腺病毒介导IL-24基因诱导人脑胶质瘤U87MG细胞的凋亡

目的：研究腺病毒介导IL-24基因表达载体(Ad-IL-24)对人脑胶质瘤U87MG细胞的抑制作用,初步探讨其作用机制。方法：将本科室构建的Ad-IL-24感染U87MG细胞,RT-PCR法检测IL-24基因的表达,MTT法和流式细胞术检测U87MG细胞的生长和凋亡,激光共聚焦显微镜观察U87MG细胞凋亡的形态学变化,RT-PCR法检测Bax、Bcl-2基因mRNA的表达,Western blotting检测caspase-3的活化。结果：Ad-IL-24感染U87MG细胞后,IL-24在U87MG细胞中有明显表达,并抑制U87MG细胞生长、诱导其凋亡、出现典型的凋亡细胞核形态学改变。Ad-IL-24可上调U87MG细胞中Bax基因、下调Bcl-2基因的表达,并诱导caspase-3蛋白的活化。结论：Ad-IL-24可诱导U87MG细胞凋亡,其机制可能与上调Bax基因、下调Bcl-2基因表达,并活化caspase-3有关。     

Ad-ING4对人前列腺癌细胞PC-3体内外抑癌效应的研究

背景与目的：腺病毒作为载体已被广泛用于肿瘤的基因治疗。ING4是生长抑制因子家族中的一个成员,是一种潜在的抑癌基因。本研究旨在探讨腺病毒介导的人ING4基因（Ad-ING4）对人前列腺癌细胞PC-3的体内外抑癌效应及其分子机制。方法：将扩增的Ad-ING4重组腺病毒感染PC-3细胞,用RT-PCR法检测ING4在PC-3细胞中的转录;MTT法检测ING4基因对PC-3细胞增殖的影响：流式细胞术和Hoechst33258染色法检测细胞凋亡的变化;半定量RT-PCR法检测ING4基因的表达对PC．3细胞中的bcl-2、bax、p53和caspase-3凋亡相关基因表达的影响。用Ad-ING4重组腺病毒在裸鼠PC-3移植瘤的瘤体内注射治疗,观察肿瘤生长变化,15d后处死裸鼠,摘除瘤体,称瘤重;用免疫组化法检测瘤组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3和CD34蛋白的表达。结果：腺病毒介导的人ING4基因在PC-3细胞中成功转录,明显抑制PC-3细胞增殖,上调p53、bax、caspase．3基因表达和下调bcI-2基因表达,并诱导细胞凋亡。Ad-ING4重组腺病毒能显著抑制裸鼠PC-3移植瘤的生长,瘤重的抑制率达37％,与空病毒载体Ad-GFP组和细胞对照PBS组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;免疫组化结果显示Ad-ING4重组腺病毒能明显上调Bax和Caspase-3蛋白的表达水平,下调Bcl-2和CD34蛋白的表达水平。结论：腺病毒介导的ING4基因在体内外均可明显抑制人前列腺癌细胞PC-3的生长,诱导其凋亡,其机制可能是上调P53、Bax、Caspase-3蛋白和下调Bcl-2蛋白表达水平。     

云南元宝枫黄酮诱导个旧肺鳞癌细胞YTMLC凋亡的实验研究

目的研究云南元宝枫黄酮对个旧肺鳞癌细胞(YTMLC)凋亡诱导作用及相关基因表达的影响,为开发应用元宝枫黄酮提供实验依据。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测元宝枫黄酮对YTMLC细胞的生长抑制作用,流式细胞术TUNEL法检测元宝枫黄酮对YTMLC细胞凋亡的影响,RT-PCR检测元宝枫黄酮对YTMLC细胞 p53、p21、bcl-2、bax和caspase-3基因表达的影响。结果元宝枫黄酮作用YTMLC细胞48 h后,IC50为（108.53±8.22）mg/L。流式细胞术显示元宝枫黄酮既可以诱导YTMLC细胞凋亡,也可以引起YTMLC细胞坏死。元宝枫黄酮对p53、p21、bax和caspase-3的基因表达均有明显上调作用;对bcl-2基因表达有下调作用。结论云南元宝枫黄酮可以抑制个旧肺鳞癌细胞(YTMLC)体外生长,引起肿瘤细胞坏死,诱导肿瘤细胞凋亡,其诱导肿瘤细胞凋亡的可能机制是通过上调p53、p21、bax和caspase-3基因的表达,下调bcl-2基因表达。     

