高表达整合素连接激酶对大鼠骨髓间充质干细胞旁分泌功能的影响

目的 研究转染腺病毒介导的整合素连接激酶(ILK)对大鼠骨髓间充质干细胞旁分泌作用的影响.方法 构建携带人野生型整合素连接激酶质粒cDNA和人重组绿色荧光蛋白的腺病毒载体(adeno-ILK)和空载腺病毒(MSC),通过全骨髓贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞.采用无血清培养转染adeno-ILK(MSC-ILK组)或空载腺病毒(MSC组),通过流式细胞术检测人重组绿色荧光蛋白从而测定转染效率,确定最佳的病毒感染复数.提取骨髓间充质干细胞mRNA,用Real-time PCR测定血管内皮生长因子、成纤维细胞生长因子2和胰岛素样生长因子1的基因表达量.结果 MSC-ILK组旁分泌因子血管内皮生长因子、成纤维细胞生长因子2和胰岛素样生长因子1的基因表达量分别是MSC组的 8.2±0.4、2.6±0.2及2.4±0.2倍(P＜0.05或P＜0.01).结论 整合素连接激酶基因转染可明显促进骨髓间充质干细胞表达旁分泌因子血管内皮生长因子、成纤维细胞生长因子2和胰岛素样生长因子1.     

骨髓间充质干细胞移植对急性胰腺炎后肠黏膜屏障的影响

目的 研究大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)在急性胰腺炎后肠黏膜损伤修复中的作用.方法 从雄性SD大鼠股骨骨髓腔获取并培养MSC.20只雌性SD大鼠分成3组:急性重症胰腺炎(SAP)组(n=6)和MSC治疗组(n=8),均分2次以腹腔内注射L-精氨酸(2 g/kg)造模,成模12 h后,MSC治疗组予尾静脉注射MSC 5×...     

骨髓间充质干细胞体外定向诱导内皮祖细胞的实验研究

目的:研究兔骨髓间充质干细胞(mensenchymal stem cell,MSC)在体外定向诱导分化为内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)的状况。方法:取兔髂骨骨髓,经密度梯度离心法分离并培养骨髓间充质干细胞,实验组细胞在内皮细胞生长添加剂、血管内皮生长因子、成纤维细胞生长因子等诱导条件下定向分化为内皮祖细胞。对照组不干预,继续培养。结果:实验组细胞集落接近融合时形态呈现“鹅卵石”样或“铺路石”样外观,流式细胞仪检测发现实验组细胞较对照组高度表达CD133、CD34(P<0．05)。结论:体外诱导可使骨髓间充质干细胞分化为内皮祖细胞,并有效扩增。     

骨髓间充质干细胞的免疫调节功能及其在治疗肝脏疾病中的应用

生理条件下,间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)主要以静态形式存在于骨髓中,占骨髓细胞总量的1/10万至1/1万[1].一旦机体受到创伤等刺激,MSC会趋化到周围间质组织,并作为功能活化的细胞参与组织修复再生等过程.除骨髓外,MSC还存在于其他组织,如脂肪组织、脐带血和胎儿组织.骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)因其取材方便、伦理冲突少,是实验研究中最常用的MSC.     

间充质干细胞在消化系疾病治疗中的应用

1970年Friedenstein等[1]从豚鼠骨髓中分离培养出间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC).MSC是具有多分化潜能的非造血干细胞,在一定条件下具有分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、成纤维细胞、内皮细胞等的能力.     

