白细胞介素—1受体拮抗剂对角膜碱烧伤治疗的实验研究

目的 系统观察研究白细胞介素-1受体拮抗剂（LI-lra)对角膜碱烧伤的治疗作用。方法 采用日本大耳白兔及Wistar大鼠,制成角膜碱烧伤模型。通过裂隙灯与病理组织学观察,进行角膜OD值与角膜上皮细胞活性测定。烧伤斑图像分析。以及IL-1酶联免疫吸附测定（IL-1ELISA）。结果 应用IL-1ra后兔角膜水肿程度减轻,角膜OD值较大,角膜上皮细胞活性恢复较好,并能明显抑制大鼠角膜中的IL-1水平。结论 IL-1ra能抑制炎症反应。有利于角膜透明度和上皮细胞活性恢复。     

白细胞介素—1受体拮抗剂家兔实验性角膜血管增生的研究

角膜新生血管（ｃｏｒｎｅａｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎＣＮＶ）的形成与白细胞介素－１（ＩＬ－１）有明显关系，本实验通过用白细胞介素－１受体拮抗物（ＩＬ－１ｒａ）抑制热灼伤致家兔ＣＮＶ形成的研究，采用ＩＬ－１ｒａ分别与生理盐水，醋酸氢化可的松作阴性，阳性对照，观察以ＩＬ－１ｒａ对ＣＮＶ有明显抑制作用，为临床治疗ＣＮＶ提供了一个新的途径。     

白细胞介素1及其受体拮抗剂与眼病

白细胞介素１是一种重要的细胞因子，具有广泛的生物学活性，参与了多种生理及病理过程是细胞因子网络中的关键因子之一。白细胞介素１受体拮抗剂，能特异性地与白细胞介素１受体结合，并不激活靶细胞，从而阻断白细胞介素１的生物学活性。本就白细胞介素１及其受体拮抗剂的生物学特性，以及它们与某些角膜病和葡萄膜病变的关系作了一综述。     

白细胞介素—1受体拮抗剂对内毒素性前葡萄膜炎治疗作用的实验研究

实验利用革兰氏阴性细菌的脂多糖（内毒素），建立大鼠前葡萄膜炎模型。通过分析房水蛋白含量，房水细胞计数及病理学变化，观察了白细胞介素－１受体拮抗的抗炎作用，结果表明，白细胞介素－１受体拮抗可显著减少房水蛋白含量和细胞数，并明显抑制了多形核白细胞的浸润。由此认为白细胞介素－１受体拮抗剂具有抑制细菌内毒素性前葡萄膜炎的作用。     

角膜碱烧伤白细胞介素-1ra基因治疗的实验研究

目的探讨阳离子聚合物包装IL-1ra重组质粒、角膜原位转染治疗角膜碱烧伤的疗效。设计实验性研究。研究对象角膜碱烧伤大鼠动物模型。方法制作Wistar大鼠角膜碱烧伤模型，随机分为2组，Ⅰ组为阴性对照（12只），结膜下注射生理盐水。Ⅱ组为IL-1ra基因治疗组（18只），以PeDNA3．1质粒作为IL-1ra基因表达载体，阳离子聚合物为转染介质，角膜基质显微注射20μg IL-1ra质粒。碱烧伤后不同时间点（3、7、21天）处死实验动物取下角膜，HE染色分析角膜组织病理变化，比较两组角膜透明性和新生血管生长情况，对角膜内浸润的炎性细胞进行计数。主要指标角膜透明性和新生血管情况，角膜组织病理变化及炎性细胞计数。结果碱烧伤造模后，对照组角膜浸润水肿明显，且随时间延长而加重，角膜基质内大量炎性细胞浸润和粗大新生血管形成。IL-1ra基因治疗组的角膜基质轻、中度水肿，角膜中性粒细胞、淋巴细胞等炎性细胞计数在不同时间点均少于对照组，角膜新生血管管径均较细。结论角膜基因原位转染可使IL-1ra在局部有效表达，抑制碱烧伤引起的角膜免疫炎症反应，为眼碱烧伤的治疗提供了新的选择。     

