红景天苷体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞*◇

背景：前期实验证明红景天苷能诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞定向分化,但是具体的影响方式尚不清楚。 目的：以骨髓间充质干细胞为研究对象,进一步探讨红景天苷诱导其向神经元样细胞定向分化的作用方式和分子机制。 方法：选取第2代Wistar大鼠骨髓间充质干细胞,按照不同的诱导剂分为维甲酸诱导组、红景天苷诱导组和对照组,通过不同的时间点对细胞进行观察。 结果与结论：两诱导组细胞不同时间点神经干细胞标志物巢蛋白、神经细胞分化相关的兔抗微管蛋白和神经微管相关蛋白2表达阳性率均高于对照组(P < 0.01);神经胶质纤维酸性蛋白阳性率维甲酸组显著高于红景天苷组(P < 0.01)。Real Time-PCR结果显示,维甲酸和红景天苷诱导不同时间,两组细胞均有神经细胞相关基因神经元特异性烯醇化酶、神经微管相关蛋白2 mRNA表达,与诱导时间有关且不完全相同,两组间神经胶质纤维酸性蛋白mRNA的高丰度出现于诱导早期;诱导后两组神经元特异性烯醇化酶蛋白的表达随时间延长显著增加,兔抗微管蛋白表达出现于诱导早期。说明红景天苷能促进骨髓间充质干细胞向神经细胞分化,其诱导效应与维甲酸相似,且向神经元样细胞定向分化方面优于维甲酸。      

皮肤源祖细胞体外诱导神经元样细胞的实验研究

目的探讨皮肤源祖细胞的体外培养、鉴定及定向诱导成神经元的方法,为治疗中枢神经系统疾病提供理想的种子细胞。方法取出生1～3d的昆明鼠皮肤,分离培养出皮肤源祖细胞;皮肤源祖细胞以含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和10%胎牛血清(FBS)的培养基中预诱导24h,再以含二甲基亚砜(DMSO)和3-叔丁基-4-羟基茴香醚(BHA)的培养基中诱导7d;观察诱导细胞形态,以及免疫荧光鉴定细胞表达神经丝蛋白(NF)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)情况;ELISA检测诱导细胞分泌神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)情况。结果细胞诱导后呈多极性生长;细胞免疫荧光表达NF和NSE,GFAP表达阴性;随诱导时间延长培养液中BDNF和NGF浓度增加。结论皮肤源祖细胞在特定条件下能定向分化为神经元,并且能提高神经生长因子和脑源性神经营养因子的分泌,能为组织工程皮肤和修复神经系统病变提供种子细胞。     

神经生长因子诱导神经干细胞向胆碱能神经元的分化

为了探讨神经生长因子(NGF)是否具有诱导神经干细胞(NSCs)向胆碱能神经元分化的能力,利用无血清培养技术从胎鼠脑内获得神经干细胞,传代纯化后利用免疫细胞化学技术,观察不同剂量NGF作用后神经干细胞向胆碱乙酰转移酶(ChAT)阳性细胞分化的情况。结果发现:50、100、200ng/ml NGF组ChAT阳性细胞数明显比对照组增加,且以100ng/ml组最为明显;各NGF组,分化的细胞状态较好,且突起明显比对照组增粗增长,以200ng/ml组最为明显。此结果证明NGF具有诱导NSCs向胆碱能神经元分化的趋势,且能促进分化细胞突起的生长。     

Sertoli细胞诱导大鼠胚胎中脑神经干细胞定向分化的研究

目的研究Sertoli细胞对胚胎中脑神经干细胞的营养及向多巴胺能神经元分化的诱导作用。方法将大鼠Sertoli细胞与胚胎13d大鼠中脑神经前体细胞体外共培养5、7、10、14d后,免疫荧光检测神经干细胞标记物Nestin、神经元前体细胞标记物β-Ⅲ tubulin、多巴胺能神经元标记物酪氨酸羟化酶(TH)的表达情况。结果随着共培养时间的延长,神经干细胞中nestin阳性细胞数量逐渐减少,β-Ⅲ tubulin阳性细胞数在共培养7d时较多,TH阳性的神经元在共培养10d时数量最多。而且在各时间段TH阳性细胞数均多于单独培养的神经前体细胞。结论Sertoli细胞能够诱导与其共培养的胚胎中脑神经干细胞定向分化为多巴胺能神经元。     

