生长因子对卵巢癌细胞系HO－8910体外生长的调控作用

目的：探讨生长因子对人卵巢癌细胞体外生长的调控及其机理。方法：人卵巢癌细胞系ＨＯ－８９１０在体外经不同生长因子作用后，对其细胞增殖、ＤＮＡ合成、细胞时相、核功能与活性的变化以及细胞内环状腺苷酸浓度，进行动态检测分析。结果：（１）胰岛素样生长因子及转化生长因子－α对细胞生长有轻微的正调节作用，且表现出剂量依赖性；表皮生长因子对细胞生长有明显的促进效应；而转化生长因子－β１对细胞有一定的生长抑制作用。（２）各种生长因子体外作用于细胞后，细胞周期、核内Ａｇ－ＮＯＲｓ计数及环状腺苷酸浓度发生了相应的动态变化。结论：生长因子对卵巢癌细胞的生长调控作用，是通过细胞内信号传导而改变细胞核内核酸合成状态及诱导细胞周期时相变化。细胞内环状腺苷酸含量的变化，在生长因子对卵巢癌细胞生长调控过程中具有双向调节功能；而转化生长因子－β１的生长抑制调节可能具有自分泌因子的性质     

转化生长因子β1对人卵巢癌细胞系HO—8910凋亡的诱导作用

目的：进一步探讨转化生长因子β１（ＴＧＦ－β１）对人卵巢癌细胞的体外生长抑制作用的机理。方法：利用ＤＮＡ电泳、ＰＩ染色、末端酶缺口掺入及流式细胞术分析方法，观察了经ＴＧＦ－β１作用后，ＨＯ－８９１０细胞凋亡的现象，并利用反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对细胞中ｃ－ｍｙｃ基因表达进行了相对定量动态分析。结果：ＴＧＦ－β１（２０ｎｇ／ｍｌ）作用３６小时后，细胞中ＤＮＡ出现缺口标记，４８小时后，被标记的细胞数达到７５．５５％，ＰＩ染色及流式细胞术分析结果也表明此时存在凋亡细胞小峰；６０小时后，ＤＮＡ电泳出现明显的梯状（ｌａｄｄｅｒ）条带；同时，自９小时始，细胞内ｃ－ｍｙｃ基因的表达开始下降。结论：ＴＧＦ－β１在体外能诱导ＨＯ－８９１０细胞产生凋亡，细胞凋亡可能发生于Ｇ０／Ｇ１期。同时提示ｃ－ｍｙｃ基因的表达抑制及ｃＡＭＰ含量的升高，对ＴＧＦ－β１作用后ＨＯ－８９１０细胞产生凋亡具有一定的促进作用。     

人卵巢癌细胞系HO—8910的建立及其生物学特性

以分化差的卵巢乳头关浆液性囊腺癌患者腹水为材料，建立了体外培养的人卵巢癌细胞系ＨＯ－８９１０。细胞已传代１３０次，生长良好；组织学和超微结构均显示该细胞具有恶性上皮细胞特征；染色体数目分布在４５－３００之间，众数为５４（４２％），流式细胞仪检测ＤＮＡ指为１．４５，均呈超二倍体；该细胞能分泌性激素，并有激素受体存在；裸鼠移植瘤与患者原始肿瘤病理形态基本一致；细胞经液氮冻存后复苏良好。该细胞系的建立为     

人卵巢癌细胞系HO－8910的建立及其生物学特性

以分化差的卵巢乳头状浆液性囊腺癌患者腹水为材料，建立了体外培养的人卵巢癌细胞系ＨＯ－８９１０。细胞已传代１３０次，生长良好；组织学和超微结构均显示该细胞具有恶性上皮细胞特征；染色体数目分布在４５～３００之间，众数为５４（４２％），流式细胞仪检测ＤＮＡ指数为１．４５，均呈超二倍体；该细胞能分泌性激素，并有激素受体存在；裸鼠移植瘤与患者原始肿瘤病理形态基本一致；细胞经液氮冻存后复苏良好。该细胞系的建立为卵巢癌防治研究提供了体外实验材料。     

