抑制DLK1表达对食管癌细胞放射敏感度的影响

目的 探讨抑制DLK1的表达对食管癌细胞放射敏感度的影响。方法 采用克隆形成实验验证KYSE-R与KYSE细胞的放射敏感度差异,RT-PCR和Western blot检测DLK1的表达。选用最佳DLK1干扰序列转染KYSE-R细胞,4 Gy射线处理后克隆形成实验检测KYSE-R细胞放射敏感度,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。结果 KYSE-R细胞表现出比KYSE细胞更强的放射抗拒性,DLK1在KYSE-R中的表达显著高于KYSE,且siDLK1-3干扰效果最佳（均P<0.05）。4 Gy射线照射后DLK1干扰组细胞存活力显著低于对照组,而DLK1干扰组细胞凋亡率和G₂/M期细胞比例明显高于对照组（均P<0.05）。结论 抑制DLK1表达可通过降低细胞存活、促进细胞凋亡和增加G₂/M期细胞比例、增强放射敏感度,为食管癌放射增敏研究提供新的靶点。     

下调VEGF表达影响鼻咽癌细胞放射敏感度的机制

目的　应用RNA干扰技术抑制人鼻咽低分化鳞状上皮细胞癌细胞株CNE-2中血管内皮生长因 子（VEGF）表达,研究阻断VEGF基因表达对鼻咽癌细胞放射敏感度的影响及机制。方法 构建针对 VEGF的siRNA真核表达载体pU-VEGF-siRNA（CNE-2组）、1个阴性对照质粒（CNE-2/Neg-siRNA 组）、经脂质体转染至CNE-2细胞（CNE-2/VEGF-siRNA组）,用平板克隆形成实验检测在6MV-X线 0、2、4、6、8、10 Gy照射后克隆形成能力及通过单击多靶模型、线性二次模型拟合放射生物学参 数,流式细胞检测分析细胞周期和细胞凋亡的变化,用RT-PCR定量分析三组细胞中Cyclin D1、Cyclin E、P16和P53的mRNA表达。结果 经6MV-X线0、2、4、6、8、10 Gy照射后细胞存活率显著下降, CNE-2/VEGF-siRNA组细胞经D0和2 Gy照射后的存活分数明显低于CNE-2组、CNE-2/Neg-siRNA组; CNE-2/VEGF-siRNA组中G1/S期细胞周期阻滞更为明显。在Cyclin D1、Cyclin E、p16和p53基因中, Cyclin D1mRNA表达在放疗后6、12和24 h进行性升高,差异有统计学意义,而其他基因变化差异无统 计学意义,Western blot检测显示Cyclin D1蛋白表达在放疗后24 h明显升高。结论 下调VEGF表达可 增加鼻咽癌细胞的放射敏感度,其机制可能是通过Cyclin D1信号通路途径使细胞周期发生G1/S期阻滞。     

转染p16基因对人肺腺癌细胞放射效应的影响

目的 :探讨p16基因与人肺腺癌细胞放射效应的关系。方法 :免疫组化、Westernblot方法检测人肺腺癌细胞株Anip973、AGZY83a的p16蛋白表达 ,FuGene转染方法把 p16表达载体转入这两个细胞株 ,进行细胞存活曲线、流式细胞仪 (FCM )分析细胞周期分布。结果 :p16蛋白表达AGZY83a为 87.4 % ,明显高于Anip973(5 2 % ) ,细胞存活曲线显示低表达的Anip973与转染后Anip973p16的Dq值有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,D0 值间无显著差异 (P >0 .0 5 )。p16蛋白高表达的AGZY83a与AGZY83ap16间D0 值、Dq值均无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;流式细胞仪测定细胞周期结果显示 ,Anip973转染 p16基因后出现G2 M期比例增加 ,S期比例减少。结论 :转染 p16基因后可能通过改变细胞周期分布及抑制细胞对照射后的亚致死性损伤修复 ,来改变p16蛋白低表达的人肺腺癌细胞株Anip973的放射效应 ,而对于高表达的AGZY83a则无显著影响。     

