汉滩病毒感染成龄鼠模型用于特异性单克隆抗体保 …

目的 建立汉滩病毒感染成龄鼠的模型。以进行ｍＡｂ的保护实验。方法 将７～８ｗｋＢａｌｂ／ｃ小鼠于感染病毒前１ｄ及感染后１ｄ，２ｄ和４ｄ，分别经腹腔注环磷酰胺６５ｍｇ／ｋｇ体重，总剂量为２６０ｍｇ／ｋｇ体重，观察其发病及死亡情况。并检测其体内不同脏器中汉滩病毒抗原的分布及滴度。用ｍＡｂ对上述感染小鼠进行保护实验。结果 经环磷酰胺处理的成龄鼠，由汉滩病毒隐性感染变为急性染的乳鼠类似，平均发病与死亡时间     

特异性单克隆抗体对肾综合征出血热病毒人工感染新生乳鼠保护作用的观察

本文报道以本室研制的肾综合征出血热(HFRS)病毒单克隆抗体(McAb)对人工感染HFRS病毒新生乳小鼠进行体内保护试验,取得了较满意的结果。 一、HFRS病毒感染乳鼠试验 取F_1M_8陈株鼠脑悬液10~(-1)～10~(-7)浓度腹腔感染(0.05ml)乳鼠,发现有规律的发病与死亡。病毒浓度越大,发病死亡时间越快(10~(-1)第7～8天,而     

运用流式细胞术快速检测汉滩病毒滴度

目的:建立用流式细胞仪快速测定汉滩病毒滴度的方法.方法:汉滩病毒76-118株感染Vero-E6细胞,以汉滩病毒核蛋白单克隆抗体(mAb) 3G1为一抗,FIX标记的羊抗小鼠抗体为二抗,用流式细胞术(FCM)检测阳性细胞率,评价感染后不同时间点,以及不同病毒接种量的阳性细胞率,并与间接免疫荧光法对比.结果:感染后36 h阳性细胞百分率为(10.06±0.42)%,最低检测的病毒滴度为100 TCID50/ML.结论:相对于传统的空斑实验及间接免疫荧光滴定法,FCM是一种简单、快速、有效检测汉滩病毒滴度的方法.     

McAbs接种孕鼠体内对HFRS病毒感染新生子代乳鼠的被动保护作用

选BALB/c纯系小白鼠孕鼠于产前5d和3d,皮下接种抗HFRS病毒血凝素McAbs和多克隆免疫鼠血清,待其子鼠产后第3天,腹腔接种100LD_(50)HFRS病毒陈株攻击感染子代乳鼠。结果表明,接种孕鼠体内的该McAbs,可经胎盘进入子鼠体内,能被动地保护新生子代乳氧免于HFRS病毒致死性感染。孕鼠产前5d和3d,皮下接种该McAbs可100％保护新生子代乳鼠,而孕鼠产前4d接种多克隆免疫鼠血清,保护率只有42.9％,但感染对照组新生子代乳鼠则全部死亡。     

抗家鼠型肾综合征出血热病毒单克隆抗体对感染乳鼠保护作用的初步研究

以家鼠型HFRS病毒R22株100LD_(50)感染2～4日龄乳鼠。于感染后0、48、96及120h分别经腹腔注射对该株病毒具有中和活性的单一McAb或混合McAb,同时设该病毒免疫血清、单注射该病毒和Sp2/0腹水3种对照,观察McAb对感染乳鼠的保护作用,观察时间为35d。结果在感染后96h内注射单一McAb、混合McAb及免疫鼠血清的保护率均可达100％,而Sp2/0腹水对照组与病毒对照组的乳鼠均在感染后第13～16d发病死亡。在死亡乳鼠的脑,肺组织中检出了HFRS病毒抗原,而在保护存活乳鼠的脑、肺组织中均未检出病毒抗原。McAb对感染乳鼠的保护率与其浓度相关。在感染后24h分别注射不稀释、10~(-1)、10~(-2)和10~(-3)稀释的混合McAb,其保护率依次为100％、88.7％、55.6％和16.7％。     

汉滩病毒部分核蛋白基因原核表达产物 的免疫及其保护作用

目的 探讨汉滩病毒（HTNV）部分核蛋白（NP）基因（37－294bp)原核表达产物NP AA1－86多肽的免疫原性及其免疫保护作用。方法 大肠杆菌表达的HTNV部分核蛋白多肽NP AA1－86混合福氏佐剂,腹腔注射免疫BALB／c小鼠,IFA检测抗体应答;^3H-TdR掺入及4h ^51Cr释放试验检测免疫小鼠脾细胞对HTNV的特异淋巴细胞增殖转化指数及细胞毒T淋巴细胞（CTL）杀伤功能;免疫小鼠脾细胞转输感染HTNV A9株的乳鼠,观察对乳鼠致死性的免疫保护作用。结果 免疫后1周小鼠即出现抗体应答反应,抗体滴度最高达1：12800,与重组完整NP免疫组差异无显著性（P＞0．05）;免疫小鼠的淋巴细胞增殖转化指数、CTL杀伤率较对照组明显增高（P＜0．01）,与完整NP免疫组差异无显著性（P＞0．05）,CTL杀伤率随效：靶比例的增高呈逐渐上升趋势;免疫小鼠脾细胞转输可部分保护病毒致死性感染的乳鼠,保护率约25％。结论 大肠杆菌表达的汉滩病毒部分核蛋白多肽NP AA1－86不仅包含NP几乎所有的体液免疫表位,同时含有部分细胞免疫表位,对汉滩病毒感染可产生部分免疫保护作用。     

