补肾化瘀方对宫腔粘连子宫内膜细胞生长周期及MMP-9的影响

目的:研究家兔补肾化瘀方含药血清对宫腔粘连子宫内膜基质细胞的生长周期及MMP-9因子的影响,探讨其部分作用机制。方法:选取宫腔粘连患者子宫内膜组织,制备宫腔粘连子宫内膜基质细胞模型。将家兔分为中药高、中、低剂量组及西药补佳乐组、空白组5组,用不同浓度补肾化瘀中药以及西药补佳乐灌胃7d,心脏采血并取含药血清,用家兔含药血清干预细胞模型,应用流式细胞检测仪检测细胞周期,ELISA法检测MMP-9因子的表达。结果:各组家兔含药血清作用于宫腔粘连患者子宫内膜基质细胞模型24h后,与空白组比较,各给药组的增殖指数(PI)和MMP-9含量均增高,凋亡指数(API)均降低,S期细胞百分比均增高,差异有统计学意义(P0.01)。与西药组比较,中药各组PI增高,API降低,S期细胞百分比增高,中药中、低剂量组MMP-9表达减少,差异有统计学意义(P0.01);但中药高剂量组MMP-9表达与西药组差异无统计学意义(P0.05)。与中药中剂量组比较,中药高剂量组MMP-9表达增多,PI增高,API降低,S期细胞百分比增高,中药低剂量组PI降低,API增高,差异均有统计学意义(P0.01);中药中、低剂量组的S期细胞百分比差异无统计学意义(P0.05)。与中药低剂量组比较,中药高、中剂量组与西药组MMP-9表达增多,差异均具有统计学意义(P0.01)。结论:含有补肾化瘀方的家兔含药血清可以提高宫腔粘连子宫内膜基质细胞中MMP-9因子的水平,促进宫腔粘连子宫内膜基质细胞的增殖,并降低其凋亡,不同浓度的补肾化瘀方对于宫腔粘连子宫内膜基质细胞的影响也有区别。     

Study on the Effect and Mechanism of Bushen Huayu Recipe(补肾化瘀方)on Endometrial Fibrosis in Rats with Uterine Adhesion Based on TGF-β1/Smad Pathway

目的:观察补肾化瘀方对宫腔粘连(IUA)大鼠子宫内膜纤维化的改善作用,探究其作用机制.方法:采取机械+感染双重损伤法建立IUA大鼠模型,将造模大鼠随机分为模型组、补肾化瘀方组、补肾化瘀方+SRI-011381组、SRI-011381组,每组15只.另取15只大鼠作为假手术组.药物治疗21d后,观察大鼠子宫形态,HE染色观察子宫组织病理变化,计数子宫内膜腺体数量,Masson染色观察纤维化情况,ELISA试剂盒检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)的水平,qRT-PCR检测子宫组织转化生长因子-β1(TGF-β1) mRNA、Smad3 mRNA、Smad4 mRNA和Smad7 mRNA表达水平,Western blotting法测定TGF-β1、Smad3、Smad4、Smad7、p-Smad3、p-Smad4、p-Smad7水平.结果:与假手术组比较,模型组大鼠子宫组织增粗,腺体数量减少,纤维化面积增加,血清炎症因子水平升高,TGF-β1 mRNA、Smad3 mRNA、Smad4 mRNA表达及Smad3、Smad4磷酸化增加,Smad7 mRNA表达及磷酸化减少,差异均有统计学意义(P＜0.05).与模型组比较,补肾化瘀方组大鼠子宫腺体数量增加,纤维化面积减少,血清炎症因子水平降低,TGF-β1 mRNA、Smad3 mRNA、Smad4 mRNA表达及Smad3、Smad4磷酸化减少,Smad7 mRNA表达及磷酸化增加,差异均有统计学意义(P＜0.05).SRI-011381可抑制补肾化瘀方的作用,促进纤维化,进一步激活TGF-β1/Smad通路(P＜0.05).结论:补肾化瘀方对IUA大鼠子宫内膜纤维化有改善作用,其机制可能与调节TGF-β1/Smad通路有关.     