Osterix和Runx2在骨髓增生异常综合征患者骨髓间充质干细胞上的表达及意义

目的:研究表明骨髓间充质干细胞(MSC)的功能改变在骨髓增生异常综合征(MDS)的造血功能衰竭过程中发挥了重要的作用,但其作用机制有待进一步阐明。因此,本研究对MDS患者的MSC中参与骨髓形成的基因Runx2和Osterix表达特点进行分析。方法:以在我院就诊的MDS患者为研究对象,通过细胞形态、免疫表型和成骨细胞、脂肪细胞分化潜能对体外培养的MSC进行鉴定,q-PCR对MSC中Runx2和Osterix基因表达进行分析,以营养性贫血患者的MSC作为对照组。结果:MDS患者的MSC和对照组MSC均表达相似的免疫表型和具有向成骨细胞、脂肪细胞分化的潜能。然而,MDS患者的MSC中Osterix基因的表达水平显著低于对照组(P0.01);MDS患者MSC中Runx2的表达水平亦显著低于对照组(P0.05)。结论:MDS患者的MSC中参与骨髓形成的Osterix和Runx2基因表达水平降低。     

间充质干细胞的移植免疫作用及临床应用

骨髓间充质干细胞(MSC)是一种存在于骨髓中的非造血组织干细胞,在支持骨髓造血功能上起重要作用。最近研究结果显示,不论在体内、体外,MSC都具有免疫调节作用,预示其在移植治疗方面具有较好的临床应用前景。     

脐带间充质干细胞移植治疗难治性系统性硬化症一例

系统性硬化症(systemic sclerosis,SSc)尚无特效治疗,本研究尝试用人脐带间充质干细胞(MSCs)移植治疗1例难治性SSc合并下肢溃疡的患者,疗效显著,现报告如下.     

间充质干细胞与肺

间充质干细胞(MSC)是一类自我更新能力强、细胞特性稳定、具有多分化潜能的成体干细胞,广泛存在于人骨髓、肝、脾、肺等多种组织和器官中.本文综述了MSC的生物学特性和临床应用前景,并着重阐述肺部MSC的特点,对近年来MSC与各类常见肺部疾病的相关研究作一回顾.     

成人骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞的研究

目的：通过成人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSC)体外定向诱导为成骨细胞，探讨理想而有临床实用价值的成人骨髓MSC体外诱导培养体系。方法：体外分离、扩增成人骨髓MSC，流式细胞仪检测细胞表面抗原的表达。采用基础诱导培养液[地塞米松、β-甘油磷酸钠、L-抗坏血酸加不同浓度的重组人转化生长因子-β1(recombinant human transforming growth factor—betal，rhTGF-β1)]诱导成人骨髓MSC体外分化为成骨细胞。利用倒置光学显微镜、透射电镜、四甲基偶氮唑盐(MTT)比色、碱性磷酸酶(ALP)染色、ALP活性测定等方法研究成人骨髓MSC增殖和分化情况。结果：成人骨髓MSC的增殖和分化作用和rhTGF-β1有剂量依赖关系，低浓度时促进增殖，高浓度抑制增殖，5μg／L浓度达到高峰，其浓度升高促进MSC分化。结论：含有rhTGF-β1 5μg／L的基础诱导培养液是理想且有临床实用价值的成人骨髓间充质干细胞体外诱导为成骨细胞的培养体系。     

间充质干细胞在系统性硬化的应用前景

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)多存在于骨髓中,是一类具有多向分化能力及免疫调节作用的细胞.近年来,MSCs在自身免疫性疾病中的应用受到很大关注.研究表明,MSCs分化为血管内皮细胞的能力受损在系统性硬化(systemic sclerosis,SSc)的病理改变中起重要作用.同时,...     

