KRAS促进肺癌细胞糖酵解

目的 探讨KRAS对肺癌细胞糖酵解的影响及其初步机制.方法 采用Real-time PCR 和Western blot检测KRAS、HK2、PKM2在肺癌细胞系H1299、A549、SPC-A1中的表达水平,应用干化学方法检测肺癌细胞培养48 h后培养基上清中乳酸的浓度.采用RNA干扰技术,将KRAS-shRNA感染H1299细胞,实验分为3组:空白对照组(CON组)、阴性对照组(NC组)、慢病毒干扰组(KD组).采用Real-time PCR和Western blot检测KRAS敲低效率及敲低KRAS基因前后H1299细胞中HK2、PKM2的表达变化.将TNF-α作用于NC组和KD组细胞,检测KRAS、HK2、PKM2的表达水平及乳酸浓度的变化.结果 在3株肺癌细胞系中,H1299细胞中KRAS和HK2、PKM2的表达水平最高,乳酸水平也高于A549、SPC-A1细胞.与空白对照组相比,KRAS-shRNA感染H1299细胞后,KRAS基因拷贝以及蛋白表达水平被显著抑制(P＜0.05),HK2、PKM2基因拷贝及蛋白表达水平显著下降,培养基中乳酸浓度明显降低(P＜0.05).以TNF-α作用NC组、KD组细胞后,KRAS、HK2、PKM2基因和蛋白表达均升高(P＜0.05).KRAS-shRNA可部分抑制TNF-α升高的乳酸浓度(P＜0.05).结论 KRAS能通过调节HK2和PKM2促进肺癌细胞的糖酵解.     

PKM2基因沉默对人肺癌细胞生物学特性的影响

目的 探讨M2型丙酮酸激酶（pyruvate kinase M2,PKM2）下调对人肺癌A549细胞生物学特性的影响。方法 采用免疫荧光技术检测A549细胞中PKM2蛋白的表达;将构建有PKM2-shRNA的重组质粒转入A549细胞;分别采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测PKM2 mRNA和蛋白表达水平;CCK-8法检测PKM2基因沉默对A549细胞增殖能力的影响;采用葡萄糖测定试剂盒测定细胞对葡萄糖的消耗量;Transwell实验检测细胞穿过人工基膜的能力。结果 肺癌A549细胞的细胞质及细胞核中均有PKM2表达;PKM2-shRNA质粒转染A549细胞48h后,可明显下调A549细胞中PKM2 mRNA及蛋白的表达水平,并且明显抑制A549细胞增殖;PKM2 shRNA可减少A549细胞葡萄糖的消耗,还可抑制细胞侵袭能力。结论 在肺癌细胞A549中,抑制PKM2表达可显著抑制细胞增殖、侵袭和糖代谢能力。     

