β—淀粉样蛋白片段31—35诱导体外皮质神经元凋主恨的时程 …

在过去工作证实人工合成的β－淀粉样蛋白片段３１～３５（Ａβ３１～３５）诱发体外培养的新生小鼠大脑皮质神经元凋亡的基础上，本研究探讨了这一凋亡的详细过程和一上结相关基因表达的变化。结果显示：（１）用荧光细胞核染料ＰＩ染色，观察到Ａβ３１～３５处理后１ｈ开始出现神经元核染色质凝聚，２ｈ可看到核沟出现和大小不等的核片块，在３，４和２４ｈ出现越来越多的核片块，但不同细胞核的变化不同步，即有些细胞出现核损害     

真核表达载体pcDNA3.1(+)tPA的构建

目的 构建一种无形成病毒及激活原癌基因可能的真核表达载体ｐｃＤＮＡ３．１（＋）ｔＰＡ,以探讨其对纤溶活性影响。方法 用分子克隆方法,将人ｔＰＡｃＤＮＡ与真核表达载体ｐｃＤＮＡ３．１（＋）重组,并对重组质粒进行ＤＮＡ测序,结果 重组质粒ｐｃＤＮＡ３．１（＋）ｔＰＡ经ＫｐｎＩ和ＸｂａＩ酶切后,出现了５．４ｋｂ与２．０ｋｂ两个片段,经ＰｓｔＩ酶切后出现了７８ｂｐ,６２２ｂｐ,２．０ｋｂ及４．２ｋｂ五个片     

真核表达载体pcDNA3.1(十)tPA的构建

目的构建一种无形成病毒及激活原癌基因可能的真核表达载体ｐｃＤＮＡ３．１（＋）ｔＰＡ,以探讨其对纤溶活性影响,方法用分子克隆方法,将人ｔＰＡｃＤＮＡ与真核表达载体ｐｃＤＮＡ３．１（＋）重组,并对重组质粒进行ＤＮＡ测序。结果重组质粒ｐｃＤＮＡ３．１（＋）ｔＰＡ经ＫｐｎⅠ和ＸｂａⅠ酶切后,出现了５．４ｋｂ与２．０ｋｂ两个片段;经ＰｓｔⅠ酶切后出现了７８ｂｐ,４１４ｂｐ,６２２ｂｐ,２．０ｋｂ及４．２ｋｂ五个片段;经ＥｃｏＲＩ酶切后,出现了４７２ｂｐ及６．９ｋｂ两个片段;测序结果证明为人全长ｔＰＡｃＤＮＡ。结论该新型表达质粒的构建为探讨基因防治脑梗死等血栓性疾病奠定了基础。     

脑缺血选择性海马CA1区神经元损害的实验研究

采用Ｐｕｌｓｉｎｅｌｉ－Ｂｒｉｅｒｌｅｙ４血管阻塞脑缺血模型观察了大鼠全脑缺血２０ｍｉｎ再灌流８ｈ，ｃ－ｆｏｓ基因表达及再灌流７ｄ海马ＣＡ１区迟发性神经元损害。在缺血再灌流早期（８ｈ）海马ＣＡ１区极少ｃ－ｆｏｓ表达，而齿状回、海马ＣＡ３区、杏仁核大量ｃ－ｆｏｓ表达。缺血再灌流晚期（７ｄ）镀银染色显示海马ＣＡ１区神经元及其突触终末带呈黑色溃变相，而齿状回、海马ＣＡ３区、杏仁核呈金黄色正常相。相邻切片ＨＥ染色示缺血组海马ＣＡ１区核完整的锥体细胞数（５±２．６个／２００μｍ）与对照组（４０±２．９个／μｍ）比较差异有显著意义（Ｐ＜０．０１）。脑缺血诱导的ｃ－ｆｏｓ基因表达对于缺血易损海马ＣＡ１区迟发性神经元坏死可能起直接的调控作用。     

