丹参素对氧化低密度脂蛋白致血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的 探讨丹参素( DSS)对氧化低密度脂蛋白(ox - LDL)致血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的影响和机制.方法 采用反复贴块法培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞原代培养成功后,采用第3～10代细胞应用于实验.收集培养的细胞种植在6孔板中的4个孔中,分为4组:①正常组;②ox - LDL(100 mg/L)干预组;③ox - LDL(1 00 mg/L)+ DSS( 50 mg/L)干预组;④ox - LDL(100mg/L)+ DSS(100 mg/L)干预组,作用12h后,收集每孔细胞,用流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 丹参素可明显升高ox - LDL引起的凋亡指数升高.结论 丹参素可促进ox - LDL致血管平滑肌细胞凋亡.     

丹参的两种主要成分对培养内皮祖细胞药理作用研究

目的：观察丹参的两种主要成分丹参素和丹参酮ⅡA对体外培养内皮祖细胞（EPC）数量和功能的影响。方法：密度梯度离心法获取外周血单个核细胞，培养7天后，收集贴壁细胞并分别加入丹参素5mg／L、10ms／L及20mg／L，丹参酮ⅡA0．05mg／L、0．2mg／L及0．8mg／L干预72h。荧光显微镜、流式细胞仪及免疫组化法鉴定EPC，分别观察EPC的数量、增殖、迁移及黏附能力。结果：与对照组相比，丹参素干预组促进外周血EPC扩增，并显著改善外周血EPC的黏附、迁移及增殖能力，丹参酮ⅡA组对内皮祖细胞数量和功能无明显影响。结论：在丹参的两种主要成分中，丹参素可增加培养EPC的数量并改善其功能，丹参酮ⅡA则无明显影响。     

丹参注射液对脑梗死患者内皮祖细胞数量及活性的影响

脑梗死主要病因是动脉粥样硬化,而内皮损伤和内皮功能障碍与其关系密切。研究表明,外周血中血管内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）数目和动脉粥样硬化的众多危险因素（年龄、性别、高血压、糖尿病、高脂血症等）间存在密切关系。     

丹参的两种主要成分对培养内皮祖细胞药理作用研究

目的:观察丹参的两种主要成分丹参素和丹参酮IIA对体外培养内皮祖细胞(EPC)数量和功能的影响。方法:密度梯度离心法获取外周血单个核细胞,培养7天后,收集贴壁细胞并分别加入丹参素5mg/L、10 mg/L及20mg/L,丹参酮IIA0.05mg/L、0.2mg/L及0.8mg/L干预72h。荧光显微镜、流式细胞仪及免疫组化法鉴定EPC,分别观察EPC的数量、增殖、迁移及黏附能力。结果:与对照组相比,丹参素干预组促进外周血EPC扩增,并显著改善外周血EPC的黏附、迁移及增殖能力,丹参酮IIA组对内皮祖细胞数量和功能无明显影响。结论:在丹参的两种主要成分中,丹参素可增加培养EPC的数量并改善其功能,丹参酮IIA则无明显影响。     

白花丹参提取物对脂多糖损伤内皮祖细胞周期与凋亡的影响

目的探讨白花丹参提取物对脂多糖损伤内皮祖细胞周期与凋亡的作用。方法以10μg/mL脂多糖诱导内皮祖细胞损伤,制备内皮祖细胞损伤模型后用不同质量浓度白花丹参提取物干预,用MTT比色法检测各组细胞活性,用AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡变化,碘化丙啶单染流式细胞仪检测各组细胞周期。结果与正常对照组比较,模型组细胞增殖活性明显下降,细胞凋亡率明显增加,S期细胞比率降低,G0/G1期细胞比率增加。与模型组比较,白花丹参组细胞存活率升高,细胞凋亡率下降,且呈剂量依赖性,G0/G1期细胞比率降低,S期及G2/M期细胞比率均增加。结论白花丹参对脂多糖损伤的血管内皮祖细胞有保护作用,其机制可能是通过保护细胞周期正常进行、抑制细胞凋亡实现的。     