表皮生长因子受体信号通路对卵巢癌细胞自噬的调控

表皮生长因子受体(EGFR)下游的信号通路影响卵巢癌细胞的多种生理活动,包括对自噬的调节。自噬是细胞自我消化的过程,既是细胞在不利生存条件下的自我保护机制,又可以诱导细胞凋亡,并可引起肿瘤耐药。在卵巢癌细胞中,EGFR-Ras-Raf-c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路、EGFR-磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)通路和EGFR-两面神激酶(JAK)-信号传导和转录激活因子3(STAT3)通路对自噬既有促进作用,又有抑制作用。近年来,EGFR抑制剂试图通过阻断EGFR信号通路,抑制卵巢癌细胞自噬活动,逆转耐药。综述EGFR下游的3条主要信号通路对卵巢癌细胞自噬的调控作用,以期为卵巢癌的治疗和抗耐药提供新的作用靶点。     

雌激素对卵巢癌细胞株体外生长的影响

目的 探讨１７－β雌二醇（Ｅ２）对卵巢癌细胞株体外生长和细胞周期的影响。方法 采用四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）比色法和流式细胞术（ＦＣＭ）的方法,观察了卵巢癌细胞株ＣＡＯＶ３和ＯＣＶＡＲ３在加入含有不同浓度１７－β Ｅ２培养液后细胞活性和细胞周期的变化;同时采用免疫组化方法,测定癌细胞在加入１７－β Ｅ２前后雌激素受体表面的影响。结果 （１）浓度为０．２５～５．００ｎｍｏｌ／Ｌ的１７－β Ｅ２,可轻度     

靶向Akt1的siRNA抑制卵巢癌细胞系生长的体外研究

目的:探讨靶向Akt1的siRNA抑制人卵巢癌细胞系SKOV3的Akt1表达后,对细胞增殖和侵袭的抑制作用。方法:将Akt1特异性siRNA转染人卵巢癌细胞系SKOV3,Real-time PCR检测Akt1 mRNA表达,Western blot和免疫荧光技术检测Akt1、Akt2、PI3Kp85α和Ki-67的蛋白表达;MTT法和Annexin V标记评价其对细胞增殖活性和凋亡的影响,流式细胞法分析细胞周期变化,Transwell法分析对侵袭能力的影响。结果:转染Akt1 siRNA后可明显下调Akt1 mRNA表达;Akt1、PI3Kp85α、Akt2和Ki-67蛋白的表达水平均明显降低(P<0.01);卵巢癌细胞增殖活性明显降低,细胞周期出现G0/G1阻滞,并诱发细胞凋亡,细胞侵袭能力减弱(P<0.01)。结论:靶向Akt1的siRNA可显著抑制卵巢癌细胞Akt1的表达,进而抑制肿瘤细胞的生长和侵袭,有望成为卵巢癌基因治疗的分子靶点。     

血管内皮生长因子在卵巢癌细胞浸润转移中的作用

目的 :探讨血管内皮生长因子 (VEGF)在卵巢癌浸润转移中的作用。方法 :阳离子脂质体介导VEGF165质粒转染 2株卵巢癌细胞CaOV 3、COC1,并经逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)、Western免疫印迹检测转染VEGF165质粒前后癌细胞VEGFmRNA及其蛋白表达水平 ;用Boyden小室体外侵袭实验比较VEGF165质粒转染前后以及单克隆抗体作用后 2株癌细胞通过人工重组基底膜的能力强弱变化。结果 :VEGF165质粒转染后 ,2株细胞mRNA和蛋白表达水平均较转染前明显增强 (P <0 .0 5 )。VEGF165质粒转染的癌细胞CaOV 3、COC1穿过人工重组基底膜的相对百分率分别为 4 2 .5± 4 .1、2 6 .8± 2 .4 ,明显高于对照组穿膜细胞相对百分率 (2 4 .7± 1.9、8.6± 1.1) (P <0 .0 5 ) ;而在VEGF单克隆抗体存在时 ,2株癌细胞穿膜细胞相对百分率 (10 .2± 0 .7、5 .4± 0 .3)较处理前均有不同程度的下降 (P <0 .0 5 )。结论 :VEGF参与了卵巢癌转移的侵袭、浸润阶段 ,应用VEGF单克隆抗体可针对性地抑制VEGF介导的卵巢癌侵袭、浸润。     