补肾活血方联合补佳乐对宫腔粘连大鼠YAP1/TGF-β1信号通路的影响

目的:探讨补肾活血方联合补佳乐对宫腔粘连大鼠的疗效及机制。方法:将40只SD雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、中药组(补肾活血方)、西药组(补佳乐)、中药+西药组(补肾活血方+补佳乐),每组8只。应用双重感染建立宫腔粘连模型后,灌胃给药4周,HE染色观察子宫内膜病理变化; Masson染色观察子宫内膜纤维化; 免疫组化检测子宫内膜Yes 相关蛋白1(YAP1)及转化生长因子-β₁(TGF-β₁)蛋白表达。最后将每组剩余大鼠与雄鼠合笼,7 d后记录胚胎孕囊数。结果:与模型组相比,中药+西药组的内膜厚度和腺体数明显改善(P<0.05)。与模型组相比,中药组、西药组、中药+西药组纤维化明显减轻(P<0.05),而与西药组或中药组相比,中药+西药组纤维化程度显著降低(P<0.05)。与模型组相比,中药组、中药+西药组YAP1蛋白表达明显降低(P<0.05); 同西药组或中药组相比,中药+西药组子宫内膜YAP1蛋白表达明显降低(P<0.05)。与模型组相比,中药+西药组TGF-β₁蛋白表达明显减少(P<0.05); 同西药组相比,中药+西药组TGF-β₁蛋白表达量减少(P<0.05)。与模型组、中药组、西药组相比,中药+西药组子宫孕囊数明显增多(P<0.05)。结论:补肾活血方联合补佳乐能够有效抑制大鼠宫腔粘连,减轻子宫内膜纤维化,改善妊娠结局,其作用机制可能与调控YAP1/TGF-β₁信号通路有关。     

补肾活血中药对薄型子宫内膜大鼠子宫内膜干细胞标志物的影响

目的探讨补肾活血中药对薄型子宫内膜大鼠子宫内膜干细胞标志物的影响。方法取处于动情期的雌性大鼠36只随机分为正常对照组、模型组、补佳乐组以及补肾活血中药高、中、低剂量组。除正常对照组外,其余各组大鼠建立肾虚血瘀薄型子宫内膜模型。正常对照组灌服蒸馏水,模型组建立模型后灌服蒸馏水,补佳乐组建立模型后灌服补佳乐0.3 mg/(kg·d),补肾活血中药高、中、低剂量组建立模型后分别灌服补肾活血中药8.64、4.32、2.16 mg/kg。经过3个动情周期后,处死大鼠,取材。免疫组织化学检测活化β-catenin蛋白的表达、RT-PRC检测Oct4基因表达以及Wertern blot法检测ABCG2蛋白的表达。结果 1)活化β-catenin蛋白的表达:模型组较对照组极显著降低(P0.001),给药后各组β-catenin不同程度增加,低剂量组较模型组有显著性差异(P0.05),中剂量组、高剂量组、补佳乐组与模型组有极显著性差异(P0.001)。2)Oct4基因的表达:模型组较对照组极显著降低(P0.001),给药后各组OCT4表达量不同程度增加,其中低剂量、中剂量与模型组无显著性差异,高剂量与模型组有极显著性差异(P0.001),补佳乐组与模型组有显著性差异(P0.05)。3)ABCG2蛋白的表达:模型组较对照组极显著降低(P0.001),给药后各组ABCG2表达量不同程度增加,其中低剂量与模型组无显著性差异,中剂量组与模型组有显著性差异(P0.05),高剂量、补佳乐组与模型组有极显著性差异(P0.001)。结论补肾活血中药可以不同程度的增加β-catenin蛋白、OCT4基因及ABCG2蛋白的表达。     

补肾化瘀法治疗宫腔粘连术后及其对局部TGF-β1和CTGF表达的影响

目的观察总结补肾化瘀法用于宫腔粘连术后治疗的临床疗效,并探讨其对子宫内膜转化生长因子-β1 (TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)水平的影响。方法将120例符合病例纳入标准的患者按1∶1∶1的比例随机分为试验组、对照A组、对照B组,每组各40例。3组患者均行宫腔粘连分离术。术后治疗:试验组予补肾化瘀方口服;对照A组予雌孕激素序贯治疗;对照B组宫内放置节育环治疗。疗程均为3个月经周期。结果总体疗效及中医证候评分试验组明显优于对照组;3组治疗后子宫内膜TGF-β1和CTGF的表达均较治疗前下降,试验组下降明显优于对照组。结论补肾化瘀法用于宫腔粘连术后患者的治疗效果显著,其作用机理与子宫内膜TGF-β1和CTGF水平表达的降低相关。     

