mitoKATP和肌浆网钙ATP酶在心肌缺血预适应的作用及机制

目的探讨肌浆网钙ATP酶在心肌细胞缺氧预适应模型上的作用以及其与mitoKATP开放的相关性。方法原代培养的新生大鼠心肌细胞,随机分为4组正常培养组、缺氧/复氧损伤组、缺氧预适应组、5 HD(mitoKATP阻断剂)合并缺氧预适应组。测定各组细胞上清中LDH的释放量,细胞存活率及肌浆网钙ATP酶活性。结果缺氧预适应组与缺氧复氧组比较,LDH的释放显著下降(P <0 0 1) ,细胞存活率明显上升(P <0 0 1) ,肌浆网钙ATP酶活性提高(P <0 0 1)而5 HD合并缺氧预适应组较缺氧预适应组LDH释放增多(P <0 0 5 ) ,细胞存活率下降显著(P <0 0 1) ,肌浆网钙ATP酶活性下降(P <0 0 1)。结论肌浆网钙ATP酶与mitoKATP开放均参与了缺氧预适应早期相的保护作用,且2者之间的作用具有相关性。     

ATP敏感性钾通道在心血管疾病中的作用

1983年日本学者在豚鼠心室肌细胞上发现了一类非电压依赖、受细胞内三磷腺苷（ATP）和二磷腺苷（ADP）调节的选择性钾通道,命名为ATP敏感性钾通道（KATPchannel）。KATPchannel分为细胞膜、线粒体、核膜KATPchannel三类,在心血管疾病如急性心肌缺血、缺血预适应、心律失常、高血压等中发挥的作用十分广泛,但何种KATPchannel起关键作用还有一定争议,深入研究KATPchannel在心血管系统中的作用对于防治心血管疾病具有重要意义。     

优降糖对KATP通道介导缺血预适应心肌再灌注损伤的影响

目的 :探讨优降糖在完整大鼠心脏模型中 ,对 ATP敏感钾通道 (KATP)介导心肌缺血预适应作用的影响。方法 :将 4 4只大鼠随机分为 4组 :心肌缺血预适应组 (IPC组 )、优降糖组 (GL I组 )、优降糖 IPC组 (G P组 )和对照组 (C组 )。心肌缺血预适应由 3次 10分钟缺血和 10分钟再灌注组成。所有大鼠均接受 30分钟缺血和 6 0分钟再灌注。梗死范围由饱和曲利本蓝和红四氮唑蓝染色判定 ,并以坏死区占缺血区的百分比表示。 导联记录心脏室性心律失常。结果 :IPC能显著缩小缺血再灌注后的心肌梗死范围 ,且这种作用能被 KATP通道阻滞剂优降糖完全取消。 IPC可减少缺血再灌注所致的室性心律失常的发生 ,但这种保护作用不能被优降糖所阻断。结论 :优降糖对 KATP介导 IPC的心肌保护作用有影响。     

一氧化氮合酶在缺血预适应诱导第二心肌保护窗口中的作用

目的探讨一氧化氮合酶在缺血预适应诱导第二心肌保护窗口减少心肌梗死范围中的作用.方法结扎冠状动脉复制心肌缺血预适应及心肌梗死模型.斑点印迹法测定心肌热休克蛋白72含量.结果缺血预适应前静注一氧化氮合酶抑制剂(左旋硝基精氨酸)可使缺血预适应组的心肌梗死范围由(22.6±5.9)%扩大至(40.1±8.3)%,与对照组(44.2±8.1)%水平相似.亦可使缺血预适应诱导的心肌热休克蛋白72表达由3.3±0.8降至2.3±0.8,与对照组水平1.8±0.6相似.结论一氧化氮合酶在缺血预适应诱导第二心肌保护窗口过程中发挥重要作用.其作用可能与其参与诱导心肌热休克蛋白72表达有关.     

