雌激素对大脑皮质细胞的神经保护作用

目的观察雌激素对体外培养的大鼠大脑皮质细胞在发生缺血缺氧损伤时的保护作用及对凋亡基因 Bcl- 2和 Bax表达的影响. 方法原代培养大鼠大脑皮质细胞,将实验分为对照组和雌激素组.对照组给予等体积蒸馏水+ 100 mmol/L谷氨酸,雌激素组给予雌激素 0.1 mmol/L+ 100 mmol/L谷氨酸,作用 24 h透射电镜观察细胞超微结构.免疫组化和 RT- PCR观察 Bcl- 2和 Bax的表达. 结果透射电镜显示雌激素能改善大脑皮质细胞超微结构,抑制凋亡.免疫组化雌激素组 Bcl- 2的阳性细胞数明显增加,而 Bax的蛋白表达则无明显改变. RT- PCR结果雌激素组 Bcl- 2 mRNA的表达为 0.72,较对照组 0.56明显上调,差异有非常显著性意义( P< 0.01). BaxmRNA的表达虽无明显改变,但 Bcl- 2和 Bax的比率二组差异有非常显著性意义,分别为 1.14和 0.86( P< 0.01). 结论雌激素能改善大鼠大脑皮质细胞超微结构,具有神经保护作用.而且能上调抗凋亡基因 Bcl- 2表达,抑制细胞凋亡.     

大剂量硝酸甘油对大鼠离体缺血再灌注心肌细胞凋亡和Bax及Bcl-2的影响

目的：研究硝酸甘油是否对大鼠离体缺血再灌注心肌细胞凋亡和Bcl-2／Bax水平存在直接的影响。方法：实验选用SD大鼠30只，随机分为硝酸甘油组和对照组，每组15只。制备大鼠离体心肌缺血再灌注模型(缺血30min，再灌注120min)在再灌注开始时分别给以大剂量硝酸甘油(15μg／h，以950mL／L乙醇为溶剂)或950mL／L乙醇(3μL／h)。再灌注结束后，将缺血区剪下，制备石蜡切片，采用TUNEL技术检测心肌凋亡，免疫组化技术检测心肌组织的Bcl-2和Bax水平。结果：硝酸甘油组细胞发生凋亡数[(35．2&;#177;6．7)％]明显多于对照组细胞[(5.2&;#177;0．8)％](t=28.1，P&;lt;0.01)。对照组Bcl-2表达(5.7&;#177;1.3)明显强于硝酸甘油组(1．8&;#177;0.8)(t=11．9、P&;lt;0．01)。对照组Bax表达(5.9&;#177;1．3)明显弱于硝酸甘油组(9.1&;#177;1.3)(t=9．2，P&;lt;0．01)。结论：大剂量的硝酸甘油促进了大鼠离体缺血／再灌注心肌细胞凋亡，提高了Bax蛋白的水平，降低了Bcl-2蛋白水平；大剂量硝酸甘油对Bcl-2／Bax的调节可能是其促凋亡的主要机制之一。     

肿瘤坏死因子-α诱导成骨细胞凋亡时Bcl-2和Bax蛋白表达变化

目的：了解成骨细胞凋亡发生机制，观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导大鼠成骨细胞凋亡过程中Bcl-2，Bax蛋白表达变化及意义。方法：以原代培养的SD大鼠颅骨成骨细胞为实验对象，分别用含量为0，10，20，30，40μg／L TNF-α刺激成骨细胞。通过对细胞活性、超微结构变化观察TNF-α对成骨细胞凋亡的诱导作用；同时检测细胞Bcl-2，Bax蛋白表达变化。结果：随刺激含量的加大，成骨细胞的活性逐渐降低，细胞凋亡逐渐增加。TNF-α含量为&;lt;30μg／L时Bax表达呈稳步上升趋势，30～40μg/L时开始下降。Bcl-2表达在含量为10μg／L的时候轻度上升，在20μg／L回复到正常，后随着剂量的加大Bcl-2表达开始明显下降，30～40μg／L时下降非常显著。对于Bax／Bcl-2相对表达强度与细胞死亡率做相关性分析两者呈显著性正相关(n=25，r=0．827，P&;lt;0．001)。结论：蛋白相对比例是决定成骨细胞对TNF-α诱导凋亡的易患性的重要因素。     