泽丹冲剂对盆腔炎性大鼠子宫TGF-β_1、Smad_3的影响研究

目的:研究泽丹冲剂对慢性盆腔炎大鼠子宫组织TGF-β1、Smad3表达的影响,阐明以利湿化瘀法为主的泽丹冲剂作用机制。方法:大鼠双侧宫腔内注射大肠杆菌混悬液(浓度约为6×106)0.2mL建立慢性盆腔炎大鼠模型。造模成功后,随机分成泽丹冲剂高、中(8g·kg、4g·kg)剂量组,妇乐颗粒组(2.5g·kg),模型组和正常组。灌胃给药21d后,采用Western Blot法检测大鼠子宫组织TGF-β1、Smad3表达。结果:与模型组比较,泽中、高剂量组,妇乐组子宫组织TGF-β1、Smad3表达均明显降低(P0.05),但泽中、高剂量组优于妇乐组(P0.05)。结论:泽丹冲剂通过降低TGF-β1、Smad3的异常高表达,减轻慢性盆腔炎大鼠子宫组织的纤维化及粘连,因而对慢性盆腔炎具有良好的治疗作用。     

补肾化瘀泄浊方通过调控细胞外调节蛋白激酶信号通路阻抑人肾小管上皮细胞间充质转化的机制研究

目的:观察补肾化瘀泄浊方对转化生长因子(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)的上皮间充质转化(EMT)及Smad2/3的影响,探讨其阻抑HK-2 EMT的机制。方法:采用TGF-β1诱导建立HK-2 EMT模型,Western blot检测TGF-β1对EMT标记蛋白、Smad2/3及细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号蛋白的影响。予不同剂量补肾化瘀泄浊方进行干预,Real-Time PCR检测EMT相关基因mRNA的表达,Western blot检测EMT相关蛋白、Smad2/3及ERK的表达;与ERK通路抑制剂PD98059作比较,观察补肾化瘀泄浊方通过ERK信号通路干预HK-2 EMT的作用。结果:与空白组比较,模型组HK-2细胞出现EMT特有的“纺锤形”结构,EMT标记α-SMA、Vimentin蛋白和mRNA表达升高(P<0.05),E-cadherin蛋白和mRNA表达降低(P<0.05),且磷酸化ERK及Smad2/3蛋白水平显著升高(P<0.05)。与模型组比较,补肾化瘀泄浊方各剂量组HK-2细胞EMT样形态改善,α-SMA、Vimentin蛋白和mRNA表达降低(P<0.05),E-cadherin蛋白和mRNA表达升高(P<0.05),磷酸化ERK及Smad2/3蛋白水平下降(P<0.05),且剂量越高作用越明显。与模型组比较,ERK通路抑制剂能显著下调α-SMA、Vimentin、磷酸化Smad2/3蛋白水平(P<0.05);补肾化瘀泄浊方高剂量具有与ERK通路抑制剂类似的作用。结论:TGF-β1可诱导HK-2 EMT,上调ERK及Smad2/3磷酸化水平,补肾化瘀泄浊方很可能通过抑制ERK通路活化,下调Smad2/3磷酸化水平,阻抑HK-2 EMT。     

补肾调经方对PCOS模型大鼠性激素、卵巢形态及TGF-β_1/smad通路的影响

目的探讨补肾调经方对多囊卵巢综合征(PCOS)模型大鼠性激素、卵巢形态及转化生长因子-β_1(TGF-β_1)/smad通路的影响。方法将60只雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、补肾调经方低剂量组、补肾调经方中剂量组、补肾调经方高剂量组与炔雌醇环丙孕酮组,每组10只。除空白组外,其余组大鼠采用丙酸睾酮+注射用绒促性素建立PCOS模型。造模成功后,补肾调经方低、中、高剂量组给予0.264 g/(kg·d)、0.528 g/(kg·d)、1.056 g/(kg·d)的补肾调经方溶液灌胃,炔雌醇环丙孕酮组给予临床剂量1倍的炔雌醇环丙孕酮溶液灌胃,空白组、模型组给予等体积蒸馏水灌胃,均1次/d,连续12 d。末次灌胃结束后次日,采用放射免疫法测定各组大鼠血清黄体生成激素(LH)、睾酮(T)、促卵泡成熟激素(FSH)、雌二醇(E_2)水平;光镜下观察各组大鼠卵巢组织形态学变化,并计算卵泡数目;蛋白免疫印迹法检测各组大鼠卵巢组织中TGF-β_1、Smad3、Smad4和Smad 7蛋白表达情况。结果与模型组比较,补肾调经方中、高剂量组与炔雌醇环丙孕酮组大鼠血清LH、T水平及卵巢组织中Smad 7蛋白表达量均明显降低,血清FSH、E_2水平及卵巢组织中TGF-β_1、Smad3、Smad4蛋白表达量均明显升高,卵巢质量减轻,卵泡数目减少,差异均有统计学意义(P均0.05);与炔雌醇环丙孕酮组比较,补肾调经方高剂量组大鼠血清LH、T水平及卵巢组织中Smad 7蛋白表达量更低,血清FSH、E_2水平及卵巢组织中TGF-β_1、Smad3、Smad4蛋白表达量更高,卵巢质量更轻,卵泡数目更少,差异均有统计学意义(P均0.05)。补肾调经方各剂量组与炔雌醇环丙孕酮组大鼠卵巢病理性改变均呈不同程度改善,以补肾调经方高剂量组改善最为明显。结论补肾调经方可有效调节PCOS大鼠性激素分泌,促进卵泡发育和排卵,能够改善卵巢形态,机制可能与调控TGF-β_1/Smad信号通路的激活有关。     