实验性局灶性脑缺血及再灌流后AP-1复合物的结合活性测定

本研究应用凝胶迁移法检测局灶脑缺血区中Ｆｏｓ与Ｊｕｎ基因的蛋白产物形成异源二聚体复合物—转录因子ＡＰ１（ａｃｔｉｖａｔｏｒｐｒｏｔｅｉｎ１）的ＤＮＡ结合活性。缺血３０ｍｉｎ或９０ｍｉｎ伴随再灌流４ｈ，结果表明ＡＰ１结合活性增加。提高的ＤＮＡ结合活性持续２４ｈ。以上结果说明提高转录因子ＡＰ１的表达水平在缺血病变的基因调节改变中起一定作用     

大鼠内脏伤害性刺激后脑内70kDa热休克蛋白和c—Fos表达

不同的内脏伤害性刺激动物模型上研究脑内ｃ－ｆｏｓ样蛋白（Ｆｏｓ）表达的研究己有报道，而具有分子伴侣功能的７０ｋＤ热休克蛋自（ｈｓｐ７０）的表达是否有改变尚未见报道。本工作以大鼠内脏大神经电刺激作为伤害性刺激动物模型用免疫组化方法观察脑内ｈｓｐ７００和Ｆｏｓ表达的变化。结果显示：在内脏大神经电刺激后１２－１８ｈ于大脑新皮质，内嗅皮层，尾核，丘脑外侧核后部，下丘脑外侧核，下丘脑弓状核，巨细胞网状外侧核等结构观察到ｈｓｐ７０免疫阳性细胞；Ｆｏｓ在蓝斑，中脑导水管周围灰质，中缝大核，背核，下丘脑弓状核，隔核，伏隔核，新皮质等部位于刺激后２ｈ表达增加，４ｈ后减少。对照组脑内ｈｓｐ７０和ｆｏｓ阳性染色很少。这提示：ｈｓｐ７０和Ｆｏｓ表达可能都参与神经系统对内脏伤害性刺激的反应并发挥不同的功能。     

万拉法新对强迫游泳大鼠下丘脑和海马c-fos及c-jun蛋白表达的下调作用

目的　探索新一代抗抑郁药万拉法新对大鼠下丘脑和海马内ｃｆｏｓ 和ｃｊｕｎ 蛋白表达的影响。方法　采用特异性抗体的原位免疫细胞化学方法,在强迫游泳大鼠抑郁模型上,观察万拉法新慢性给药（ 腹腔内注射每日１ 次,连续７ 次）对大鼠游泳不动时间和下丘脑及海马核团ｃｆｏｓ 和ｃｊｕｎ 表达的影响;用图像分析技术对大鼠下丘脑室旁核（ Ｐ Ｖ Ｎ） 、视上核（ Ｓ Ｏ Ｎ） 和海马齿状回（ Ｄ Ｇ） 内的ｆｏｓ 和ｊｕｎ 阳性细胞的相对切面面积比和平均目标灰度进行分析。结果　强迫游泳可使大鼠下丘脑和海马内多个核团的ｃｆｏｓ 和ｃｊｕｎ 蛋白表达水平增加,而万拉法新明显缩短了强迫游泳大鼠的不动时间。图像分析结果提示,万拉法新使强迫游泳大鼠下丘脑 Ｐ Ｖ Ｎ 和 Ｓ Ｏ Ｎ 及海马 Ｄ Ｇ 内ｆｏｓ 和ｊｕｎ 阳性细胞相对切面面积比明显降低（ Ｐ＜００５） ,而平均目标灰度显著增加（ Ｐ＜ ００１） 。结论　下丘脑 Ｐ Ｖ Ｎ、 Ｓ Ｏ Ｎ 和海马 Ｄ Ｇ 可能是介导抗抑郁药抑制大鼠绝望行为的重要中枢核团,ｆｏｓ 和ｊｕｎ 蛋白可能是抗抑郁药发挥受体后作用的传导物质。     