实验性大鼠急性脑缺血细胞凋亡与相关蛋白表达的关系

目的：研究大鼠脑缺血再灌注后细胞凋亡及p53，Bcl-2蛋白家族表达的变化，并探讨它们在细胞凋亡中的作用。方法：实验在华北煤炭医学院形态实验室完成。54只大鼠用随机数字表法随机分成3组：脑缺血组(42只)、假手术组(6只)和正常组(6只)。脑缺血组又分为7组：即缺血2h再灌注1，3，6，12，24，48和72h组(n=6)。采用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型，用TUNEL法检测细胞凋亡的变化，用免疫组化法检测p53，Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果：①缺血2h再灌注1h皮质区可见凋亡细胞[(7．83&;#177;1．72)个／高倍视野]，24～48h达高峰[(43．33&;#177;5．20)个／高倍视野，(48．50&;#177;6．25)个／高倍视野]，72h开始下降[(26．67&;#177;3．56)个／高倍视野](P&;lt;0．05，P&;lt;0．01)；缺血2h再灌注1h皮质区可见p53蛋白阳性细胞[(14．35&;#177;1．92)个／高倍视野]，24h达高峰[(48．00&;#177;6．42)个／高倍视野]，48h后开始下降[(31．00&;#177;6．60)个／高倍视野](P&;lt;0．05，P&;lt;0．01)；缺血2h再灌注1h皮质区可见Bcl-2蛋白阳性细胞[(28．62&;#177;6．80)个／高倍视野]，3h达高峰[(56．50&;#177;7．87)个／高倍视野]，6h后开始下降[(45．00&;#177;6．63)个／高倍视野](P&;lt;0．01)；缺血2h再灌注1h皮质区可见Bax蛋白阳性细胞[(45．83&;#177;4．07)个／高倍视野]，24h达高峰[(61．00&;#177;8．88)个／高倍视野]，48h开始逐渐下降[(45．83&;#177;6．49)个／高倍视野](P&;lt;0．05，P&;lt;0．01)。②缺血再灌注后不同时间点细胞凋亡数与p53及Bax蛋白的阳性表达数呈正相关(r=0．843，P&;lt;0．001；r=0．840，P&;lt;0．001)，与Bcl-2蛋白的阳性表达数呈负相关(r=-0．387，P&;lt;0．05)。结论：大鼠脑缺血再灌注后，缺血周边区发生明显的细胞凋亡，同时伴有p53及Bax蛋白表达增加及Bcl-2表达降低，p53及Bax蛋白表达对细胞凋亡起促进作用，而Bcl-2蛋白表达则对细胞凋亡起抑制作用。     

人参皂甙Re对大鼠急性缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关基因蛋白表达的影响

背景：心肌细胞缺血再灌注损伤近来已成为临床研究的热点，但人参及其提取物对急性缺血再灌注损伤后心肌细胞凋亡的作用尚未阐明。目的：观察人参皂甙Re对急性缺血再灌注心肌细胞凋亡及Bcl-2，Bax，Bad和Fas基因蛋白表达的影响，探讨人参皂甙Re抑制心肌细胞凋亡的可能机制。设计：随机对照实验研究。地点、对象和干预：本实验在湖北省武汉市同济医院动物实验中心完成。实验共用Wastar大鼠15只，雌雄不分。按随机数字表法分为假手术组、缺血再灌注组、人参皂甙Re治疗组，每组各5只。建立Wistar鼠缺血再灌注心脏模型。应用原位末端标记法检测心肌凋亡细胞，并进行细胞计数；原位杂交和免疫组化检测Bcl-2mRNA和基因表达产物的蛋白质，通过图像分析系统测量阳性染色区域的平均吸光度值进行量化分析，以观察人参对大鼠心肌缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响及基因表达。主要观察指标：人参皂甙Re治疗与否对急性大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及Bcl-2，Bax，Bad和Fas基因蛋白表达的影响。结果：①假手术组未发现心肌凋亡细胞。缺血再灌注组心肌凋亡细胞数为(134&;#177;46)个／视野，人参皂甙Re治疗组为(91&;#177;19)个／视野，两组间差异有显著性意义(t=4.63，P&;lt;0．01)。②免疫组织化学检测发现缺血再灌注组及人参皂甙Re治疗组Bcl-2，Bax，Bad和Fas基因蛋白的表达较假手术组明显增加(t=2．79，P&;lt;0．05)，人参皂甙Re治疗组bcl-2的表达与缺血再灌注组比较，差异无显著性意义(t=2．67，P&;gt;0.05)，而Bax，Bad，Fas的表达明显下降(t=2．8l，P&;lt;0．05)，人参皂甙Re治疗组Bcl-2／Bad，Bcl-2／Bad，Bcl-2／Fas比值均较假手术组与缺血再灌注组明显增大(t=2．84．P&;lt;0．05)。结论：人参皂甙Re治疗可以抑制急性缺血再灌注诱导的心肌细胞凋亡，其作用机制可能是抑制了促凋亡基因bax，bad，fas的表达，从而使Bcl-2／Bax，Bcl-2／Bad，Bcl-2／Fas比值增大。     

雌激素对血清饥饿诱导成骨细胞凋亡基因表达的影响

目的探讨雌激素对血清饥饿诱导的体外培养大鼠成骨细胞凋亡基因bcl-2、bax、fas表达的影响，为明确雌激素抑制由血清饥饿诱导的大鼠成骨细胞凋亡的机理提供依据。方法新生SD大鼠颅骨第2、3代成骨细胞随机分为对照组、血清饥饿组、血清饥饿＋雌激素组3组，每组细胞分别培养1d、2d、3d、5d、7d、14d后做免疫组化染色，计数各组Bcl-2、Bax、Fas阳性细胞率。结果对照组成骨细胞有少量Bcl-2、Bax、Fas表达；与对照组比较，血清饥饿组细胞Bax和Fas表达升高（P〈0．05），高峰期为14d，Bcl-2的表达无明显变化（P〉0．05）；与血清饥饿组比较，血清饥饿＋雌激素组细胞Bax和Fas表达降低（P〈0．05），高峰期仍为14d，Bcl-2的表达升高（P〈0．05）。结论血清饥饿使成骨细胞Bax和Fas表达增强，而对Bcl-2的表达无明显影响；雌激素能抑制血清饥饿增强成骨细胞Bax和Fas表达的作用，并使Bcl-2的表达增加，从而抑制血清饥饿诱导的大鼠成骨细胞凋亡。     