肺瘤平膏联合环磷酰胺化疗对肺癌的抑瘤作用和酸性微环境的影响

目的 观察肺瘤平膏和化疗药环磷酰胺对肺癌小鼠的作用,并从酸性微环境和细胞凋亡角度探索其内在作用机制.方法: 建立Lewis肺癌小鼠模型,分别给予环磷酰胺,肺瘤平膏,环磷酰胺+肺瘤平膏相应处理,以生理盐水组作为对照,观察各组小鼠的肿瘤体积,肿瘤增殖率,食物消耗量.给药15 d后处死小鼠,取肿瘤组织,用乳酸试剂盒检测肿瘤组织的乳酸相对浓度,免疫组织化学法检测葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4,GLUT4),己糖激酶1(hexokinase 1,HK1),葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78),碳酸酐酶-Ⅸ(carbonic anhydrase-Ⅸ,CA-Ⅸ)的蛋白表达,流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡率和调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)比例,Wes-tern blot法检测缺氧诱导因子1-α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α),Bcl-2,Bax,Caspase-3,白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)的蛋白表达.结果: 肺瘤平膏+环磷酰胺组小鼠的肿瘤生长受到抑制最为明显,肿瘤增殖率最低,与生理盐水组相比差异有统计学意义(P<0.05),食物的消耗量也最多,但差异并不具有统计学意义(P>0.05).进一步的分子生物学检测发现,肺瘤平膏+环磷酰胺组肿瘤组织的乳酸水平在各组中最低,并伴有GLUT4,HK1,GRP78,CA-Ⅸ等蛋白表达和Treg细胞比例的下降,与生理盐水组相比差异具有统计学意义(P<0.05).此外,与生理盐水组相比,肺瘤平膏+环磷酰胺组肿瘤细胞凋亡显著增加,而HIF-1α,Bcl-2,Bax,Caspase-3,IL-2等蛋白的表达与生理盐水组相比存在明显差异.结论: 化疗药环磷酰胺与肺瘤平膏在抑制肺癌生长,提高荷瘤小鼠一般状况上具有协同作用,这些作用部分是因为二者联用改善组织缺氧,抑制HIF-1α表达,进而调控下游GLUT4,HK1,GRP78,CA-Ⅸ等蛋白的表达,降低肿瘤组织局部的乳酸水平,改善肿瘤组织酸性微环境,从而诱导肿瘤细胞凋亡,抑制T细胞向Treg细胞分化.     

肺瘤平膏联合环磷酰胺化疗对肺癌的抑瘤作用和酸性微环境的影响

目的 观察肺瘤平膏和化疗药环磷酰胺对肺癌小鼠的作用,并从酸性微环境和细胞凋亡角度探索其内在作用机制.方法: 建立Lewis肺癌小鼠模型,分别给予环磷酰胺,肺瘤平膏,环磷酰胺+肺瘤平膏相应处理,以生理盐水组作为对照,观察各组小鼠的肿瘤体积,肿瘤增殖率,食物消耗量.给药15 d后处死小鼠,取肿瘤组织,用乳酸试剂盒检测肿瘤组织的乳酸相对浓度,免疫组织化学法检测葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4,GLUT4),己糖激酶1(hexokinase 1,HK1),葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78),碳酸酐酶-Ⅸ(carbonic anhydrase-Ⅸ,CA-Ⅸ)的蛋白表达,流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡率和调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)比例,Wes-tern blot法检测缺氧诱导因子1-α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α),Bcl-2,Bax,Caspase-3,白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)的蛋白表达.结果: 肺瘤平膏+环磷酰胺组小鼠的肿瘤生长受到抑制最为明显,肿瘤增殖率最低,与生理盐水组相比差异有统计学意义(P<0.05),食物的消耗量也最多,但差异并不具有统计学意义(P>0.05).进一步的分子生物学检测发现,肺瘤平膏+环磷酰胺组肿瘤组织的乳酸水平在各组中最低,并伴有GLUT4,HK1,GRP78,CA-Ⅸ等蛋白表达和Treg细胞比例的下降,与生理盐水组相比差异具有统计学意义(P<0.05).此外,与生理盐水组相比,肺瘤平膏+环磷酰胺组肿瘤细胞凋亡显著增加,而HIF-1α,Bcl-2,Bax,Caspase-3,IL-2等蛋白的表达与生理盐水组相比存在明显差异.结论: 化疗药环磷酰胺与肺瘤平膏在抑制肺癌生长,提高荷瘤小鼠一般状况上具有协同作用,这些作用部分是因为二者联用改善组织缺氧,抑制HIF-1α表达,进而调控下游GLUT4,HK1,GRP78,CA-Ⅸ等蛋白的表达,降低肿瘤组织局部的乳酸水平,改善肿瘤组织酸性微环境,从而诱导肿瘤细胞凋亡,抑制T细胞向Treg细胞分化.     