高胆固醇血症患者外周血内皮祖细胞的变化及丹参的保护作用

目的:观察丹参对高胆固醇血症患者内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的保护作用。方法:年龄性别匹配的健康志愿者及高胆固醇血症患者各6例入选研究,各取空腹外周血20 mL,采用密度梯度离心法分离单个核细胞,贴壁选择法行EPCs培养,以健康志愿者为对照组,各高胆固醇血症患者血样一分为二,分别为高胆固醇组及丹参组,丹参组培养时另添加复方丹参注射液10μg/mL,采用流式细胞术、倒置显微镜、MTT法、Boyden小室等分别观察各组EPCs数量、集落形成能力、增殖能力、黏附能力及迁移能力。结果:高胆固醇血症患者外周血EPCs数量较对照组显著下降〔(6.13±0.84)vs(24.53±3.67),P<0.01〕,且其克隆形成能力、增殖能力、黏附能力及迁移能力也显著降低,培养时添加复方丹参注射液使丹参组克隆形成能力、增殖能力、黏附能力及迁移能力较高胆固醇组显著提高,但低于对照组,其中黏附能力及迁移能力虽仍较对照组低,但无统计学差异(P>0.05)。结论:高胆固醇血症患者外周血内皮祖细胞数量下降,功能受损,复方丹参注射液对高胆固醇血症患者外周血培养的内皮祖细胞功能有保护作用。     

丹参素对异丙肾上腺素损伤大鼠内皮血管活性的保护作用及机制研究

目的 观察异丙肾上腺素持续给药对大鼠内皮血管活性的影响及丹参素的保护作用.方法 雄性SD大鼠随机分为5组:对照组,模型组,丹参素高、低剂量(3、10 mg/kg)组,缬沙坦(10 mg/kg)阳性对照组.血管切片染色观察组织形态改变;观察各组大鼠内皮完整胸主动脉环对内皮依赖型血管收缩剂杨梅黄酮、内皮依赖型血管舒张剂乙酰胆碱的反应性,观察缝隙连接开放剂AAP-10和阻断剂18α-甘草次酸对模型大鼠血管环舒缩功能的影响;Western blotting法测定血管缝隙连接蛋白Connexin 43 (Cx43)、Connexin 40 (Cx40)的表达水平.结果 模型组大鼠血管中膜厚度明显增加,收缩舒张功能均下降:与模型组相比,丹参素给药组大鼠血管组织结构有所改善,血管舒缩功能显著提高(P＜0.05).与模型组相比,模型大鼠胸主动脉环用18α-甘草次酸孵育后收缩功能显著降低(P＜0.05),用AAP-10孵育后收缩功能恢复,舒张功能改变不明显.Western blotting结果显示,丹参素和缬沙坦治疗组均可有效逆转异丙肾上腺素引起的Cx40、Cx43水平降低(P＜0.05).结论 丹参素可有效保护异丙肾上腺素引起的大鼠血管环收缩与舒张功能损伤,其机制可能与丹参素保护血管上缝隙连接蛋白表达,逆转受损信号传导有关.     

复方丹参注射液对内皮祖细胞数量和功能的影响

目的:观察复方丹参注射液对内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)数量和功能的影响。方法:采用密度梯度离心法分离人脐血单个核细胞,接种到包被有人纤维连接蛋白的培养皿,分为对照组(未加细胞因子)、VEGF组(加血管内皮生长因子10 ng.mL^-1)、复方丹参50组、复方丹参10组及复方丹参2组(分别加入复方丹参注射液50,10,2μg.mL^-1),培养3 d后,倒置显微镜下观察集落形成,采用流式细胞术测定各组EPCs数,采用黏附能力测定试验测定黏附能力。结果:VEGF组、复方丹参10组及复方丹参2组的EPCs数显著高于对照组(分别P<0.01,P<0.05,P<0.01),且复方丹参2组显著高于复方丹参10组及VEGF组(均P<0.01);复方丹参50组的EPCs数显著低于对照组(P<0.01)。复方丹参10组及复方丹参2组的集落数及黏附细胞数显著高于对照组,而复方丹参50组则显著低于对照组。结论:低剂量复方丹参显著提高培养EPCs数量和功能,高剂量复方丹参则反之。     