局灶脑缺血再灌注期亚低温对神经元凋亡及Bcl－2和Bax表达的影响

目的：研究再灌注期实施亚低温治疗对大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)后神经元细胞的凋亡及Bcl-2，Bax基因表达的影响。方法：采用Longa线栓法制作MCAO模型，模型成功后分别进行缺血期3h、再灌注期3h、缺血期至再灌注期6h的亚低温治疗。再灌注后24h断头取脑，连续切片作TUNEL染色及Bcl-2，Bax免疫组化染色。结果：①与对照组的Bcl-2阳性细胞百分率[(19．79&;#177;0。92)％]相比，缺血期亚低温3h组[(23．04&;#177;3．76)％]和缺血亚低温至再灌亚低温6h组[(25．47&;#177;2．03)％]的Bcl-2阳性细胞率增加(q=4．19,0．O1&;lt;P&;lt;O．05；q=7．17，P&;lt;0．01)。比较单纯再灌亚低温3h组[(22．21&;#177;2．25)％]与缺血亚低温至再灌亚低温6h组的Bcl-2阳性细胞百分率，前者Bcl-2阳性细胞率较后者低(q=4．1l，P&;lt;0．01)。②与对照组的Bax阳性细胞百分率[(52．15&;#177;6．18)％]相比，缺血期亚低温3h组[(32．35&;#177;3．71)％]和缺血亚低温至再灌亚低温6h组[(26．86&;#177;2．43)％]的Bax阳性细胞百分率均降低(q=14．21，P&;lt;0．O1；q=18．95，P&;lt;0．01)；而单纯再灌亚低温3h组的Bax阳性细胞百分率[(47．26&;#177;4．52)％]降低不明显(q=2．75，P&;gt;0．05)。③凋亡细胞阳性率与Bcl-2／Bax的比值呈负相关关系(r=-O．9759，P&;lt;O．01)。结论：①单纯于再灌注期实施亚低温3h不能明显抑制神经元细胞凋亡，对Bcl-2和Bax基因的表达也无明显影响；但将缺血期实施的亚低温延长至再灌注期后3h能进一步抑制神经元细胞凋亡并降低Bax基因的表达。②Bcl-2／Bax的比值能影响细胞凋亡的发生。     

扇贝多肽对大鼠脑缺血后缺血半影区Bcl-2和Bax蛋白表达的干预

背景：脑缺血时，抑制神经细胞凋亡的Bcl-2基因和诱导细胞凋亡的Bax均参与了其发病过程。扇贝多肽的体外抗氧化和抗凋亡作用，是否可产生对抗脑缺血后中枢神经细胞凋亡的保护作用。目的：观察扇贝多肽对大鼠脑缺血半影区内Bcl-2和Bax蛋白参与的细胞凋亡的抑制及其脑保护作用。设计：随机对照实验。单位：青岛大学医学院的人体解剖学教研室。材料：实验于2000-03／04在青岛大学医学院神经解剖实验室完成。选择成年Wistar大鼠32只，随机分为扇贝多肽组、蒸馏水组、模型对照组、假手术组，8只／组。扇贝多肽由中国水产科学院黄海水产研究所提供。干预：扇贝多肽组、蒸馏水组和模型对照组采用颈外动脉线栓法建立缺血再灌注模型，假手术组不予造模。扇贝多肽组术前2d腹腔注射体积分数0．1的扇贝多肽0．1mL／k，1次／d，再灌注前15min加注1次；蒸馏水组术前2d腹腔注射双蒸水0，1mL／k，1次／d，再灌注前15min加注1次；模型对照组和假手术组术前不给药。然后扇贝多肽组、蒸馏水组和模型对照组开始造模，从颈外动脉插入4-0尼龙线，经颈总动脉分叉处、颈内动脉颅外段进入颈内动脉颅内段到达大脑中动脉分支处阻塞大脑中动脉的起始部，引起大脑中动脉供血区的急性脑缺血。动物苏醒后出现左霍纳综合征，提尾时右前肢内收屈曲，爬行时向右划圈为造模成功。假手术组手术过程不闭塞大脑中动脉，其余步骤同以上3组。将各组大鼠断头取脑，进行免疫组化Bcl-2和Bax蛋白的测定，结果用免疫反应产物吸光度(A)值来表示Bcl-2和Bax蛋白在脑组织缺血半影区的表达水平。主要观察指标：各组大鼠脑组织缺血半影区Bcl-2和Bax蛋白表达的差异。结果：经补充后32只大鼠进入结果分析。①缺血半影区Bcl-2蛋白的表达：模型对照组及蒸馏水组吸光度值明显高于假手术组[0．453&;#177;0．048，0．510&;#177;0．061，0．2ll&;#177;0．023(F=683．78，9：21．13～24．74，P&;lt;0．01)]；扇贝多肽组(0．954&;#177;0．059)与模型对照组及蒸馏水组相比呈显著过表达(q=38．08～41．69，P&;lt;0．01)。②缺血半影区Bax蛋白的表达：模型对照组及蒸馏水组吸光度值明显高于假手术组[0．834&;#177;0．082，0790&;#177;0．102，0．125&;#177;0．017(F=590．44，9=49．57～51．98，P&;lt;0．01)]；扇贝多肽组(0．471&;#177;0．045)与模型对照组及蒸馏水组相比表达受到显著抑制(q=23．80-26．23，P&;lt;0．01)。结论：扇贝多肽能够上调脑缺血半影区内抑制神经细胞凋亡的Bcl-2蛋白水平，同时降低半影区内诱导神经细胞凋亡的Bax蛋白的表达。从而在阻止脑缺血再灌注后细胞凋亡启动中起制动作用，保护脑缺血后半影区内神经元的功能。     

