市售荷叶药材中荷叶碱含量调查*

[目的]调查市售荷叶药材中荷叶碱的含量。【方法】以荷叶中的荷叶碱为指标成分,采用高效液相色谱法（HPLC）进行含量测定。【结果】在24个样品中,2个样品合格,22个样品不合格,合格率为8．3％。【结论】现有市售荷叶药材中荷叶碱含量普遍偏低。     

HPLC法测定不同市售荷叶药材中4种生物碱类成分的含量

目的 建立测定荷叶药材中4种生物碱类成分2-羟基-1-甲氧基阿朴啡、原荷叶碱、荷叶碱和莲碱含量的高效液相色谱方法,并测定不同市售荷叶药材中4种成分的含量.方法 采用HypersilC18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈-0.1%三乙胺水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温35 ℃,检测波长270 nm.结果 2-羟基-1-甲氧基阿朴啡、原荷叶碱、荷叶碱和莲碱的线性范围分别为0.109 6～0.657 6μg(r=0.999 5),0.021 0～0.126 0μg(r=0.999 5),0.103 0～0.618 0μg(r=0.999 8),0.085 6～0.513 μg(r=0.999 5),平均加样回收率(n=6)分别为99.5%,100.5%,97.5%和100.1%.30批市售品中4种生物碱类成分的含量分别为:2-羟基-1-甲氧基阿朴啡0.010%～0.076%,原荷叶碱0.002%～0.120%,荷叶碱0.008%～0.249%,莲碱0.008%～0.067%.结论 30批市售荷叶药材中4种生物碱类成分含量变化较大,其中原荷叶碱和荷叶碱的含量变化更为明显,应将4种生物碱同时纳入荷叶药材的质量控制.     

HPLC法测定不同产地和采收期荷叶中芦丁和荷叶碱的含量

目的建立荷叶中芦丁和荷叶碱含量的测定方法,比较不同产地和采收时间对荷叶中芦丁和荷叶碱含量的影响。方法采用HPLC法对14个不同来源和本市产的5个不同采收时间的荷叶进行超声提取后,分别测定提取物中芦丁和荷叶碱的含量。结果由于产地、采收时间的不同,芦丁和荷叶碱的含量差异较大,其中岳阳、江苏、浙江、湘潭的荷叶中活性成分含量较高。结论本法可以用于荷叶中芦丁和荷叶碱的质量控制,不同产地和采收期的荷叶中芦丁和荷叶碱的含量由于土壤或者气候等各种因素的影响,差异比较明显,实验结果可用于指导筛选荷叶优良产地和合理采集利用荷叶资源。     

一测多评法同时测定荷叶中4种生物碱含量

目的采用高效液相色谱法,建立同时测定荷叶中N-去甲基荷叶碱、O-去甲基荷叶碱、荷叶碱、莲碱4种生物碱含量的一测多评法。方法采用高效液相色谱法,荷叶碱为内标,分别建立荷叶碱与N-去甲基荷叶碱、O-去甲基荷叶碱、莲碱的相对校正因子,计算荷叶中N-去甲基荷叶碱、O-去甲基荷叶碱、莲碱的含量,实现一测多评。同时采用外标法测定荷叶中4种生物碱类成分的量,并将计算结果与一测多评法进行比较。色谱柱为Phenomenex C(18;流动相为乙腈-水-三乙胺-冰醋;检测波长为270nm;流速为1 m L/min;柱温为30℃;进样量为10μL。结果荷叶中的N-去甲基荷叶碱、O-去甲基荷叶碱、荷叶碱、莲碱分别在0.020 9～0.418 4μ、0.010 0～0.199 2μ、0.019 7～0.393 6μ、0.007 8～0.156 8μ范围内呈良好的线性关系;平均回收分别为101.16%、98.73%、101.06%、95.95%,RSD值分别为1.93%、1.75%、1.33%、2.00%。结论以荷叶碱为内标同时测定N-去甲基荷叶碱、O-去甲基荷叶碱、莲碱的一测多评法可用于荷叶的定量分析。     