白细胞介素—1及其受体家族与眼病

白细胞介素－１是重要的炎症反应因子,在机体系统免疫和炎症反应中起广泛的作用。ＩＬ－１ｒａ是天然存在的ＩＬ－１的拮抗剂,可以拮抗ＩＬ－１的作用。本文就ＩＬ－１ｓ,ＩＬ－１ｒａ及其受体家族近年在眼科特别是角膜病方面的研究进展进行了综述。     

阳离子聚合物介导下白细胞介素1受体拮抗剂基因兔角膜原位转染及其表达

目的 探讨阳离子聚合物即线性聚乙烯亚胺（PEI）介导下兔角膜基质注射PEGFP-IL-1ra质粒进行基因角膜原位转染的有效性和安全性。方法 以人cDNA文库为模板进行聚合酶链反应（PCR）,获得人IL-1ra cDNA片段,构建重组质粒PEGFP-hIL-1ra。以阳离子聚合物为介导转染角膜内皮细胞,通过绿色荧光蛋白（GFP）示踪、蛋白免疫印迹技术检测转染后IL-1ra基因和蛋白的表达。实验组30只Wistar大鼠角膜基质注射PEGFP-hIL-1ra质粒和PEI-in-vivo的混合溶液20μl（含10μg质粒）,对照组15只Wistar大鼠角膜基质注射PEI-in-vivo溶液20μl。注射后1、3、6、14、21d,收集角膜通过HE染色、透射电镜、锥虫蓝-茜素红染色、免疫组织化学观察IL-1ra基因角膜原位转染后的细胞结构和功能的变化。荧光显微镜下追踪IL-1ra-GFP融合蛋白在角膜的表达部位和表达强度。结果 以cDNA文库为模板扩增出hIL-1ra cDNA片段,构建重组质粒PEGFP-hIL-1ra。经PstⅠ和BamHI酶切及DNA测序证实了插入片段方向和大小正确。PEI-in-vitro介导下PEGFP-hIL-1ra转染角膜内皮细胞12h后,可见10％～15％细胞中有GFP荧光表达。Western-blotting检测可见相对分子质量为44000的hIL-1ra-GFP蛋白表达。PEGFP-hIL-1ra质粒和PEI-in-vivo角膜基质注射后1d,角膜上皮基底细胞可见荧光条带,6d时全角膜荧光强度达到高峰,14d开始减弱,21d角膜上皮层尚存微弱荧光。对照组观察期内始终未见绿色荧光。实验组角膜HE染色未见病理性改变,角膜上皮基底细胞层p63抗体阳性;锥虫蓝-茜素红联合染色未见角膜内皮细胞损伤;透射电镜显示角膜各层细胞的细胞质内可见IL-1ra-GFP颗粒,未见细胞器的损害。结论 阳离子聚合物介导下角膜基质注射PEGFP-hIL-1ra质粒可快速、有效地将IL-1ra基因转入角膜并表达,为临床上使用抗炎细胞因子IL-1ra对角膜免疫炎性反应相关疾病进行基因治疗提供了新的技术平台。（中华眼科杂志,2006,42：686-693）     

白细胞介素-1受体拮抗剂防治角膜移植免疫排斥反应的实验研究

目的观察白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)抑制大鼠正位穿透性角膜移植术后免疫排斥反应、促进植片存活的作用.方法将主要组织相容性系统完全不同的近交系F344大鼠的角膜植片移植到另一近交系LOU大鼠的角膜上,将手术成功大鼠分为实验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组及对照Ⅳ组,均于术后第1d起结膜下分别注射50、100、200μg的IL-1ra,对照组(Ⅳ组)结膜下注射等量生理盐水,连续2周.对角膜植片存活情况进行评分,观察其临床效果.结果各实验组角膜植片平均存活天数(meansurvivaltime,MST)分别为(11.13±1.46)d、(12.00±1.60)d及(13.44±1.13)d,明显高于对照组(8.00±1.25)d,差异有显著性(t=0.00,P＜0.01).IL-1ra200μg组与50μg组间比较,差异有显著性(t=0.00,P＜0.01).结论结膜下注射IL-1ra可抑制角膜移植术后免疫排斥反应,减少新生血管的生成,减轻免疫性炎性反应,延长角膜植片的存活时间.IL-1ra的剂量越大,效果越好.     