乳酸对人非小细胞肺癌细胞A549生物学特性影响的研究

背景 肿瘤的重要特征之一是代谢异常,乳酸作为代谢产物也参与肿瘤代谢。目的 探讨乳酸对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞A549糖酵解压力、增殖、迁移和周期等生物学特性的影响。方法 培养人非小细胞肺癌细胞A549,分为对照组、5 mmol/L乳酸处理组和10 mmol/L乳酸处理组。对照组不作任何处理,其他两组乳酸处理24 h后,通过Seahorse细胞代谢分析仪分析乳酸处理后A549细胞的糖酵解压力和线粒体底物选择,qPCR检测糖酵解相关基因(HK3、LDHA、LDHB、PKM)和细胞周期及迁移相关基因(CCNE1、CCND1、CCNB1、CDK2、CDH1、TWIST1、SNAI2)mRNA表达水平,Western blot检测糖酵解相关蛋白(G6PD、PKM2、HK1和LDHA)水平。利用实时无标记细胞分析(real time cellular analysis,RTCA)、流式细胞术分析乳酸对NSCLC细胞A549增殖、迁移、周期等生物学特性的影响。结果 两个乳酸处理组相较对照组糖酵解降低,糖酵解最大能力及糖酵解储备均降低且10 ...     

靶向PKM2干扰质粒联合重组人血管内皮抑素治疗肺癌的实验研究

目的 研究丙酮酸激酶同工酶M2(PKM2)干扰质粒联合重组人血管内皮抑素是否能增强单药的抗癌作用.方法 免疫荧光检测A549细胞内PKM2蛋白表达,蛋白印迹检测PKM2质粒干扰效果.建立裸鼠皮下A549肺癌模型,将25只荷瘤小鼠随机平均分为5组:生理盐水组(NS组)、无关序列干扰质粒组(psh-Control组)、PK...     

吉非替尼抑制糖酵解诱导非小细胞肺癌的程序性死亡

目的 探究吉非替尼对非小细胞肺癌A549和H1975细胞死亡形式的影响,并从糖酵解方面探讨其可能机制。方法 A549细胞加入浓度分别为0、20、30、40 µmol/L的吉非替尼,H1975细胞加入浓度分别为0、20、40、80 µmol/L的吉非替尼。采用MTT法检测吉非替尼对非小细胞肺癌细胞的增殖抑制作用。用乳酸试剂盒检测细胞内乳酸的变化,Western blot法检测细胞内糖酵解相关蛋白（PKM2、HK2）和PI3K-Akt-mTOR信号通路中蛋白的表达水平;2-NBDG检测细胞葡萄糖摄取能力,ATP试剂盒检测胞内ATP水平;JC-1试剂盒检测细胞线粒体膜电位,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot法检测凋亡蛋白（Bax、Bcl-2）以及自噬标志蛋白LC3B的相对表达水平。结果 MTT结果显示吉非替尼可呈时间剂量依赖性的抑制A549和H1975细胞增殖（P<0.05）,A549细胞24、48、72 h的IC50值分别为48.6、28.6和19.7 µmol/L,H1975细胞24、48、72 h的IC50值分别为321.6、49.1和14.6 µmol/L。乳酸检测结果显示,吉非替尼抑制胞内乳酸水平（P<0.05）。Western blot结果显示,糖酵解相关蛋白PKM2、HK2表达下调（P<0.05）,PI3K-Akt-mTOR信号通路中相关蛋白表达下调（P<0.05）。吉非替尼也可以抑制A549和H1975细胞葡萄糖摄取、ATP水平（P<0.05）。JC-1试剂盒和Annexin V-FITC/PI双染法检测出吉非替尼能够诱导A549和H1975细胞发生凋亡,A549细胞中0、20、30、40 µmol/L的凋亡率分别为（10.77±1.0）%、（14.5±0.4）%、（17.4±0.2）%、（32.1±0.6）%,差异有统计学意义（P<0.05）;而H1975细胞0、20、40、80 µmol/L的凋亡率分别为（10.5±0.6）%、（13.2±0.92）%、（18.9±0.98）%、（35.1±1.4）%,差异有统计学意义（P<0.05）。促凋亡蛋白Bax表达增加和抑凋亡蛋白Bcl-2表达下调（P<0.05）。同时LC3B表达增加证明吉非替尼能够诱导A549和H1975细胞自噬增加（P<0.05）。结论 吉非替尼对A549和H1975细胞具有增殖抑制、诱导凋亡和增加自噬作用,凋亡机制可能为吉非替尼影响A549和H1975细胞糖酵解功能和PI3K-Akt-mTOR信号通路。     