白藜芦醇对大鼠脊髓损伤早期Bcl-2和Bax表达的影响

目的：探讨脊髓损伤后使用白藜芦醇对脊髓损伤早期Bcl-2和Box表达的影响。方法：2004～06／09在武汉大学人民医院动物实验中心将62只SD健康成年雄性大鼠随机分成5组，据Allen’s法制成中度脊髓损伤模型，术后立即腹腔注射白藜芦醇100mg／kg或甲基强的松龙(MPSS)100mg／kg；通过免疫组织化学染色观察脊髓损伤8，24及72h后白藜芦醇组脊髓Bcl-2和Box表达的变化，并与MPSS组进行疗效对比。结果：与损伤组比较，Bcl-2表达在损伤后8h差异无显著性意义(P&;gt;0．05)，显示白藜芦醇对损伤后的脊髓无干预作用，而24及72h后差异有显著性意义(P&;lt;0．01)，表明白藜芦醇能够增强Bcl-2表达，对损伤后脊髓有明显作用；Bax表达在损伤后8及72h差异有显著性意义(P&;lt;0．05)，其中24h时最为显著(P&;lt;0．01)，表明白藜芦醇可抑制Bax表达，对损伤后的脊髓有干预作用；白藜芦醇与MPSS组间差异无显著性意义(P&;gt;0．05)，即白藜芦醇对损伤后脊髓有相似作用。结论：白藜芦醇在脊髓损伤早期能够有效上调Bcl-2表达及下调Bax表达．对损伤后脊髓起保护作用。     

Na^＋／H^＋交换器-1抑制诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的可能机制

背景：肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells，PASMC)的增殖在缺氧肺动脉高压肺血管重构中起重要作用。解放军第三军医大学附属新桥医院全军呼吸研究所在前期实验中通过构建Na^+／H^+交换器-1(sodium／pmton exchanger isofom-1，Na^+／H^+exchanger isoflorm-1，Na^+／H^+ antiporter isoform-1，NHE-1)特异性核酶基因逆转录病毒载体，转染入体外培养的大鼠PASMC内表达，发现NHE-1抑制可诱导细胞内酸化而抑制PASMC增殖，并促进其凋亡。但这种促凋亡作用是通过什么途径来完成，尚不清楚。目的：探讨Bcl-2、Bax蛋白表达在NHE-1抑制而诱导大鼠PASMC凋亡中的作用。设计：分组对照实验。地点和材料：实验在解放军第三军医大学附属新桥医院全军呼吸内科研究所完成。转染表达NHE-1特异性核酶基因的体外培养大鼠PASMC(PRZ细胞)、转染PLXSN空载体的大鼠PASMC(PX细胞)、未处理大鼠PASMC细胞(PA细胞)为前期实验所制备。干预：已构建NHE-1特异性核酶基因逆转录病毒载体，转染入体外培养的大鼠PASMC内表达，同时转染pLXSN空载体入另一组大鼠PASMC内，后者与未转染的大鼠PASMC细胞为对照组。用荧光指示剂(Fura-2／AM)测定法检测转染NHE-1特异性核酶基因的大鼠PASMC内Ca^2+([Ca^2+]i)变化；RT-PCR方法检测细胞内Bcl-2和Bax mRNA表达变化，免疫组化法检测细胞内Bcl-2和Bax蛋白表达变化。主要观察指标：①转染NHE-1特异性核酶基因的大鼠PASMC内Ca^2+([Ca^2+]i)变化。②细胞内Bcl-2和Bax mRNA表达变化。③细胞内Bcl-2和Bax蛋白表达变化。结果：转染NHE-1特异性核酶基因后，大鼠PASMC内[Ca^2+]i显著升高，细胞内[Ca^2+]i在PA细胞[(95．94&;#177;6．39)nmol／L]与PX细胞[(98．08&;#177;7．37)nmol／L]之间差异无显著性意义(P&;gt;0．05)，而PRZ细胞[(198．08&;#177;16．59)nmol／L]显著高于PA细胞及PX细胞，差异有显著性意义(P&;lt;0．001)。Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著降低(PA细胞、PX细胞、PRZ细胞的平均积分光密度分别为2．21&;#177;0．18，2．09&;#177;0．30。1．45&;#177;0．20)，Bax mRNA和蛋白表达显著增加(PA细胞、PX细胞、PRZ细胞的ABax／Aβ-actin分别为0．17&;#177;0．02，0．23&;#177;0．06，0．59&;#177;0．08)。结论：NHE-1抑制诱导的PASMC凋亡与[Ca^2+]i增加、Bcl-2表达降低及Bax表达增加有关。     