人源脂肪干细胞向膀胱平滑肌细胞诱导分化的试验研究

目的通过成熟的体外培养和扩增脂肪干细胞的流程获得人脂肪干细胞,对脂肪干细胞的分化潜能进行研究,探索体外诱导脂肪干细胞向膀胱平滑肌细胞定向分化的方法。方法通过酶消化法从吸脂术后的脂肪抽吸液中分离脂肪干细胞并在体外培养、扩增。尝试利用TGF-β及抗坏血酸建立体外诱导脂肪干细胞向膀胱平滑肌细胞定向分化体系。以RT-PCR、免疫组织化学的方法评价平滑肌分化情况。结果人脂肪干细胞具有良好的增殖能力和分化潜能,诱导后细胞排列形态与平滑肌细胞漩涡状排列类似,RT-PCR结果提示a-肌动蛋白、Calpolin,Sm22表达,MHC表型无表达;免疫组化显示a-肌动蛋白显色随诱导培养时间增加。结论人脂肪干细胞具有向平滑肌细胞分化潜能,TGF-β及抗坏血酸具促使脂肪干细胞向平滑肌分化作用。     

C6胶质瘤细胞体外诱导神经干细胞的迁移

目的：体外观察 C6胶质瘤细胞的培养上清是否有诱导神经干细胞迁移的作用。方法：实验组取处于指数生长期的 C6胶质瘤细胞或星形胶质细胞的无血清培养上清加入细胞培养室的下室,并加无血清培养基;培养室的上室加处于对数生长期的神经干细胞球悬液,培养箱中共培养,光镜下计数迁移的细胞球数。结果：C6胶质瘤细胞的上清引起神经干细胞球迁移的数目明显多于星形胶质细胞的上清和新鲜无血清培养基。结论：C6胶质瘤细胞的培养上清中存在诱导神经干细胞球迁移的物质,这将为研究诱导神经干细胞迁移的物质提供很大的便利。     

一种诱导神经干细胞向神经元定向分化的方法

目的 介绍一种诱导神经干细胞向神经元定向分化的方法 . 方法 采用选择性无血清培养液培养大鼠神经干细胞.纯化培养2或3代后,将其接种于条件培养液中,诱导其向神经元定向分化.用倒置显微镜观察形态学变化,用NSE免疫细胞化学法检测其向神经元分化情况. 结果 条件培养液可有效诱导神经干细胞向神经元定向分化.将神经球消化成单细胞后接种,不但分化过程比神经球接种更同步,而且可提高其向神经元分化的比例. 结论 本方法 可稳定高效地诱导神经干细胞向神经元定向分化.     

联合应用EGF和NGF对成年大鼠海马神经干细胞分化的影响

目的探讨联合应用表皮生长因子(EGF)和神经生长因子(NGF)对成年大鼠海马神经干细胞(NSCs)分化的影响。方法用含碱性成纤维生长因子(bFGF)、表皮生长因子、B27的无血清细胞培养技术体外培养成年大鼠海马神经干细胞,单克隆培养细胞行Nestin免疫细胞化学染色,诱导分化1w后细胞行GFAP和NSE免疫细胞化学染色;根据培养基中所加营养因子的不同将第4代细胞分为4组培养:EGF组、EGF+NGF组、NGF组、对照组,此4组细胞培养1w后行NSE免疫细胞化学染色,计数阳性细胞比例后进行统计学分析。结果单克隆培养后克隆球表达Nestin,诱导分化1w后细胞表达NSE、GFAP。与空白对照组相比,EGF组、NGF组和EGF+NGF组细胞分化为神经元的比例较高(P<0.05),其中EGF+NGF组细胞的比例最高。结论单独或联合应用EGF、NGF可以促进成年大鼠海马神经干细胞向神经元分化。     

