对抗自由基的途径减少视神经损伤诱导的RGC凋亡。     

丹七散提取物抗N-甲基-D-天冬氨酸诱导的视神经节细胞凋亡机制

目的:观察丹七散提取物(DQSE)对N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)诱导损伤的大鼠视网膜神经节(RGCL)细胞抗凋亡作用,并探讨其作用机制。方法:Wistar大鼠随机分为对照组、NMDA组、DQSE(3.9,7.8,15.6 g·kg^-1)组和阳性对照组(MK801,NMDA抑制剂)。给药7 d后,对照组大鼠玻璃体注射生理盐水,其余组玻璃体注射NMDA制备视网膜损伤模型。给药14 d后,TUNEL法观察RGCL凋亡;免疫组织染色法检测视网膜casepase-3表达分布;Western-blotting法测定视网膜Cleaved casepase-3,-8和-9表达水平。结果:中、高剂量DQSE能显著减少大鼠RGCL的TUNEL阳性表达率(P<0.01,P<0.001)和casepase-3阳性表达率(P<0.01,P<0.001)。DQSE(3.9,7.8,15.6 g·kg^-1)剂量依赖性地降低视网膜Cleaved casepase-3,-8,和-9表达水平。结论:DQSE通过下调Cleaved caspase-3蛋白及其上游的Cleaved caspase-8、-9蛋白表达水平产生抗凋亡作用,进而减少RGCL细胞丢失,实现视网膜保护作用。     

糖尿病神经病理性痛大鼠脊髓背角凋亡细胞与凋亡蛋白酶caspase-3的表达变化

目的探讨糖尿病神经病理性痛（DNP）大鼠脊髓背角凋亡细胞及与之相联系的凋亡蛋白酶caspase-3的表达变化。方法健康雄性sD大鼠60只,随机分为DNP组和正常对照组,每组30例。DNP组：腹腔注射链脲霉素（STZ）50mg／kg制备成DNP模型;正常对照组给予等容量0．9％氯化钠溶液。分别给予注射STZ或0．9％氯化钠溶液后3、5、7周时取10只大鼠,采集静脉血样,测定空腹血糖浓度,然后测定机械缩足阈值,取2组大鼠L1-5脊髓组织,采用原位末端标记法（TUNEL）检测2组大鼠脊髓背角神经细胞凋亡的变化。采用免疫组织化学染色法观察凋亡蛋白酶caspase-3的表达变化。结果与正常对照组比较,DNP组血糖升高,机械缩足阈值降低（P〈0．05）,凋亡细胞与凋亡蛋白酶caspase-3的表达逐渐增加（P〈0．05）。结论DNP大鼠脊髓背角凋亡细胞与凋亡蛋白酶caspase-3的表达上调。     

糖尿病视网膜病变神经细胞凋亡及褪黑素对其影响的实验研究

目的 探讨褪黑素对2型糖尿病大鼠视网膜神经细胞凋亡的影响.方法 将48只Wistar雄性大鼠完全随机分为正常组(12只)、模型组(18只)和褪黑素组(各18只).制作2型糖尿病大鼠模型.褪黑素组以褪黑素10 mg/(kg·d)剂量灌胃,共12周.取出视网膜组织,分别在光镜和透射电镜下观察视网膜结构变化,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法观察视网膜神经细胞的凋亡.结果 电镜变化:模型组神经节细胞结构改变,部分神经节细胞出现凋亡;褪黑素组变化较模型组轻微.TUNEL方法检测结果:模型组、褪黑素组和正常组凋亡细胞数分别为(20.07 ±0.24)、(14.42 ±0.51)和(4.22±0.54)个,模型组和褪黑素组视网膜凋亡细胞均明显多于正常组(均P＜0.01),但褪黑素组明显少于模型组(P＜0.01).结论 糖尿病视网膜病变早期存在着视网膜神经细胞的凋亡现象,褪黑素能够抑制视网膜神经细胞的凋亡.     

藏红花酸对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠视网膜神经上皮的保护作用

目的研究藏红花酸对链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病大鼠视网膜神经上皮的保护作用及机制。方法♂SD大鼠40只,随机选取30只腹腔注入STZ(60 mg·kg^-1)将大鼠随机分为3组:糖尿病对照组、藏红花酸低剂量组(50 mg·kg^-1·d^-1,p.o.)、藏红花酸高剂量组(100 mg·kg^-1·d^-1,p.o.)。空白对照组及糖尿病组每天给予3 mL 0.5%CMC-Na。第8周末取各组大鼠眼球检测视网膜神经上皮caspase-3、蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)表达量,实时荧光定量PCR检测大鼠视网膜神经上皮Bcl-2、TNF-α、Bax、PKC-βmRNA表达水平。结果caspase-3、TNF-α、PKC及Bax表达量DM组表达最高,DM+CRO组比DM组明显下降(P<0.05),Bcl-2表达量DM+CRO处理组较DM组明显升高(P<0.01)。结论藏红花酸对STZ诱导的糖尿病大鼠视网膜神经上皮具有保护作用,其可能机制是抑制TNF-α、Bax、caspase-3表达,提高Bcl-2的表达,并且藏红花酸可以减少视网膜神经上皮PKC蛋白和基因的表达,保护糖尿病大鼠视网膜。     