卵巢癌细胞系CAOV3体外化疗后survivin mRNA表达的变化

目的　探讨卵巢癌细胞系CAOV3体外化疗后survivinmRNA表达的变化。方法　采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法检测不同浓度 (分别为 2 0 0 0、2 0 0、2 0、2、0 2mg/L)紫杉醇或卡铂对CAOV3细胞体外生长的抑制作用。应用RT PCR技术检测高浓度紫杉醇或卡铂 (分别为 2 0 0、5 0 0mg/L)处理 1d ,低浓度紫杉醇或卡铂 (分别为 2 0、5 0mg/L)处理 1、3、5d后存活的卵巢癌细胞中survivinmRNA的表达水平 ,同时利用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果　不同浓度 (分别为 2 0 0 0、2 0 0、2 0、2、0 2mg/L)紫杉醇或卡铂作用后CAOV3细胞的抑制率分别为 94 %、88%、34%、2 2 %、13%或 97%、4 6 %、14 %、9%、7% ,随着药物浓度的下降 ,细胞受抑制程度明显减弱 (P <0 0 5 )。低浓度紫杉醇处理1、3、5d后CAOV3细胞的凋亡率分别为 15 %、2 3%和 2 9% ;高浓度紫杉醇处理 1d后CAOV3细胞的凋亡率为 4 3%。低浓度卡铂处理 1、3、5d后CAOV3细胞的凋亡率分别为 14 %、2 2 %和 2 6 % ;高浓度卡铂处理 1d后CAOV3细胞的凋亡率为 19%。紫杉醇或卡铂低浓度处理 3d及高浓度处理 1d后存活的卵巢癌细胞中survivinmRNA的表达量均明显高于未加药的对照 (P <0 0 1) ,尤其是紫杉醇处理后存活的卵巢癌细胞中survivinmRNA的表达量增加更为明显     

表皮生长因子及其受体与卵巢癌的关系

表皮生长因子及其受体与卵巢癌的关系张海鹏，沈铿综述（北京协和医院妇产科）近３０年来，一批生长因子被分离、纯化，其中包括胰岛素及类胰岛素生长因子（ＩＧＦ），成纤维细胞生长因子（ＦＧＦ），血细胞集落刺激因子（ＨＣＳＦ），血小板衍生性生长因子（ＰＤＧＦ）及...     

沙立度胺对人卵巢癌细胞株体外生长影响的研究

卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤，大部分初诊为中晚期。究其原因为早期诊断困难所致。近年来的研究报道，沙立度胺(反应停，Thd)具有抗肿瘤血管的生成的作用，但是沙立度胺对于卵巢癌的体外实验尚无报道。为此，我们观察沙立度胺对人卵巢癌细胞株SKOV3体外生长以及其对血管内皮生长因子分泌的影响，并探讨沙立度胺与常用的化疗药物的相互作用，以期为临床化疗提供依据。     