全身热疗对大鼠海马神经元凋亡蛋白表达的影响

目的观察用丙泊酚和水合氯醛全身麻醉建立全身高温模型的大鼠海马神经元凋亡蛋白的表达,探讨全身热疗诱导大鼠海马神经元凋亡的信号途径。 方法63只健康雄性Wister大鼠随机分为空白对照组(A组)、丙泊酚麻醉热疗组(B组)、水合氯醛麻醉热疗组(C组),每组21只。B、C两组热疗后24 h,A、B、C 3组大鼠同时断头取脑,采用TUNEL法检测海马神经元凋亡百分比,免疫组化法检测Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白的表达,透射电镜观察神经元超微结构的变化。 结果B、C两组与A组比较,大鼠海马神经元超微结构发生改变,B组神经元超微结构损害较C组轻;B组和C组的海马神经元凋亡百分比和Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白表达均高于A组(P<0.05),C组Bax、caspase-3阳性评分高于B组(P<0.05)、Bcl-2阳性评分低于B组(P<0.05)。 结论全身热疗通过上调Bax、caspase-3表达和下调Bcl-2表达诱导大鼠海马神经元凋亡。     

当归注射液、三七总皂甙和外源性环磷酸腺苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的：观察当归注射液、三七总皂甙(PNS)和外源性环磷酸腺苷(cAMP)对缺血再灌注(IR)过程心肌的保护作用，研究上述3种药物抗心肌缺血再灌注损伤的作用机制。方法：80只SD大鼠随机数字表法分成5组(每组n=16)：空白组，IR组，当归治疗组，PNS组和cAMP组，建立在体心肌缺血再灌注动物模型。用化学扩增法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性，TBA法测定丙二醛(MDA)含量，免疫组化SP法观察心肌细胞热休克蛋白70(HSP70)、蛋白激酶C(PKC)的表达和Fas，Bcl-2的含量，原位末端TUNEL法检测细胞凋亡指数，在电镜下观察心肌细胞的超微结构。结果：当归注射液和PNS均显著降低了再灌注心肌MDA水平(P&;lt;0．01)，增强了SOD活性(P&;lt;0．01)和HSP70的表达(P&;lt;0．01)，同时改善了心肌的超微结构。当归注射液明显增加了PKC的含量(P&;lt;0．05)，并使PKC从细胞核转移到细胞膜。PNS组PKC的含量高于IR组，(P&;lt;0．01)，但比正常心肌明显减少(P&;lt;0．05)。cAMP使凋亡指数和Fas含量明显减少(P&;lt;0．01)，Bcl-2含量明显增多(P&;lt;0．01)。结论：当归注射液可通过抗氧化作用、增加HSP70的表达和调节PKC的表达发挥抗心肌缺血再灌注损伤，对心肌有明显的保护作用。PNS长时间处理可促进HSP70的表达，对心肌再灌注损伤有良好的保护效应。cAMP具有抗心肌缺血再灌注损伤的作用，其作用机制可能是通过调节Fas和Bcl-2介导的心肌缺血再灌注细胞凋亡而实现。     

亚低温对缺血再灌注大鼠海马CA1区Bcl-2和Bax表达动态变化的影响

目的：研究脑缺血再灌注后全身亚低温的脑保护作用及其对Bcl-2和Bax表达的动态影响，探讨亚低温脑保护作用的机制。方法：实验于2002-01／12在江苏省麻醉医学研究所(省级重点实验室)完成。实验动物选择126只SD雄性大鼠随机分为假手术组、常温缺血组和亚低温缺血组。采用Pulsinelli四血管阻断法制作大鼠全脑缺血再灌注模型，即刻全身亚低温4h，分别在再灌注后4，8，24，48，72，96h，7d，7个时间点取脑标本，进行Bcl-2和Bax免疫组织化学及苏木精-伊红染色。结果：与常温组相比，全身亚低温组海马CA1区死亡细胞数明显减少[常温比亚低温24h：(195&;#177;18)比(214&;#177;20)个／mm，P&;lt;0．05；48h：(185&;#177;17)比(215&;#177;21)个／min．P&;lt;0．01；72h：(130&;#177;20)比(200&;#177;17)个／mm，P&;lt;0．01)]；Bcl-2蛋白免疫反应强度峰值增高，持续时间延长[灰度值：常温比低温：24h(40&;#177;8比57&;#177;8，P&;lt;0．01)；48h(42&;#177;6比55&;#177;8，P&;lt;0．01)；72h(38&;#177;4比41&;#177;6，P&;lt;0．01)]。Bax蛋白免疫反应强度峰值减低，持续时间缩短[灰度值：常温比低温24h(32&;#177;4比24&;#177;5．P&;lt;0．05)；48h(30&;#177;7比24&;#177;6，P&;lt;0．05)；72h(26&;#177;4比22&;#177;5，P&;lt;0．05)]。结论：全身亚低温对缺血性锥体细胞损害有较好的保护作用。可增强具有抗凋亡的Bcl-2蛋白的表达，延长其表达持续时间，而减弱具有促凋亡的Bax表达，同时缩短其表达持续时间，此可能是亚低温对缺血性脑组织损害产生保护作用的分子机制之一。     