心肌缺血预适应延迟保护作用和诱导型一氧化氮合酶及蛋白激酶C的关系

缺血预适应（IPc）是体内普遍存在的一种强大的自身的保护机制。随着研究的不断深入，发现心肌缺血预适应存在具有更广泛临床意义的延迟保护作用，并且这种延迟保护作用与诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的活化及蛋白激酶C（PKC）通路有关。文章就心肌缺血预适应延迟保护作用机制与iNOS及PKC的关系研究进展作一综述。     

钙离子、蛋白激酶C与大鼠心肌预适应相关性研究

目的：观察钙离子、蛋白激酶C在大鼠心肌预适应保护机制中的作用,方法：64只雄性SD大鼠随机分为8组,A组正常灌流20min缺血40min再灌30min（I／R）;B组短暂缺血复灌＋I／R;C组短暂缺血复灌＋L－型钙通道阻滞剂＋I／R;D组短暂缺血复灌＋PKC阻滞剂＋I／R;E组钙通道激动剂＋I／R;F组钙通道激动剂＋PKC阻滞剂＋I／R;G组L－型钙通道阻滞剂＋I／R;H组PKC阻滞＋I／R。结果：实验中观察到B、E组与A、E、C组相比,各项指标匀提示心肌保护作用较好。结论：短暂钙离子内流增加通过蛋白激酶C诱导出心肌内源性保护作用。     

线粒体ATP敏感钾通道开放剂对大鼠肺缺血-再灌注损伤的保护作用

目的 探讨线粒体ATP敏感钾通道开放剂二氮嗪(DE)对肺缺血-再灌注损伤(I/R)的保护作用.方法 建立大鼠肺I/R模型,随机设立假手术(sham)组、I/R组、DE组、线粒体ATP敏感钾通道阻断剂5-羟基葵酸(5-HD)组,每组10只,观察各组肺组织病理形态学变化,测定肺湿/干质量比,检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果 与sham组比较,I/R组肺组织出现明显损伤性病理形态学变化,肺湿/干质量比明显增加(P<0.05),肺组织MPO活性显著增高、MDA含量显著增加和SOD活性显著降低(P<0.05).与I/R组比较,DE组肺组织损伤明显减轻,肺湿/干质量比降低(P<0.05),肺组织MPO活性降低、MDA含量减少、SOD活性增高(P< 0.05).5-HD组各观察指标与I/R组差异无统计学意义(P>0.05).结论 线粒体ATP敏感钾通道开放剂DE可通过抑制中性粒细胞聚集、减少自由基产生、增强抗氧化能力对大鼠肺缺血-再灌注损伤产生明显保护作用,该保护作用可被线粒体ATP敏感钾通道阻断剂5-HD所拮抗.     

bcl-2在mitoKATP通道开放剂二氮嗪诱导的抗小鼠移植肝脏缺血再灌注损伤中的作用的研究

目的研究bcl-2在线粒体ATP敏感性钾通道(mitoKATP)开放剂二氮嗪(DZ)诱导的抗小鼠移植肝脏缺血再灌注损伤中的作用,探讨应用二氮嗪减轻移植肝缺血再灌注损伤的可行性。方法两袖套法建立小鼠同种异体原位肝移植模型,利用化学合成bcl-2基因的SiRNA,经门静脉高压注射转染供体肝脏。随机分为肝脏移植组、SiRNA-bcl-2转染移植组、DZ灌注移植组、DZ灌注+SiRNA-bcl-2转染移植组、阴性对照组。肝脏移植术后第3天用萤光定量PCR和Western-Blot观察各组肝组织的bcl-2 mRNA和蛋白表达变化;测定受体血清AST、ALT含量。TUN EL法检测肝细胞凋亡。结果二氮嗪灌注组bcl-2 mRNA和蛋白表达水平较肝移植组明显增高(P<0.01),bcl-2mRNA和蛋白表达分别增加(63.2±4.8)%和(83.5±6.4)%;bcl-2 SiRNA转染组bcl-2 mRNA和蛋白表达水平较肝移植组明显降低(P<0.01),bcl-2mRNA和蛋白表达抑制分别为(65.7±5.3)%和(83.4±6.3)%;DZ灌注+SiRNA转染移植组bcl-2mRNA和蛋白表达与肝移植组和阴性对照组比较无显著差异(P>0.05);二氮嗪(DZ)灌注组中肝细胞凋亡指数、血清AST、ALT含量明显低于各组。bcl-2 SiRNA转染移植组中肝细胞凋亡指数、血清AST、ALT含量明显高于各组。结论bcl-2基因表达上调在线粒体ATP敏感性钾通道开放剂二氮嗪诱导的抗小鼠移植肝脏缺血再灌注损伤中起重要作用,二氮嗪能通过诱导bcl-2基因表达减轻移植肝缺血再灌注损伤。     