HOXB5对结直肠癌细胞有氧糖酵解和恶性增殖的影响

目的 探讨同源盒蛋白（HOX）B5对结直肠癌（CRC）细胞有氧糖酵解和恶性增殖的影响。方法 通过预实验选取CRC细胞株Caco2构建过表达HOXB5的细胞株,HCT116构建敲低HOXB5的细胞株;分别采用CCK-8法、平板克隆实验、糖代谢检测试剂盒、Western blot法检测过表达或敲低HOXB5对CRC细胞增殖能力、平板克隆形成能力、有氧糖酵解、糖酵解相关蛋白的影响。结果 在Caco2细胞中,过表达HOXB5能明显增强细胞增殖及平板克隆形成能力（均P<0.05）,增加细胞葡萄糖消耗量以及乳酸、三磷酸腺苷（ATP）含量（均P<0.05）,上调丙酮酸激酶同工酶2(PKM2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)蛋白表达水平（均P<0.05）;在HCT116细胞中,敲低HOXB5能明显减弱细胞增殖及平板克隆形成能力（均P<0.05）,减少细胞葡萄糖消耗量以及乳酸、ATP含量（均P<0.05）,下调PKM2、LDHA、GLUT1蛋白表达水平（均P<0.05）。结论HOXB5通过促进CRC细胞有氧糖酵解来增强其恶性增殖。     

20(S)-原人参二醇对肺癌A549细胞增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤生长的抑制作用

目的研究20(S)-原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤生长抑制作用。方法采用噻唑蓝(MTT)法观察20(S)-原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞增殖的抑制作用,流式细胞术测定20(S)-原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞凋亡及周期的影响,并在裸小鼠人肺癌模型上观察20(S)-原人参二醇对荷瘤裸小鼠肿瘤生长的抑制作用。结果20(S)-原人参二醇对A549细胞具有明显的抑制作用并有剂量时间依赖关系,并且流式细胞仪检测时均出现典型凋亡峰,24小时凋亡率分别为32.47%、32.75%、33.51%。荷瘤裸小鼠动物实验表明,20(S)-原人参二醇对裸小鼠的肿瘤生长也具有明显的抑制作用,抑瘤率分别为18.78%、34.37%、50.02%。结论20(S)-原人参二醇对A549细胞的增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤的生长具有明显的抑制作用。     

科罗索酸抗肺癌作用机制的初步研究

目的研究科罗索酸(CRA)对人肺癌细胞A549生长的影响,初步探讨其抗肿瘤作用机制。方法采用MTT法检测不同浓度下CRA对肺癌细胞A549的体外生长的影响,建立生物发光标记的人肺癌细胞A549裸小鼠荷瘤模型,IVIS小动物活体成像系统检测实体瘤的生长情况,免疫组织化学法分析肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)和CD34的表达,以CD34阳性血管数作为微血管密度(MVD)。结果 CRA对A549的体外作用IC50值为26.8μg/ml。体内抗肿瘤实验中,不同剂量的CRA对A549实体瘤均有一定的治疗效果,VEGF和CD34蛋白的含量也有不同程度的影响。结论 CRA对人肺癌细胞A549实体瘤具有一定的治疗作用,其作用机制可能与抑制肿瘤组织中VEGF和CD34蛋白的表达有关。     