凋亡抑制基因BAG-1在甲状腺癌中的表达及临床意义

摘 要：［目的］ 探讨凋亡抑制基因BAG-1在甲状腺癌中的表达及其临床意义。［方法］ 应用免疫组化SP法检测78例甲状腺癌、62例甲状腺腺瘤、37例癌旁组织和28例正常甲状腺组织中BAG-1的表达情况,并比较其表达差异,分析 BAG-1的表达与甲状腺癌临床病理特征的关系。［结果］ 甲状腺癌、甲状腺瘤、癌旁甲状腺及正常甲状腺组织中BAG-1的阳性表达率分别为74.36%,40.32%,16.22%和0。未分化型甲状腺癌（未分化癌和髓样癌）组织中的BAG-1阳性率较分化型甲状腺癌增高（100.0% vs 69.23%,P<0.05）;有淋巴结转移和临床Ⅲ、Ⅳ期病例组的BAG-1阳性率较无淋巴结转移组、临床Ⅰ、Ⅱ期病例增高（92.9% vs 64.0%,95.8% vs 64.8%,P均<0.05）。［结论］ BAG-1在甲状腺癌中高表达,其过量表达可能与肿瘤的发生发展有关。     

人肺癌细胞NHE—1基因片段的克隆及其反义表达载体的构建

Na~ /H~ 交换泵(Na~ /H~ exchanger,NHE)基因家族有5个亚型,分别命名为NHE-1,2,3,4及β-NHE,其中NHE-l是一种管家基因.NHE-l能通过Na~ /H~ 交换,将胞内H~ 排出,是维持胞内pH在中性或偏碱性(pH= 7.0～7.2)的一种重要膜蛋白.肿瘤细胞由于其糖酵解的反巴士德效应,导致酸性产物的异常增加,但肿瘤细胞能依靠表达增强的NHE-1膜蛋白,将胞内H~ 泵出胞外,阻止癌细胞酸化.而目前已证明胞内H~ 的蓄积将会诱发细胞凋亡.因此,抑制人肺癌细胞NHE-1基因上调表达将诱发细胞酸化和凋亡,达到肿瘤治疗的目的.为将来在有机整体中实施NHE-1基因抑制的肿瘤治疗奠定基础,我们从人肺癌组织细胞中克隆了NHE-1基因cDNA的部分序列,并构建了其反义表     

双干扰质粒共转染对胃癌BAG-1基因亚型表达的抑制作用

目的 构建针对人BAG-1(Bcl-2-associated athanogene 1)基因的短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达质粒,探讨其对人胃癌SGC-7901细胞BAG-1主要亚型表达的抑制作用及对细胞生长的影响.方法 以人BAG-1 mRNA编码区为RNA干扰靶点,设计2条不同的位于BAG-1基因P29、P33、P46、P50亚型的两个通用外显子上64nt寡核苷酸干扰片段A、B及1条阴性对照片段S,将其定向克隆到带有卡那霉素抗性和增强绿色荧光蛋白的真核表达载体pGenesil-1上,将其转染至SGC-7901细胞中,设空白对照组(未转染质粒SGC-7901-Un)、阴性对照组(转染阴性对照质粒pGensil-Neg)、干扰组(转染干扰质粒pGensil-BAG1-A和pGensil-BAG1-B),用RT-PCR、Western blot检测BAG-1基因的干扰效果.MTT法检测细胞生长情况并绘制生长曲线.结果 酶切及测序结果证实,pGensil BAG1-A和pGensil-BAG1 B干扰质粒及阴性对照质粒pGensil-S构建成功.质粒在SGC-7901细胞中的转染效率达40％～50％.阴性对照组细胞BAG-1基因表达与空白对照组无明显差异,干扰组细胞BAG-1基因表达较空白对照组显著下降(P＜0.01),表达抑制率在mRNA水平为(63±9.8)％,在蛋白水平对BAG1-P46、BAG1-P32亚型的抑制率分别为(94.3±1.08)％、(66.1±6.5)％.生长曲线表明细胞生长受到了抑制.结论 针对人BAG-1基因的shRNA真核表达质粒pGensil-BAG1-A和pGensil-BAG1-B共转染能高效特异的抑制胃癌SGC-7901细胞中BAG-1主要亚型的表达,并抑制人胃癌SGC-7901细胞的生长.     