重组人白细胞介素24抑制淋巴瘤raji细胞生长及其分子机制

目的:研究重组人白细胞介素24体外对淋巴瘤raji细胞的生长抑制作用及其分子机制.方法:用rhIL-24蛋白作用于淋巴瘤raji细胞,MTT法检测rhIL-24蛋白对raji细胞的生长抑制作用,激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察rhIL-24蛋白诱导raji细胞凋亡的形态学改变,流式细胞仪(FACS)检测rhIL-24蛋白诱导raji细胞的凋亡率及细胞周期改变,免疫细胞化学分析凋亡相关因子Bcl-2 和 Bax的改变.结果:rhIL-24蛋白作用于淋巴瘤raji细胞后,可以显著抑制raji细胞的生长,诱导G2/M期阻滞和凋亡,rhIL-24蛋白能使raji细胞中bcl-2的表达下调和bax的表达上调.结论:rhIL-24蛋白对淋巴瘤raji细胞具有显著的生长抑制及凋亡诱导作用,其作用机制可能与下调bcl-2和上调bax的表达有关.     

天花粉蛋白对宫颈癌HeLa细胞凋亡及bax 、bcl-2 基因表达的影响

 目的 研究天花粉蛋白对人宫颈癌HeLa细胞的诱导凋亡作用并探讨其对凋亡相关基因bax和bcl-2表达的影响。方法 不同浓度天花粉蛋白分别处理HeLa细胞24～72h后，MTT法检测细胞的生长活性，显微镜观察细胞形态，流式细胞仪检测细胞周期，WesternBlot检测凋亡相关蛋白bax，bcl-2的表达。结果 显微镜下观察到细胞圆缩，染色体凝聚等凋亡细胞的形态学改变，流式细胞仪直方图上亦出现特征性的亚二倍体峰，随着天花粉蛋白浓度的增加，bax基因的表达增加而bcl-2的表达减少。结论 天花粉蛋白对HeLa细胞的生长具有抑制作用，可诱导宫颈癌HeLa细胞发生凋亡，bcl-2蛋白的减少与bax蛋白表达增多可能是HeLa细胞凋亡的机制之一。     

重组人白细胞介素24抑制淋巴瘤raji细胞生长及其分子机制

目的：研究重组人白细胞介素24体外对淋巴瘤raji细胞的生长抑制作用及其分子机制。方法：用rhIL-24蛋白作用于淋巴瘤raji细胞,MTT法检测rhIL-24蛋白对raji细胞的生长抑制作用,激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）观察rhIL-24蛋白诱导raji细胞凋亡的形态学改变,流式细胞仪（VACS）检测rhIL-24蛋白诱导raji细胞的凋亡率及细胞周期改变,免疫细胞化学分析凋亡相关因子Bcl-2和Bax的改变。结果：rhIL-24蛋白作用于淋巴瘤raji细胞后,可以显著抑制raji细胞的生长,诱导G2／M期阻滞和凋亡,rhIL-24蛋白能使raji细胞中bcl-2的表达下调和bax的表达上调。结论：rhIL-24蛋白对淋巴瘤raji细胞具有显著的生长抑制及凋亡诱导作用,其作用机制可能与下调bcl-2和上调bax的表达有关。     