补肾活血方联合宫腔灌注对重度宫腔粘连患者子宫内膜容受性及妊娠的影响

目的:观察补肾活血方联合宫腔灌注对重度宫腔粘连(IUA)患者子宫内膜容受性及妊娠的影响。方法:选取本院收治的重度IUA患者127例,所有患者均行宫腔粘连电切术加宫腔球囊置入术,对照组给予宫腔灌注配合口服雌孕激素治疗,观察组给予宫腔灌注结合口服补肾活血方治疗,2组均连续治疗3个月经周期。对比2组子宫内膜情况、子宫动脉血流参数、子宫内膜血流参数、Smad表达及血清相关细胞因子水平,记录妊娠情况。结果:观察组排卵日子宫内膜厚度及Glycodelin-A含量均大于对照组(P 0.05)。观察组治疗后子宫动脉阻力指数(RI)、搏动指数(PI)均低于对照组(P 0.05),子宫内膜血流指数(FI)、血管化指数(VI)、血管化血流指数(VFI)均高于对照组(P 0.01)。治疗后,2组Smad2及Smad3表达水平均较术中下降(P 0.05);观察组Smad2及Smad3表达水平均低于对照组(P 0.05)。治疗后,2组纤溶酶原激活因子(uPA)表达水平均较术中上升(P 0.05),纤溶酶原抑制因子-1 (PAI-1)、去整合素金属蛋白酶(ADAM) 15及ADAM17表达水平均较术中下降(P 0.05);观察组uPA表达水平高于对照组(P 0.05),PAI-1、ADAM15及ADAM17表达水平均低于对照组(P 0.05)。治疗后,2组转化生长因子-β1 (TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、结缔组织生长因子(CTGF)、血管内皮生长因子(VEGF)及胰岛素样生长因子-1 (IGF-1)水平均较术前下降(P 0.05);观察组TGF-β1、VEGF、CTGF、IGF-1及TNF-α水平均低于对照组(P 0.05)。观察组妊娠成功率69.57%,高于对照组的23.81%(P 0.01)。结论:补肾活血方联合宫腔灌注可有效改善重度IUA患者术后子宫内膜容受性,提高妊娠率。     

益气化瘀方对子宫复旧不全大鼠子宫内膜细胞凋亡与产后子宫内膜增殖影响研究

目的:通过对比分析益气化瘀方对子宫复旧不全SD级大鼠子宫内膜细胞凋亡及子宫内膜增殖影响的研究,为孕妇产后疾病的治理提供理论依据。方法:选取试验用无特定病原体级实验动物(SPF级动物)SD大鼠为研究对象,按照实验需求,分为5组,除去空白组以外的四组进行子宫内接种大肠杆菌,进行造模,然后给药,观察大鼠子宫内膜细胞凋亡率、大鼠子宫内膜细胞凋亡因子Bcl-2和Bax的表达情况。结果:(1)与模型组对比,新生化颗粒组、益气化瘀方低剂量组和益气化瘀方高剂量组大鼠子宫内膜凋亡率降低,P0.05;与新生化颗粒组比较,益气化瘀方高剂量组大鼠子宫内膜细胞凋亡率无统计学差异,P0.05,益气化瘀方低剂量组大鼠子宫内膜凋亡率升高,P0.05;与空白组比较,模型组大鼠子宫内膜凋亡率显著升高,P0.05。(2)与模型组对比,新生化颗粒组、益气化瘀方低剂量组和益气化瘀方高剂量组Bcl-2蛋白表达增加,Bax表达减少,P0.05;与新生化颗粒组比较,益气化瘀方高剂量组Bcl-2蛋白表达和Bax表达无统计学差异,P0.05,益气化瘀方低剂量组Bcl-2蛋白表达减少,Bax表达增加,P0.05;与空白组比较,模型组Bcl-2蛋白表达明显下降,Bax表达增加,P0.05。结论:益气化瘀方能通过调节使Bax蛋白表降低,使Bcl-2蛋白表达增加,从而降低子宫内膜细胞凋亡率,促进产后子宫增殖恢复。     