厄贝沙坦对大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2／Bax蛋白表达的影响

目的：观察自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats，SHR)心肌细胞凋亡和Bax／Bcl-2蛋白的表达；同时观察血管紧张素Ⅱ-1型受体(angiotensinⅡ1type recptor，AT1R)拮抗剂一厄贝沙坦对SHR大鼠心肌细胞凋亡和BcL-2／Bax蛋白表达的影响。方法：24只16周龄SHR大鼠(上海市高血压研究所提供，医动字02-37-1号)分为SHR治疗组[沙坦30mg／(kg&;#183;d)，20周|和SHR对照组，另选16周龄Wistar大鼠12只作为正常对照组。分别采用SP免疫组化法和末端脱氧核苷酸转移酶介导dUTP缺口末端标记法方法检测心肌细胞凋亡指数和BcL-2／Bax蛋白水平的表达，放射免疫法检测血浆和组织血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)。结果：SHR治疗组与正常对照组比较：收缩压明显增高[(243&;#177;13)和(151&;#177;11)mmHg，1mmHg=0．133kPa]，左心室质量与体质量比(left ventricular mass／body mass，LVW／BW)明显增加[(4．05&;#177;0．33)和(2．90&;#177;0．23)g／kg]；血浆和心肌组织ArgⅡ增高[血浆：(31．8&;#177;5．4)和(22．2&;#177;18．5)ng；心肌：(13．2&;#177;2．1)％和(8．3&;#177;1．2)％]；心肌细胞凋亡指数明显增加[(4．75&;#177;0．70)％和(2．84&;#177;0．60)％]；心肌细胞Bax蛋白的表达明显增强[(5．02&;#177;0．34)％和(2．85&;#177;0．29)％]，Bcl-2／Bax比率明显降低(0．65&;#177;0．13和1.05&;#177;0．18)，差异有显著性意义(P&;lt;0．05～0．01)；而Bcl-2蛋白的表达[(3．29&;#177;0．24)％和(2．95&;#177;0．29)％]差异无显著性意义。SHR治疗组与SHR对照组比较：收缩压明显回落，LVWI明显下降，心肌细胞凋亡指数明显减少，心肌细胞Bax蛋白的表达减弱，Bcl-2／Bax比率、血浆和心肌组织AngⅡ则高于SHR对照组[SHR对照组上述指标分别为(179&;#177;11)mmHg，(3．22&;#177;0．38)g／kg，2．73&;#177;0．60)％，(3．17&;#177;0．27)％，0．65&;#177;0．13，(31．8&;#177;5．4)ng／k(13．2&;#177;2．1)ng／L]，差异均有显著性意义(P&;lt;0．05～0．01)。SHR治疗组与正常对照组比较：心肌细胞凋亡指数、Bax,Bcl-2蛋白表达均无明显差别，血浆、心肌组织AngⅡ则明显高于正常对照组，差异均有显著性意义(P&;lt;0．05～0．01)。结论：成年SHR大鼠的左室心肌细胞凋亡活跃与Bax蛋白表达增强，致Bcl-2／Bax比率减低有关。其次还提示较长时间给予AT1R厄贝沙坦能有效抑制Bax的过度表达，增加Bcl-2／Bax比率，从而让心肌细胞凋亡恢复正常。AT1R-厄贝沙坦使心肌细胞凋亡恢复正常的作用可能与心肌局部肾素血管紧张素系统有关。     

灯盏花素对大鼠脑缺血再灌注后凋亡相关蛋白的干预

目的：探讨灯盏花素干预脑缺血再灌注损伤后对Bcl-2蛋白、c-Fos蛋白、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白的表达影响及其对大脑损伤的保护作用。方法：实验于2004-06／09在华中科技大学同济医学院生理学实验室进行，取SD大鼠30只，随机分为假手术组、模型组和灯盏花组3组，每组10只。假手术组不造模，模型组和灯盏花组建立脑缺血再灌注模型后分别腹腔注射生理盐水1mL／b和灯盏花素注射液1mL／kg。采用免疫组化法测定灯盏花素干预大鼠脑缺血24h后对BCl-2蛋白、c-Fos蛋白、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达的变化?结果：30只大鼠均进入结果分析。①Bcl-2蛋白：模型组大鼠脑组织中阳性细胞数与假手术组相比有显著差异[(40．83&;#177;2．69),(2．02&;#177;0．18)个／视野，t=7．12，P&;lt;0．01]，而灯盏花组又明显高于模型组[(64．88&;#177;3．13)个／视野，t=9．34，P&;lt;0．01]。②c-Fos蛋白：模型组大鼠脑组织中c-Fos蛋白表达水平显著高于假手术组[(72．47&;#177;4．23)．(2．30&;#177;0．34)个／视野，t=10．22，P&;lt;0．01]；灯盏花组较模型组明显减少[(48．23&;#177;5．12)个／视野，t=7．55，P&;lt;0．01]。③半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白：模型组大鼠脑组织中阳性细胞数明显高于假手术组[(126．3l&;#177;7．12)，(2．30&;#177;0．64)个／视野，t=15．74，P&;lt;0．01]，灯盏花组大鼠脑组织中阳性细胞数明显低于模型组[(42．22&;#177;4．24)个／视野，t=7．36．P&;lt;0．01]。结论：灯盏花素可能通过上调原癌期蛋白质c-bcl-2下调原癌基因蛋白质C-fos和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白水平，从而，抑制脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡,对脑损伤产生保护作用。     