结核分枝杆菌RelE毒素蛋白对肺癌A-549细胞成瘤性的抑制作用

目的探索结核分枝杆菌RelE毒素蛋白对动物体内的肺癌A-549细胞的成瘤性的影响,以及因此产生的对动物免疫功能的作用。方法构建BALB/C小鼠的免疫抑制模型,通过接种稳定表达结核分枝杆菌RelE毒素蛋白、RelB抗毒素蛋白和RelBE毒素-抗毒素蛋白的肺癌A-549细胞株,含空质粒PcDNA3.1（＋）的A-549细胞株,以及正常的肺癌A-549细胞,构建BALB/C小鼠荷瘤模型,观察各组小鼠的肿瘤生长情况,并测定各组小鼠的脾淋巴细胞增殖活性以及血清IFN-γ和IL-2的浓度。结果接种了表达RelE毒素蛋白的A-549细胞的小鼠组,肿瘤生长较其它实验组慢,肿瘤结节的瘤体体积和数量都较其它实验组有明显差异（P〈0.05）。对各组小鼠免疫功能变化的研究发现,各实验组小鼠的脾淋巴细胞增殖活性以及血清IFN-γ和IL-2的浓度的差异没有统计学意义（P〉0.05）。结论结核分枝杆菌RelE毒素蛋白对肺癌A-549细胞的成瘤性有抑制作用。     

龙葵提取物对荷lewis肺癌小鼠肿瘤组织细胞周期调控相关蛋白及凋亡的影响

[目的]观察龙葵氯仿及正丁醇提取物对荷lewis肺癌小鼠肿瘤组织细胞周期调控相关蛋白、细胞凋亡及相关凋亡蛋白表达的影响。[方法]建立lewis肺癌模型,64只C57BL/6J小鼠随机分成模型组、环磷酰胺组、龙葵氯仿和正丁醇提取物高、中、低剂量组,给药15d后处死,剥离肿瘤组织,称重,计算肿瘤生长抑制率;TUNEL染色法检测细胞凋亡;免疫组织化学法检测PCNA、p53、p21和Bax、Bcl-2。[结果]龙葵氯仿及正丁醇提取物对荷瘤小鼠肿瘤增殖有一定抑制作用,其中氯仿提取物中剂量组和正丁醇提取物高剂量组的抑瘤率分别为38.93%和32.14%（P〈0.01或P〈0.05）。龙葵氯仿及正丁醇提取物可降低荷瘤小鼠肿瘤组织PCNA和P53阳性细胞表达率,分别为29.7%-58%和32%-56%,并提高P21阳性细胞表达率（20%-32%）（P〈0.01或P〈0.05）。荷瘤小鼠肿瘤组织细胞的凋亡率均不同程度升高（15%-38%）（P〈0.01或P〈0.05）。Bax阳性细胞表达率均有不同程度升高（11%-41%）,Bcl-2阳性细胞表达率则均有不同程度降低（23%-37%）（P〈0.01或P〈0.05）,并可不同程度上调荷瘤小鼠肿瘤组织Bax/Bcl-2的比值。[结论]龙葵正丁醇及氯仿提取物有一定抑制lewis肺癌的生长作用,其作用机制可能与对荷瘤小鼠肿瘤组织细胞周期调控相关蛋白（PCNA、p53、p21）表达的影响、上调肿瘤组织Bax蛋白的表达、下调Bcl-2蛋白的表达,上调Bax/Bcl-2的比值;促进肿瘤组织的细胞凋亡等相关。     