参蛤益肺胶囊调控慢性阻塞性肺疾病大鼠TGF-β1/Smad信号通路的研究

目的:观察参蛤益肺胶囊对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary diseases,COPD)大鼠模型TGF-β1/Smad信号通路的影响。方法:随机取10只大鼠为空白组,另40只大鼠为造模组,采用烟熏联合肺炎克雷伯氏杆菌感染的方法建立COPD稳定期大鼠模型。将造模成功的38只大鼠按照雌雄各半的原则随机分为模型组8只、参蛤益肺胶囊低剂量组10只、参蛤益肺胶囊高剂量组10只及茶碱组10只,空白组、模型组以蒸馏水灌胃,各给药组则灌以相应药物。检测各组大鼠血清TGF-β1水平,气道组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的基因表达及TGF-β1、Smad3、Smad7的蛋白表达。结果:实验12周结束后,茶碱组、参蛤益肺胶囊高剂量组血清TGF-β1含量低于参蛤益肺胶囊低剂量组(P 0. 05)。茶碱组、参蛤益肺胶囊高剂量组TGF-β1、Smad3的基因表达低于参蛤益肺胶囊低剂量组(P 0. 05);参蛤益肺胶囊高剂量组TGF-β1、Smad3的蛋白表达低于参蛤益肺胶囊低剂量组、茶碱组(P 0. 05),模型组Smad7的基因及蛋白表达低于其余各组(P 0. 05),茶碱组、参蛤益肺胶囊高剂量组Smad7的基因表达高于参蛤益肺胶囊低剂量组(P 0. 05)。实验18周结束后,茶碱组、参蛤益肺胶囊低剂量组、参蛤益肺胶囊高剂量组血清TGF-β1含量比较,差异无统计学意义(P 0. 05)。模型组Smad7的基因及蛋白表达低于其余各组,参蛤益肺胶囊高剂量组Smad7蛋白表达低于茶碱组(P 0. 05)。结论:参蛤益肺胶囊对TGF-β1/Smads信号通路有调控作用,可减少TGF-β1、Smad2、Smad3的表达,增加Smad7的基因表达,减轻气道重塑的程度,延缓COPD疾病发展,参蛤益肺胶囊常规高剂量在抑制Smad2表达方面疗效更佳。     

盆舒颗粒对宫腔黏连模型大鼠子宫内膜TGF-β 1、Smad3的影响

目的:观察盆舒颗粒对宫腔黏连模型大鼠子宫内膜转化生长因子-β1(TGF-β1)、信号传导蛋白(Smad3)的影响。方法:将50只成年雌性SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药治疗组、TGF-β1抗体干预组、TGF-β1抗体干预+中药治疗组,每组10只,采用自制刮宫勺刮伤大鼠子宫内膜制作宫腔黏连模型,各组分别给予相应的干预措施。在干预第15天摘取双侧子宫,观察各组大鼠宫腔组织损伤病变情况,并采用免疫组化法检测各组大鼠子宫组织中TGF-β1,Smad3含量。结果:模型组与正常组95%可信区间无重叠,说明有显著性差异;模型组与中药治疗组、TGF-β1抗体干预组、TGF-β1抗体干预+中药治疗组95%可信区间均无重叠,说明有显著性差异;中药治疗组与TGF-β1抗体干预组、TGF-β1抗体干预+中药治疗组95%可信区间重叠,说明无显著性差异。TGF-β1抗体干预+中药治疗组疗效最好。与正常组比较,模型组大鼠子宫内膜上皮细胞TGF-β1、Smad3表达显著升高,差异均有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,中药治疗组、TGF-β1抗体干预组、TGF-β1抗体干预+中药治疗组大鼠子宫内膜上皮细胞TGF-β1、Smad3表达显著降低,差异均有统计学意义(P0.05)。中药治疗组、TGF-β1抗体干预组、TGF-β1抗体干预+中药治疗组3组大鼠子宫内膜上皮细胞TGF-β1、Smad3表达之间比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:盆舒颗粒、TGF-β1抗体能改善宫腔黏连模型大鼠子宫病理变化,降低TGF-β1、Smad3表达,具有潜在防治宫腔黏连的作用,二者联合使用作用效果更为显著。     

