鸭乙肝病毒基因探针和表面抗原抗体检测系统已制备成功

白求恩医科大学肝病研究所名誉所长叶维法教授继1982年与日美两国协作,在我国肝癌高发区江苏启东县和广西扶绥县的家鸭中检出鸭乙肝病毒(DHBV)感染后,该所于1986年制备了检测DHBV-D NA的基因探针,并建立了检测DHBV感染的表面抗原抗体系统。用以上手段已对300余只流行区和非流行区的家鸭,进行了DHBV感染与肝病的相关关系的研究,并分析了DHBV     

鸭乙肝病毒表面抗原的检测和肝脏组织学观察

鸭乙型肝炎病毒(DHBV)及其所致肝病已被认为研究乙型肝炎和肝癌的发生机理的实验模型。但由于感染DHBV的鸭血清中病毒DNA和DNA-P随鸭龄增长而逐渐下降至测不到的水平,检测鸭血清中DHBV-DNA和DNA-P不能完全反映实际感染状态。关于鸭血中DHBV表面抗原(DHBsAg)的检测及共与肝病的关系,国内外皆未见报道。因此,本实验对这一方面进行了研究,并对鸭DHBV感染的流行病学作了一定的探讨。     

鸭血清中鸭乙型肝炎病毒表面抗原与肝脏病理变化

用超速离心方法从启东鸭血清中分离和纯化了鸭乙型肝炎病毒(DHBV),提示了DHBsAg有亚型存在的可能性。纯化的DHBsAg免疫动物,制备了特异性抗血清,并用戊二醛二步法建立了检测DHBsA巴的灵敏、特异、简便的反向间接血凝法。通过对江苏启东、山东日照、广西扶绥、长春各地鸭血清中DHBsAg的检测和启东、长春鸭肝脏病理学检查,示检测血清中DHBsAg标志     

鸭乙肝病毒的聚合白蛋白受体

为研究DHBV的宿主限制性机制,探讨基因组Pre-S编码的生物学意义。本文用PDSA,PHSA PBSA分别包被羊红细胞,检测了140启东鸭、20只广西扶绥鸭和20只长春鸭的聚合白蛋白结合活性,同时做了血清和肝组织中DHBV、DNA斑点杂交和组织学检查。83/140的启东鸭、5/20扶绥鸭、1/18长春鸭的PDSA结合活性增高,5/140启东鸭、1/20扶绥鸭和1/18长春鸭的PHSA和PBSA     

三种鸭乙肝病毒感染情况的研究

DHBV的感染与肝病的关系还不甚明了。本文用斑点杂交法,液闪法和光镜病理分别对92只从市场采购的家鸭进行研究发现:A组(绍兴麻鸭)46只中有28只DHBVDNA(+)(60.8%),B组(昆山麻鸭)18只中有7只DHBV DNA(+)(38.9%),二组比较(P>0.05)无显著性差异,C组(天津白鸭)28只无一只DHBV DNA阳性,说明南方鸭比天津鸭易感。同时用DHBVDNA探针与人HBV DNA阳性的血清行杂交和用HBVDNA探针与鸭DHBV DNA阳性的血清行杂交结果均为阴性,说明二者之基因序列无同源性。DNA聚合酶(DNA-p)的检测发现其阳性率为6.5%并同时伴有DHBV DNA(+),说明DNA-p的检测     

肝苏颗粒浸膏粉抗鸭乙型肝炎病毒的实验研究

目的：观察肝苏颗粒浸膏粉（以下简称肝苏）体内抗鸭乙型肝炎病毒（DHBV）的作用,为临床治疗乙肝病毒感染提供实验依据,方法：采用重庆鸭乙型肝炎动物模型,用肝苏口服治疗4W,停药观察1W,检测用药前后血清的DHBVDNA,DHBsAg,转氨酶（ALT,AST）及肝组织病理变化,结果：肝苏各剂量组用药后血清DHBV DNA滴度显著降低或极显著降低（P＜0．05或P＜0．01）,停药1W后中,小剂量组血清DHBV DNA有明显回升现象,而大剂量组DHBV DNA回升现象不明显,其抗病毒效果与剂量大小有一定的关系,用药前后血清DHBsAg O,D值（490nm)的变化与DNA滴度改变相似,此外,肝脏病理学检查及治疗4W,停药1W后血清ALT,AST检查未发现该药对鸭肝组织有明显的毒性损害,结论：连续用肝苏1个月在鸭体内有抗鸭乙型肝炎病毒的作用。     