bcl-2、IL-6、IL-6R反义寡脱氧核苷酸对小细胞肺癌细胞作用的比较

目的:比较bcl-2、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、白介素-6受体(interleukin-6 receptor,IL-6R)反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸(antisense phosphorothiate oligodeoxynucleotide, AS-PS-ODN)对小细胞肺癌细胞株NCI-H446细胞增殖及诱导凋亡的作用,初步探讨反义核苷酸技术治疗中靶基因的选择策略.方法:合成反义寡脱氧核苷酸bcl-2 AS-PS-ODN、IL-6 AS-PS-ODN、IL-6R AS-PS-ODN,分别作用于NCI-H446细胞株,通过细胞克隆形成实验检测细胞增殖活性的变化,细胞凋亡线粒体流式检测及DNA倍体分析检测细胞凋亡,半定量RT-PCR检测相关基因表达水平的变化.结果:(1)bcl-2 AS-PS-ODN、IL-6 AS-PS-ODN、IL-6R AS-PS-ODN均能够抑制肺癌细胞增殖活性和诱导细胞凋亡,其中以IL-6 AS-PS-ODN抑制作用最强, bcl-2 AS-PS-ODN次之, IL-6R AS-PS-ODN作用最弱.(2)3种反义寡脱氧核苷酸均能下调肺癌细胞相应基因的表达水平,其中以IL-6下调幅度最大,达(84.1±5.01)%; bcl-2和IL-6R基因下调幅度相近,分别为(62.6±3.42)%和(60.3±4.45)%.(3)反义核苷酸作用后除了引起自身基因表达下调外,还伴对其他基因表达的调节作用,如IL-6 AS-PS-ODN作用使bcl-2基因表达下调(32.2±0.20)%;而bcl-2 AS-PS-ODN作用使IL-6基因表达上调(74.3±4.13)%. 结论:IL-6 AS-PS-ODN较bcl-2 AS-PS-ODN和IL-6R AS-PS-ODN能更有效地诱导小细胞肺癌细胞凋亡,IL-6是NCI-H446小细胞肺癌反义核苷酸治疗较为合适的靶基因.     

奥沙利铂处理HepG2细胞后DR5、caspase-8及survivin、bcl-2表达的变化

目的：研究奥沙利铂作用于HepG2细胞后DR5、caspase-8、survivin、bcl-2的表达,对奥沙利铂诱导HepG2细胞凋亡的机制进行初步探讨。方法：实验分为对照组和奥沙利铂组,应用MTT法、流式细胞仪体外研究奥沙利铂对HepG2细胞增殖的影响;采用免疫细胞化学及western blot的方法,观察奥沙利铂作用于HepG2细胞24h后DR5、caspase-8、survivin、bcl-2的表达情况。结果：奥沙利铂对肝癌HepG2细胞的抑制作用呈时间依赖性和浓度依赖性;奥沙利铂作用于HepG2细胞24小时后细胞表面DR5及caspase-8的表达增强,而survivin和bcl-2的表达减弱。结论：奥沙利铂诱导肝癌HepG2细胞凋亡的机制可能与其上调DR5及caspase-8表达和下调survivin及bcl-2表达有关。     

奥沙利铂处理HepG2细胞后DR5、caspase-8及survivin、bcl-2表达的变化

目的:研究奥沙利铂作用于HepG2细胞后DR5、caspase-8、survivin、bcl-2的表达,对奥沙利铂诱导HepG2细胞凋亡的机制进行初步探讨.方法: 实验分为对照组和奥沙利铂组,应用MTT法、流式细胞仪体外研究奥沙利铂对HepG2细胞增殖的影响;采用免疫细胞化学及western blot的方法,观察奥沙利铂作用于HepG2细胞24h后DR5、caspase-8、survivin、bcl-2的表达情况.结果: 奥沙利铂对肝癌HepG2细胞的抑制作用呈时间依赖性和浓度依赖性;奥沙利铂作用于HepG2细胞24小时后细胞表面DR5及caspase-8的表达增强,而survivin和bcl-2的表达减弱.结论: 奥沙利铂诱导肝癌HepG2细胞凋亡的机制可能与其上调DR5及caspase-8表达和下调survivin及bcl-2表达有关.     

