大鼠胸主动脉平滑肌细胞的组织贴块法培养及鉴定

目的:建立大鼠胸主动脉平滑肌细胞的组织贴块培养法.方法:取大鼠胸主动脉,切成1 mm×1 mm×1 mm的小块,均匀地种植于培养瓶壁上,约50 min后加入含有20%小牛血清的PRMI-1640培养基进行培养.结果:培养第5天时,可见少量梭形或长梭形细胞自组织块周围游出,至培养3周细胞融合成片,呈"峰、谷"状生长.肌动蛋白免疫组化染色,＞98%的细胞染色阳性,透射电镜观察,于基膜下和胞浆内可见密斑和密体.VG染色也证实几乎所有的细胞均为平滑肌细胞.结论:应用细胞贴块法培养大鼠平滑肌细胞,操作简单,结果稳定,纯度较高,具有应用价值.     

组织块法培养大鼠肠系膜小动脉的平滑肌细胞

利用贴块法成功地大量培养了大鼠肠系膜小动脉的平滑肌细胞。培养的细胞经光镜和免疫组化鉴定为平滑肌细胞。方法简便，经济，为阻力血管的细胞水平的研究提供了实验材料。     

组织贴壁法培养大鼠主动脉平滑肌细胞的探讨

目的：探讨分离、培养大鼠主动脉平滑肌细胞（VSMC）的方法,为研究损伤性血管疾病提供有用的体外研究模型。方法：用组织贴壁、反转干涸的方法分离、培养大鼠主动脉平滑肌细胞并进行传代培养。采用形态学和抗α－SM－actin免疫组织化学鉴定证实为SVMC。结果：细胞呈VSMC特征性“峰”“谷”状生长,历次原代培养经鉴定均为高纯度的VSMC。经传代培养至20代,细胞维持原有生长性状,细胞活力未见减低。结论：组织贴壁法培养大鼠主动脉平滑肌细胞具有简便、易行、细胞损伤小、活力及纯度高的优点,是研究损伤性血管疾病良好的体外研究模型。     

改良组织块法培养SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞

目的应用改良植块法体外培养大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞。方法15只SD雄性大鼠,随机分成3组,每组5只,分别采用组织块法、酶消化法及改良组织块法分离大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞,在含双抗及20%胎牛血清DMEM,37℃、5%CO2、95%空气的细胞培养箱静置中培养,相差显微镜观察细胞形态及扩增情况,用α-平滑肌肌动蛋白(a-SM-Actin)及结蛋白(desmin)免疫组织化学染色,鉴定细胞类型。结果α-平滑肌肌动蛋白在阴茎海绵体平滑肌细胞阳性率为96.3%,在成纤维细胞中阳性率为23.8%,结蛋白在阴茎海绵体平滑肌细胞阳性率为74.4%,在成纤维细胞中呈阴性。三组间结蛋白阳性细胞率具有显著差异,改良组织块法组结蛋白阳性细胞率高于组织块法和酶消化法组。结论结蛋白是鉴定海绵体平滑肌细胞的特异性指标,改良组织块法可获纯度更高、结构和功能良好的阴茎海绵体平滑肌细胞。     

改良组织块贴壁法培养大鼠主动脉平滑肌细胞及鉴定

目的以简捷、高效的方法获取原代和传代的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC),为进一步的科学研究提供实验材料。方法采用改良的组织块贴壁法培养原代大鼠VSMC,2.5 g.L-1胰蛋白酶消化传代,并用相差显微镜、电镜、荧光显微镜及激光共聚焦显微镜对细胞进行鉴定。结果95%的组织块接种成活,相差显微镜下细胞呈典型的"峰-谷"状生长,胞体长梭形;电镜下可见粗、细肌丝沿细胞长轴平行排列;荧光显微镜及激光共聚焦显微镜检测α-肌动蛋白可见细胞胞浆内呈阳性显色,细胞核不显色。结论本方法培养VSMC简便、易操作,获得的细胞纯度和成活率较高。     

