复合树指单体对人牙髓细胞毒性的研究

目的：评价复合树脂单体对人牙髓的毒性作用,探讨不同细胞系对检测敏感性的影响。方法：选用人牙髓细胞（ＬＳＣ）为实验细胞,以Ｌ－９２９小鼠成纤维细胞作为对照细胞系,采用ＭＴＴ比色分析法,对两种牙科用复合树脂单体（ＴＥＧＤＭＡ和ＵＤＭＡ）进行体外细胞毒性研究。结果：在低于ＩＣ５０的各浓度组中,ＬＳＣ细胞的生存率高于Ｌ－９２９细胞;ＭＴＴ比色法作为一种能定量检测牙科材料细胞毒性的有效方法,实验时应注重考虑     

玻璃离子水门汀的体外细胞毒性研究

目的：对６种玻璃离子水门汀的体外细胞毒性进行对比研究，以期为临床应用提供参考依据。方法：采用体外细胞培养技术和四唑盐显色（ＭＴＴ）方法。结果：显示６种不同的玻璃离子水门汀均有不同程度的细胞毒性，而且有显著的浓度、时间依赖性。结论：表明Ｖｉｔｒｅｂｏｎｄ型玻璃离子水门汀的细胞毒性作用显著强于其他５种。     

牙本质粘结剂对人牙髓细胞毒性的体外研究

目的：评价全酸蚀牙本质粘结剂和自酸蚀牙本质粘结剂对人牙髓细胞的毒性作用.方法：用人牙髓细胞为实验细胞,采用MTT比色分析法,对4 种牙本质粘结剂（Prime ＆ Bond NT,Single Bond,Xeno Ⅲ,iBond）进行体外细胞毒性研究.结果：不同浓度的粘结剂稀释液均可使人牙髓细胞的形态有所改变.4 种牙本质粘结剂的细胞毒性有显著性差异,且作用时间和浓度的改变对其细胞毒性有影响.全酸蚀粘结剂比自酸蚀粘结剂的细胞毒性强.结论：4 种牙本质粘结剂在体外对人牙髓细胞均有一定程度的细胞毒性,其中Single Bond的毒性较强,临床使用粘结剂时应合理选择粘结剂和掌握固化时间.     

MTA、Dycal、GIC对人牙周膜细胞的细胞毒性

目的:比较无机三氧化复合物(mineral trioxide aggregate,MTA)、氢氧化钙制剂(Dycal)和玻璃离子粘固剂(glass ionomer cement,GIC)对牙周膜细胞的细胞毒性。方法:采用MTT法测定上述3种材料不同浓度的浸提液对体外培养的人牙周膜细胞增殖的影响,所得数据以SAS6.12软件包进行统计学分析。结果:MTA组各浓度组之间均无显著性差异(P>0.05);Dycal组各浓度组间均有显著性差异(P<0.05);GIC组的对照组和10mg/ml组无显著性差异(P>0.05),对照组分别和20mg/ml、40mg/ml组有显著性差异(P<0.05),20mg/ml、40mg/ml组之间也有显著性差异(P<0.05)。结论:MTA细胞毒性最小,Dycal和GIC存在不同程度的细胞毒性,尤以Dycal为甚。MTA的生物相容性明显优于Dycal和GIC。     

人牙髓细胞的培养

本实验从人恒牙内分离出牙髓细胞，进行组织培养。培养３天，见组织块边缘有梭形细胞游出，随着培养天数的增多，游出的细胞也逐渐增多。来源于相邻组织块的细胞团逐渐靠近，接触；培养２０天时，细胞长满瓶底，铺成单层，按１：３的比例进行传代，平均６天传代一次，观察细胞的形态，排列及增殖情况，从细胞生长曲线可以看到，接种后第１天，细胞基本无增长，第２～５天，细胞增长旺盛，第６天，细胞生长又趋于缓慢，第７天时，增长     

蟾酥制剂对人牙髓细胞的细胞毒性研究

目的：观察人牙髓细胞(Human dental pulp cell，HDP)受到蟾酥制剂浸出液的细胞毒刺激后的MTT值。方法：用蟾酥制剂浸出液五种浓度分别处理人牙髓细胞1、2、4、6、24h后，测算MTT值。结果：1、2、4h组间的活细胞数量无显著差别，6h、24h组间差别明显。结论：蟾酥制剂对体外培养的人牙髓细胞有较大的毒性。     