鸭乙肝病毒经不同途径感染雏鸭的造模研究

取1～3日龄健康雏麻鸭67只予以腿部肌注 DHBV,1周后感染率达88.0%,并持续3个月以上.电镜下可见血清阳性鸭的肝细胞胞浆中散在有 DHBV 的完整颗粒和内质网中密集的空泡颗粒。另将14日龄鸭28只分别予 DHBV 静脉注射或肌内注射,1周后血清阳转率各为35.7%和42.9%,持续1周又全部转阴;肝组织病理学观察,阳性鸭炎症改变明显.此外,对1～15日龄雏鸭94只,经 DHBV 灌胃后.连续采血测定均阴性。本研究表明,DHBV腿部肌注是最简便可靠的实验感染途径.     

鸭乙型肝炎病毒感染雏鸭原代肝细胞培养方法的建立及其应用

应用胰蛋白酶灌流DHBV感染北京雏鸭肝脏,制备原代培养的鸭肝细咆,斑点、杂交法检测DHBV DNA。观察了体外培养条件下鸭肝细胞中DHBV复制动态和药物对DHBV DNA复制的作用。结果表明,培养1～8天的鸭肝细胞中DHBV处于活跃复制状态,随着培养时间继续延长,细胞逐渐脱落,细胞中DHBV DNA减少,复制减弱。磷羧基甲酸钠、叠氮脱氧胸苷、脱氧无环鸟苷和中药肝可康、肝复灵五种药物对DHBV DNA的复制均有抑副作用。     

三种方法诱发鸭肝纤维化模型的对比研究

采用鸭乙型肝炎病毒(DHBV)强毒株感染1日龄鸭,结果85天后均出现纤维增生(6/6),120天有3/5出现肝纤维化,与感染十四氯化碳注射组(65天3/4出现纤维增生,85天3/6出现肝纤维化)、感染 牛血清白蛋白攻击组(85天3/5出现纤维增生,120天8/12出现肝纤维化)相比,均无统计学差异。提示强毒株DHBV是引起肝脏特异性病变的主要原因,造成DHBV持续感染和延长观察时间,可望进一步提高鸭肝纤维化的造模成功率。     

补锌去铁对中药保肝康抗鸭乙肝病毒疗效的影响(摘要)

目的:观察补锌去铁对中药保肝康抗鸭乙型肝炎病毒(DHBV)疗效的影响。方法:采用垂直传播的DHBV DNA阳性的6月龄麻鸭作鸭乙型肝炎病毒模型。以补锌去铁加中药保肝康进行治疗,观察其对DHBV、鸭肝功能及血清锌、铁、肝组织铁的影响。并设保肝康作为中药对照,抗乙肝转移因子作     

芹灵冲剂对DHBV肝炎雏鸭肝、肾功和血液生化指标的影响

目的　观察芹灵冲剂(Qinling chongji,QL)对DHBV肝炎雏鸭肝脏的保护作用及对肝炎雏鸭肾功能、血液生化改变的影响.     