左、右归丸及其拆方对去卵巢大鼠肾脏TGFβ1/Smad1表达的影响

目的:观察左、右归丸及其拆方对去卵巢大鼠肾脏TGFβ1/Smad1基因与蛋白表达的影响,并探讨补肾法对去卵巢模型大鼠肾脏TGFβ1/Smad1通路的影响。方法:将90只SD雌性大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、补佳乐组、左归丸组、右归丸组、共同药组、滋阴药组、补阳药组。除假手术、空白组外均进行双侧卵巢切除。经12周治疗分别以Q-PCR法、Western blot法检测TGFβ1、TβRⅠ、TβRⅡ、Smad1在肾脏中基因和蛋白的表达。结果:与空白组相比,除假手术组外,TGFβ1、TβRⅠ、TβRⅡ、Smad1 mRNA及蛋白表达降低(P0.01);与模型组比较,各用药组TGFβ1、TβRⅠ、TβRⅡ、Smad1 mRNA及蛋白表达升高(P0.01);与补佳乐组比较,各用药组TGFβ1、TβRⅠ、TβRⅡ、Smad1表达低,其中左归丸组表达较高。结论:左、右归丸及其拆方可影响肾脏中TGFβ1/Smad1基因与蛋白的表达,其中以左归丸改变最为显著。     

活血消异方对子宫内膜异位症盆腔粘连大鼠TGF-β/Smads信号通路相关因子的影响

目的观察活血消异方对子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)盆腔粘连大鼠TGF-β/Smads信号通路相关因子的影响。方法将造模大鼠自体子宫内膜移植于肠系膜上建立EMs盆腔粘连大鼠模型,随机分为模型组(简称C组),术后第1天中药给药组(简称D1组),术后第3天中药给药组(简称D2组),术后第5天中药给药组(简称D3组),术后第1天西药给药组(简称E1组),术后第3天西药给药组(简称E2组),术后第5天西药给药组(简称E3组)。中药组予活血消异方灌胃,西药组予促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)肌肉注射。连续给药28天后,开腹进行盆腔粘连评分,再分别取造模大鼠粘连腹膜组织、空白组(简称A组)和假手术组(简称B组)正常腹膜组织,采用免疫组化、反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)检测腹膜组织中TGF-β1、TGF-β3、Smad3、Smad7蛋白和mRNA表达。结果与B组比较,C组盆腔粘连评分显著升高(P0.05),与C组比较,D1、D2、D3、E1、E2、E3组盆腔粘连评分均显著降低(P0.05);D1、D2组盆腔粘连评分显著低于D3组(P0.05);E1组显著低于E2、E3组(P0.05);C组大鼠TGF-β1、TGFβ3、Smad3、Smad7 mRNA及蛋白表达量显著高于B组(P0.05);D1、D2、D3、E1、E2、E3组TGF-β1、Smad3 mRNA和蛋白表达均显著低于C组(P0.05),TGF-β3mRNA和蛋白表达均高于C组(P0.05),Smad7 mRNA和蛋白表达均与C组相当(P0.05);D1、D2、D3组间TGF-β1、TGF-β3mRNA和蛋白表达量差异有统计学意义(P0.05),E1、E2、E3组间TGF-β3mRNA和蛋白表达量差异有统计学意义(P0.05)。结论 EMs可导致大鼠严重、广泛的盆腔粘连;活血消异方能过调控TGF-β/Smads信号传导通路相关因子的表达,改善EMs盆腔粘连程度,且中药干预越早,改善盆腔粘连程度疗效越显著。     