姜黄素对糖尿病大鼠心肌自噬,凋亡及AMPK-mTOR信号通路的影响

目的:基于心脏组织AMPK/mTOR信号通路、自噬和凋亡来探讨姜黄素(curcumin,Cur)对糖尿病大鼠心脏损伤的保护作用。方法:50只雄性SD大鼠被随机分为3组:正常对照组(Con,n=10)给予正常饮食以及等量生理盐水腹腔注射;糖尿病模型组(DM,n=40)大鼠给予高糖高脂饮食联合连续5 d腹腔注射链脲佐菌素(streptozocin,STZ) (35 mg·kg^-1·d^-1),给药组(Cur+DM),部分糖尿病大鼠(n=20)在其饮用水中给予Cur(300 mg·kg^-1·d^-1)进行干预16周。HE染色观察大鼠心脏组织形态改变;透射电镜观察大鼠心脏组织粒体形态变化;TUNEL染色,免疫组织化学和蛋白印迹等方法检测心脏组织自噬、凋亡,AMPK/mTOR信号通路等相关蛋白的表达情况。结果:与正常对照组相比,糖尿病模型组大鼠心肌肥大,线粒体嵴稀疏、断裂,自噬及相关蛋白表达水平下降(P<0.05),细胞凋亡及相关蛋白表达水平显著增加(P<0.05),P-AMPK/AMPK蛋白表达水平降低(P<0.05)而P-mTOR/mTOR增加(P<0.05)。与糖尿病模型组比较,给药组大鼠心肌肥大水平和线粒体断裂程度减轻,自噬及相关蛋白表达水平增加(P<0.05),细胞凋亡及相关蛋白表达水平减轻(P<0.05),P-AMPK/AMPK蛋白表达水平增加(P<0.05),而P-mTOR/mTOR减少(P<0.05)。结论:姜黄素可能通过活化AMPK/mTOR信号通路增强糖尿病大鼠心脏组织自噬水平,减轻心脏组织细胞凋亡,从而改善糖尿病大鼠心脏损伤。     

葛根素对糖尿病大鼠视网膜的保护及对NF-κB表达的抑制

目的探讨糖尿病(DM)大鼠视网膜功能、超微结构的变化和NF-κB的表达及葛根素的干预作用。方法采用单次ip给予链脲佐菌素(STZ)60 mg·kg-1制备DM模型。ig给予葛根素125,250和500mg·kg-1组,连续给药4周。视网膜电图(ERG)测定视网膜功能、透射电镜观察视网膜超微结构、TUNEL法检测视网膜细胞凋亡以及免疫组织化学染色法检测视网膜组织NF-κB p65活性。结果与正常对照组相比,DM模型组ERG的b波振幅明显降低。与DM模型组相比,葛根素250和500 mg·kg-1组的b波振幅明显上升(P<0.05);透射电镜下见DM模型组视网膜神经节细胞,内、外核层细胞均出现线粒体改变。葛根素干预后超微结构改变明显好转。与正常对照组相比,DM模型组视网膜细胞凋亡指数显著增高以及NF-κB p65表达明显增强,葛根素干预后各组凋亡指数均显著下降,葛根素250和500 mg·kg-1组NF-κB p65表达显著下降(P<0.05)。结论 DM大鼠早期即出现神经视网膜功能和超微结构的改变,葛根素可抑制NF-κB的活化,抑制视网膜神经细胞的凋亡从而起到保护神经视网膜的作用。     

伊伐布雷定对糖尿病大鼠心肌的保护作用及机制探讨

目的：研究伊伐布雷定（ivabradine,Iva）对糖尿病（DM）大鼠心肌的保护作用及机制。方法建立链脲佐菌素（STZ）诱导Ⅰ型糖尿病大鼠模型,将54只实验大鼠随机分为对照（ NC）组、DM组、Iva低、中、高剂量组、阳性对照药（卡维地洛）组。测血糖、体重、心脏重量和血清中乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）,同时测定心肌组织超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（ MDA）含量,观察心肌结缔组织生长因子（ CTGF）表达的变化。结果与NC组相比,DM组大鼠血清中LDH、CK活性显著升高（P＜0．05）,心肌组织SOD活性显著降低（P＜0．05）,经Iva治疗后LDH、CK活性显著降低,SOD活性显著升高（P＜0．05）;DM组心肌中MDA含量与NC组相比显著升高,Iva组MDA含量升高显著降低（P＜0．05）。与NC组相比,DM组大鼠心肌中CTGF表达显著升高（P＜0．05）,应用Iva干预治疗后,CTGF表达的升高显著被抑制（P＜0．05）。结论 Iva可显著升高糖尿病大鼠心肌组织SOD活性,抑制CTGF表达升高和脂质过氧化,从而对糖尿病大鼠心肌损伤产生保护作用。     