RNA干扰HIF-1α增强人肺腺癌SPCA-1细胞放射敏感性的研究

目的探讨RNA干扰乏氧诱导因子1（HIF-1）增强人肺腺癌SPCA-1细胞的放射敏感性。方法构建干扰HIF-1α质粒pSUPER-HIF-1α，采用荧光定量RT-PCR、Western blot方法观察有氧与乏氧状态下RNA干扰HIF-1α的变化，用成克隆实验观察乏氧时RNA干扰HIF-1α对放射的增敏作用。结果在常氧和乏氧的状态下，RNA干扰HIF-1α引起mRNA的表达水平分别下降64％和76％；在乏氧的状态下，蛋白的表达下降。转染pSUPER-HIF-1α后的细胞存活曲线的D0值为2．5Gy，转染空白质粒细胞和空白对照细胞的D0值分别为5、0Gy和5、1Gy，增敏比为2．1。结论RNA干扰HIF-1α可以增加SPCA-1细胞对放射的敏感性。     

ERCC1、BAG-1 及 BRCA1 基因在非小细胞肺癌中的表达及其与预后的关系

目的 探讨ERCC1、BAG-1和BRCA1基因mRNA在接受以铂类为基础辅助化疗的非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者中的表达情况及其与预后的关系。方法 85例NSCLC患者中74例给予以铂类为基础的术后辅助化疗,采集全组患者的肿瘤组织和其中34例患者的癌旁组织,应用半定量RT-PCR法,检测其ERCC1、BAG-1和BRCA1基因mRNA的表达情况,回顾性分析患者的临床病理资料,探讨3个基因的表达与患者总生存期（OS）之间的关系。结果 ①ERCC1、BAG-1阴性表达的患者OS显著长于阳性表达的患者（P均=0.001）。ERCC1、BAG-1阴性表达的患者接受铂类化疗的疗效显著优于阳性表达的患者（P=0.002、P=0.001）。②BRCA1阴性表达的患者OS长于阳性表达的患者,但差异无统计学意义（P=0.057）。③多因素分析显示ERCC1、BAG-1可作为NSCLC患者接受铂类化疗的预后指标（P=0.027、P=0.022）。结论 检测ERCC1和BAG-1的表达可作为指导NSCLC患者术后接受铂类化疗及预后评估的指标。     

靶向沉默RNF2基因对食管癌细胞放射敏感度的影响

目的 探讨RNF2基因表达对X射线照射后食管癌细胞放射敏感度的影响。方法 针对RNF2mRNA序列,设计合成3对有效的干扰序列（siRNA1、siRNA2和siRNA3）和阴性对照序列。瞬时转染细胞,分别命名为RNF2 siRNA1组、RNF2 siRNA2组、RNF2 siRNA3组,转染空载体组和未转染组分别命名为NC组和control组。RT-PCR和Western blot法观察食管癌ECA109细胞各组中RNF2表达变化。MTT法检测RNF2基因对ECA109增殖能力的影响。克隆形成实验检测RNF2对ECA109放射敏感度的影响。流式细胞术测定RNF2基因干扰后对细胞周期和凋亡分布的影响。结果 3对干扰序列组的RNF2基因在mRNA和蛋白表达水平低于control组和NC组,尤以siRNA1组效果最明显。选择siRNA1作为干扰组进行MTT和流式细胞术检测。MTT结果表明照射后干扰组细胞增殖明显受抑;克隆形成实验的结果显示干扰组的的D0、Dq、SF2显著低于control组和NC组,而干扰组的外推数N（extrapolation number N）值明显高于后者,可见干扰组细胞的放射敏感度高于control组和NC组;流式细胞术显示照射后RNF2 siRNA组G0/G1期明显高于control组和NC组,S期显著低于control组和NC组。结论 siRNA干扰技术有效地抑制了食管癌ECA109细胞中RNF2基因的表达,联合X线照射后显著抑制了细胞增殖,消除了细胞周期阻滞在S期,增加了食管癌的放射敏感度。     