复方三七颗粒对动脉粥样硬化血管平滑肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的：探讨复方三七颗粒对动脉粥样硬化平滑肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法：建立动脉粥样硬化大鼠模型,采用TUNNEL法检测各组细胞凋亡率,免疫组化法检测Bcl-2和Bax蛋白表达。结果：复方三七颗粒组与模型组比较,平滑肌细胞凋亡率明显减少（P〈0.05）,Bcl-2蛋白表达增加（P〈0.05）,Bax蛋白表达降低（P〈0.05）。结论：复方三七颗粒可能通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白,从而得出复方三七颗粒拮抗动脉粥样硬化的机制可能与抑制细胞凋亡有关。     

缬沙坦对自发性高血压大鼠心肌Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

背景：高血压的心肌肥厚(cardiomyopathy hypertrophy)是对于慢性动脉压力超负荷的一种代偿反应，压力负荷持续性增高将导致心肌收缩力下降。在心肌代偿性肥厚发展为心力衰竭机制的众多研究中，心肌细胞进行性丢失日益受到重视。目的：探讨遗传性高血压及左室肥厚过程中心肌组织凋亡调节蛋白Bcl-2，Bax表达的变化及血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensin Ⅱ type 1 receptor，AT1R)拮抗剂缬沙坦的影响。设计：随机对照实验研究。单位：一所大学医学院心内科，一所大学医院心内科。材料：本实验在北京大学人民医院中心实验室完成。实验选用8周龄自发性高血压大鼠(SHR)30只，按随机数字法将其分为缬沙坦组和非治疗组；以8周龄Wistar鼠15只作为对照组。干预：所有动物饲养8周，取左心室组织，称质量备用。部分心肌组织置100mL／L甲醛液中固定6h后常规石蜡包埋备形态学研究。计算心脏指数。采用免疫组化、Western印迹等方法检测凋亡调节蛋白Bel-2，Bax表达。主要观察指标：心肌细胞Bcl-2及Bax蛋白Western blot条带吸光度(A值)扫描值及Bcl-2／Bax比值。结果：SHR心肌中存在Bax高表达，缬沙坦治疗8周后，SHR心肌组织Bax蛋白表达显著降低至接近对照组。缬沙坦组及对照组Bcl-2蛋白表达与非治疗组比较，差异无显著性意义(P&;lt;0．05)。缬沙坦组及对照组Bel-2／Bax比值(6．71&;#177;1．10，5．86&;#177;0．70)明显高于非治疗组(0．63&;#177;0．23)(P&;lt;0．05)。结论：心肌细胞凋亡是代偿性心肌肥厚发展为心力衰竭的可能机制之一。高血压早期缬沙坦在降压同时有效抑制心肌细胞凋亡。     

高压氧对脑损伤后脑组织Bcl-2及Bax表达的影响

背景：国内外大量临床及实验报道，高压氧对严重颅脑损伤具有治疗意义，但目前对高压氧通过何种机制产生治疗作用尚未达成共识，可能与细胞凋亡而非细胞坏死有关。目的：探讨高压氧对创伤性脑损伤的治疗作用与脑组织Bcl-2及Bax蛋白的表达之间的关系。设计：完全随机设计，对照实验研究。地点与材料：本实验在上海第二医科大学神经创伤与脑血管病研究室的实验室内进行。实验动物为购自上海医科大学实验动物中心的SD大鼠。SD雄性大鼠56只，随机分为假手术组、外伤组和伤后高压氧治疗组，后两组又分别为8h，24h和48h组，共7组。干预：以50g&;#215;15cm冲击力自行制作自由落体脑挫裂伤动物模型(SD大鼠)，设立高压氧治疗组和对照组，分别使用Western Blot和免疫组化方法检测Bcl-2及Bax蛋白在脑组织的表达情况。主要观察指标：Western Blot检测脑外伤后及高压氧治疗前后Bcl-2及Bax蛋白的脑组织表达。免疫组化检测脑外伤和高压氧治疗前后阳性细胞计数。结果：创伤性脑损伤后脑挫裂伤灶和海马结构Bcl-2及Bax蛋白的表达均明显增强，高压氧治疗组Bcl-2的表达明显强于对照组(P&;lt;0．05)．而Bax虽在各组均有表达，但在各组间无显著性差异(包括假手术组)。结论：研究表明高压氧治疗对创伤性脑损伤后脑组织Bcl-2蛋白表达有显著影响，并进而改变Bcl-2／Bax的比例，而其比值与细胞凋亡密切相关，所以抑制细胞凋亡很可能是高压氧对创伤性脑损伤治疗作用的重要机制。     