钙离子、蛋白激酶C与大鼠心肌预适应相关性研究

目的 :观察钙离子、蛋白激酶C在大鼠心肌预适应保护机制中的作用。方法 :64只雄性SD大鼠随机分为 8组 ,A组正常灌流 2 0min缺血 40min再灌 3 0min(I/R) ;B组短暂缺血复灌 +I/R ;C组短暂缺血复灌 +L- 型钙通道阻滞剂 +I/R ;D组短暂缺血复灌 +PKC阻滞剂 +I/R ;E组钙通道激动剂 +I/R ;F组钙通道激动剂 +PKC阻滞剂 +I/R ;G组L- 型钙通道阻滞剂 +I/R ;H组PKC阻滞剂 +I/R。结果 :实验中观察到B、E组与A、E、C组相比 ,各项指标均提示心肌保护作用较好。结论 :短暂钙离子内流增加通过蛋白激酶C诱导出心肌内源性保护作用。     

钙在嗜铬细胞瘤细胞缺氧性脑损伤中的作用研究

目的观察缺氧后大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞内游离钙的浓度(犤Ca2+犦i)、环磷酸腺苷(cAMP)、钙调蛋白(CaM)和钙调蛋白激酶II(Ca2+/CaM-PKII)的变化。方法采用放免技术,从细胞水平进一步观察缺氧对PC12细胞的毒性、细胞内犤Ca2+犦i变化,cAMP、CaM和Ca2+/CaM-PKII的变化。结果缺氧组PC12细胞cAMP、CaM含量在缺氧后24h明显高于正常对照组;Ca2+/CaM-PKII活性明显低于正常对照组。结论犤Ca2+犦i、cAMP、CaM和Ca2+/CaM-PKII在缺氧PC12细胞损伤机制中起了重要的作用。     

外源性磷酸肌酸对游泳力竭小鼠大脑中谷氨酸和钙-ATP酶活力的影响

目的：研究外源性磷酸肌酸（PCr）对游泳力竭小鼠大脑中谷氨酸（Glu）和钙-ATP酶（Ca^2＋ATPase）活力的影响,以进一步揭示PCr的抗疲劳机制。方法：将44只6周龄小鼠分为力竭对照组12只（A组）、力竭给药组12只（B组）、游泳8min对照组10只（C组）、游泳8min给药组10只（D组）,采取小鼠负重游泳的力竭运动模型,每只小鼠负重量为自身体质量的6％。于游泳前30min,B、D组小鼠经腹腔注射磷酸肌酸钠溶液1000mg／kg;A、C组小鼠注射同等比例生理盐水作为安慰剂。记录力竭组小鼠的力竭游泳时间,采用化学比色法检测4组小鼠大脑中Glu含量和Ca^2＋ATPase的活性。结果：经检测,B组小鼠的力竭游泳时间明显长于A组（P〈0．05）。小鼠大脑Glu含量检测显示,B组明显低于A组,D组明显低于c组（P％0．05）;Ca^2＋ATPase活力检测显示,B组明显高于A组,D组明显高于C组（P〈0．05）。结论：外源性PCr的抗疲劳机制与增强Ca^2＋ATPase活性和间接降低大脑中的Glu含量有关。     

颈椎椎后肌肉组织Ca^（2＋）-ATP酶与颈椎病及颈部软组织病理变化的相关性

目的:通过分析Ca2 与骨骼肌的关系,进一步阐述颈椎椎后肌肉组织内Ca2 -ATP酶与颈椎病的关系,及颈部软组织的病理变化。方法:应用计算机检索PubMed 1985-01/2006-12相关骨骼肌损伤与肌组织Ca2 -ATP酶关系方面的文献,检索词“Ca2 pump,Ca2 -ATPase,skeletal muscle”。限定文献语言种类为English。同时计算机检索CNKI与万方数据库1990-01/2006-12相关钙ATP酶与骨骼肌损伤的关系,及颈椎病发病病因的文献。检索词“钙ATP酶(Ca2 -ATP酶),骨骼肌,颈椎病病因”,限定文献语言种类为中文。对资料进行初审,选取包括Ca2 -ATP酶与肌组织损伤相关的文献,开始查找全文。纳入标准:Ca2 -ATP酶活性变化与骨骼肌损伤密切相关的文献研究。排除标准:重复研究,Meta分析类文章。共检索到4050篇关于Ca2 -ATP酶活性变化,骨骼肌损伤及颈椎病发病原因等方面的文献,最终纳入24篇符合标准的文献。结果:目前对酶活性变化与骨骼肌损伤的关系研究已较为广泛。而骨骼肌损伤作为颈椎病发病的一个因素,以酶活性变化作为指标来观察颈椎病发病时颈部软组织病理变化情况,及治疗后软组织病理变化情况的研究则较为少见。众多研究表明Ca2 是参与骨骼肌收缩的重要离子之一,与骨骼肌的生理病理有密切关系,而肌细胞内质网膜上的Ca2 -ATP酶是调节细胞内Ca2 浓度的重要蛋白质之一。骨骼肌慢性劳损易导致ATP酶活性下降,而酶活性的下降加重骨骼肌损伤,而引发系列疾病。强迫屈颈体位作为颈椎病发病的危险因素之一,可使颈椎椎后肌肉Ca2 -ATP酶活性降低,酶活性降低致使肌细胞损伤,并最终导致骨骼肌损伤而发病。结论:Ca2 -ATP酶活性变化是颈部软组织病理变化的一个重要指标之一。同时,该酶的活性变化也与颈椎病发病有着密切的关系。     