体内应用NK细胞特异的单克隆抗体证实NK细胞的抗病毒作用(文摘)

目前有关自然杀伤(NK)细胞在病毒感染中的作用,主要依据来源于抗asialo GM,血清的应用。asialo GM1是存在于所有小鼠NK细胞表面的一种中性鞘糖酯。单克隆抗体NK 1.1是针对C57BL/6小鼠NK细胞表面同种异型抗原决定簇的鼠IgG2a。抗体经腹腔注入对照组或感染组小鼠体内,所用抗体量为去除90％淋巴细胞脉络丛脑炎病毒(LCMV)诱导的NK细胞活性所需剂量。感染后一定时间测定脾脏、肝脏内病毒空斑滴度;检测NK细胞对YAC-1细胞的杀     

单克隆抗体对肾综合征出血热病毒感染乳鼠保护作用的病理及免疫组化观察

用单克隆抗体对肾综合征出血热病毒感染乳幼鼠保护作用进行了病理形态学及免疫组化研究,结果发现用100LD50/0.05ml/只,经腹腔感染14h后用同样方法和剂量注射HFRS-McAb,对感染后的4日龄昆明种乳幼鼠有明显保护作用,存活率达100％,对照组在感染后13d全部死亡。免疫组化证实感染后第7d血管内皮细胞、肠粘膜上皮细胞出现抗原。7～11d抗原的分布及消长情况保护组与对照组无明显差别,病变亦相     

类人慢性粒细胞性白血病小鼠模型的建立

 目的：为了进一步阐明慢性粒细胞性白血病(chronic myeloid leukemia,CML) 的发病机制、寻找新的治疗靶点,有必要建立CML动物模型。方法：首先改进逆转录病毒包装技术,在相同实验条件下,改变以下条件之一,如质粒的质量、包装细胞的状态、转染当天包装细胞的密度等,进行病毒滴度的测定,优化实验条件后进行后续实验。实验组为BCR/ABL(含BCR/ABL融合基因的逆转录病毒载体)组小鼠。供体小鼠经5-氟尿嘧啶（5-FU）预处理后,骨髓细胞经p210 BCR/ABL逆转录病毒上清感染,感染的骨髓细胞经尾静脉注射给经致死剂量X光照射的受体小鼠。观察移植后BCR/ABL组小鼠的活动情况、发病鼠外周血和骨髓的细胞形态、肝脾病理改变等。同时观察MigR1(逆转录病毒空载体)组小鼠。结果：通过提高质粒的质量、改善包装细胞的状态、优化转染当天包装细胞的密度等,提高了病毒的滴度,用于小鼠移植模型实验。BCR/ABL组小鼠均于移植后19～25 d发病死亡。发病时外周血及骨髓均见中晚幼及成熟粒细胞大量增生,肝脾肿大伴正常结构破坏及大量粒细胞浸润。MigR1组小鼠均无发病。结论: 通过改进逆转录病毒包装技术,提高包装病毒的滴度,我们在体外将BCR/ABL转入小鼠骨髓细胞并移植入受体小鼠,成功建立了类人CML小鼠模型。     

CVA10候选疫苗病毒株的分离、鉴定及其致病性和免疫保护性研究

目的分离、筛选柯萨奇病毒A组10型(Coxsackievirus A10,CVA10)病毒候选疫苗株,并对其免疫原性及免疫保护性进行评价,为CVA10疫苗的研制奠定基础。方法本研究从北京市儿童医院、军事医学研究院、北京市疾控中心共收集80个手足口病(hand foot and mouth disease,HFMD)标本,通过细胞培养法、RT-PCR的方法分离、鉴定CVA10病毒株。对病毒进行嗜斑纯化,各纯化病毒株与Al(OH)_3(0.5 g/ml)佐剂混合后制备原疫苗,免疫Balb/c小鼠,收集血清。应用交叉中和实验及抗体阳转率实验筛选候选CVA10疫苗株。筛选后T9疫苗株免疫ICR乳鼠,观察ICR乳鼠的致病情况。结果共分离出14株CVA10病毒株。交叉中和实验筛选得到4株候选疫苗株。最后阳转率实验确定T9为候选疫苗株。Al(OH)_3+CVA10灭活抗原在Balb/c小鼠体内能诱生高滴度的特异性抗体,该抗体对Balb/c小鼠有保护作用。T9病毒免疫ICR乳鼠后,对乳鼠完全致死。结论筛选1株CVA10病毒候选疫苗株,CVA10候选疫苗对ICR乳鼠动物模型有致病性。