糖化血红蛋白A1亚基在肺癌发生过程中的作用

目的：探讨糖化血红蛋白A1亚基（HbA1c）在肺癌的肿瘤发生中的作用及机制。方法：构建BALB/c裸鼠肺癌原位癌动物模型,采用皮下注射A549细胞的方式进行肺癌原位癌造模。采用实时荧光定量PCR(qRTPCR)技术检测细胞中血红蛋白A1亚基(HbA1)的表达,采用蛋白印迹法检测HbA1和HbA1c的表达。采用CCK-8实验检测A549细胞的增殖速度,采用Transwell小室实验检测A549细胞的迁移能力。结果：肺癌原位癌小鼠血清中糖化血红蛋白的表达水平显著高表达。糖化血红蛋白HbA1c上调后A549细胞的增殖和迁移能力显著上调,呈现显著的癌化趋势。小鼠HbA1c上调后小鼠肺癌原位癌肿瘤显著增大,促进肿瘤的发生。结论：初步发现糖化血红蛋白A1亚基能促进肺癌的增殖和迁移。     

冬虫夏草合用顺铂诱导非小细胞肺癌凋亡的研究

目的探讨冬虫夏草(CS)能否促进顺铂诱导Balb-c裸鼠非小细胞肺癌凋亡及其机制。方法造模后的A549肺癌小鼠分为4组,A组:对照组(NS)、B组:顺铂组(DDP)、C组:DDP 30 mg/kgCS组和D组:DDP 60 mg/kgCS组,通过检测各组小鼠的体质量变化、抑瘤率,提取组织DNA并电泳,检测血清IL-2、TNF-α含量及肿瘤组织IL-2和TNF-α蛋白表达量等方法观察冬虫夏草合用顺铂对非小细胞肺癌的疗效。结果C、D组小鼠的体质量、抑瘤率明显高于A、B组,且C、D组出现明显的DNA ladder条带,C、D组小鼠血清中的IL-2、TNF-α含量及肿瘤组织IL-2和TNF-α蛋白表达量也显著高于A、B组。结论冬虫夏草可能是通过免疫调节诱导肿瘤细胞凋亡而增强DDP抗肺癌作用,可能是良好的非小细胞肺癌化疗的辅助用药。     

川陈皮素对肺癌的增殖抑制作用及其机制

目的 观察川陈皮素对肺癌的体内外抑瘤作用并初步探讨其机制.方法 应用MTT法检测不同浓度川陈皮素作用对人肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用.Western blot检测川陈皮素处理后A549细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达情况.彗星电泳检测川陈皮素作用后A549细胞DNA损伤情况.通过C57BL/6小鼠Lewis肺癌模型进行体内抗瘤实验,TUNEL法观察药物作用后的肿瘤细胞凋亡情况,并用免疫组化法检测瘤组织中Bax、Bcl-2和Caspase-9蛋白表达情况.结果 体外实验显示,川陈皮素作用对A549细胞有明显的增殖抑制作用,并且抑制效应随浓度增加而增强;川陈皮素作用A549细胞24 h后,随着作用剂量的加大,Bcl-2蛋白表达下调,而Bax蛋白则表达上调;对细胞DNA具有损伤作用,当达到一定作用剂量和作用时间时可以使A549细胞发生凋亡.体内抑瘤实验表明,川陈皮素高(300 mg/kg)、中(200 mg/kg)、低(100 mg/kg)浓度组对小鼠Lewis肺癌的抑瘤率分别为43.70%、27.59%和20.14%,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.01);川陈皮素能使Lewis肺癌细胞发生凋亡;使Lewis肺癌组织内Bax和Caspase-9表达上调,Bcl-2表达下调.结论 川陈皮素在体内外均有明显的抑制肿瘤细胞增殖的作用,其作用机制可能与改变Bcl-2/Bax的比值,启动Caspase级联反应相关.     