凋亡相关基因Bcl-2及Bax在实验性糖尿病大鼠阴茎组织细胞凋亡中的作用——定位、定性、定量分析

背景：近年来的研究表明，细胞凋亡可能与糖尿病性阴茎勃起功能障碍的病理过程有关。目的：应用大鼠糖尿病模型，观察抑制凋亡基因Bcl-2和凋亡诱导基因Bax在糖尿病大鼠阴茎组织中的表达。设计：随机对照实验。单位：佳木斯大学中心实验室。对象：选取纯系成年雄性Wistar大鼠50只。随机分为正常对照组10只，造模组40只，造模组再根据造模后大鼠是否发生糖尿病分为四氧嘧啶组9只和糖尿病组12只。方法：实验于2003—01／03在佳木斯大学中心实验室完成。造模组大鼠以20g/L四氧嘧啶50mg／kg行尾静脉注射，48h后于大鼠尾尖取血测定血糖和尿糖。以血糖浓度≥16．67mmol／L，尿糖＋＋＋～＋＋＋＋的大鼠确定为糖尿病模型。发生糖尿病的大鼠为糖尿病组，未发生糖尿病的大鼠为四氧嘧啶组，死鼠剔除。各组大鼠于实验前、实验后48h，2，4，6和8周测血糖和尿糖。8周处死大鼠并取阴茎海绵体，切取长0．5cm中段阴茎海绵体放入10g／L中性甲醛溶液固定24h之后，切取5～7μm石蜡切片。细胞凋亡检测用原位末端标记法，Bcl-2和Bax的基因表达用免疫组织化学方法检测。主要观察指标：各组大鼠勃起组织细胞凋亡和Bcl-2及Bax基因的表达结果。结果：19只大鼠造模后死亡，进入结果分析31只。①各组大鼠勃起组织细胞凋亡情况：糖尿病组凋亡率显著高于正常对照组和四氧嘧啶组（1626&;#177;6．63）％，（0．38&;#177;0．02）％，（0．40&;#177;0．03）％，（q=4．45，P〈0．01）。②各组大鼠勃起组织Bcl-2基因的表达结果：糖尿病组显著低于正常对照组和四氧嘧啶组[（12．04&;#177;2.30）％，（20．88&;#177;3．02）%，（21．23&;#177;2.58）％，（q=4．45，P〈0．01）]，③各组大鼠勃起组织Bax基因的表达结果：糖尿病组明显高于正常对照组和四氧嘧啶组[（18．35&;#177;2．00）％，（9．33&;#177;0．56）％，（10．32&;#177;0．63）％，（q=4．45，P〈0．01）]。④Bcl-2／Bax比值：糖尿病组显著低于正常对照组和四氧嘧啶组。结论：糖尿病大鼠勃起组织细胞凋亡率增加，提示细胞凋亡与糖尿病性勃起功能障碍发病有关，Bcl-2／Bax下调提示Bcl-2和Bax共同参与糖尿病勃起组织细胞凋亡。     

亚低温对大鼠局灶性脑缺血神经元细胞凋亡及调控基因Bcl-2和Bax表遮的影响

目的 研究不同时程的亚低温治疗对大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型的神经元细胞凋亡及Bcl-2，Bax基因表达的影响。方法 健康雄性SD大鼠共40只．月龄两三个月。按抽签法随机分为5组，每组8只(n=8)，分别为：假手术组(A)、对照组(B)、亚低温0．5h组(C)、亚低温1．Oh组(D)、亚低温3．Oh组(E)。采用Longa线栓法制作MCAO模型，缺血3．0h后再灌注。缺血后即刻分别进行不同时程(0．5，1．0，3．0h)的亚低温治疗，再灌注后24h断头取脑，连续切片作TUNEL染色及Bel-2，Bax免疫组化染色。结果 凋亡神经元细胞(TUNEL阳性细胞)主要见于梗死灶周围的纹状体及额顶部皮层。Bel-2及Bax阳性细胞也主要见于梗死灶周围的纹状体及额顶部皮层，与该区凋亡细胞的集中分布相一致。与对照组的Bel-2细胞阳性率相比，亚低温3．0h组增加[(23．0&;#177;3．8)％，P&;lt;0．05)]；与对照组的Bax细胞阳性率相比．亚低温1．0,3．0h组均降低分别为(45．9&;#177;4．1)％，(32．4&;#177;3．7)％，P&;lt;0．05，P&;lt;0．01]；凋亡细胞阳性率与Bel-2／Bax的比值呈负相关关系(r=-0．9759，P&;lt;0．01]。结论 亚低温1．0h以上有抑制细胞凋亡作用；Bel-2／Bax的比值能影响细胞凋亡的发生。