甲状腺激素T3对心肌细胞钠钾泵及钙泵功能的影响

目的观察甲状腺激素T3(三碘甲腺原氨酸)对鼠缺血再灌注(I/R)心肌细胞钠钾泵及钙泵功能的影响,探讨T3在心肌保护中的作用.方法将实验大鼠分为甲状腺功能正常(A组)和甲状腺功能减退(甲减,B组)两组,每组又分别随机分成对照组、缺血组、单纯灌注液组、T3灌注液组;测定左室心肌与体重的比值;测定各组心肌细胞Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性.结果甲减状态大鼠心肌细胞Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性分别下降10.8%、43.2%(P＜0.01).缺血30min,A、B两组的Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性均明显降低,并随着复灌进一步下降.然而,在复灌20min时,T3灌注液组的酶活性较单纯灌注液组显著提高,A组Na+-K+-ATPase活性(14.93±0.87)μmol/(mg*h)比较(12.17±0.91)μmol/(mg*h),P＜0.05,Ca2+-ATPase活性(11.20±1.07)μmol/(mg*h)比较(7.33±0.56)μmol/(mg*h),P＜0.01;B组Na+-K+-ATPase(14.10±0.51)μmol/(mg*h)比较(10.89±0.76)μmol/(mg*h),P＜0.01,Ca2+-ATPase活性(6.89±0.52)μmol/(mg*h)比较(5.23±0.71)μmol/(mg*h),P＜0.05.结论甲减状态及I/R过程心肌细胞钠钾泵及钙泵功能受到严重损害,T3可显著提高钠钾泵及钙泵功能,可部分逆转I/R过程中泵功能的损害,降低胞浆中Ca2+浓度,减轻心肌细胞的损伤,对心肌保护有益.     

Afatinib triggers a Ni2+-resistant Ca2+ influx pathway in A549 non-small cell lung cancer cells

Afatinib is used to treat non-small cell lung cancer cells (NSCLC), and its mechanism involves irreversible inhibition of epidermal growth factor receptor (EGFR) tyrosine kinase. In this study, we examined if afatinib had cytotoxic action against NSCLC other than inhibition of tyrosine kinase. Afatinib (1–30 μM) caused apoptotic death in A549 NSCLC in a concentration-dependent manner. Afatinib triggered Ca²⁺ influx without causing Ca²⁺ release, and the Ca²⁺ influx was unaffected by sodium orthovanadate (SOV, an inhibitor of tyrosine phosphatase), suggesting that afatinib-triggered Ca²⁺ response was unrelated to its inhibition of tyrosine kinase. Addition of afatinib also promoted Mn²⁺ influx. Ca²⁺ influx triggered by afatinib was resistant to SKF96365 and ruthenium red (two general blockers of TRP channels) and, unexpectedly, Ni²⁺ (a non-specific Ca²⁺ channel blocker). Afatinib caused an increase in mitochondrial Ca²⁺ level, an initial mitochondrial hyperpolarization (4 h) and followed by mitochondrial potential collapse (24–48 h). Afatinib-induced cell death was slightly but significantly alleviated in low extracellular Ca²⁺ condition or under pharmacological block of mitochondrial permeability transition pore (MPTP) opening by cyclosporin A. Therefore, in addition to tyrosine kinase inhibition as a major anti-cancer mechanism of afatinib, stimulation of an atypical Ca²⁺ influx pathway, mitochondrial Ca²⁺ overload, and potential collapse in part contribute to afatinib-induced cell death.     