BAG-1基因多态性与晚期非小细胞肺癌患者铂类药物敏感性的关系

目的：研究抗凋亡基因BAG-1 324位点 （C-T, rs11551682） 基因多态性与晚期非小细胞肺癌 （NSCLC） 患者对含铂类化疗方案敏感性的关系, 探讨其在晚期非小细胞肺癌化疗方案选择及预后中的意义。方法： 以聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性 （PCR-RFLP） 方法对142例经病理学确诊的晚期非小细胞肺癌患者BAG-1 324位点基因多态性进行分析, 采用紫杉醇/顺铂 （TP） 或长春瑞滨/顺铂 （NP） 的方案化疗, 3个周期后进行临床疗效评价。用卡方检验等方法分析比较不同基因型与含铂化疗方案敏感性的关系。结果： 142例晚期非小细胞肺癌患者中, BAG-1 codon324存在3种等位基因型, 基因型频率分别为C/C 77.46%（110/142）、 C/T 22.54% （32/142） 和T/T 0例; 含铂化疗方案总有效率 （CR+PR） 为32.39%, 其中CR 4例, PR 42例, SD 55例, PD41例。携带BAG-1 codon 324 C/C基因型的个体对含铂化疗方案的化疗敏感性是BAG-1 codon324 C/T基因型携带者的2.852倍（95%CI 1.133～7.182, P=0.026）; 携带BAG-1 codon324 C/C基因型患者与C/T基因型患者PFS、 OS差异有显著性统计学意义 （5.7个月 vs 5.3个月, P=0.002; 8.1个月 vs 7.7个月, P=0.013）。采用Cox回归模型进行多因素分析提示： BAG-1 Codon324位点基因型为C/T的患者疾病进展风险是C/C基因型患者的1.870倍 （P=0.002）。结论： BAG-1 codon324基因多态性可能与晚期非小细胞肺癌患者对含铂化疗方案的化疗敏感性相关, 携带C/T基因型患者可能预后不良。     

The Study on the Function of BAG-1Gene and its Related Signaling Pathway in Human Lung Cancer Cells

Background and Objective Apotosis is a programmed cell death process which can be induced by ectoor intra-cellular signals. Recent study indicates that genesis and development of     

BAG-1 在非小细胞肺癌中的表达与含铂方案化疗敏感性的关系*

目的：研究BAG-1 在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer ,NSCLC ）中的表达与临床特征及含铂方案化疗敏感性的关系,探讨NSCLC 的铂类耐药机制。方法：应用免疫组化的方法检测125 例NSCLC 术后石蜡标本中BAG-1 蛋白的表达情况,其中75例术后给予含铂方案化疗、50例单独行手术治疗,随访后进行生存预后分析。结果：1）BAG-1 在NSCLC 中存在高表达（阳性率为64.8%）;2）BAG-1 表达水平与组织学分级相关,分级越差其阳性率越高（P=0.024、0.042）,与其它临床特征之间差异均无统计学意义;3）BAG-1 阳性组具有生存优势,且在胞浆中的表达具有更低的死亡风险（P=0.039）;4）BAG-1 阳性组在接受含铂方案化疗后不能明显延长生存时间,阴性组更能从中受益（P=0.048）。 结论：BAG-1 与铂类药物化疗敏感性相关,可能成为新型的临床预后指标,有助于NSCLC 个体化治疗方案的选择。     