汉黄芩素抑制人胃癌MGC-803细胞糖代谢的作用

探讨汉黄芩素对人胃癌MGC-803细胞糖代谢的抑制作用及其可能的内在机制。采用葡萄糖摄取检测试剂盒检测汉黄芩素对MGC-803细胞糖代谢中葡萄糖摄取量的影响;同时采用乳酸生成检测试剂盒检测汉黄芩素对MGC-803细胞糖代谢中乳酸生成量的影响;Annexin V-PI双染实验检测汉黄芩素调节糖代谢过程中MGC-803细胞的凋亡率;Western blot法分析糖代谢相关蛋白己糖激酶2(HKⅡ)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、丙酮酸脱氢酶激酶(PDHK)和乳酸脱氢酶A(LDH-A)的表达变化情况。结果表明:汉黄芩素能在一定浓度下抑制人胃癌MGC-803细胞糖代谢中的葡萄糖摄取量,同时它还能抑制人胃癌MGC-803细胞糖代谢中的乳酸生成量,但并未诱发明显凋亡。此外一定浓度下的汉黄芩素还能抑制人胃癌MGC-803细胞糖代谢相关蛋白的表达。综上所述,汉黄芩素能抑制人胃癌细胞MGC-803的糖代谢但并未诱发明显凋亡,其抑制作用可能与其对MGC-803细胞糖代谢相关蛋白的作用相关。     

鸦胆子苦素D通过PI3K/Akt信号通路抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的能量代谢研究

目的研究鸦胆子苦素D对乳腺癌MDA-MB-231细胞能量代谢的影响及作用机制。方法通过MTT法检测鸦胆子苦素D对细胞活力的影响。通过试剂盒测定葡萄糖消耗量、乳酸生成量、ATP含量和己糖激酶(HK)、磷酸果糖激酶(PFK)、丙酮酸激酶(PK)、乳酸脱氢酶(LDH)活性。Western blotting检测鸦胆子苦素D对PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达水平的影响。 结果鸦胆子苦素D可浓度依赖性地抑制MDA-MB-231细胞的增殖活性(P＜0.01)。与对照组相比,1、2、4 μmol/L鸦胆子苦素D均可降低MDA-MB-231细胞中ATP含量, 减少葡萄糖消耗量和乳酸生成量, 降低HK、PFK、PK和LDH的活性(P＜0.05);2、4 μmol/L鸦胆子苦素D可抑制细胞中PI3K、p-Akt蛋白的表达(P＜0.05)。 结论鸦胆子苦素D抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞PI3K/Akt信号通路,进而抑制有氧糖酵解过程,减少细胞能量供应。     

雷公藤甲素通过调控糖酵解途径抑制人肝癌SMMC-7721细胞的研究

目的 观察中药雷公藤甲素（TPL)对肝癌细胞增殖、调亡、代谢的影响,探讨其可能的作用机制。 方法 对细胞进行培养与转染,药物处理细胞24 h、48 h、72 h后,CCK-8法检测细胞存活率,确定药物对细胞的 半抑制浓度（IC50)。野生型细胞分为对照组、给药组。转染细胞分为si - NC组、si - NC + TPL组、si - HIF + TPL组。流式细胞术检测细胞调亡率,氟代脱氧葡萄糖（18F -FDG)摄取实验检测TPL对肝癌细胞糖代谢水平的影响。 实时荧光定量PCR检测细胞糖酵解途径关键酶乏氧诱导因子_ lα ( HIF-lα)、己糖激酶2( HK2)、葡萄糖转运蛋 白1 (GLUT1)、丙酮酸激酶(PKM2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)的mRNA水平。蛋白免疫印迹法检测HIF- lα、HK2、 PKM2、LDHA蛋白的表达水平。结果 （1 )当TPL浓度达到40 nmol/L以上时,细胞的存活率显著降低（P 0.05) 。 (2)与对照组相比,给药组（40 nmol/L）细胞凋亡率明显增加（P0.05)。（3)给药组（40 nmol/L)细胞 对18F - FDG的相对摄取率,与对照组比较,明显降低（P 0. 05 )。(4)相较于对照组,给药组HIF - 1 α、HK2、 GLUT1、PKM2、LDHA等糖酵解途径关键基因mRNA表达水平降低（P 0. 01 )。(5)TPL干预细胞后,HIF-lα, HK2、PKM2、LDHA等蛋白表达水平降低（P0.05)。敲减HIF - lα基因后,影响其下游蛋白的表达。结论 中药TPL可抑制肝癌细胞增殖、侵袭,影响其代谢,诱导其凋亡,其机制可能与HIF-lα介导的糖酵解途径有关。     