高血压合并冠心病患者平滑肌细胞内Ca2+水平和血管紧张素Ⅱ1型受体表达的观察研究

目的 观察高血压合并冠心病患者与正常血压冠心病患者平滑肌细胞内Ca2+水平和血管紧张素Ⅱ1型(AT1)受体的表达情况.方法 ①收集首都医科大学附属北京安贞医院心脏外科行冠状动脉旁路移植术患者术中剩余大隐静脉,进行细胞培养,分为高血压搭桥组和正常血压搭桥组.②用激光共聚焦显微镜(CLSM)观察不同浓度的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)分别刺激后2组的平滑肌细胞内游离钙浓度的变化情况.③提取培养的平滑肌细胞总RNA、RT-PCR,观察2组AT1受体的表达情况.结果 经AngⅡ刺激后人平滑肌细胞内Ca2+均迅速升高.在高血压搭桥组AngⅡ刺激后平滑肌细胞胞内Ca2+荧光吸光度较正常血压搭桥组明显升高(P＜0.05).在平滑肌细胞观察到高血压搭桥组AT1受体表达较正常血压搭桥组略高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 AngⅡ刺激后人血管平滑肌细胞存在胞内Ca2+的变化.高血压冠心病患者和正常血压冠心病患者平滑肌细胞存在AT1受体表达差别.     

心肺复苏后心功能障碍与心肌内质网Ca2＋调控蛋白表达关系的研究

目的探讨心肌内质网Ca2＋调控蛋白表达与心肺复苏（CPR）后心功能障碍的关系。方法38只SPF级雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组（12只）和心搏骤停组（26只）。静脉弹丸式注射氯化钾40μg/g诱导心搏骤停,8 min后进行CPR;对照组大鼠仅麻醉后置管并监测指标,不诱导心搏骤停。在复苏后进行有创血流动力学监测1 h,采用超声心动图测定心功能。分别于自主循环恢复（ROSC）后5 min和60 min时采集心肌标本,采用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测内质网Ca2＋ATP酶（SERCA2a）、磷酸化受磷蛋白（p-PLB）和兰尼定受体（RyR）水平。结果心搏骤停组ROSC率为92.3%（24/26）,平均复苏时间为（68±39）s。心搏骤停组复苏后1 h心功能明显下降,与对照组相比,射血分数、短轴缩短率（FS）、左室内压上升或下降最大速率（±dp/dt max）明显降低〔射血分数：0.548±0.060比0.809±0.043,F＝71.692,P＝0.000;FS：（34.4±4.4）%比（46.0±3.5）%,F＝55.443,P＝0.000;+dp/dt max （mmHg/s）：4718±743比7098±394,P＜0.01;-dp/dt max （mmHg/s）：-3824±612比-6187±473,P＜0.01〕。与对照组相比,心搏骤停组ROSC后5 min及60 min PLB磷酸化水平（灰度值）均显著降低（5 min：0.64±0.15比1.29±0.13,P＜0.01;60 min：0.95±0.08比1.30±0.09,P＜0.05）,而内质网SERCA2a活性（灰度值）和RyR水平（灰度值）差异均无统计学意义（SERCA2a 5 min：1.01±0.18比1.24±0.07,60 min：1.03±0.14比1.25±0.06;RyR 5 min：0.96±0.13比0.97±0.13,60 min：0.88±0.14比0.99±0.11,均P＞0.05）。结论内质网PLB磷酸化水平异常与CPR后心功能障碍密切相关。     

钙通道阻滞剂预防脑卒中的临床证据

通过检索MEDLINE和Cochrane图书馆,了解钙通道阻滞剂的作用机制,对其应用于脑卒中一﹑二级预防的证据进行总结和评价.结果发现,钙通道阻滞剂除具有降低血压作用以外,还有抗动脉粥样硬化的作用,能够降低中风的发生率,在脑卒中一级预防中有一定作用,但也有增加心脏病变包括心肌梗塞和心衰的风险.目前尚无证据证明钙通道阻滞剂在脑卒中二级预防中的效果,因此不推荐钙通道阻滞剂作为脑卒中预防的一线药物.     

大鼠脑出血后AQP4mRNA的表达与Ca2+关系的探讨

目的：探讨AQP4mRNA的表达与Ca^2 浓度在大鼠脑出血后脑水肿中的作用机制。方法：采用胶原酶复制大鼠脑出血模型，通过半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测AQP4mRNA的表达，Fura-2／AM荧光法测定水肿区脑细胞内Ca^2 浓度。结果：脑出血后血肿周围脑组织AQP4mRNA的表达和Ca^2 浓度均明显增高。结论：脑出血后AQP4的表达增高，介绍Ca^2 内流增加，AQP4和Ca^2 可能共同参与脑出血后脑水肿的形成。