白细胞介素1在角膜新生血管中的作用

角膜增生血管形成是导致盲目的常见原因之一，眼科界一直在对其进行研究。但至今，对角膜新生血管形成的机制不甚清楚，随着人们对白细胞介素的研究和认识，发现白细胞介素、在多种疾病中参与其发展过程，而重组人白细胞介素1获得成功，使对其在角膜新生血管中的作用进行初步研究，显示白细胞介素1有较强诱发角膜新生血管的作用，为研究新生血管性疾病提供了新的途径。现对有限的献进行综述。     

Galardin抑制白细胞介素—1α诱导的角膜基质细胞胶原降解

目的：探讨Galardin对角膜基质细胞胶原降解的抑制作用。方法：角膜基质细胞三维胶原凝胶表面分别添加纤维蛋白溶酶原、白细胞介素-1α（IL-1α）及不同质量浓度的Galardin的MEM培养液培养24h,测定培养上清液中羟脯氨酸的量做为胶原降解活性单位。同时检测Galardin及IL-1α对角膜基质细胞胶原降解的作用。结果：在存在纤维蛋白溶酶原的情况下,随着IL-1α质量浓度的升高,以剂量关系增加角膜基质细胞胶原降解量。Galardin以剂量关系抑制IL-1α诱导的角膜基质细胞胶原降解量。结论：Galardin具有抑制IL-1α诱导的角膜基质细胞胶原降解的作用。     

白细胞介素1受体拮抗剂对急性排斥期大鼠角膜移植物Fas/FasL表达的影响

目的 研究白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1 ra)对急性排斥反应期角膜移植物Fas／FasL蛋白表达的影响。方法 建立大鼠同种异体穿透角膜移植模型，设生理盐水组和IL-1 ra治疗组。急性排斥期随机取角膜植片，用免疫组织化学(SABC)法检测植片Fas／FasL蛋白表达。并以正常大鼠角膜作对照。结果 在正常角膜，Fas和FasL蛋白主要表达于上皮层及内皮层；基质层中仅有少量Fas蛋白表达，未见FasL蛋白表达。急性排斥期角膜植片全层Fas和FasL蛋白表达增高，且植片周边(距伤口边缘0．5mm范围内)增高显著；IL-1 ra治疗组Fas和FasL蛋白表达均低于生理盐水组。结论 IL-1 ra可通过调节Fas／FasL蛋白的表达抑制角膜移植免疫排斥反应的发生。     

白细胞介素-1受体拮抗剂抗家兔实验性角膜血管增生的研究

角膜新生血管（ｃｏｒｎｅａｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎＣＮＶ）的形成与白细胞介素－１（ＩＬ－１）有明显关系。本实验通过用白细胞介素－１受体拮抗物（ＩＬ－１ｒａ）抑制热灼伤致家兔ＣＮＶ形成的研究，采用ＩＬ－１ｒａ分别与生理盐水、醋酸氢化可的松作阴性、阳性对照，观察到ＩＬ－１ｒａ对ＣＮＶ有明显抑制作用，为临床治疗ＣＮＶ提供了一个新的途径。     