体外人牙髓细胞的矿化特性

为探讨体外人牙髓细胞的生物学特性，采用体外细胞连续培养、钙质染色、Ｘ射线能谱分析与透射电镜观察等方法，对体外人恒牙牙髓细胞的矿化特性进行了研究并与人牙龈成纤维细胞（ｈｕｍａｎｇｉｎｇｉｖａｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ，ＨＧＦｓ）进行了比较。结果表明，人牙髓细胞在体外可以复层生长并形成细胞结节，ＨＧＦｓ则无此能力，牙髓细胞的碱性磷酸酶活性亦较ＨＧＦｓ者高；细胞结节钙质染色呈阳性，结节内钙磷含量明显增高；人牙髓细胞有许多与成牙本质细胞相似的超微结构特征，胞间基质中可见致密晶状小体。结果提示，体外连续培养的人牙髓细胞有向成牙本质细胞分化的可能，这可为研究人牙髓细胞的分化和矿化提供有价值的思路。     

三种牙本质黏结剂对人牙髓细胞的细胞毒性

目的：比较不同固化时间下3种牙本质黏结剂（Dentin bonding agents，DBA）对牙髓细胞的细胞毒性，指导临床上合理选择黏结剂和掌握固化时间。方法：组织块培养法进行人牙髓细胞原代培养，并以免疫组织化学染色法鉴定。采用MTT比色分析法来评价3种DBA（Prime＆BondNT，Pb；XenoⅢ，Xe；AdheSE，Ad）的细胞毒性。结果：经ANOVA和Dunnett—t检验，与对照组相比，固化10s和40s的3种牙本质黏结剂对牙髓细胞均有毒性（P〈0．001），与浸渍液作用24h后一些牙髓细胞变圆、皱缩、失去细胞突起。固化10s的3种DBA中Ad对细胞毒性最大，Pb毒性最小；固化40s的3种DBA中Xe毒性最大，Pb毒性最小。与固化10相比，Xe和Ad固化40s可以减轻对牙髓细胞的毒性，经student—t检验，P〈0．01。结论：3种牙本质黏结剂对体外培养牙髓细胞均有一定毒性，延长固化时间可以减轻对牙髓细胞的毒性。     

体外培养的人牙髓细胞表型分析

目的：分离培养来源于人体的牙髓细胞并对其细胞表型进行分析。方法：采用组织块法培养人牙髓细胞,根据牙髓的细胞成分选择特异性抗体,利用免疫组化技术对其细胞表型进行分析。结果：Ⅲ型胶原在体外培养的牙髓细胞中广泛表达,ON和OPN表达也较广泛,阳性细胞呈星形,伸出多个胞浆突起互相连接;α-平滑肌肌动蛋白和CD34表达细胞为集落状,前者呈细长的梭形,后者呈圆形;Ⅰ型胶原、BSP和OC仅在少量细胞中表达,且细胞形态不规则;DSP、NF、CD14及CD45均为阴性。结论：体外培养的人牙髓细胞表型呈现多样性,表达平滑肌、内皮细胞及骨的标志物。     

4种牙体修复材料对人牙髓细胞毒性的实验研究

目的：比较4种牙体修复材料--Dyract AP、Ceram X、Quixfil U及Surefil复合树脂对人牙髓细胞的生物学作用.方法：制备4种牙体修复材料的细胞培养基（DMEM）浸出液,采用四唑盐MTT比色分析法测定材料对人牙髓细胞生长的影响;通过扫描电镜观察人牙髓细胞在不同材料表面的生长情况.结果：人牙髓细胞在4种复合树脂浸出液作用下,细胞相对增值率（RGR）与对照组相比均有显著性差异（P＜0.05）,其中Surefil的RGR与其他3种材料相比有显著性差异（P＜0.05）,而Ceram X、Quixfil U、Dyract AP 3种材料之间RGR无显著性差异（P＞0.05）;扫描电镜观察到人牙髓细胞在4种材料表面均可贴附,且生长良好.结论：4种牙体修复材料均对牙髓细胞的生长无不良影响,具有良好的生物相容性.     