泰山白花丹参提取物对H2O2诱导的人脐血内皮祖细胞损伤的保护作用及机制

目的:研究泰山白花丹参提取物对过氧化氢(H202)诱导的人脐血内皮祖细胞(EPCs)氧化应激损伤的保护作用及机制.方法:通过密度梯度离心分离人脐血单个核细胞,EBM-2完全培养基诱导分化培养EPCs.以0.001％H2O2诱导EPCs损伤,以泰山白花丹参提取物干预,以eNOS抑制剂L-NMMA定位泰山白花丹参对EPCs的作用靶位.通过光镜观察细胞形态,以四甲基偶氮噻唑蓝比色法检测细胞活力,用流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡变化,取各实验组上清行丙二醛(MDA)含量检测.结果:EPCs受到氧化损伤后,细胞活力明显降低,细胞凋亡明显增加,上清MDA含量明显增加,加入白花丹参提取物可明显改善上述结果,而1 mmol·L-1 L-NMMA+0.6 g·L-1白花丹参制剂+H2O2处理组与H2O2组比较细胞活力和细胞凋亡率都没有显著差异.结论:泰山白花丹参提取物对H2O2损伤后内皮祖细胞有显著保护作用,eNOS抑制剂L-NMMA能抵消这种保护作用,说明泰山白花丹参可能是通过eNOS途径对EPCs氧化应激损伤起保护作用(eNOS是白花丹参的作用靶点之一).     

丹参素对低氧低糖损伤神经细胞的影响

目的 评价丹参素对低氧低糖诱导人拟神经元细胞SH-SY5Y损伤的影响.方法采用细胞培养于人工无糖培养基、1.5% O_2和5% CO_2环境建立低氧低糖损伤SH-SY5Y细胞模型.以SRB方法测定存活细胞数,相差和荧光显微镜观察细胞凋亡,采用细胞培养上清乳酸脱氢酶(LDH)活性反映细胞受损伤程度,并测定了细胞内脂质过氧化产物丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性以反映细胞氧化胁迫状态.结果 低氧低糖损伤24h,存活细胞数量明显减少,SH-SY5Y细胞皱缩、吖啶橙和溴化乙啶双染可见明显核皱缩、碎裂及凋亡小体出现,细胞培养上清LDH水平明显升高,细胞内MDA含量明显升高,SOD水平降低,表明细胞受到严重的氧化胁迫损伤.丹参素可抑制细胞内SOD活性的降低,对上述各损伤指标均有明显的干预作用,且具有浓度依赖性.结论 丹参素对低氧低糖所致SH-SY5Y神经瘤细胞损伤有明显保护作用,有望成为有临床应用价值的神经保护剂.     

丹酚酸B预处理EPCs联合BMSc移植对AMI大鼠心功能的影响

[目的]通过建立大鼠急性心肌梗死模型,将中药丹酚酸B预处理的内皮祖细胞(EPCs)按不同比例与骨髓基质细胞(BMsc)进行混合后注射至缺血局部,观察细胞移植后大鼠急性心肌梗死模型心功能的改善情况.[方法]应用密度梯度离心法和贴壁筛选法培养、纯化EPCs与BMSCs;采用结扎大鼠左冠状动脉前降支,制作大鼠急性心肌梗死模型.丹酚酸B最佳药物浓度处理的EPCs,以不同比例(1:1,2:1,4:1,8:1)与BMSc混合,在大鼠心肌梗死区周边分5点注射.[结果]各细胞移植组均能不同程度的改善心肌梗死大鼠心室结构,增强心功能.超声心动图结果:同-时间细胞移植组均能不同程度的改善心肌梗死大鼠心室结构,增强心功能,与模型组相比,4:1组、8:1组左室射血分数及心输出量明显升高(P<0.05).[结论]丹酚酸B预处理的EPCs联合BMSc的移植促进了AMI大鼠左室功能的恢复.     