组织块贴壁法培养大鼠主动脉平滑肌细胞及鉴定

目的建立大鼠胸主动脉平滑肌细胞的组织块贴壁法。方法采用组织块贴壁法进行原代培养,胰酶消化法传代,并应用相差显微镜和平滑肌肌动蛋白对细胞进行形态学和免疫组化鉴定。结果90％的组织块接种存活,培养5代的平滑肌细胞纯度达98％以上。镜下可见培养细胞呈典型的“峰-谷”状生长,免疫组化染色显示胞浆内平滑肌肌动蛋白阳性表达。结论组织块贴壁法培养大鼠平滑肌细胞操作简单、结果稳定、纯度较高、存活率高。     

改良组织块贴壁法培养小鼠气道平滑肌细胞及鉴定

目的 采用改良组织块贴壁法建立小鼠气道平滑肌细胞体外培养模型。方法 用I型胶原酶消化小鼠气道平滑肌组织块后再贴壁，培养出的小鼠原代气道平滑肌细胞经过细胞免疫荧光技术鉴定。结果 相比单纯组织块贴壁法，改良组织块贴壁法获得的原代平滑肌细胞的纯度更高[（93.0%±1.8%）vs(96.1%±1.8%),P<0.01]，酶消化法获得的平滑肌细胞的纯度（90.8%±1.9%）最低，与改良组织块贴壁法相比，差异具有统计学意义（P<0.01）。结果还显示P5代细胞与P1代细胞相比，平滑肌细胞生长形态较前改变，呈不规则形，且α-SMA阳性表达减弱，Vimentin阳性表达增强，标志着平滑肌细胞的纯度会随传代次数增加而逐渐降低。酶消化法获得的ASMCs的增殖速度较单纯组织块贴壁法和改良组织块贴壁法获得的ASMCs的增殖速度慢（P<0.01）。结论 改良组织块贴壁法经济稳定，可在短期内培养出数量多、纯度高、活性好的小鼠气道平滑肌细胞，此法成功建立了体外培养小鼠气道平滑肌细胞的模型。     

贴块法培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞条件的优化

血管平滑肌细胞是构成血管壁组织结构及维持其功能的主要细胞成分,其结构和功能的改变是导致高血压、动脉粥样硬化和血管成形术后再狭窄等多种心血管疾病的细胞病理学基础［1-3］。为了更好地研究这些疾病及筛选相关治疗药物,体外培养血管平滑肌细胞是必不可少的一个环节。而国内最常用的贴块法培养血管平滑肌细胞一直受其培养周期较长的制约,为了更快获得大量平滑肌细胞,为相关研究提供实验材料支持,本研究以传统贴块法为基础,从多个方面优化培养条件以达到缩短培养周期的目的。     

组织块消化法原代培养大鼠输精管平滑肌细胞及鉴定

目的 建立一种稳定高效、存活率高的大鼠输精管平滑肌细胞体外分离及培养方法,为相关研究提供理想的细胞模型。方法 采用组织块消化法对大鼠离体输精管平滑肌细胞进行原代培养。采用形态学观察、HE染色、抗α-SMA免疫细胞化学荧光染色对细胞进行鉴定,台盼蓝染色计算细胞存活率及细胞总数,胰酶消化传代并绘制生长曲线。结果 对照实验表明胶原酶Ⅱ消化效果优于胶原酶Ⅰ,最佳消化时间为60min,同时控制吹打次数、沉淀时间及培养环境,获得了理想的平滑肌细胞总数及存活率。平滑肌细胞呈典型的梭形、长条形,可传代,且出现平滑肌细胞培养典型的“峰-谷”状特征,生长曲线为“S”型。经抗α-SMA免疫荧光鉴定,培养细胞为平滑肌细胞,纯度为(92.6±4.3)%。结论 采用组织块消化法成功建立了大鼠输精管平滑肌细胞的体外分离及培养方法。     

哮喘大鼠气道平滑肌细胞培养方法探讨

目的：探讨哮喘大鼠气道平滑肌细胞培养方法,了解其生长特性。方法：制作慢性哮喘大鼠模型,用酶解离法、组织贴块法分别培养哮喘大鼠气道平滑肌细胞,倒置相差显微镜观察其生长情况,用免疫组化SP法分析SM α-action抗原的表达。结果：以酶解离法培养2～3d可见细胞贴壁,7～9d可融合;以贴块法培养7～10d组织块周围有细胞长出,10～14d融合,传代后细胞“谷峰”生长明显。SM-α action免疫组化SP法染色均呈阳性。结论：两种方法均能培养出纯度较高的哮喘大鼠平滑肌细胞,其中酶解离法细胞产量高,纯度高,生长速度快,能为气道疾病细胞实验提供可靠的细胞模型。     