两种不同盖髓剂对人牙髓细胞毒性的体外研究

目的:研究丁香酚及Dycal对人牙髓细胞的毒性。方法:体外组织块法培养人牙髓细胞,采用噻唑蓝比色法(MTT法)及台盼蓝染色活细胞计数法来评价不同浓度及不同时间段丁香酚及Dycal对牙髓细胞细胞毒性,比色法测定丁香酚干预组细胞内总谷胱甘肽含量。结果:0.1mmol/L浓度的丁香酚及0.1%浓度的Dycal对人牙髓细胞毒性明显,其对细胞毒性反应成浓度及时间依赖性改变。各丁香酚组细胞内谷胱甘肽含量低于对照组,第3天丁香酚最低浓度组细胞内谷胱甘肽含量高于高浓度组。结论:高浓度丁香酚及Dycal对牙髓细胞毒性明显,细胞毒性与浓度及作用时间有关。低浓度丁香酚可能通过谷胱甘肽的参与抵抗氧化应激,从而起到对细胞的保护作用。Dycal可能更加适合用于间接盖髓。     

玻璃离子粘固剂及复合体氟离子体外释放的比较

目的:比较不同类型玻璃离子粘固剂(GIC)及复合体在体外释放氟离子的能力。方法:选择树脂改良型GIC(VITREBOND;FUJIⅡLC),传统型GIC(FUJIⅡ;国产GIC;GLASLONOMER)及复合体(DYRACT)作为实验对象。使用氟离子选择电极,连续14d测定各种材料固化后标本浸泡溶液中的氟离子浓度,采用光固化树脂(Z100)作为实验对照组。实验数据采用单因素方差分析和q检验法检验。结果:5种GIC均显现出较高的初期氟离子释放,2 d后氟离子释放趋于平稳;复合体显现出一种平缓的氟离子释放状态。树脂改良型GIC的累计氟离子释放量明显高于其他材料,其由高到低的顺序为:VITREBOND>FUJIⅡLC>国产GIC>DYRACT>FUJIⅡ>GLASLONO-MER(P<0.05)。结论:树脂改良型GIC较传统型GIC和复合体具有更好的氟离子释放能力,在预防继发龋上可能具有一定的优势。     

SHH和bFGF体外诱导人牙髓干细胞向神经细胞分化的研究

目的：研究体外使用音猬因子（SHH）、碱性成纤维生长因子（bFGF）体外诱导人牙髓干细胞（DPSCs）分化为神经细胞的可行性,以优化人牙髓干细胞向神经细胞分化的诱导条件。方法：从因正畸或阻生拔除的第一前磨牙或第三磨牙中提取牙髓,采用酶消化及过滤法得到单细胞悬液,有限稀释法培养分离的原代人牙髓干细胞,并进行克隆化培养,检测间充质干细胞特异性标志物STRO-1的表达。将人牙髓干细胞分别接种于含有不同浓度诱导液,MTT法检测不同时间、两种因子单独或联合对细胞增殖能力的影;免疫荧光法检测抗微管相关蛋白（MAP-2）、神经元烯醇化酶（NSE）、胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。透射电镜观察诱导前后细胞超微结构。结果：克隆来源细胞的间充质干细胞特异性标志物STRO-1表达阳性。100μg/L音猬因子SHH与20μg/L碱性成纤维生长因子bFGF单独作用促增殖作用最强（P〈0.05）,碱性成纤维生长因子bFGF单独作用各组及对照组均未检测出神经元样细胞。音猬因子SHH作用各组检测到阳性细胞。而100μg/L音猬因子SHH与20μg/L碱性成纤维生长因子bFGF联合增殖和分化作用均优于其它组。透射电镜观察到神经元样细胞表现。结论：100μg/L音猬因子和20μg/L碱性成纤维生长因子联合可以在体外有效诱导人牙髓干细胞分化为神经细胞。     

Hypoxia-amplified Proliferation of Human Dental Pulp Cells

IntroductionPostnatal human dental pulp is a potentially promising source of progenitor cells. Sustaining and amplifying progenitor cell populations would be beneficial for basic science research with application in pulpal regeneration. Hypoxia has been observed to promote the undifferentiated cell state in various stem cell populations. The purpose of this study was to examine human dental pulp cells (DPCs) proliferation in normoxia and hypoxia.MethodsDental pulp cells were obtained from third molars of adult patients and cultured in alpha modification of Eagle's medium culture medium with 10% fetal bovine serum. For cell proliferation, DPCs were divided into two groups: (1) DPCs incubated in normoxic conditions (20% oxygen tension) and (2) DPC incubated in hypoxic conditions (3% oxygen tension). Cell proliferation assays were performed every 2 to 3 days from day 3 to day 14 by trypsinization and quantification of cells with a hemacytometer. Fluorescence-activated cell sorting analysis was completed to investigate stem cell markers, CD133, and STRO-1.ResultsDPCs proliferated significantly more in hypoxia than in normoxia (ie, two-fold throughout the experiment, p < 0.0001). The primitive stem cell marker, CD133, decreased in hypoxia, whereas the osteoprogenitor marker, STRO-1, increased by 8.5-fold.ConclusionsThis study suggested that hypoxia is an effective treatment to amplify numbers of progenitor cells from human dental pulp.     