补肾活血防粘汤对宫腔粘连患者术后TGF-β1、CTGF表达的影响

目的:研究补肾活血防粘汤对中、重度宫腔粘连分离术(IUA)后患者宫腔粘连组织中TGF-β1、CTGF表达的影响,探讨补肾活血防粘汤防治中、重度IUA的可能作用机制。方法:将90例接受宫腔镜下宫腔粘连分离术(TCRA)的患者随机分成对照组、西药组及治疗组,对照组行TCRA后立即宫腔内留置Foley导管并注入2mL手术防粘连液;西药组在对照组基础上予补佳乐、黄体酮胶囊行人工周期治疗;治疗组在对照组基础上配合口服中药补肾活血防粘连汤,连续治疗3个月经周期后复查宫腔镜,取各组患者宫腔内膜组织行HE染色,免疫组化法检测TGF-β1、CTGF的表达量。结果:对照组TGF-β1、CTGF的表达量明显高于西药组和治疗组(P0.05),而治疗组中TGF-β1、CTGF的表达量明显低于西药组(P0.05)和对照组(P0.01)。结论:补肾活血防粘汤可有效预防TCRA后宫腔再次粘连,其机制可能与抑制TGF-β1来下调CTGF表达,延缓纤维化的形成有关。     

补肾活血方对卵巢早衰小鼠颗粒细胞TGF-β1、TGF-βRII、Smad2/3表达的影响

目的探索补肾活血方(紫石英、补骨脂、菟丝子等)对免疫性卵巢早衰(POF)小鼠卵泡壁颗粒细胞转化生长因子(TGF)-β1、TGF-βRII、Smad2/3蛋白表达的影响。方法 Balb/c雌性小鼠皮下多点注射小鼠透明带3建立免疫性POF模型,POF小鼠分成模型组,阳性组(戊酸雌二醇)和补肾活血方低、中、高剂量组。干预30 d后,卵巢组织作苏木精-伊红(HE)染色,免疫组化法与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测卵泡壁颗粒细胞和卵巢组织TGF-β1、TGF-βRII、Smad2/3的蛋白表达。结果与模型组相比,补肾活血方各剂量组、阳性组卵巢成熟卵泡数目明显增多,闭锁卵泡数目减少。卵泡壁颗粒细胞和卵巢组织TGF-β1、TGF-βRII、Smad2/3蛋白表达在补肾活血方各剂量组、阳性组中明显高于在模型组中(P0.05)。结论补肾活血方能通过上调颗粒细胞TGF-β1、TGF-βRII、Smad2/3的蛋白表达改善卵巢功能。     

益肾化瘀方对单侧输尿管结扎大鼠转化生长因子β1、Smad7信号蛋白表达的影响

目的探讨益肾化瘀方抗肾间质纤维化的可能作用机制。方法 108只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、缬沙坦组和益肾化瘀方高、中、低剂量组,每组18只。除假手术组外其余大鼠采用单侧输尿管结扎方法建立肾间质纤维化模型,造模次日益肾化瘀方高、中、低剂量组分别予益肾化瘀方浓缩液32、16、8 g/(kg·d)灌胃,缬沙坦组予缬沙坦溶液13.3 mg/(kg·d)灌胃,假手术组、模型组予生理盐水20 ml/(kg·d)灌胃,各组均连续灌胃28天。分别于造模后第7、14、28天观察大鼠肾组织病理改变,计算肾间质纤维化面积,检测大鼠肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad7信号蛋白的表达。结果模型组大鼠出现肾间质炎细胞浸润和梭形核细胞增生,伴局灶性肾间质纤维化,各治疗组肾脏病理表现均有不同程度的减轻,其中益肾化瘀方高剂量组病理改变与缬沙坦组相当。与同时间点假手术组比较,其余各组大鼠肾间质纤维化面积、TGF-β1升高,Smad7信号蛋白减少(P0.01);与同时间点模型组比较,除益肾化瘀方低剂量组外,其余各治疗组大鼠肾间质纤维化面积、TGF-β1降低,Smad7信号蛋白增加(P0.05或P0.01),并且以益肾化瘀方高剂量组和缬沙坦组改善最明显(P0.05)。结论益肾化瘀方可能通过抑制大鼠肾组织中TGF-β1的高表达,上调Smad7的表达,从而减轻肾间质纤维化。     