自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞的培养及鉴定

目的：培养、鉴定自发性高血压大鼠主动脉平滑肌细胞,了解生长特性,为血管增生性疾病的治疗研究提供试验材料。方法;采用组织贴块法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,用倒置相差显微镜观察其生长情况,用免疫组化染色做鉴定,台盼蓝染色进行活力检测,绘制生长曲线、MTT法测定VSMC细胞的成活率、生长、增殖特征。结果：细胞生长曲线近似“S”形,VSMC传代周期为7-10d,呈典型“峰一谷”状生长,MTT法显示细胞生长第7～9天光密度值变化较明显,免疫组化染色显示胞浆内平滑肌肌动蛋白阳性表达,第2代阳性结果强于4代。结论：正确的利用组织块可以简单、经济、高效地培养出VSCM,为VscM的治疗提供了理想的细胞模型。随传代过程细胞生物学特性发生改变。     

组织块法培养人绒毛膜滋养层细胞

目的 培养符合实验要求的人绒毛膜滋养层细胞。方法 用组织块法行原代培养,胰蛋白酶消化法行传代培养,免疫组织化学染色进行细胞鉴定。结果 ６ｄ时,细胞开始由组织块边缘向外生长;１５ｄ时,即可进行传代。角蛋白染色示细胞纯度达９５％以上。结论 组织块法培养人绒毛膜滋养层细胞简便易行,可获得符合实验要求的人绒毛膜滋养层细胞。     

乳鼠心肌细胞酶消化培养和贴块培养法的比较

目的探索经济、简单易行的心肌细胞培养方法。方法选用新生乳大鼠心肌细胞进行0．25％胰酶分离培养和贴块培养两种培养方法。结果用0．25％胰酶消化培养可获得大量的单细胞，但是酶对细胞的损伤比较大，酶消化所受的影响因素比较多，此过程获取单细胞所需的时间比较长；贴块培养法简便易行，得到的细胞结构完整、存活率高，且经济实惠、适合长期研究且需细胞量不多的实验。结论酶分离培养和贴块培养各有优劣势，应根据不同的实验目的选用不同的培养方法。     

大鼠胃底平滑肌细胞的培养

1　材料和方法1 .1　材料　高糖 DMEM培养液 ,Gibco公司 ;新生小牛血清(NBS) ,杭州四季青生物技术研究所 ;胰蛋白酶 ,华美公司 ;胶原酶 型 ,Sigma公司 ;兔抗鼠α- actin单克隆抗体 ,武汉博士德公司 .1 .2　方法　无菌条件下剪取大鼠及乳鼠胃底 (1～ 3 d) ,将剪下后的组织立即置于预冷含双抗的无菌 Hanks液中 ,去除食物残渣及内膜 ,留下肌层和外膜 ,以无菌的 Hanks液冲洗 4～5次 ,刮除内膜 ,用冷的 Hanks液冲洗 3～ 4次 ,剪成 1 mm3的小块备用 . 1贴块法培养 :用吸管将置于培养液 (含小牛血清 ,0 .3 g· L-1 谷氨酰胺 ,1× 1 0 5U· L-…     

关于动脉平滑肌细胞培养的几个问题

平滑肌细胞异常增殖及其从动脉中层向内膜迁移过程是动脉粥样硬化和血管成形术后再狭窄等心血管疾病的重要发病因素。血管平滑肌细胞(ＶＳＭＣ)常用于多种与平滑肌细胞生长增殖有关疾病的发病机理及药物作用机制的研究 ,提高培养成功率 ,增强细胞功能稳定性 ,提高细胞质量是进行ＶＳＭＣ的分子生物学研究的重要条件。作者采用组织贴块法取材于大鼠主动脉中膜进行培养。通过实践和摸索 ,提出几点看法 ,现讨论如下。1　组织块大小边缘密度翻面时间观察时间对原代细胞萌发的影响　　对于贴块法的原代培养来源 ,由于细胞并非直接获得 ,而是从组…     