β1-肾上腺素受体细胞外第二环自身抗体长期存在对大鼠免疫功能的影响

目的 观察β1-肾上腺素受体细胞外第二环自身抗体（β1-AA）长期存在对大鼠免疫功能的影响.方法 用人工合成的β1-肾上腺素受体细胞外第二环肽段（β1-AR-ECII）作为抗原主动免疫大鼠,获取β1-AA,并经SDS-PAGE检测纯度;将纯化的β1-AA通过鼠尾静脉注入大鼠体内,建立被动免疫模型,并通过SA-ELISA方法定期检测血清中β1-AA的水平;定期采用流式细胞技术测定大鼠外周血CD4＋、CD8＋ T淋巴细胞亚群的变化;定期用直接溶血空斑和间接溶血空斑实验观察B细胞抗体生成能力的变化.结果 被动免疫模型中,β1-AA水平可以维持在与临床患者血清中该抗体相匹配的状态,较好地模拟了临床患者血清中自身抗体维持在一定水平且长期存在的状态.β1-AA的长期存在可以使机体的CD4＋/CD8＋ T淋巴细胞比值持续升高,使直接溶血空斑和间接溶血空斑数目明显增高.结论 β1-AA长期存在可以导致机体细胞免疫和体液免疫功能改变.     

HepG2细胞抗原对脐血CD34^＋造血干细胞诱导分化的树突细胞免疫功能的影响

背景：树突细胞（DC）是体内功能最强的抗原呈递细胞,可激活初始型T细胞,生成辅助性T细胞和杀伤性T细胞。DC具有特异性呈递肿瘤抗原的能力,在肿瘤免疫中发挥重要作用。目的：探讨HepG2细胞抗原对脐血CD34^＋造血干细胞诱导分化的DC免疫功能的影响。方法：分离培养脐血CD34^＋造血干细胞后,加入细胞因子组合诱导生成DC并将其分成HepG2细胞抗原负载组和对照组．以流式细胞仪测定DC生成率和免疫表型,以酶联免疫吸附测定（ELISA）检测干扰素-γ（IFN-γ）含量,以MTT法检测细胞毒性T淋巴细胞（CTL细胞）对HepG2细胞的杀伤作用。结果：DC生成率为60．2％±9．4％。与对照组相比,HepG2细胞抗原负载组DC免疫表型CD1a^＋／CD40^＋、CD83^＋／CD86^＋、CD14^＋／HLA-DR^＋比例显著增高（57．6％±5．4％对33．2％±6．0％、32．5％±3．9％对26．0％±2．8％、38．1％±2．6％对29．1％±2．1％,P〈0．01）;IFN-γ含量呈时间依赖性增高;CTL细胞对HepG2细胞的杀伤作用显著增强（43.3％±11.3％对13．9％±4．6％,P〈0．01）。结论：应用HepG2细胞抗原孵育脐血CD34^＋造血干细胞可诱导分化成熟DC,DC可促进异基因淋巴细胞活化分泌IFN-γ,并产生特异性CTL细胞,杀伤肝癌HepG2细胞。     

骨髓间充质干细胞对外周血T淋巴细胞亚群影响的体外实验研究

目的：探讨骨髓间充质干细胞（MSC）在体外对T淋巴细胞亚群及其分泌的细胞内因子的影响。方法：通过Ficoll—Hypaque梯度密度离心法分离出正常人骨髓单个核细胞，体外培养扩增MSC，获取第3代细胞。将其按照不同的比例加入双向混合淋巴细胞培养（MLC）体系中，在第1，3，5天，采用MTT比色法检测各组MLC中的T淋巴细胞的增殖情况，再用流式细胞术分析各组T细胞亚群及其内因子白介素（IL）-4和干扰素（IFN）-γ的分泌变化情况。结果：加入了MSC的MLC体系中，MSC对T淋巴细胞的增殖抑制具有剂量依赖性，且随着时间延长，抑制程度增强；其中，CD4^＋T细胞亚群受抑不如CD8^＋T细胞亚群显著；而根据T细胞内因子的变化，Th1和Tc1的比率较对照组有显著降低，而Th2和Tc2的比率却有轻度上升。结论：MSC在体外能够明显抑制T淋巴细胞的增殖，尤其是CD8^＋T细胞（CTL）。除此之外，它还能降低MLC体系中的Th1Tc1，升高Th2和Te2。所以在临床上可能有减轻移植后急性移植物抗宿主病（aGVHD）的发生，而保留移植物抗白血病（GVL）的潜力。     