子宫内膜癌和子宫平滑肌瘤内皮抑素及CD34内皮祖细胞的表达及其意义

目的研究子宫内膜癌和子宫平滑肌瘤组织内皮抑素、内皮祖细胞(EPCs)的表达及其临床意义。方法应用免疫组化方法检测24例正常子宫内膜、68例子宫肌瘤和92例子宫内膜癌组织中内皮抑素及EPCs的表达,评价其与子宫内膜癌临床病理分期及病情发展的相关性。结果①内皮抑素蛋白的表达在正常子宫内膜与子宫平滑肌瘤之间无显著性差异,子宫内膜癌组织中内皮抑素表达明显高于正常子宫内膜组和子宫平滑肌瘤组。②子宫内膜癌CD34 EPCs表达与正常子宫内膜及子宫平滑肌瘤比较均有显著性差异。③临床期别越高,内皮抑素的表达越高,内皮抑素表达与临床手术分期相关(P<0.05)。④临床期别越高,组织分化越差,EPCs表达越高。临床手术分期、组织学分级、淋巴结转移和肌层浸润均与CD34 EPCs表达有关。⑤内皮抑素与EPCs的表达有显著相关性(r=0.708,P<0.01),内皮抑素水平越高,EPCs表达越多。结论子宫内膜癌组织内皮抑素和CD34 EPCs表达水平与子宫内膜癌的发生发展及患者预后有关。     

丹参中丹参素、原儿茶醛来源的初步研究

目的：考察丹参药材中丹参素和原儿茶醛的来源。方法：以丹参素、原儿茶醛为指标成分，用高效液相色谱法测定其含量；采用液相色谱与多级质谱联用法鉴定丹酚酸。结果：丹参素、原儿茶醛并非丹参固有成分，随煎煮时间增加而增加，而丹酚酸B随煎煮时间增加而减少。结论：丹参素、原儿茶醛是丹酚酸B的降解产物。     

薯蓣皂苷致肝毒性及其机制的初步研究

薯蓣皂苷有广泛的生物学作用,具有广阔的应用前景,但是目前有关薯蓣皂苷毒理及其机制方面研究较少。该文从细胞水平上检测薯蓣皂苷(dioscin)对肝脏的毒性,同时对薯蓣皂苷作用于HepG2细胞后CYP1A在mRNA、蛋白水平的变化进行了研究,对CYP1A转录调控子芳香烃受体(AhR)的表达也进行了检测,旨在探索薯蓣皂苷的肝毒性及其可能的机制。将0.5~32 μmol·L^-1薯蓣皂苷作用于HepG2细胞12 h,利用CCK-8法检测细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞膜损伤,采用倒置显微镜观察细胞形态变化,流式细胞仪检测活性氧(ROS)的生成量;实时荧光定量PCR检测CYP1A及其转录调控子AhR mRNA的表达;Western blot 法检测CYP1A1的蛋白表达。结果显示薯蓣皂苷0.5~32 μmol·L^-1作用于HepG2细胞可以显著抑制细胞活性,与对照组相比,LDH释放量显著升高,ROS的生成量显著增大,细胞形态发生变化并坏死。 Q-PCR 检测结果显示,与对照组相比,CYP1A及芳香烃受体(AhR)mRNA表达升高;在蛋白水平上,薯蓣皂苷作用于细胞后CYP1A1蛋白表达升高,且AhR的拮抗剂白藜芦醇(Res)与薯蓣皂苷合用后能使CYP1A1的表达下调。以上实验结果表明大剂量薯蓣皂苷具有肝细胞毒作用,这可能与其能激活芳香烃受体(AhR),诱导CYP1A表达进而产生毒性作用有关。     

丹酚酸B干预EPCs对BMSCs移植的AMI大鼠心肌VEGF、bFGF蛋白表达的影响

[目的]探讨中药丹酚酸B预处理的内皮祖细胞(EPCs)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植后,急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌血管新生的影响.(方法]密度梯度离心法和贴壁筛选法培养、纯化EPCs与BMSCs;免疫细胞化学法(CD34/CD133/CD44)分别鉴定两种细胞.结扎大鼠左冠状动脉,制作大鼠急性心肌梗死模型;丹酚酸B最佳药物浓度干预的EPCs,与BMSCs混合,在大鼠心肌梗死区周边分5点注射.免疫组织化学法检测心肌蛋白的表达.[结果]细胞移植4周后,EPCs与BMSCs共移植组血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的积分光密度(IOD)分别13.179±3.053、23.634±4.705,与对照组差异具有统计学意义.[结论]丹酚酸干预EPCs提高BMSCs移植后大鼠心肌VEGF、bFGF蛋白表达,有效改善了BMSCs向心肌分化的血管微环境.     