组织贴块法培养大鼠主动脉平滑肌细胞及鉴定

目的探讨以原代培养的方法获得活力稳定、高度纯化的大鼠血管平滑肌细胞的体外模型,并为相关研究提供所需的试验材料。方法采用组织贴块法进行细胞原代培养,胰酶消化传代,液氮冻存,并应用倒置相差显微镜和SP法免疫组化染色对细胞进行鉴定。结果85％的组织块接种存活,传代后90％以上的平滑肌细胞重新贴壁生长,冻存后细胞再行1～2次传代后可恢复增生活力。显微镜下细胞呈典型的“谷峰状”生长,SP法免疫组化染色显示胞质内“平滑肌肌动蛋白表达阳性。结论组织块贴壁法简便易行,短期内可获大量符合后续试验要求的血管平滑肌细胞。     

改良组织块贴壁法培养小鼠主动脉血管平滑肌细胞及生物学鉴定?

目的：探讨小鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)的原代培养方法及生物学特性,为血管性疾病细胞及分子水平的科学研究提供实验材料。方法分离小鼠胸、腹主动脉,采用改良组织块贴壁法获得主动脉 VSMC,胰蛋白酶消化传代,差速贴壁法进行细胞纯化,倒置相差显微镜观察细胞形态及生长情况,并用苏木素-伊红(HE)染色法和免疫荧光法进行鉴定。结果该方法成功分离出小鼠主动脉 VSMC,细胞生长旺盛,活性良好,呈放射状、典型“峰-谷”样生长,HE 染色细胞呈梭形,细胞质丰富,核大而圆形或椭圆形,细胞免疫荧光显示特异性的细胞质内α-平滑肌肌动蛋白阳性表达。结论本方法简单、经济、可靠,可在体外条件下分离,培养出纯度高、活性良好的主动脉 VSMC。     

组织块贴壁法原代培养人脐血管平滑肌细胞的改良

目的提高人脐血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)体外培养的成功率。方法以传统的平滑肌细胞贴壁培养法为基础,选择人脐血管为材料,对培养基配置,组织块的大小和接种间距,培养液的pH等多个重要环节进行改进;采用倒置相差显微镜和α-actin免疫组化染色,对VSMCs进行鉴定。结果光镜下见培养细胞呈典型的"峰、谷"样结构特征;α-actin免疫组化染色显示98%的细胞含有肌动蛋白,证实为VSMCs。结论此培养方法能提高人脐血管平滑肌细胞体外培养的成功率,为心血管疾病发病机制的体外研究,提供了一种实用而充足的细胞材料。     

大鼠输精管平滑肌细胞的体外培养

目的建立从SD大鼠的输精管中提取、培养获得平滑肌细胞的方法.方法取SD大鼠的输精管,用酶消化法分离、提取平滑肌细胞,进行体外培养、扩增.倒置相差显微镜下观察体外培养的平滑肌细胞的生长情况,用平滑肌特异性的抗α-SMA做免疫组化染色,鉴定培养的细胞.结果平滑肌细胞体外培养呈长梭形,并出现"峰-谷"样生长特征.用抗α-SMA免疫组化染色的方法鉴定所培养为平滑肌细胞,其纯度为(91.3±5.2)%.结论成功地建立了从SD大鼠输精管中提取、培养获得自体平滑肌细胞的稳定模型.     

大鼠血管平滑肌细胞分离培养的探讨

目的：培养大鼠血管平滑肌细胞。方法：手术显微镜下分离主动脉和肺动脉，再用翻转干涸法进行操作。结果：显微镜下分离组织，岢基本除净动脉纤维脂肪层和外膜，再用刀片轻刮内膜，可保证所贴组织块为地动脉中膜。传至第三代时，用台盼蓝检查细胞传代成活率９５％，光镜、电镜和免疫组化鉴定培养细胞，培养细胞纯度９６％。结论：贴块片简便易行、经济、又可以防止膜损伤，可为血管病理变化研究提供适宜的细胞。