荷叶生物碱提取纯化工艺研究

目的对荷叶生物碱提取纯化工艺进行研究,以进一步深入开展荷叶生物碱提取物药理活性及在生物体内的药代动力学研究,同时为其大规模工业生产及临床应用奠定基础。方法采用酸性染料比色法和高效液相色谱法分别测定荷叶总生物碱及主要指标性成分2-羟基-1-甲氧基阿朴啡、荷叶碱的含量,采用正交设计方法优选荷叶生物碱最佳提取工艺,然后考察使用阳离子交换树脂纯化荷叶生物碱的工艺。结果荷叶生物碱的最佳提取工艺为药材16倍量90%乙醇提取3次,每次1.5 h;荷叶生物碱的最佳纯化工艺为荷叶药材90%乙醇提取液,减压回收溶剂,残留物加药材20倍量质量分数为1%HCl超声分散后,离心,上清液流经D001-CC大孔阳离子交换树脂柱,以50%乙醇5倍柱体积(BV)洗脱除杂,再用质量分数为1%的氨性乙醇水溶液其中乙醇水溶液中乙醇浓度为70%洗脱7 BV,洗脱流速10 BV/h,收集氨性乙醇洗脱液,减压回收溶剂,残留物减压干燥,得荷叶生物碱部位。结论该方法工艺较简单,成本低,环境污染小,制得的荷叶生物碱部位总生物碱含量在50%以上。     

分光光度法测定不同产地荷叶药材总黄酮的含量

目的比较不同产地荷叶药材总黄酮的含量。方法采用紫外-可见光分光光度法,以芦丁为对照品,NaNO3-Al（NO3）3-NaOH显色,在500 nm处测定总黄酮含量。结果在14.43~72.15μg.ml-1范围内,吸光度与浓度线性关系良好（r=0.9995）,平均回收率为100.64%（RSD=0.90%）,不同产地药材总黄酮含量范围为1.88%~10.99%。结论不同产地荷叶药材中总黄酮含量存在较大差异。     

HPLC测定不同生长期和采收期太空莲叶中荷叶碱的含量

目的建立太空莲叶中荷叶碱含量测定方法,测定太空莲叶不同生长期和采收期荷叶碱的含量。方法采用色谱柱Hypersil BDS C18(4.6 mm×250 mm,5.0μm),乙腈-水-三乙胺-乙酸(27∶70.6∶1.6∶0.78),流动相流速为1.0 mL/min,检测波长为270 nm。结果在该色谱条件下,荷叶碱分离度良好,线性范围0.01-0.2 mg/mL。不同生长期和不同采收期荷叶中荷叶碱含量差异明显,8月初的初生嫩叶荷叶碱含量最高。结论不同采收期的近成熟叶荷叶碱含量普遍大于成熟叶,8月至9月的近成熟叶荷叶碱含量高于其他时间段的近成熟叶,因此综合考虑建议最佳采集时间为8月至9月,实验结果为荷叶资源的开发利用提供了参考依据。     

荷叶中荷叶碱的浸提动力学模型研究

[目的]考察温度、溶剂量、溶剂种类对荷叶碱浸提动力学过程。[方法]基于Fick第一定律建立浸提动力学模型将不同提取条件对荷叶碱浸提动力学的影响进行拟合与预测。[结果]温度升高,浸提速率及浸提量增大,且随温度升高,其对浸提量影响减小。提取体积增大,荷叶碱平衡提取量增大,但浸提达到平衡的时间延长。不同溶剂提取过程中,存在浓度交叉,试验范围内以70%乙醇提取率最高。不同溶剂下荷叶中荷叶碱浸提动力学符合一级一项浸提动力学模型。[结论]采用数字模型定量描述浸提过程功能成分质量浓度随时间变化的规律,其对于揭示不同因素对浸提动力学效果的影响及优化浸提工艺等具有重要指导意义。     

大孔吸附树脂分离纯化荷叶中阿朴啡类生物碱

目的优化大孔吸附树脂分离纯化荷叶中阿朴啡类生物碱的洗脱条件。方法采用大孔吸附树脂柱色谱法,以不同体积分数甲醇水溶液进行洗脱,分离富集阿朴啡类生物碱,并配以HPLC进行同步监控。结果基于不同体积分数甲醇水洗脱液对各种阿朴啡类生物碱洗脱能力不同,采用70%、80%、95%甲醇水溶液进行梯度洗脱,荷叶中3种主要的阿朴啡类生物碱得到了分离富集。70%甲醇水溶液洗去目标物以外的杂质后,75.58%的N-降荷叶碱和65.03%的O-降荷叶碱富集于80%甲醇水洗脱液中,69.46%荷叶碱富集于95%甲醇水洗脱液中。各洗脱液分别蒸干后得固体,N-降荷叶碱和O-降荷叶碱在相应的固体中质量分数分别为44.01%、7.61%。荷叶碱在相应的固体中质量分数为68.52%。结论此方法操作简单、重复性好,能有效分离富集荷叶中阿朴啡类各种生物碱。     