护肝煎剂抑制鸭肝炎病毒的实验研究

鸭乙型肝炎病毒(DHBV)是1980年才发现的嗜肝DNA病毒,与人乙型肝炎病毒(HBV)的生物学特征及其与宿主肝脏疾病的关系十分相似。国内外近10年来的研究表明,DHBV感染的鸭子可以用作研究人乙型肝炎和肝癌较为理想的动物模型。本研究是用含有DHBV的麻鸭血清注射一日龄鸭足静脉造成人工感染,用具有抗HBV、活血化瘀、调节免疫功能等作用中药制成护肝煎剂进行实验治疗,以检测鸭血清中DHBeAg的P/n值作为疗效指标,研究结果报告如下。     

水芹水醇提取物在雏鸭体内对DHBV-DNA的抑制效果

目的观察水芹(Oenanthe Javanica,OJ)水醇提取物在鸭体内对鸭乙型肝炎病毒(DHBV)-DNA的抑制效果.方法将DHBV感染雏鸭随机分为高、中、低三个剂量组,分别为8,5,3 g/kg组进行药物治疗.每组5～6只,ig,2次/d×10 d;设病毒对照组(DHBV),以生理盐水(NS)代替药物,ig,2次/d×10d.阳性药用阿昔洛韦(ACV)粉剂250mg,ig,100mg/kg,2次/d×10d.在感染7 d后,即用药前(T0),用药后5 d(T5),用药10 d(T10)和停药后3 d(P3),自鸭腿胫静脉分别取血,分离血清,检查DHBV-DNA水平和肝功能.治疗结束经颈静脉放血处死动物,分别切取雏鸭肝脏,作肝病理检查.结果三批实验结果表明,水芹水醇提取物中,高剂量组对感染雏鸭无毒性,给药5,10 d能显著降低DHBV感染鸭血清DHBV-DNA水平,即d5的测定值由1.04分别下降至0.52和0.44,抑制率分别为50.0%和50.6%;d 10由0.85分别下降0.42和0.36,抑制率分别为57.7%和57.6%,与病毒对照组比较,均有显著性差异(P<0.05和P<0.01).低剂量组对鸭血清DHBV-DNA也有一定疗效,并显示明显的量效关系.肝功能改善明显,给药10 d,中剂量雏鸭血中ALT,AST,SB含量下降率分别为44.1%,44.2%,33.3%.高剂量的下降率分别为61.0%,58.3%,64.4%.低剂量虽对肝功能有改善,但无统计显著性.肝组织病理观察证实,中、高剂量对雏鸭肝脏均有保护作用,肝细胞变性坏死均较轻,肝小叶结构基本完整.结论OJ在雏鸭体内有抗DHBV的作用,保肝效果显著.     

鸭乙型肝炎病毒对鸭心肌细胞超微结构的影响

将鸭乙型肝炎病毒(DHBV)感染雏鸭制作的鸭乙型肝炎模型已被广泛用于研制抗乙肝病毒新药,为探索DHBV感染对雏鸭心脏有何影响,我们观察了被DHBV感染的雏鸭其心肌的超微结构,现报道如下。 1 材料与方法 1.1 动物及分组 20只1日龄武汉麻鸭(购自华中农业大学种禽厂),随机分为对照组和感染组,每组10只。 1.2 造模方法及标本制作 雏鸭喂养1周后,分成2组:感染组每只鸭自胫静脉注射DHBV阳性血清     

用分子杂交方法研究鸭乙肝病毒感染和鸭肝病

嗜肝 DNA 病毒感染同肝炎、肝硬化和肝癌的相关关系是肝病学中的重大课题。除了 HBV 感染同人类肝病和肝癌的发生有关之外,一些动物嗜肝 DNA 病毒也有类似性。尽管 WHV、GSHV 和 DHBV 有类似于 HBV的形态、结构以及都能造成长期持续性感染,但 WHV 感染的土拔鼠和 GSHV 感染的金花鼠,两者的肝病病理学改变有显著差     

四组肝病科研题论文27篇作成果鉴定

白求恩医科大学肝病研究所创建人叶维法教授九年前与日本千叶大学医学部、美国Fox Chase癌肿研究中心协作研究鸭乙型肝炎病毒DHBV及其所致肝病,科研论文3篇在日本美国医学杂志发表后,该所五年来又对DHBV及肝病的细胞免疫学、超微病理学及分子生物学研究论文6篇,已于去年7月请南北各地专家举行鉴定会,评为国内先进水平及国际水平成果(其中3篇已在国外发表,3篇在国内发表)。近又完成国家自然科学基金研究题DHBV-DNA在肝癌细胞内整合的研究论文。该所十年来另一组肝病激素代谢研究包括脑下垂体、甲状腺、肾上腺、胰腺及性腺的论文10篇,均已在国内外发表,近作成果书面鉴定。     