脑缺血再灌流大鼠脑胶质源性神经营养因子基因表达的变化

探讨脑缺血再灌流不同时程及不同程度缺血对海马及皮层胶质源性神经营养因子（ｇｌｉａｌｃｅｌｌｌｉｎｅ ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ, ＧＤＮＦ）基因表达的影响,以及Ｎ甲基Ｄ天冬氨酸（Ｎｍ ｅｔｈｙｌＤｓａｐａｒｔａｔｅ, ＮＭＤＡ）受体拮抗剂,钙离子通道阻断剂是否能调节缺血病态下ＧＤＮＦｍ ＲＮＡ的表达。参照Ｓｍ ｉｔｈ 等方法建立大鼠前脑缺血再灌流动物模型。用ＤＩＧＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ３′ｅｎｄ ｌａｂｅｌｉｎｇ Ｋｉｔ,标记５１ ｍ ｅｒ的ＧＤＮＦ寡核苷酸探针在含有海马结构的冰冻组织切片上进行原位杂交检测ＧＤＮＦｍ ＲＮＡ的表达。１０ ｍ ｉｎ 缺血再灌流２ ｈ,齿状回ＧＤＮＦｍ ＲＮＡ表达上调。再灌流６ ｈ,ＣＡ１,ＣＡ３ 和皮层ＰＡＲ区ＧＤＮＦｍ ＲＮＡ表达亦见增多,２４ ｈ 达高峰。Ｋｅｔａｍ ｉｎｅ 可使ＧＤＮＦ的基因表达在海马结构及皮层ＰＡＲ区明显低于相应的缺血再灌流组,统计学差异显著（Ｐ＜ ００５）。脑缺血再灌流时ＧＤＮＦ基因表达增加,对缺血神经元可能起保护作用。Ｋｅｔａｍ ｉｎｅ可阻断缺血后ＧＤＮＦｍ ＲＮＡ 的表达增加,提示ＮＭＤＡ谷氨酸受体很可能参与介导了缺     

p53,CerbB—2和PCNA在脑胶质瘤中表达的意义及其 …

目的 研究７６例脑质瘤的ｐ５３ＣｅｒｂＢ－２和ＰＣＮＡ表达意义及其相关性。方法 应用ＳＰ微波免疫组化技术和统计学分析。结果 （１）在７６例脑胶质瘤组织中；ｐ５３，ＣｅｒｂＢ－２和ＰＣＮＡ的阳性表达率分别是４４．７４％（３４／７６），３４．２１％（２６／７６）和８０．２６％（６１／７６）。（２）ｐ５３的表达强度与胶质瘤的组织学类型和恶性程度呈显著正相关（Ｐ〈０．０１）。（３）ｐ５３ＣｅｒｂＢ－２和Ｐ     

大鼠脑缺血再灌注区ICAM-1表达与白细胞浸润的观察及丹参的影响

目的　观察细胞间粘附分子（ Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１） 蛋白在大鼠脑缺血再灌注的不同时程脑组织中的表达与中性白细胞浸润程度的关系及丹参对它们的影响。方法　 Ｓ Ｄ大鼠分为３ 组：假手术组、对照组及丹参组。大脑中动脉缺血２ ｈ 再灌注２ ｈ 、１２ ｈ、２４ ｈ 、４８ ｈ 、７２ ｈ 、７ ｄ、１４ ｄ 后,分别进行 Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１ 免疫组织化学及组织 Ｈ Ｅ染色。结果　在脑缺血再灌早期,脑微血管内皮细胞 Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１ 免疫反应开始逐渐增加,再灌注４８ ｈ 达到高峰,再灌注１４ ｄ 接近正常水平,同时脑缺血区中性白细胞浸润也随之增加,在时程上与 Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１ 表达同步。丹参组,再灌注４８ ｈ 后, Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１ 免疫阳性血管数及中性白细胞的浸润比同时间对照组明显降低。结论　脑缺血 Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１ 的表达与中性白细胞浸润密切相关,丹参能降低 Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１ 的表达,抑制中性白细胞的浸润。     