白细胞介素-1及其抑制剂对眼眶成纤维细胞增殖和合成透明质酸作用的研究

目的：观察白细胞介素1(IL-1)及白细胞介素1受体拮抗剂(IL-1Ra)对甲状腺相关眼病(TAO)病人及正常人眼眶成纤维细胞(OFs)增殖及合成透明质酸(HA)的作用。方法：取5例TAO病人眼眶组织与眼外肌进行OFs培养，另取4例无眼部病变的意外死亡者眼眶组织与眼外肌进行OFs培养作为对照。分别在其中加人不同浓度的IL-1、IL-1Ra，用MTT法及放射免疫法观察它们对OFs增殖及分泌HA的作用；然后用不同浓度的IL-1Ra与IL-1共同孵育，观察OFs的增殖及HA合成的变化。结果：IL-1在5U／ml浓度以上时均能明显刺激OFs的增殖和HA的合成，当IL-1浓度为500U／ml时对TAO病人OFs的刺激作用强于对正常人OFs.IL-1Ra单独使用时对OFs的增殖及HA合成均没有显著性影响。当IL-1Ra(5、50ng／m1)与IL-1(500U／m1)联合孵育时，能阻断IL-1对OFs的刺激作用。结论：IL-1能刺激TAO病人与正常人OFs的增殖和HA的合成，而IL-1Ra能阻断其刺激作用，因此IL-lRa可能是TAO治疗中的一个新途径。     

IL-1ra治疗角膜碱烧伤的免疫学机制研究

目的研究白介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)治疗角膜碱烧伤的免疫学机制。方法Wistar大鼠角膜碱烧伤模型,每组30只。Ⅰ组为阴性对照组,Ⅱ~Ⅳ组为IL-1ra结膜下注射治疗组(1000、500、200μg/ml,2次/d)。在烧伤后不同时间段(3、7、21d)收集角膜,行苏木精-伊红染色,CD3、CD4、CD8阳性细胞计数。结果IL-1ra治疗组角膜水肿程度轻,CD3 、CD4 、CD8 细胞计数在各个时间点均少于对照组(P<0.05)。7d、21d时1000μg/ml和500μg/ml组之间细胞计数无统计学差异(P>0.05),但均少于200μg/ml组(P<0.05)。结论IL-1ra可剂量依赖性地抑制淋巴细胞在角膜的聚集和活化,下调角膜碱烧伤后免疫应激水平。     

重组人白细胞介素-1受体拮抗剂对体外培养的胎儿晶状体上皮细胞的影响

目的:探讨重组人白介素-1受体拮抗剂对培养的胎儿晶状体上皮细胞黏附和增殖的影响。方法:培养晶状体上皮细胞,取生长良好的第2代细胞用于实验。将第2代胎儿LEC于不同浓度的rhIL-1ra孵育后,用四甲基偶氮唑盐(methylthio tetrazole,MTT)法记录各孔黏附细胞数量的吸光度(A)值,并与空白组进行对照;将第2代胎儿LEC培养24h待细胞贴壁后,与不同浓度的rhIL-1ra再共育24h后,MTT法记录各孔细胞数量的吸光度(A)值,并与空白组进行对照。结果:除1μg/L浓度组外,其余各组抑制胎儿晶状体上皮细胞与胶原的黏附呈剂量依赖性,与空白组对照具有显著性差异。100μg/L浓度组细胞收缩、变圆,但仍保持贴壁状态,与空白组对照可显著抑制已贴壁胎儿晶状体上皮细胞的增殖。结论:有>1μg/L的各组rhIL-1ra能够抑制体外培养的胎儿LEC与胶原的黏附,并且浓度越大抑制作用越明显,具有浓度依赖性。仅100μg/LrhIL-1ra浓度组作用24h可显著地抑制已贴壁胎儿晶状体上皮细胞的增殖,但仍保持贴壁状态,提示该药可能具有较轻的毒副作用。     

IL-1ra基因修饰角膜内皮细胞及其表达

目的构建真核细胞内表达的重组质粒PEGFPhIL1ra,对角膜内皮细胞进行基因修饰,为构建白细胞介素1受体拮抗剂(interleukin1receptorantagonist,IL1ra)基因化角膜内皮细胞移植膜奠定基础。方法以人cDNA文库为模板进行PCR扩增,获得人IL1racDNA片断,插入PEGFPC2载体,构建真核表达质粒PEGFPhIL1ra。以阳离子聚合物为介导,对饲细胞培养下的角膜内皮细胞(cornealendothelialcells,CECs)进行体外转染。通过绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)示踪检测转染效率,蛋白免疫印迹检测外源性IL1ra基因在角膜内皮细胞内表达强度。结果以cDNA文库为模板扩增出hIL1racDNA,通过酶切、DNA测序证实PEGFPhIL1ra构建正确。20%～25%的转染角膜内皮细胞中有绿色荧光。Westernblotting检测可见转染角膜内皮细胞内有相对分子量为44000的hIL1raGFP融合蛋白表达,3d时蛋白表达水平达到峰值,并且持续至5d,7d时表达水平开始回落,9d时表达处于较低水平,对照组在观察期内均未见蛋白表达。结论阳离子聚合物介导下重组质粒PEGFPhIL1ra可对角膜内皮细胞实现有效转染并且持续表达IL1ra蛋白。     