p53基因诱导胱癌细胞HTB9凋亡及相关基因的表达

目的 研究野生型p53基因诱导膀胱癌细胞凋亡的作用,及其对凋亡相关基因bcl-2、bax和ICE表达的调控。方法 将野生型p53基因重组腺病毒载体转染人膀胱癌细胞HTB9,应用RT－PCR检测bax的mRNA表达水平,应用免疫组化法检测bcl-2、bax和ICE蛋白表达水平,以DNA琼脂糖凝胶电泳、脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP切口末端标记技术（TUNEL）和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 野生型p53基因导入可诱导HTB9细胞凋亡,凋亡细胞百分率可达50．4％;bax mRNA和蛋白水平增高,ICE和Bcl-2蛋白水平分别增高和下降。结论 野生型p53基因很可能是通过调控凋亡相关基因ICE、Bax和Bcl-2的表达来诱导细胞凋亡。     

Anti-cancer effect of tectochrysin in NSCLC cells through overexpression of death receptor and inactivation of STAT3

Phenolic compounds (flavonoids and phenolic acid derivatives) are the most important pharmacologically active ingredients, and these compounds could inhibit proliferation of human cancer cells by inducing of apoptotic cell death. Here we focused on the anticancer effects of tectochrysin on human non-small-cell lung cancer (NSCLC) cells and its mechanism of action. We analysed the activity of tectochrysin on NSCLC cells (A549 and NCI-H460) by use of Western blot analysis for major apoptotic proteins and death receptor expression. We also used EMSA for effects on STAT3 DNA binding activity. Tectochrysin (0–80 μM) suppressed the growth of A549 and NCI-H460 lung cancer cells by inducing of apoptotic cell death in a concentration dependent manner. Expression of DR3 and Fas as well as DR downstream pro-apoptotic proteins including cleaved caspase-3, cleaved caspase-8, cleaved caspase-9 and Bax were concomitantly increased, but the expression of anti-apoptotic proteins; Bcl-2 was decreased in both cancer cells. In addition, tectochrysin treatment also inhibited phosphorylation of STAT3 in A549 and NCI-H460 cells. However, deletion of DR3 and Fas by small interfering RNA significantly reversed tectochrysin-induced cell growth inhibitory effect as well as down regulation of STAT3 in A549 and NCI-H460 lung cancer cells. Pull down assay and docking model showed interaction of tectochrysin with STAT3. We propose that tectochrysin leads to apoptotic cell death in NSCLC cells through activation of DR3 and Fas expression via inhibition of STAT3 phosphorylation.     

survivin抗肺癌细胞凋亡的分子机制

目的 研究survivin反义寡核苷酸（ASODN）诱导肺癌细胞凋亡的作用,探讨survivin抗肺癌细胞凋亡的分子机制。方法 在脂质体介导下,分别以100mmol／L、300mmol／L和500mmol／L浓度的survivin ASODN,作用于肺癌细胞株NCI-H44624h、48h和72h后,用RT-PCR和Western blot检测survivin mRNA及蛋白表达,流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡;Rh123染色法检测细胞线粒体膜电位（△ψm）变化;ELISA法检测胞浆细胞色素C（cyt C）浓度;比色法检测胞浆内天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-9（caspase-9）、caspase-3的活性;Western blot检测caspase-8蛋白表达;加入环孢霉素A（CsA）后,以FCM检测细胞凋亡。结果 与各对照组相比,survivin ASODN显著下调了survivin mRNA表达,且呈时间和浓度依赖性,其中以500mmol／L作用72h时效果最佳,抑制率达62．7％,其蛋白表达也显著下调。NCI-H446细胞的凋亡指数（AI）为48．35％,明显高于对照组（3．75％）、空脂质体组（3．41％）、无义寡核苷酸（NSODN）组（4．69％）、100和300mmol／LASODN组（19．85％和34．39％）;增殖指数（PI）为24．38％,明显低于上述各组（75．54％、73．12％、71．76％、51．03％和38．94％,P均〈0．01）。survivin ASODN导致细胞△ψm逐渐下降,并相继引起cytc的释放、caspase-9和caspase-3的激活,而caspase-8酶原无变化。CsA显著抑制了survivin ASODN诱导的细胞凋亡。结论 survivin通过调控线粒体凋亡途径发挥抗肺癌细胞凋亡作用;survivin ASODN能够显著下调survivin mRNA及蛋白表达,诱导肺癌细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