Evaluation of Cannabinoids on the Odonto/Osteogenesis in Human Dental Pulp Cells In Vitro

IntroductionCannabinoids possess anti-inflammatory, analgesic, and osteogenic effects in different cell types and tissues. The null hypothesis is delta-9-tetrahydrocannabinol (THC) might induce dental tissue repair and regeneration. The aim of this study was to investigate the effect of THC on human dental pulp cell (HDPC) viability and biomineralization as well as the molecular mechanism of THC-induced odonto/osteogenic differentiation of HDPCs.MethodsThe toxicity of THC on HDPCs was determined by 3-(4,5-dimethylthiazolyl-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide assay. The odonto/osteogenic differentiation marker genes of HDPCs were assessed by real-time polymerase chain reaction with or without THC treatment. HDPC biomineralization was examined by collagen synthesis and calcium nodule deposition. The molecular mechanism of THC on HDPCs was investigated by examining the mitogen-activated protein kinase (MAPK) signaling pathway via blocking cannabinoid receptor type 1 or 2 receptors.ResultsWe found that THC had no inhibition of HDPC vitality in the testing concentration (0–100 μmol/L). THC showed biphasic effects on HDPC proliferation. At a low dose (<5 μmol/L), THC considerably increased HDPC cell division. HDPC proliferation reduced with higher THC concentrations (>5 μmol/L). The expression of odonto/osteogenic marker genes were up-regulated in the presence of cannabinoids. These were confirmed by increased collagen synthesis and mineralized calcium nodule formation in the cannabinoid group. The effect of THC-induced odonto/osteogenesis occurred via MAPK signaling.ConclusionsTHC was biocompatible to HDPCs by promoting their mitogenic division in a biphasic pattern depending on the concentration. THC induced HDPC odonto/osteogenic differentiation through the activation of MAPK mediated by CB1 and CB2 receptors. Cannabinoids may play an important role in the HDPC regeneration process and potentially be used as a pulp-capping agent.     

胞内信号转导分子LIM矿化蛋白1在人牙髓细胞体外矿化过程中表达的实验研究

目的:研究胞内信号转导分子LIM矿化蛋白1在人牙髓细胞体外矿化过程中的表达。方法:利用组织块法体外培养人牙髓细胞,实验组培养液中加入矿化诱导剂,对照组不加矿化诱导剂。培养14d后,免疫细胞化学检测牙本质涎蛋白的表达;von kossa染色检测矿化结节的形成。培养期间,采用半定量RT-PCR技术监测LIM矿化蛋白1及碱性磷酸酶的表达,SPSS11.0软件分析结果。结果:培养14d,实验组牙本质涎蛋白免疫细胞化学呈阳性表达,von kossa染色阳性,矿化结节形成;对照组牙本质涎蛋白表达阴性,von kossa染色阴性。RT-PCR结果显示碱性磷酸酶及LIM矿化蛋白1在实验组和对照组各时段均表达。培养期间,实验组LIM矿化蛋白1的表达显著性高于对照组,其中培养第2天及9天时表达分别达到两个高峰,约为对照组的1.8倍及3.0倍。培养期间,碱性磷酸酶的表达显著性增高,其中培养14d时约为对照组的2.0倍。结论:首次发现LIM矿化蛋白1与人牙髓细胞的体外矿化过程相关,提示LIM矿化蛋白1可能在牙髓细胞的分化及矿化中发挥一定作用。     

体外克隆化传代培养人年轻恒牙牙髓干细胞的研究

目的：观察克隆化传代培养10代以上人年轻恒牙牙髓干细胞的形态及特性。方法：体外分别采用传统传代法和克隆化传代法培养人年轻恒牙牙髓干细胞,流式细胞仪分别检测两种培养方法传代第10代细胞表面抗原stro-1的表达。细胞连续性克隆化传代培养。结果：克隆化传代培养的第10代细胞表面抗原stro-1阳性率高于传统传代培养的细胞（P〈0.05）。所培养的细胞具有干细胞的形态特征,呈集落型生长。目前细胞已稳定传代22代。结论：克隆化传代培养能有效提纯人年轻恒牙牙髓干细胞,细胞能稳定传代20代以上并保持干细胞特性。