IL-1ra对IL-1α诱导的眼眶成纤维细胞合成糖胺多糖的抑制作用

目的 :明确白介素 1受体拮抗剂 (IL 1ra)是否对白介素 1α(IL 1α)诱导的眼眶成纤维细胞合成糖胺多糖 (gly cosaminoglycans,GAG)有抑制作用 ,探讨IL 1ra在Graves’眼病(GO)治疗及预防中的临床应用前景。方法 :以下述方法分别处理培养的GO患者和正常人眼眶成纤维细胞 :IL 1α 30U/ml或 /和不同浓度的IL 1ra孵育 4 8h ;用IL 1α 30U/ml处理后 ,再加入IL 1ra 75ng/ml共孵育不同时间 (2 4h、4 8h、72h)。用 [3 H]葡萄糖胺掺入法测定 [3 H]GAG的产量。结果IL 1α 30U/ml明显刺激GO患者和正常人成纤维细胞合成GAG ,增加率达 4 6 .6 %～ 12 7.9% (平均 10 3.5 % ,P <0 .0 0 1)。与IL 1α 30U/ml克分子浓度比为 2 5∶1、4 0∶1和 10 0∶1的IL 1ra ,分别抑制IL 1α诱导的GO患者和正常人成纤维细胞合成GAG达 (30 .93± 11.4 6 ) %、(5 9.34± 9.3) %和 (83.15± 8.5 6 ) % (P <0 .0 0 5 )。在 2 4h、4 8h、72h时 ,IL 1ra分别抑制IL 1α诱导的眼眶成纤维细胞合成GAG(2 4 .18± 6 .3) %、(6 0 .4 8± 12 .83) %和 (73.0 4± 7.14 ) % (前两组相比 ,P <0 .0 0 1;后两组相比 ,P =0 .15 9)。结论 :IL 1ra能够剂量和时间依赖性地抑制IL 1α诱导的眼眶成纤维细胞合成GAG ,IL 1ra可望用于GO的治疗和预防。     

Expression of the interleukin 1 receptor antagonist in the normal human cornea

The human cornea has been shown to express a number of inflammatory cytokines including IL-1, IL-6 and IL-8. In view of the potent proinflammatory activities of interleukin-1 (IL-1), regulatory mechanisms should be present in the human cornea to control IL-1 mediated inflammatory and immune responses. This is important for the maintenance of the integrity and transparency of the cornea. To test this hypothesis, the authors determined the presence of IL-1 receptor antagonist (IL-tra) in the normal human cornea using an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). IL-tra is a natural antagonist of IL-1 and competes with IL-1 for the binding to its receptors thereby blocking the inflammatory response. Corneas were either tested immediately or after a 24-hour culture period. Furthermore, the authors separately analyzed the three layers of the cornea. Their results present evidence for the constitutive expression of the IL-tra protein in the normal human cornea and show that both epithelial and stromal cells produce IL-1ra. The epithelial cells are the major source of corneal IL-1ra immunoreactivity, and secrete IL-1ra during culture. Stromal cells contain detectable, albeit low amounts of cell associated IL-1ra. No IL-1ra was detected in the endothelial cell layer. A more accurate understanding of the balance between IL-1 and IL-1ra in ocular tissues and the role of the IL-1ra under physiologie and pathophysiologic conditions will be necessary for an eventual use of IL-1 receptor antagonist as a therapeutical tool