宣肺化瘀方对肺纤维化大鼠肺组织TGF-β1/Smad表达的影响

目的观察宣肺化瘀方对肺纤维化大鼠肺组织TGF-β1/Smad2表达的影响。方法将健康雄性Wistar大鼠(SPF级)60只,随机分成6组,对照组、模型组、醋酸泼尼松(0.167 mg/kg)组及宣肺化瘀方高、中、低剂量(14.38、7.19、3.60 g/kg)组,每组10只。经鼻滴入博莱霉素7μg/g(150μL)建立肺纤维化动物模型。各给药组于造模8 h后开始分别ig醋酸泼尼松或宣肺化瘀方,每日1次。各组大鼠在造模28 d后取材。对肺组织行HE染色和天狼星红染色,光镜下观察肺泡炎和肺纤维化改变;采用碱性水解法测定肺组织中羟脯氨酸(Hyp)的量;应用免疫组织化学法测定大鼠肺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Smad4、Smad7表达;应用Western blotting方法检测转化生长因子βⅡ型受体(TGF-βRⅡ)、Smad2、p-Smad2、Smad7的蛋白表达水平。结果模型组肺泡结构严重破坏,肺间质增生,炎细胞浸润和胶原纤维增生。与对照组比较,模型组Hyp水平、胶原阳性染色面积比值明显升高;与模型组相比,宣肺化瘀方3个剂量组和醋酸泼尼松组肺泡间隔胶原纤维表达明显减少,Hyp的量显著下降,其中,宣肺化瘀方高剂量组比低、中剂量组胶原纤维表达更少,Hyp的量更低。宣肺化瘀方组与模型组相比,TGF-βRⅡ、Smad2、p-Smad2、Smad4、α-SMA蛋白含量显著降低,而Smad7蛋白表达明显升高。结论宣肺化瘀方能有效地防治肺纤维化,其作用机制可能是通过调控TGF-β/Smad信号通路,抑制α-SMA的过度表达,进而减少胶原纤维的形成。     

补肾通络方对肺纤维化大鼠肺组织TGF-β1/Smads通路的影响

目的:观察补肾通络方对博莱霉素所致肺纤维化大鼠肺组织病理及转化生长因子β_1(TGF-β_1)/Smads通路蛋白的影响,揭示该方抑制肺纤维化的作用机制。方法:48只清洁级雄性SD大鼠随机分为正常组8只,模型组、补肾通络低、高剂量组、氢化可的松琥珀酸钠组各10只。除正常组外,各组均采用博莱霉素法诱导肺纤维化制备模型。从术后第3天开始,补肾通络高、低剂量组分别给予14. 2,7. 1 g·kg~(-1)补肾通络方药灌胃,氢化可的松琥珀酸钠组给予4. 58 g·kg-1氢化可的松琥珀酸钠溶液腹腔注射,正常组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,共治疗28 d。大鼠处死后测定血清羟脯氨酸(HYP),透明质酸(HA),层粘连蛋白(LN)的含量,取肺组织,采用苏木精-伊红染色法(HE)及马松(Masson)三色染色法观察肺组织病理形态变化,采用实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)观察各组大鼠肺组织TGF-β_1,Smad2,Smad3,Smad7等mRNA和蛋白表达变化。结果:与正常组相比,模型组大鼠肺纤维化明显,HYP,HA,LN含量升高(P 0. 05,P 0. 01),肺组织TGF-β_1,Smad2,Smad3蛋白和mRNA表达升高(P 0. 05,P 0. 01),Smad7蛋白和mRNA表达降低(P 0. 01);与模型组相比,补肾通络高剂量组血清HYP,HA,LN的含量下降(P 0. 05,P 0. 01)肺组织TGF-β_1,Smad2,Smad3蛋白和mRNA表达降低(P 0. 05),Smad7蛋白和mRNA表达升高(P 0. 01)。结论:补肾通络方可有效改善肺纤维化的病变进程,其机制可能与调节TGF-β_1/Smads通路有关。     

补肾调冲方对PCOS患者子宫内膜保护作用研究

[目的]探讨补肾调冲方对多囊卵巢综合征患者子宫内膜的保护作用。[方法]诊刮获取多囊卵巢综合征患者的子宫内膜组织,体外混合培养子宫内膜细胞,分别予以补肾调冲方、孕酮、17β-雌二醇干预子宫内膜细胞,并设置空白对照组。利用透射电镜观察子宫内膜细胞超微结构;ELISA法检测子宫内膜细胞中孕激素受体的表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot检测转化生长因子(TGF-β1)、Smad4 mRNA及蛋白的表达。[结果]药物干预后经透射电镜观察发现,与雌激素组、空白对照组相比,实验组、孕激素组细胞表面微绒毛数量增多,有分支,线粒体体积增大,粗面内质网扩张,高尔基体肿胀;实验组子宫内膜细胞中孕激素受体表达低于雌激素组、空白对照组,差异有统计学意义(P0.05);与雌激素组、空白对照组相比,实验组TGF-β1、Smad4 mRNA及蛋白表达增多,差异有统计学意义(P0.05)。[结论]补肾调冲方能够促进多囊卵巢综合征患者子宫内膜由增生期向分泌期转变。