拓扑替康诱导卵巢癌COC1/ DDP 细胞凋亡的分子机制初步探讨

  目的 探讨拓扑替康(TPT)对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1／DDP的杀伤和诱导凋亡活性及其作用机制。方法 MTT比色法与软琼脂克隆形成测定TPT对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1／DDP的杀伤效应；TUNEL法和流式细胞仪研究TPT对靶细胞的凋亡诱导作用；Western blot检测TPT对COC1／DDP细胞内bcl-2、bax和caspase-3基因表达的影响以及caspase-3活性的改变。结果 TPT对COC1／DDP细胞有明显细胞毒性作用，不仅有剂量依赖性，也存在明显的时间依赖性；COC1／DDP细胞在TPT作用后出现特征性凋亡形态特征，且凋亡率由8．54％上升为23．16％(P<0．05)。TPT不影响COC1／DDP细胞内bcl-2蛋白表达，却明显增加19ax蛋白和caspase-3蛋白表达，并提高caspase-3活性。结论 TPT对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1／DDP有明显的杀伤和促凋亡作用，其机制可能依赖于细胞内bax蛋白表达增高和caspase-3的活化。     

黄芪甲苷对人结肠癌SW480细胞系增殖和凋亡的影响

目的 探讨黄芪甲苷对人结直肠癌SW480细胞系增殖和凋亡的影响。方法 药物细胞毒性实验检测黄芪甲苷对SW480细胞存活率的影响，测得IC50为168 μmol/L；以不同浓度黄芪甲苷处理SW480细胞。细胞计数试剂盒检测细胞增殖倍数；蛋白质印迹法检测细胞中Ki67、PCNA、bcl-2、Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9的表达水平；Hoechst染色法检测细胞凋亡情况。结果 黄芪甲苷浓度大于20 μmol/L时，细胞存活率明显降低。与对照组相比，黄芪甲苷加药组细胞增殖倍数明显降低，黄芪甲苷低剂量组Ki67的表达量没有显著变化，黄芪甲苷中、高剂量组细胞中Ki67和PCNA的表达量显著降低；黄芪甲苷干预后，凋亡细胞比率显著升高，bcl-2的表达水平显著降低，而bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9的表达量显著上升；且随着黄芪甲苷浓度的增加，效果越明显。结论 黄芪甲苷能抑制人结肠癌SW480细胞增殖，诱导细胞凋亡。     

紫杉醇脂质体对乳腺癌MCF-7细胞生长抑制作用的机制

目的 分析紫杉醇脂质体对乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用,观察药物作用的时间浓度关系并探究其作用机制.方法 应用不同剂量紫杉醇脂质体对MCF-7细胞进行处理,通过MTT法检测细胞存活率,倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞分析技术检测细胞凋亡情况及其对细胞周期的影响,Western blot法检测bcl-2蛋白表达情况.结果 紫杉醇脂质体对MCF-7细胞有明显的剂量时间依赖效应.紫杉醇与紫杉醇脂质体均可将MCF-7细胞阻滞在G2/M期,且随药物浓度增加,凋亡细胞所占比例逐渐增加.通过Western blot法检测发现,紫杉醇脂质体作用后MCF-7细胞bcl-2蛋白表达明显下降,bax蛋白表达明显上调,bax/bcl-2比例明显上调.结论 与紫杉醇相比,紫杉醇以脂质体对人乳腺癌MCF 7细胞具有同样的抑制作用,其促凋亡机制之一为调控bcl-2及bax蛋白表达.     