BAG-1在喉鳞癌组织中表达及其与p53基因和细胞凋亡的相关性

目的最近研究发现在恶性肿瘤细胞中存在BAG-1蛋白表达水平和活性异常升高。本研究探讨在喉鳞状细胞癌(laryngealsquamouscellcaicinomas,LSCC)中BAG-1表达临床意义及其与p53、细胞凋亡的关系,以了解BAG-1与喉癌发生发展及预后的关系。方法运用免疫组化技术及TUNEL法检测68例LSCC组织及30例癌旁组织中BAG-1、p53蛋白的表达及癌细胞凋亡指数(apoptosisindex,AI),并应用计算机图像分析系统对其阳性表达进行定量分析。结果BAG-1在LSCC及癌旁组织中的阳性率分别为76.5%、16.7%,BAG-1蛋白在LSCC组织的表达较癌旁组织中的表达高(P<0.05),5年生存者BAG-1蛋白表达阳性率显著低于5年死亡者(P<0.05),且细胞核BAG-1阳性者较细胞浆阳性者预后更差(P<0.05);BAG-1蛋白阳性组及BAG-1蛋白阴性组的p53蛋白阳性率差异无显著性(P>0.05);BAG-1阳性患者的AI均数显著低于阴性患者(P<0.01),且表达呈负相关(r=-0.602)。结论BAG-1可能在LSCC的细胞凋亡及肿瘤发生中起着重要作用,并对LSCC...     

ＢＡＧ-１和ＭＭＰ-９在非霍奇金淋巴瘤组织中的表达及意义

目的：探讨ＢＡＧ-１和ＭＭＰ-９蛋白在非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）组织中的表达及其临床意义。方法：选取皖南医学院附属弋矶山医院２００５～２００７年未经治疗的ＮＨＬ组织标本４０例,反应性淋巴结增生１１例作为对照组,采用免疫组化ＳＰ法检测ＢＡＧ-１及ＭＭＰ-９的表达,并探讨ＢＡＧ-１和ＭＭＰ-９的表达与ＮＨＬ的分期及预后的关系。结果：ＢＡＧ-１在ＮＨＬ组织中表达率为６６.４１％,对照组表达率为１８.１８％（Ｐ＜０.05）。ＭＭＰ-９在ＮＨＬ组织中表达率为７５.２１％,对照组表达率为２７.２７％（Ｐ＜0.05）。ＢＡＧ-１在Ⅰ ＋Ⅱ期ＮＨＬ患者组织中表达率为２５％,Ⅲ ＋Ⅳ期ＮＨＬ患者组织中表达率为８５.７１％（Ｐ＜０.０５）;ＭＭＰ-９在Ⅰ ＋Ⅱ期ＮＨＬ患者组织中表达率为４１.６７％,Ⅲ ＋Ⅳ期ＮＨＬ患者组织中表达率为９２.５６％（Ｐ＜０.０５）。结论：ＢＡＧ-１和ＭＭＰ-９在ＮＨＬ中高表达,且ＢＡＧ-１和ＭＭＰ-９的表达与ＮＨＬ的临床分期有关,提示ＢＡＧ-１和ＭＭＰ-９可能作为判断ＮＨＬ预后的生物学指标。     

E1A基因对人肺腺癌细胞化疗敏感性的影响 *

目的：探讨Ｅ１Ａ基因对人肺腺癌细胞的化疗增敏作用。方法：通过脂质体介导将Ｅ１Ａ基因导入人肺腺癌细胞系Ａ－ｎｉｐ９７３,经Ｇ４１８筛选获得稳定表达Ｅ１Ａ的转染细胞（Ａｎｉｐ９７３－Ｅ１Ａ）。用不同浓度顺铂、泰素及ＶＰ１６等化疗药物处理细胞,观察Ｅ１Ａ基因对人肺腺癌细胞的化疗增敏作用。结果：Ａｎｉｐ９７３－Ｅ１Ａ细胞对顺铂、泰素的敏感性显著增加,顺铂的ＩＣ５０值减少了７倍,并且敏感性随时间的延长而增加。但对ＶＰ１６,Ｅ１Ａ基因的稳定表达在该细胞系未显示增敏作用。免疫细胞化学染色显示,Ｅ１Ａ基因抑制了ＨＥＲ－２／ｎｅｕ的表达。结论：Ｅ１Ａ基因能增加人肺腺癌细胞对顺铂、泰素等化疗药物的敏感性。该作用可能与Ｅ１Ａ基因抑制ＨＥＲ－２／ｎｅｕ的表达有关。为在恶性肿瘤治疗上化疗和基因治疗联合应用的可能性提供了实验依据。     