NS398对人卵巢癌细胞系CAOV3和OVCAR3生长抑制作用的研究

目的 观察环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)选择性抑制剂——氮-2,环己氧-4,硝基苯-甲基磺胺(NS398),对人卵巢癌细胞系CAOV3和OVCAH3生长的抑制作用。方法 应用免疫组织化学(免疫组化)链霉菌抗生物素蛋白一过氧化物酶连接(SP)法,在蛋白水平,对人卵巢上皮浆液性癌细胞系CAOV3、OVCAR3的COX-2表达情况进行检测;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)快速比色法,观察NS398对CAOV3、OVCAR3生长的抑制作用,并通过倒置相差显微镜及电子显微镜观察细胞形态学的变化;通过DNA梯形电泳和末端脱氧核苷转移酶(TdT)介导的脱氧尿嘧啶三磷酸(dUTP)缺口末端标记(TUNEL)实验,对细胞凋亡情况进行检测。结果 CAOV3、OVCAR3的COX-2蛋白表达均为阳性。NS398对CAOV3、OVCAR3增殖的抑制率,均随着作用时间的延长和药物浓度的增加而增加。NS398作用后,CAOV3、OVCAR3细胞胞浆空泡化,可见凋亡小体,细胞表面的微绒毛消失。DNA梯形电泳显示特征性的梯形谱带,TUNEL实验可见凋亡细胞。结论 COX-2很可能成为卵巢癌化学药物治疗(化疗)的有效靶点,COX-2抑制剂——NS398有可能成为卵巢癌化疗的有效药物。     

丙戊酸钠协同顺铂对HO8910细胞杀伤作用机制研究

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)协同顺铂(DDP)对人卵巢癌HO8910细胞的杀伤作用及机制。方法:以1μg/m l DDP联合3mmol/L VPA处理细胞,MTT法检测细胞生长抑制率;光镜下观察药物作用下各组细胞形态学的改变;流式细胞术检测细胞周期阻滞情况;RT-PCR法检测p53、p21 mRNA水平表达的改变;W estern blot法检测Ac-H3、p53、p21、Cyclin D1蛋白水平表达的改变。结果:(1)VPA能明显抑制HO8910细胞生长,且呈剂量和时间依赖性,VPA+DDP处理组抑制率高于DDP处理组,组间差异有统计学意义(P<0.05);(2)光镜下观察细胞形态,可见VPA处理组细胞体积缩小呈长梭型,胞膜皱缩,贴壁不良,VPA+DDP组改变更明显;(3)VPA阻滞卵巢癌HO8910细胞周期于G0/G1期,VPA+DDP组S期细胞明显减少;(4)VPA及VPA联合DDP均能够明显提高卵巢癌HO8910细胞组蛋白H3的乙酰化水平,上调p53、p21 mRNA及蛋白表达水平,降低CyclinD1蛋白的表达水平,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:VPA能够协同DDP杀伤卵巢癌细胞HO8910;其作用机制可能与VPA提高组蛋白乙酰化水平,上调p53、p21基因表达和下调Cyclin D1表达,引发细胞周期阻滞有关。     

肝细胞生长因子对卵巢癌血管生成因子的影响及信号传导途径

目的研究肝细胞生长因子(HGF)对人卵巢癌SKOV3细胞血管内皮生长因子的影响及其信号传导机制。方法将不同浓度、不同作用时间的HGF和核转录因子(NFkB)抑制剂PDTC刺激培养的SKOV3细胞;应用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测卵巢癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的变化;采用蛋白印迹方法检测卵巢癌细胞VEGF蛋白和核蛋白NFkB的变化。结果HGF促进卵巢癌细胞VEGF mRNA和蛋白的表达,且随时间和浓度增加作用增强,PDTC可以抑制HGF的刺激作用;HGF促进细胞核NFkB蛋白的活化,且随时间延长作用增强,于刺激1 h达高峰,PDTC可以抑制HGF对NFkB的活化作用。结论HGF通过NFkB途径在核酸和蛋白水平调节卵巢癌细胞分泌VEGF。     

糖皮质激素对人卵巢癌细胞系增殖的抑制作用

糖皮质激素对人卵巢癌细胞系增殖的抑制作用卢建张金山牟瀚舟许沈华卵巢含有性激素和糖皮质激素受体。但人们对甾体激素在卵巢癌发生、发展中的作用了解尚不多。ＨＯ－８９１０为一人卵巢癌细胞系，有研究发现，性激素对ＨＯ－８９１０细胞的增殖过程无明显作用［１］。本...     