细胞周期蛋白激酶抑制剂诱导尤文肉瘤细胞凋亡作用的机制

目的探讨小分子细胞周期蛋白激酶抑制剂flavopiridol（FP）尤文肉瘤细胞株RD-ES凋亡诱导作用及其调控机制。方法FP作用RD-ES细胞后，光学显微镜观察其形态变化，MTT法测定FP对细胞增殖的抑制率；流式细胞仪检测细胞凋亡；Western blot检测bcl-2，bax，mcl-l和caspase-8的蛋白表达变化。结果MTT实验显示FP对尤文肉瘤RD-ES细胞增殖有抑制作用，其抑制效应具有时间及浓度依赖的特点，流式细胞计数分析表明FP可诱导细胞凋亡，免疫印迹检测显示FP对bcl-2及bax的表达无影响，但细胞凋亡抑制基因mcl-1活性型caspase-8的表达被上调。结论FP可诱导尤文肉瘤细胞株凋亡，其作用不依赖于bcl-2基因的变化，mcl-1基因表达的抑制及caspase-8路径的激活可能为其机制之一。     

DON 对胃癌细胞HGC-27 细胞周期和凋亡的影响

 目的 探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）对体外培养胃癌细胞HGC-27细胞周期和凋亡的影响。方法 体外培养的胃癌细胞HGC-27经50、100、1000、2000μg／L DON处理12h、24h、48h，应用流式细胞术（FCM）进行细胞周期分析，检测凋亡情况及其量效关系，Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达情况。结果 FCM检测结果表明，较高浓度（1000和2000μg／L）DON处理对细胞周期分布的影响随处理时间不同有明显差异。DON处理12h，可明显降低G0／G1细胞百分率、增加S期细胞百分率。处理时间延长至24h和48h，则表现为G0／G1细胞百分率增加，S期细胞百分率降低（P〈0．05）。DON处理24h和48h，各DON实验组HGC-27细胞凋亡率均高于对照组，在50～2000ug／L浓度范围内，凋亡率随着DON处理浓度的升高而升高。Western blot检测凋亡相关蛋白结果显示，DoN处理12、24和48h，Bax和Caspase-3蛋白表达均明显升高，而Bcl-2蛋白表达降低。结论 DON处理可影响体外培养的胃癌细胞象HGC-27细胞的细胞周期分布，其作用依DON浓度和作用时间的不同而有差异。同时DON可诱导HGC-27细胞凋亡，上调Bax和Caspase-3蛋白表达和下调Bcl-2蛋白表达可能是其诱导细胞凋亡的机制之一。     

Curcumin Analogue A501 induces G2/M Arrest and Apoptosis in Non-small Cell Lung Cancer Cells

Curcumin and its analogues have been reported to exert anti-cancer activity against a variety of tumors. Here, we reported A501, a new curcumin analogue. The effect of A501 on cell viability was detected by MTT assay, the result showed that A501 had a better inhibiting effect on the four non-small cell lung cancer (NSCLC) cells than that of curcumin. Moreover, Colony forming experiment showed A501 significant restrained cell proliferation. Flow cytometry displayed A501 can cause G2/M arrest and induce apoptosis. Western blotting showed thatA501 decreased the expression of cyclinB1, cdc-2, bcl-2, while increased the expression of p53, cleaved caspase-3 and bax. In conclusion, curcumin analogues A501 played antitumor activity by inhibiting cell proliferation andinducing apoptosis of NSCLC cells. And it was likely to be a promising starting point for the development of curcumin-based anticancer drugs.