p16基因重组质粒的构建及其对人肺癌细胞的抑制作用

表达大肠杆菌胞嘧啶脱胺酶(CD)基因的重组腺病毒AdCD体外转染小鼠黑色素瘤细胞B16F10,结果显示转染了CD基因的B16F10细胞对5-氟胞嘧啶(5FC)的敏感性显著提高.将经AdCD/5FC系统处理的B16F10细胞上清倍比稀释后.加至野生型B16F10细胞中,发现当上清仅占6.25%时即可对野生型B16F10细胞发挥明显的杀伤作用,提示AdCD/5FC介导的旁观者效应可能是通过5FC经CD酶代谢产生的毒性产物扩散而实现的.本实验还观察了CD基因体内转染后的杀伤效果,荷瘤小鼠经注射AdCD并连续10天给予5FC治疗后,与PBS、对照病毒AdLacZ/5FC治疗小鼠比较,小鼠肿瘤生长明显受到抑制,小鼠存活期明显延长.     

亚硒酸钠抗氧化作用与抑瘤效应的实验观察

人ｐ１６基因是最近发现的一种肿瘤抑制基因。ｐ１６蛋白作为一种细胞增殖的负调控因子，在恶性肿瘤发生发展中起重要作用。为了进一步探讨ｐ１６基因的抗肿瘤特性，我们通过运用分子克隆技术构建重组人ｐ１６基因表达载体（ｐｃＤＮＡ３－ｐ１６），并通过电穿孔方法将ｐ１６基因导入到人肺腺癌ＮＣＩ－Ｈ４６０细胞中，经Ｃ４１８筛选获得可稳定表达ｐ１６的人肺腺癌细胞，观察ｐ１６基因对人肺腺癌细胞周期的影响和细胞增殖的作用     

前列腺癌中BAG-1、bcl-2及bax的表达及意义

目的：检测凋亡抑制因子BAG-1在前列腺癌组织（PCa）中的表达，探讨其与前列腺癌发生发展的关系及其与bcl-2和bax表达的关系。方法：采用免疫组织化学染色法检测BAG-1、bcl-2、bax在10例前列腺增生组织（BPH）、45例PCa组织中的表达。结果：BAG-1在BPH、PCa中的阳性表达率分别为20％（2／10）、91．1％（41／45）。PCa中BAG-1表达水平明显高于BPH（P〈0．05），且在癌组织中与肿瘤临床分期（P〈0．01）、病理分级（P〈0．01）呈正相关。BAG-1与bcl-2在PCa中的表达正相关（P〈0．05）。BAG-1与bax在PCa中的表达也呈正相关（P〈0．05）。结论：BAG-1基因可能通过抑制凋亡在PCa的发生发展中发挥重要作用，且其表达与bcl-2、bag的异常表达密切相关     

BAG-1基因在肺癌中的表达及其与预后关系的分析

背景与目的 BAG-1是一个与凋亡相关的多功能基因,现有的研究表明BAG-1的表达水平与多种肿瘤的预后相关.本研究旨在探讨BAG-1基因mRNA在肺癌组织中的表达情况及其与肺癌患者的临床病理生理特征和预后的关系.方法采用实时定量PCR方法检测156例肺癌石蜡组织标本中BAG-1基因的转录表达情况,并与其临床病理生理特征相结合进行分析.结果 ①BAG-1低表达组患者的中位生存时间(33.5个月)明显高于BAG-1高表达组(20.5个月)(P<0.005);②BAG-1低表达组患者的3年生存率为44.74%(34/76)5年生存率为26.32%(20/76),分别明显高于BAG-1高表达组[32.5%(26/80);21.25%(17/80)](P<0.05);两组生存曲线之间比较,BAG-1低表达组患者生存期明显长于高表达组患者(P=0.045);③分层分析发现在Ⅰ期、鳞癌、不伴有转移的肺癌患者中,BAG-1低表达组患者分别较高表达组生存期明显延长,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 BAG-1可用作预测肺癌患者预后的分子标记物,特别是在早期肺癌和鳞癌患者中,BAG-1的高表达可能与患者的不良预后相关.