脑星形细胞瘤癌基因表达（论著摘要）

脑星形细胞瘤癌基因表达（论著摘要）林志雄，张鹏飞，陈锦峰（福建医学院附属第一医院神经外科福州３５０００５）抑癌基因ｐ５３和癌基因ｃｅｒｂＢ－２异常表达与肿瘤的发生发展及顶后有关，增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）则是细胞增殖的标志物，本研究旨在观察它们在星形...     

大鼠局灶性脑缺血再灌注时c-fos、bcl-2蛋白的表达

目的：为探讨细胞凋亡在脑缺血再灌注时脑损伤过程中的作用。方法：采用免疫组化法检测大鼠脑缺血再液注不同时间内ｃ－ｆｏｓ、ｂｃｌ－２蛋白表达的水平。结果：①脑缺血再灌注时在缺血侧皮层和基底节区可见ｃ－ｆｏｓ阳性表达,并于缺血 ３０ｍｉｎ再灌注１ｈ时阳性表达达高峰;②脑缺血再灌注时缺血侧皮层和基底节区均有ｂｃｌ－２阳性表达,于缺血２ｈ再灌注３ｈ时阳性表达达高峰。结论：ｃ－ｆｏｓ和ｂｃｌ－２参与大鼠脑缺血再灌注时缺血性细胞损伤的发生。     

噪音刺激下c—fos癌基因表达及钙拮抗剂防护作用的研究

应用机能定位的形态学方法——ｃ－ｆｏｓ癌基因表达法，对心理应激进行探讨。方法用８６ｄＢ噪音持续刺激ＳＤ大鼠１～２小时，并与受到４０ｄＢ强度生理性声音刺激和不给声音刺激的大鼠进行对比。结果接受噪音刺激的动物的脑干听觉通路各级神经元以及与情绪有关的边缘系统皮质下部位的杏仁核和下丘脑室旁核（ＰＶＮ）、视上核等处出现了明显的ｃ－ｆｏｓ癌基因表达产物Ｆｏｓ蛋白的聚集。用药与不用药组差异显著（Ｐ＜０．０５）。结论提示了心理应激的解剖基础和发病机制。     

大鼠胶质细胞源性神经营养因子的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

用逆转录一聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）以大鼠纹体总ＲＮＡ为模板，扩增了大鼠胶质细胞源性神经营养因子（ｒＧＤＮＦ）成熟序列的ｃＤＮＡ片段，将此ｃＤＮＡ克隆到载体ｐＧＥＭ－Ｔ中，对重组质粒进行限制酶切分析和序列测定，确定为含ｒＧＤＮＦｃＤＮＡ的重组质粒，将该ｒＧＤＮＦｃＤＮＡ重组到融合表达载体ｐＧＥＸ－１λＴ内，在大肠杆菌中较高的表达。     

沙鼠脑缺血再灌注后海马中c—fos蛋白表达及纳洛酮 …

目的 观察沙鼠脑缺血再灌注后纳洛酮对海马神经元ｃ－ｆｏｓ蛋白表达及神经元形态改变的影响。方法 采用沙鼠急性全脑缺血模型,用免疫组织化学及组织化学方法观察海马ｃ－ｆｏｓ蛋白表达及细胞形态改变。结果 纳洛酮能明显加强急性全脑缺血沙鼠海马各区ｃ－ｆｏｓ蛋白的表达,ＣＡ１区尤为明显。同时纳洛酮能明显改善缺血后ＣＡ１区神经元细胞的变性坏死。结论 纳洛酮对缺血后海马神经元细胞的保护作用可能与加强ｃ－ｆｏｓ蛋白     