Cardioprotective effect of Urena lobataleaves extract on diabetic rats

OBJECTIVE To know cardioprotective effect of U.lobataleaves extract on diabetic rat.METHODS This study uses control group post test only with male sprague dawley rats.Diabetic rats was induced by high fructose diet(HFD)and single dose streptozotocin 25mg·kg-1 bw intra peritoneal.The rat was administrated orally with water extract of U.lobataleaves in concentrations of 250,500 and 1000mg·kg-1 bw for 4 weeks.After scarifying,heart organ were collected and then superoxyde dismutase(SOD)heart level,malondialdehyda(MDA)and tumor necrosis factor-alpha(TNF-α)were examined.The data was analyzed using ANOVA test continued with LSD test(P<0.05).RESULTS The oral administration of U.lobataleaves extract 250,500,and 1000mg·kg-1 bw were able to increase SOD heart level about 40%,50% and 70% respectively compared to diabetic group(P<0.05),while the MDA heart level was decreased by 60%,90% and 110%(P<0.05)respectively.The supplementation of water extract from U.lobatain dose of 250,500 and 1000mg·kg-1 bw were also decrease TNF-αheart level approximately 20%,40% and 60% compared to control group(P<0.05).In diabetic groups,SOD heart level was decreased compared to normal group(P<0.05)while the MDA and TNF-αwere increased(P<0.05).CONCLUSION U.lobataleaves extract acts as cardioprotector on diabetic rats by increasing of SOD heart level,decreasing of MDA heart level and TNF-α.This effect may be related to active compounds that act as an antioxidant and anti-inflammatory in U.lobata extract.     

LTBP2通过TLR4/NF-κB信号通路抑制糖尿病大鼠海马神经元凋亡

目的 探讨沉默潜在转化生长因子 β 结合蛋白 2（LTBP2）基因对糖尿病大鼠学习记忆功能的影响及 机制。方法 雄性SD大鼠45只一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ）55 mg/kg,72 h后采尾静脉血测血糖,将血糖＞ 16.7 mmol/L 的大鼠定为糖尿病模型;模型诱导成功后将大鼠随机分成3组：糖尿病（DM）组、si-LTBP2组（大鼠海马 给予腺病毒包装的针对LTBP2的siRNA 10 μL）、sc-LTBP2组（大鼠海马给予LTBP2对照序列10 μL）,每组15只。另 取15只正常大鼠作为对照（CON）组。12周后,水迷宫检测大鼠学习记忆能力;免疫组织化学染色和实时荧光定量聚 合酶链式反应（qPCR）检测海马LTBP2表达;Western blot检测海马LTBP2、Toll样受体4（TLR4）、核因子（NF）-κB蛋 白相对表达量;TUNEL染色检测海马神经元凋亡。结果 与CON组相比,DM组、si-LTBP2组和sc-LTBP2组LTBP2、 TLR4、NF-κB表达明显增加,海马神经元凋亡明显增多,大鼠学习记忆能力明显下降（均P＜0.05）。与DM组相比, si-LTBP2 组 LTBP2、TLR4、NF-κB 表达明显降低,海马神经元凋亡明显减少,大鼠学习记忆能力明显提升（均 P＜ 0.05）。结论 沉默海马LTBP2的表达可明显改善糖尿病大鼠学习记忆能力,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号 通路有关。     

葛根提取物抗糖尿病大鼠氧化应激的实验研究

目的:探讨葛根提取物防治糖尿病血管病变的机制.方法:采用链脲霉素腹腔注射制备糖尿病大鼠模型,以氨基胍作为阳性药物对照,以葛根总提取物和总黄酮为受试药物,测定各实验组大鼠血糖、超氧化物歧化酶、丙二醛、一氧化氮及一氧化氮合酶,观察葛根提取物对糖尿病大鼠的作用与影响.结果:与正常对照组相比,模型组血糖、血浆超氧化物歧化酶和丙二醛有显著差异(P＜0.05,P＜0.01);葛根总提取物、葛根总黄酮可降低糖尿病大鼠血糖,与模型组比较有显著差异(P＜0.05);氨基胍、葛根总提取物和葛根总黄酮可提高糖尿病大鼠血浆超氧化物歧化酶的活性,减少丙二醛的产生,与模型组比较有显著差异(P＜0.05,P＜0.01).结论:葛根提取物具有抗氧化应激的作用,可防治糖尿病血管病变的发生.