不同切点空腹血糖受损中老年患者血浆干扰素γ和白介素4变化及其临床意义

目的 探讨辅助性T细胞1型/2型（Th1/Th2）免疫失衡在中老年IFG发病中的作用及与IR的关系.方法 根据FPG及2hPG将381例中老年糖尿病患者分为IFG1、IFG2、IGT、T2DM、糖耐量正常（NGT）组.ELISA检测血浆干扰素γ（IFN-γ）、白介素-4（IL-4）,同时检测胰岛素及HbA1c水平.结果 IFG1、IFG2、IGT组与NGT组比较,胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）均增加（P＜0.05）,但3组间差异无统计学意义（P＞0.05）.T2DM组与其他组比较,HOMA-IR差异有统计学意义（P＜0.05）,IFG1、IFG2、IGT、T2DM组胰岛β细胞功能指数（HOMA-β）与NGT组比较均降低（P＜0.05）,IFG2组与IFG1组比较,IFN-γ升高（P＜0.05）,IL-4变化差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 中老年IFG人群存在IFN-γ和IL-4升高,HOMA-IR与HOMA-β下降.     

间充质干细胞与炎症性肠病的研究进展

间充质干细胞(MSC)是一种具有多分化潜能的细胞,还具有免疫调节功能。炎症性肠病(IBD)的病因和发病机制目前尚未完全明确,近年研究显示免疫紊乱在IBD的发病中起重要作用。MSC的免疫调节特性为治疗IBD提供了一种潜在的可能性。本文就MSC的免疫调节效应及其在IBD中的作用作一综述。     

Assessment of human herpesvirus‐6 infection in mesenchymal stromal cells ex vivo expanded for clinical use

Abstract: Infection or reactivation of human herpesvirus (HHV)‐6 represents a potentially serious complication (often involving the central nervous system) in patients receiving either solid organ or hematopoietic stem cell transplantation. The objective of this study was to assess the risk of HHV‐6 infection/reactivation in mesenchymal stromal cells (MSCs). MSCs are multipotent cells displaying immunomodulatory properties that have been already successfully used in the clinical setting to enhance hematopoietic stem cell engraftment and to treat steroid‐refractory acute graft‐versus‐host disease. We analyzed 20 samples of ex vivo expanded MSCs, at different passages of culture, isolated both from bone marrow and from umbilical cord blood. Through Western blotting and immunocytochemistry techniques, we investigated the presence of the HHV‐6 receptor (CD46) on cell surface, whereas the presence of HHV‐6 DNA was evaluated by nested polymerase chain reaction assay. All of the MSC samples tested were positive for the virus receptor (CD46), suggesting their potential susceptibility to HHV‐6. However, none of the MSC samples derived from cultures, performed in the perspective of clinical use, was found to harbor HHV‐6. This preliminary observation on a consistent number of MSC samples, some of them tested at late in vitro passages, indicates a good safety profile of the product in terms of HHV‐6 contamination. Nevertheless, it remains important to set up in vitro experimental models to study MSCs' susceptibility to HHV‐6 (and HHV‐7) infection, to verify their capacity to integrate the virus into cellular DNA, and to investigate which experimental conditions are able to induce virus reactivation.     

冠状静脉逆行灌注碱性成纤维细胞生长因子对骨髓间充质干细胞向心肌内归巢的影响

目的 探讨经冠状静脉逆行灌注碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对骨髓间充质干细胞（MSCs）心肌内归巢的影响.方法 杂种犬12只,体重20～25（22.4±1.8）kg,采用开胸结扎法建立急性心肌梗死模型.1周后将存活犬（n=ll）随机分为MSCs组（n=5）和bFGF＋MSCs组（n=6）.采用密度梯度离心与贴壁培养法在体外分离、培养MSCs,移植前对MSCs进行4’,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）孵育标记.逆行灌注实验后1周,免疫荧光法比较两组梗死心肌内DAPI阳性细胞数,评价逆行灌注bFGF对MSCs归巢的影响.结果 采用密度梯度离心和贴壁培养法成功分离并富集MSCs,77.19％以上的细胞都处于G0/G1期,强表达CD44,阳性率为95.8％;MSCs体外DAPI标记率高,初始标记率达99.6％.免疫荧光显示,bFGF＋MSCs组DAPI阳性细胞数明显高于MSCs组[（325±106）/mm2比（186±67）/mm2,P＜0.05],联合组MSCs分布更为均匀;部分MSCs与心肌细胞共定位.结论 经冠状静脉逆行灌注bFGF能更有效地促进MSCs归巢至梗死心肌;同时,MSCs在心肌内的分布也更为均匀.     