感染鸭乙型肝炎病毒鸭外周血CD4~+和CD8~+T淋巴细胞水平变化

目的了解实验感染鸭乙型肝炎I型病毒(DHBV)的实验鸭外周血CD4+T和CD8+T淋巴细胞数变化及意义。方法采用经外周静脉注射含DHBV血清制备感染鸭,应用流式细胞仪检测感染DHBV实验鸭外周血CD4+T和CD8+T淋巴细胞数。结果在感染DHBV 7日后,实验鸭血清HBs Ag、鸭HBe Ag和抗-鸭HBc均阳性,说明感染成功,感染动物肝功能损害明显,血清ALT、AST水平急剧升高,与健康对照组比,差异显著(P0.01);感染动物外周血CD4+T细胞和CD8+T细胞分别为(38.41±9.59)%和(23.80±6.44)%,均显著高于对照组[分别为(23.06±12.30)%和(17.65±10.83)%,P0.01]。结论当HBV侵入机体时就会激发细胞免疫反应,大量的CD4+T和CD8+T细胞被释放入血,参与病毒清除和肝损伤过程。     

《叶维法教授肝病科研论文纪念选集》一书近将出版

国际肝病学术交流大会前任会长、白求恩医科大学肝病研究所创建人、名誉所长叶维法教授历年来曾在中国、日本、美国、德国及澳大利亚各种医学刊物发表内科消化系及内分泌代谢科研论文八十余篇,本书系将他所写有关肝病论文65篇汇编而成,其中包括他与外国科学家协作论文3篇,鸭乙肝病毒DHBV及其相关肝病的分子生物学、细胞免疫学及超微病理学     

广西麻鸭乙型肝炎感染病毒动物模型的实验研究

目的探讨广西麻鸭作为乙型肝炎病毒感染动物模型的可能性。方法应用广西1 d龄雏麻鸭经腹腔感染鸭乙型肝炎病毒(DHBV),13 d后采用实时荧光定量PCR法检测麻鸭血清DHBV含量,筛选出DHBV强阳性鸭。结果共检测148份麻鸭血清标本,其中DHBV阳性标本136份,阳性率为91.9%。结论广西麻鸭可作为乙型肝炎病毒感染动物模型。实时荧光定量PCR法检测DHBV敏感性较高,重复性好,可用于DHBV检测。     

拉米夫定联合泛昔洛韦抗鸭乙型肝炎病毒的实验研究

观察核苷酸类似物拉米夫定联合泛昔洛韦体内抗鸭乙型肝炎病毒（DHBV）的作用。方法 采用重庆麻鸭乙型肝炎动物模型,用拉米夫定联合泛昔洛韦口服治疗4周,停药观察1周,检测用药前后血清中的DHBV DNA、DHBsAg及血清转氨酶（ALT、AST）、肝组织HE染色病理。并以单用拉米夫定、泛昔洛韦、阿昔洛韦作对照。结果 拉米夫定联合泛昔洛韦用药后能使血清中DHBV DNA含量总体水平显著降低（P＜0．01）,停药1周后DHBV DNA较用药4周时DHBV DNA含量回升现象不明显。用药前后清血DHBsAg的吸光度值（490nm)的变化与DNA含量改变相似;此外,肝脏病理检查及治疗4周、停药1周后血清转氨酶检测未发现联合用药对鸭肝组织有明显的毒性损害。结论 拉米夫定联合泛昔洛韦连续用药4周在鸭体内有抗鸭乙型肝炎病毒的作用,且停药后DHBV DNA无明显“反跳”,二者用药有协同作用。