实验性局灶性脑血及再灌流后AP—1复合物的结合活性测定

本研究应用凝胶迁移法检测局灶脑缺血区中Ｆｏｓ与Ｊｕｎ基因的蛋白产物形成异源二聚体复合物－转录因子ＡＰ－（ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ－１）的ＤＮＡ结合活性。缺血３０ｍｉｎ或９０ｍｉｎ伴随再灌流４ｈ，结果表明ＡＰ－１结合活性增加。提高的ＤＮＡ结合活性持续２４ｈ。以上结果说明提高转录因子ＡＰ－１的表达水平在缺血病变的基因调节改变中起一定作用。     

大鼠脑缺血再灌注后Bcl-2、Fas蛋白的表达及意义

目的　探讨 Ｂｃｌ２ 及 Ｆａｓ 蛋白在大鼠脑缺血再灌注损伤中的表达及与缺血性凋亡的关系。方法　采用免疫组化方法观察 Ｂｃｌ２ 及 Ｆａｓ 蛋白在脑缺血再灌注后随时间延长动态变化并用图像分析测定二者的免疫强度。结果　脑缺血再灌注后 Ｂｃｌ２、 Ｆａｓ 表达。 Ｂｃｌ２ 蛋白表达于再灌注 ３ｈ 达高峰,再灌注 ６ｈ 其表达呈下降趋势,再灌注 ２４ｈ 仅少数细胞阳性表达。 Ｆａｓ 蛋白表达于再灌注 ６ｈ 达高峰,对缺血较敏感的海马大锥体细胞亦有表达,再灌注 ２４ｈ 其表达减少。结论　 Ｆａｓ 蛋白表达介导了脑缺血后细胞凋亡的发生,并可能参与了迟发性神经元死亡。 Ｂｃｌ２ 表达与神经元存活密切相关,在神经元缺血敏感性方面起重要作用,对神经元起保护作用。     

淀粉样β蛋白对表达的鼠脑乙酰胆碱受体功能的影响

目的 观察淀粉样β蛋白（Ａβ）表达的鼠脑乙酰胆碱（ＡＣｈ）受体功能的影响,探讨Ａβ和乙酰胆碱受体介导的阿尔茨海默病（ＡＤ）发病机理。方法 将提取的３个月龄鼠的脑乙酰胆碱受体ｍＲＮＡ注射到非洲爪蟾卵母细胞进行受体表达,采用双电极电压钳位技术记录表达的神经递质受体通道电流,了解其电流特性并观察淀粉样β蛋白１－４０（Ａβ１－４０）对其的影响。结果 表达到爪蟾卵母细胞膜上的ＡＣｈ受体为Ｍ型ＡＣh受体,其激     

缺血性脑损伤后神经元凋亡相关基因表达的研究进展

神经元凋亡是缺血性脑损伤后细胞死亡的一种重要形式，脑缺血后许多基因被诱导表达并且作为调控因子参与了神经元凋亡过程，主要包括Ｂｃｌ－２、Ｈｓｐ７０、ｐ５３、ｃ－ｆｏｓ等基因，本文综述了这些凋亡相关基因和蛋白质产物在缺血性脑损伤后的表达及发挥的作用。     

星形细胞瘤中肿瘤抑制基因p53的表达及PCNA,GFA …

目的 检测３０例不同病理级别星形细胞瘤标本中ｐ５３基因的表达状况及肿瘤其它生物学特性。方法 采用常规ＨＥ染色及免疫组化技术检测３０例标本中ｐ５３，增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）胶质纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）波形蛋白（ＶＩＭ），Ｓ１００蛋白的表达。结果 ｐ５３免疫组化染色阳性率随病理级别增高而增高，Ⅳ级染色阳性率８３．３％，Ⅰ～Ⅱ级１５．４％，且不同级别染色有差异；ＰＣＮＡ均呈阳性，Ⅳ级病理染色阳性强度大