荷叶总黄酮苷质量控制研究

[目的]建立荷叶提取物中黄酮类化合物的高效液相色谱测定方法。[方法]药材经提取水解后用HPLC通过测定其槲皮素的含量来确定荷叶提取物中总黄酮的含量,采用Shim-packCLC-ODS(4.6mm×150mm,5μm)色谱柱,甲醇-水-磷酸(50∶50∶0.1)为流动相,流速0.8mL/min,检测波长360nm。[结果]槲皮素在0.013～0.130μg范围内呈良好线性关系(r=0.9999),荷叶提取物中槲皮素的平均含量为4.94%,RSD=1.67%;平均回收率为99.15%,RSD=0.60%。[结论]此测定方法简便快捷、精密度高、准确性好,可以作为荷叶中总黄酮的含量测定方法,以控制荷叶黄酮苷的质量。     

荷叶碱对非酒精性脂肪肝模型小鼠肝组织中SREBP信号通路的影响

[目的]研究中药荷叶有效成分对非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型小鼠的治疗作用及相关机制。[方法]通过蛋氨酸和胱氨酸联合缺乏饲料建立NAFLD模型小鼠,同时灌胃不同剂量荷叶碱,通过考察造模给药后各组小鼠体质量及血清生化指标,同时对肝组织分别进行苏木精-伊红(HE)染色和油红O染色,研究荷叶碱对NAFLD模型小鼠的治疗作用。此外提取造模给药后各组小鼠肝组织总核糖核酸(RNA),荧光定量核酸扩增检测(qPCR)法检测各组小鼠肝组织中胆固醇调节元件结合蛋白(SREBP)通路相关基因表达,初步探究荷叶碱缓解NAFLD的作用机制。[结果]荷叶碱能显著降低NAFLD模型小鼠体质量、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆固醇(TC)及三酰甘油(TG)水平,同时荷叶碱可缓解NAFLD模型小鼠肝组织中脂肪变性,减少肝组织中脂质含量;此外,荷叶碱可下调NAFLD模型小鼠肝组织中SREBP通路相关基因SREBP-1、乙酰CoA羧化酶(ACC)、ATP-柠檬酸裂解酶(ACLY)及脂肪酸合酶(FASN)表达。[结论]荷叶碱对NAFLD具有明显的疗效,其作用机制可能与抑制肝细胞SREBP通路激活相关。     

番泻叶联合灌肠用于手术前肠道清洁的临床研究

[目的]寻求适宜的结直肠术前肠道准备方法。[方法]采用随机对照试验方法,用番泻叶联合生理盐水灌肠方法(A法),与单纯清洁灌肠方法(B法)完成术前肠道清洁,术中观察术前肠道清洁效果。[结果]A法肠道肠管肠腔清洁效果优26例,良8例,差1例;B法肠管肠腔清洁效果优14例,良16例,差5例。A法效果优于B法(P<0.01)。[结论]用番泻叶联合生理盐水灌肠法具有操作简便,病人痛苦小,减少护理工作量等优点,值得临床推广应用。     

大青叶中药饮片与配方颗粒的质量研究

目的 对比研究不同产地大青叶中药饮片与配方颗粒的质量和价格,为临床医生及患者用药提供参考依据.方法 采用HPLC测定大青叶中药饮片与配方颗粒中水溶性有效成分尿苷、鸟苷的含量;并进行不同产地大青叶中药饮片水溶性浸出物比较以及与大青叶配方颗粒价格的比较.结果 5种不同产地大青叶中药饮片的尿苷、鸟苷含量及水溶性浸出物均存在差异,大青叶饮片以安徽、河北产地为最高;4种大青叶配方颗粒水溶性成分尿苷、鸟苷含量无显著差异,且与安徽、河北两地大青叶中药饮片中尿苷、鸟苷含量基本一致;相同剂量的配方颗粒的价格为传统中药饮片价格的1.5~2.5倍.结论 大青叶传统饮片质量以安徽、河北的为佳,与大青叶配方颗粒质量基本一致而价格较低.临床中可以综合考虑患者用药方便及经济承受能力,酌情选用大青叶传统中药饮片或配方颗粒.     

正交试验法优选莲子心提取物制备工艺

目的采用正交试验法优选莲子心提取物的制备工艺。方法采用RP-HPLC法测定莲子心提取物中的甲基莲心碱含量,填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶,以乙腈：0.015mol／L十二烷基磺酸钠溶液：冰醋酸（68：31：1）为流动相,柱温25℃,检测波长282nm,流速1.0mL／min,进样量为20μL;采用L9（3^4）正交试验设计,以甲基莲心碱的提取含量作为考察指标,确定最佳工艺。结果所考察的4个因素中,乙醇浓度和回流次数有显著意义;对甲基莲心碱含量影响顺序为：乙醇浓度〉回流次数〉乙醇用量〉回流时间。最佳制备工艺为：用10倍量浓度为75％的乙醇回流3次,每次提取1h。结论RP-HPLC法测定莲子心提取物中甲基莲心碱,方法简便,快速,线性关系良好,为莲子心提取物质量控制及工艺优化提供了可靠的检测手段;所得到的提取工艺简便,合理可行。     