自泌性转化生长因子－β对人卵巢癌细胞生长的影响

目的：我们以往观察到，人卵巢癌细胞系ＣＯＣ１和ＣＯＣ２在无血清培养条件下，可以分泌转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）类似物，本研究进一步观察该ＴＧＦ－β类似物对自身细胞生长的作用。方法：分别制备ＣＯＣ１和ＣＯＣ２ＲＰＭＩ１６４０无血清培养条件的培养液ＳＦＣＭ１和ＳＦＣＭ２；观察ＳＦＣＭ１和ＳＦＣＭ２对体外培养和接种ＢＡＬＢ／ｃ裸鼠ＣＯＣ１和ＣＯＣ２细胞生长的影响，并与ＴＧＦ－β标准品相比较。结果：ＳＦＣＭ１和ＳＦＣＭ２对体外培养的自身细胞ＣＯＣ１和ＣＯＣ２均表现为剂量依赖性促进作用，ＳＦＣＭ２明显促进ＣＯＣ２细胞在裸鼠体内生长。放射性受体分析结果显示，ＣＯＣ１和ＣＯＣ２细胞均表达ＴＧＦ－β受体（结合部位）；上述ＳＦＣＭ１和ＳＦＣＭ２的促进作用均可以被抗ＴＧＦ－β中和抗体部分阻断。结论：在ＣＯＣ１和ＣＯＣ２细胞存在ＴＧＦ－β自分泌环调节机制，该机制可能与ＣＯＣ１和ＣＯＣ２细胞自主性无止境生长有关。     

抗血管内皮生长因子发夹状核酶基因抑制卵巢癌移植瘤生长的实验研究

目的 采用抗血管内皮生长因子（VEGF）发夹状核酶基因,阻断卵巢癌中VEGF的自分泌和（或）旁分泌通路,以检测抗VEGF发夹状核酶基因对卵巢癌细胞VEGF表达及其肿瘤生长的影响。方法 采用脂质体介导的方法,将自行设计和构建的抗VEGF发夹状核酶基因真核表达载体转染人卵巢癌细胞SKOV3,采用氨基糖甙庆大霉素（G418）筛选获得阳性克隆;RNA斑点杂交检测核酶基因在卵巢癌细胞中的表达;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测转染前后卵巢癌细胞中VEGF的表达;透射电子显微镜观察卵巢癌细胞超微结构改变;观察裸鼠皮下成瘤实验检测转染前后细胞的致瘤能力的变化。结果 转染核酶基因后的卵巢癌细胞VEGFmRNA表达明显降低;透射电子显微镜观察出现凋亡细胞;裸鼠致瘤能力减弱,肿瘤组织中VEGF表达及血管形成减少。结论 抗VEGF发夹状核酶基因可显著抑制卵巢癌细胞VEGF表达,通过减少血管形成抑制肿瘤生长,为进一步开展肿瘤血管靶向基因治疗,提供了实验依据。     

卵巢癌成纤维细胞通过肝细胞生长因子促进癌细胞侵袭作用的研究

目的:探讨卵巢癌相关成纤维细胞(CAFs)分泌因子,特别是肝细胞生长因子(HGF)对卵巢癌细胞株CAOV3侵袭迁移作用的影响。方法:通过RT-PCR检测CAFs和卵巢正常成纤维细胞(NFs)中HGF mRNA的表达及与CAOV3体外共培养后两种成纤维细胞中HGF表达的变化。利用Transwell模型检测CAFs和NFs对CAOV3侵袭迁移的影响。用HGF中和性抗体拮抗CAFs和NFs分泌的HGF,检测CAFs和NFs对CAOV3侵袭迁移影响的变化。结果:CAFs比NFs表达更多的HGF(P<0.01),与CAOV3共培养后,HGF表达均增多(P<0.05)。与NFs相比,CAFs具有更强的促进CAOV3侵袭迁移的能力(P<0.01),但在HGF抗体作用后,两者的促侵袭能力减弱(P<0.01)。结论:卵巢癌细胞可促进其间质成纤维细胞HGF表达,而HGF过表达又反过来促进了自身的侵袭和迁移。