熊果酸对荷肺癌裸小鼠移植瘤生长抑制及促凋亡作用研究

目的:研究熊果酸(Ursolic acid,UA)对荷肺癌裸小鼠移植瘤生长的影响并探讨其机制。方法:通过右侧腹股沟区皮下接种人非小细胞肺癌A549细胞的方法建立荷肺癌裸小鼠模型,分别腹腔注射给予不同剂量UA(5、10、20mg/(kg·d))和顺铂(2mg/(kg·d))进行干预治疗,疗程14d。观察裸小鼠生存状态和肿瘤特征;称量瘤重并计算抑瘤率;HE染色法观察肿瘤组织形态结构改变,TUNEL染色法观察肿瘤组织细胞凋亡状况,IHC法检测肿瘤组织中Caspase-3、Bax、bcl-2蛋白表达并进行半定量分析。结果:与模型组比较发现:经UA治疗14d能够明显改善荷肺癌裸小鼠饮食状况和精神状态,瘤体减小、活动度和硬度降低;较模型组,UA治疗组移植瘤组织呈现细胞皱缩、片状坏死等病变,凋亡细胞数量显著增多,瘤体重量显著减轻、抑瘤率显著升高;移植瘤组织中Caspase-3蛋白和Bax蛋白表达显著升高、bcl-2蛋白表达显著降低,Bax/bcl-2比值显著升高;UA上述作用均具有一定的剂量依赖性。结论:UA具有抑制荷肺癌裸小鼠移植瘤生长的作用,作用机制可能与UA调节凋亡相关蛋白(Caspase-3、Bax、bcl-2)表达而促进肿瘤细胞凋亡有关。     

miR-21在肺癌血管生成中的作用及培美曲塞对其影响

目的肺癌死亡率居肿瘤相关疾病死因的首位。肿瘤组织中血管异常增生,与肿瘤的分级、转移和预后不良密切相关。文中利用体内外血管生成模型评价肺癌细胞不同miR-21表达水平肺癌细胞在肿瘤血管生成中的作用及其可能机制,并探讨培美曲塞对其影响。方法采用划痕实验研究不同miR-21表达水平肺癌细胞培养上清对血管内皮细胞增殖能力的影响。采用Luminex检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在不同miR-21表达水平肺癌细胞培养上清中的表达水平。采用免疫组化法检测CD31(亦称血小板内皮细胞黏附分子-1)、血管内皮生长因子受体2(Vascularendothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)及磷酸化VEGFR2蛋白在不同miR-21表达水平肺癌实体瘤组织的表达水平差异。结果划痕实验表明,miR-21高表达的人肺癌A549(A549-21H)细胞划痕修复能力明显强于miR-21低表达的人肺癌A549(A549-21L)细胞,表现为划痕直径明显缩小。Luminex检测VEGF在不同miR-21表达水平肺癌细胞培养上清的表达水平,实验结果表明,A549-21H细胞培养上清中VEGF含量显著高于A549-21L。采用IHC法检测裸鼠肺癌移植瘤中CD31、VEGFR2及磷酸化VEGFR2蛋白表达变化研究结果表明,A549-21H瘤体CD31表达明显高于A549-21L(P<0.01),A549-21H瘤体VEGFR2表达与A549-21L比较无显著性差异,A549-21H瘤体Tyr951磷酸化VEGFR2表达明显高于A549-21L(P<0.01)。结论 miR-21可能通过调节VEGF表达水平及VEGFR2磷酸化水平参与肿瘤血管生成的调控,培美曲塞对肿瘤血管生成具有一定的抑制作用。