暑热宁合剂薄层色谱鉴别*

[目的]建立暑热宁合剂薄层色谱的鉴别方法,为其质量标准的制定提供依据.[方法]采用薄层色谱法对暑热宁合剂中的大青叶、黄连、香薷、厚朴和半夏进行定性鉴别.[结果]在薄层色谱中,供试品溶液在与对照药材或是对照品相应位置上显相同颜色的斑点,且斑点清晰,阴性对照在相同位置上无对应的斑点.[结论]所建立的薄层色谱定性方法专属性强,可用于暑热宁合剂的质量控制.     

野巴子的质量标准研究

目的:配合规范四川省中药材质量标准,保证临床用药的有效性、合理性,以攀枝花市、昆明市等地的野巴子(共11批)药材为研究对象,对其进行了规范化的质量标准研究.方法:照相关文献资料进行了药材性状、显微、薄层鉴别方法研究,照《中国药典》2005年版一部附录方法,测定了11批野巴子药材的水分、灰分、酸不溶性灰分、浸出物含量;参...     

基于AMDIS和保留指数结合的GC-MS技术定性鉴别醋炙前后香附-艾叶药对中挥发油化学成分的变化

目的 从药对的整体角度切入,以调经止痛的功效为评价模型,来探究醋炙对香附-艾叶药对整体配伍的影响。方法 采用GC-MS结合AMDIS与保留指数鉴别方法并联合主成分分析寻找共性规律的研究策略,全面系统地分析了醋炙前后香附-艾叶药对中挥发油化学成分的变化。结果 香附-艾叶（生品）挥发油中共鉴别出54种化学成分,而香附-艾叶（醋品）挥发油中共鉴别出52种化学成分。醋炙前后的香附-艾叶药对与醋炙前后的单味药中挥发油化学成分的变化并不一致。从整体来看,在醋香附-醋艾叶药对的挥发油中,多数低沸点化合物的含量降低,而高沸点化合物无明显变化,且大部分低沸点化合物主要归属于艾叶,大部分高沸点化合物主要归属于香附,α-香附酮的相对含量也有所增加。在醋香附-醋艾叶药对的挥发油中含量明显增加的化合物多为去氧倍半萜类化合物、长链脂肪醇和长链脂肪酮,而萜类氧化衍生物的含量则有所降低。结论 采用GC-MS结合AMDIS与保留指数鉴别方法并联合主成分分析寻找共性规律的研究策略,可全面、科学和快速地鉴别醋炙前后香附-艾叶药对中挥发油的差异。从整体上看,醋炙使得香附-艾叶药对中挥发油的毒性减小,安全性增加,稳固并小幅增强了调经止痛的功效。      

石韦的X射线衍射Fourier指纹图谱鉴定研究

目的 建立中药材石韦的新鉴定分析方法。方法 采用粉末X射线衍射Fourier指纹图谱鉴定法。结果 通过对3个石韦对照品和17个石韦中药材进行实验、计算分析，获得了石韦的标准X射线衍射Fourier指纹图谱及特征标记峰值。结论 表明X射线衍射Fourier指纹图谱鉴定法可用于中药材石韦的鉴定。     

Establishment of Hypoglycemic Agent Screening Method Based on Human Glucokinase

Objective To establish a reliable platform for screening glucokinase activators （GKAs） in vitro. Methods Pancreatic glucokinase （PGK） protein expressed in a prokaryotic expression system as a histidine-tagged fusion protein from Homo sapiens was produced. Then, response surface methodology （RSM） was used to optimize the microplate-based GKA screening platform. In the f＇trst step of optimization with Plackett-Burman design （PBD）, initial pH, reaction time and MgC12 were found to be important factors affecting the activity ratio of GKA （RO-28-1675） significantly. In the second step, a 23 full factorial central composite design （CCD） and RSM were applied to the optimal condition determination of each significant variable. A second-order polynomial was determined by a multiple regression analysis of the experimental data. Results The following optimal values for the critical factors were obtained： initial pH 0 （7.0）, reaction time-0.63 （13.7 min） and MgC12 0.11 （2.11 mmol/L） with a predicted value of the maximum activity ratio of 34.1%. Conclusion Under the optimal conditions, the practical activity ratio is 34.8%. The determination coefficient （R2） is 0.9442, ensuring adequate credibility of the model. LLAE3, extracted from Folium nelumbinis in our laboratory, has prominently activated effects on PGK.