胸腺肽α1对慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞调节作用的体外研究

背景：近年研究显示慢性乙型肝炎（CHB）患者体内树突状细胞（DC）存在不同程度的功能缺失。胸腺肽α1（T-α1）是一种生物学应答调节物质,对CHB的临床治疗有较好疗效。目的：研究T-α1对CHB患者外周血DC分化和功能成熟的影响,寻求改善DC功能的途径。方法：从12例CHB患者和10名健康志愿者的外周血单个核细胞（PBMC）中分离培养DC。培养过程中应用不同浓度T-α1干预DC。以流式细胞仪检测DC表面标志,以甲基噻唑基四唑（MTT）实验检测混合淋巴细胞反应中DC刺激T细胞增殖的能力。结果：从PBMC分离培养得到的外周血DC呈现典型树突状形态。CHB组DC表面标记物CD80、CD86、人白细胞位点DR抗原（HLA-DR）水平以及刺激T细胞增殖的能力显著低于正常对照组（P〈0.001）;经T-α1干预后,两组上述指标均较相应空白对照升高,尤以0.5μg/mlT-α1的作用为著（P〈0.05）,可使CHB组上述指标恢复至正常水平。结论：T-α1能促进CHB患者外周血DC分化和功能成熟,在CHBDC疫苗的研究中可能具有重要价值。     

Immunomodulatory Effects of Mice Mesenchymal Stem Cells on Maturation and Activation of Dendritic Cells

Background: Mesenchymal stem cells (MSCs) possess a wide range of immunomodulatory functions mostly in immune cells including dendritic cells (DCs). DCs are the key cells in the immune response and play an important role in initiating cell-mediated immunity. Objective: To evaluate the immunomodulatory effects of MSCs supernatant on maturation and function of DCs. Methods: Bone marrow derived mice MSCs were isolated and cultured. Twenty-four, forty-eight and seventy-two hours after passage 6, supernatants were collected and MSCs were assessed by cytometric analysis for the expression of CD34, CD44, CD45 and SCA-1. Splenic DCs were isolated using MACS and then co-cultured with MSCs supernatant. Expression of CD86, CD40 and MHC-II on DCs were also evaluated by cytometry. H 3-thymidine incorporation by proliferating T cells was determined in two separate MLR assay settings. In one setting, DCs were co-cultured with T cells in the presence of MSCs supernatant, and in the other setting DCs were treated with MSCs supernatant and then were co-cultured with T cells. Production of IL-12, IL-6 and IL-10 cytokines was measured in the supernatant of DCs treated with MSCs supernatant. We also measured IFN- γ and IL-4 levels in MLR supernatant. Results: The results showed that 72h MSCs supernatant could decrease the expression of MHC-II and CD86. The T cell proliferation was inhibited in the presence of MSCs supernatant and MSCs supernatant treated DCs as demonstrated by MLR assay. A significant increase in IL-4 level and a non significant decrease in IFN- γ level in MLR supernatant were observed. However, IL-6, IL-10 and IL-12 production did not change significantly. Conclusion: MSCs supernatant has a time dependent effect on the maturation of DCs. Also, it could alter cytokine production from responding T cells toward Th2. Generally, the findings of this study supported the immunomodulatory effect of MSCs supernatant on DCs maturation and function.