龙胆苦苷对脂多糖诱导血管内皮细胞损伤的作用及机制

目的 研究龙胆苦苷对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导血管内皮细胞损伤的作用及机制.方法 以LPS刺激大鼠主动脉血管内皮细胞RAEC,并给予低、中、高剂量(5、10、20μmol/L)龙胆苦苷进行干预,采用CCK-8法检测细胞增殖情况;采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用试剂盒检测细胞丙二醛水平...     

当归补血汤对内皮祖细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:研究当归补血汤(DBT)对过氧化氢(H2O2)诱导的小鼠骨髓来源内皮祖细胞(EPCs)氧化应激损伤的保护作用。方法:采用密度梯度离心法获取小鼠骨髓来源的单核细胞,通过特定培养基培养并鉴定获得EPCs,实验分为空白组,模型组,DBT组(100,200,400 mg·L-1)。采用噻唑蓝(MTT)比色法测定EPCs细胞存活率,构建H2O2诱导的细胞损伤模型;通过MTT,迁移小室(transwell),Matrigel基质胶,超氧化物荧光阴离子探针(DHE),分别检测EPCs增殖、迁移与体外血管形成能力,以及活性氧(ROS)水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞自噬相关蛋白泛素结合蛋白SQSTM1(p62),微管相关蛋白1轻链3Ⅱ型蛋白(LC3-Ⅱ)的蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组EPCs细胞增殖能力、迁移能力、成管腔数及小管分支长度均显著降低(P0.01),胞内ROS水平显著升高(P0.01),自噬标志性蛋白p62显著升高(P0.01),LC3-Ⅱ蛋白表达降低(P0.01);与模型组比较,DBT组能呈浓度依赖性地升高EPCs增殖能力与迁移能力(P0.01),增加细胞成管腔数和小管分支长度(P0.01),降低胞内ROS水平(P0.01);此外,DBT呈浓度依赖性上调了LC3-Ⅱ蛋白的表达(P0.01),降低p62蛋白的表达(P0.01)。结论:当归补血汤能提高氧化应激状态下的EPCs自噬水平,促进损伤的EPCs迁移、增殖能力与血管形成能力,保护氧化应激条件下内皮祖细胞的生物学功能。     

益气逐瘀法干预择期PCI围手术期对EPCs动员与归巢影响研究

目的:探讨益气逐瘀法对择期PCI围手术期EPCs动员与归巢影响。方法:采用随机、双盲、安慰剂、对照试验方法,研究对象为首都医科大学附属北京中医医院心血管科2016年7月至2016年11月成功接受PCI治疗的证属气虚血瘀证非ST段抬高急性冠脉综合征(NSTE-ACS)患者。64名符合纳入标准的患者被随机分为试验组(n=33)和对照组(n=31),对照组予常规西药治疗+安慰剂,试验组在常规西药治疗基础上加服参元丹胶囊,分别采用流式细胞仪、ELISA法进行检测2组择期PCI前后3个时点(术前、术后24 h、术后1周)外周血EPCs计数及促血管内皮生成因子VEGF水平,探索益气逐瘀法对NSTE-ACS患者择期PCI围手术期EPCs动员与归巢的影响。结果:2组受试者PCI术前外周血EPCs计数、VEGF水平比较差异无统计学意义(P=0.35、P=0.48),2组PCI术后外周血中EPCs计数及VEGF水平较术前均升高(P0.05),但接受参元丹治疗的患者外周血中VEGF水平高于对照组。2组PCI术后7 d和术后24 h比较,外周血EPCs计数及VEGF水平均变化不大(P0.05)。结论:参元益气活血胶囊(参元丹)干预NSTE-ACS患者PCI围手术期可促进骨髓EPCs动员与归巢,其机制可能与SYD增加循环中VEGF水平有关。