无血清培养条件下诱导胚胎干细胞向多巴胺能神经元定向分化的实验研究

目的 寻求无血清、无饲养层细胞存在的情况下，胚胎干细胞向多巴胺能神经元定向诱导分化的最佳条件。方法 采用阶段诱导的方法，在不同阶段加入不同的生长因子，对新近分离的胚胎干细胞进行分化培养。首先向无血清培养液中分别加入bFGF和LIF，实现由胚胎干细胞向神经前体细胞的定向分化，通过巢蛋白(nestin)免疫细胞化学染色对神经前体细胞进行鉴定；在此基础上，撤除bFGF和LIF，加入B27无血清培养基、IL-1后继续培养，实现由神经前体细胞向多巴胺能神经元的定向诱导分化；通过酪氨酸羟化酶(TH)免疫细胞化学染色对多巴胺能神经元进行鉴定。结果 有85％的细胞团呈nestin免疫阳性着色，多巴胺能神经元的分化比率为13％，较多巴胺能神经元的自然分化比率(4％)有明显提高。结论 在无血清、无饲养细胞的情况下，我们采用阶段诱导的方法，在不同的阶段加入不同的生长因子，可有效诱导多巴胺能神经元的分化，使胚胎干细胞的诱导分化过程更易于操作。     

维甲酸诱导小鼠胚胎干细胞向神经样干细胞分化

目的探讨维甲酸（RA）诱导体外培养的小鼠胚胎干细胞（ESC）向神经样干细胞定向分化。方法在无白血病抑制因子（LIF）存在的条件下,将体外培养的ESC悬浮培养4天,形成拟胚体（EB）,再经RA诱导4天后进行细胞冰冻切片,行免疫细胞化学染色计数生殖特异性基因Oct-4和神经干细胞特异性标志物Nestin的表达百分率。结果经诱导的ESC呈现Oct-4阳性细胞百分率为67．34％,而Nestin阳性细胞百分率为36．52％。结论体外培养的小鼠ESC经RA诱导后有部分细胞定向诱导分化为神经样干细胞。     

Hepatocyte progenitors in man and in rodents--multiple pathways, multiple candidates

In severe injury, liver-cell progenitors may play a role in recovery, proliferating, and subsequently differentiating into mature liver cells. Identifying these progenitors has major therapeutic potential for ex vivo pharmaceutical testing, bioartificial liver support, tissue engineering and gene therapy protocols. Potential liver-cell progenitors have been identified from bone marrow, peripheral blood, cord blood, foetal liver, adult liver and embryonic stem cells. Differences and similarities are found among cells isolated from rodents and humans. This review will discuss identifying markers and differentiation potential in in vitro and in vivo models of these putative progenitors in both humans and rodents.     

On the possible origin of extra-epithelial enterochromaffin cells by budding from the crypts of Lieberkuhn

This study was undertaken to test Pierre Masson's still unconfirmed theory that extra-epithelial enterochromaffin cells in the gut arise in adult life by budding from the crypts of Lieberkuhn under conditions of low grade inflammation. Appendices (900) were reviewed and 19 were selected for serial section study because in random sections they showed lateral fusion of the crypts, one of the key features described by Masson. Ten specimens without crypt fusion served as controls. Sixteen of the 19 study specimens and one of the control specimens showed budding, averaging one bud in every 88 sections. Most buds were in direct contact with Schwann cells in the adjacent lamina propria and 45 per cent of them contained enterochromaffin cells. There was also histologic evidence linking buds and lateral crypt fusion to low grade inflammation. Masson's ideas are, therefore, confirmed insofar as the existence of buds and their relationship to enterochromaffin cells, Schwann cells, and inflammation is concerned. The actual separation of buds from the crypts to form extra-epithelial enterochromaffin cells has yet to be proved.     

大鼠肝卵圆细胞的诱导、分离及鉴定

目的建立大鼠肝卵圆细胞的增殖模型,并探索其分离及鉴定方法。方法雄性Wistar大鼠每天1次连续灌胃给予不同剂量二乙酰氨基芴(2-AAF熏5、10、15、20、25mg/kgBW),第5天行标准的2/3肝切除术,术后按各自剂量继续给予11天,不同时间取肝脏组织,行甲胎蛋白、细胞角蛋白18及19染色并观察。以确定的2-AAF最佳剂量制备大鼠肝干细胞增殖模型,Seglen胶原酶原位灌注结合Percoll密度梯度离心分离纯化大鼠肝卵圆细胞,光镜、电镜下观察细胞特点,并进行上述细胞表型标志免疫组化染色。结果2-AAF15mg/kgBW能建立较理想的肝卵圆细胞增殖模型。HE染色可见汇管区及中央静脉周围大量增殖的嗜碱性小细胞,电镜下观察此种细胞具有卵圆形细胞核、细胞质少而淡、核/浆比例较大等特点,免疫组化染色证实甲胎蛋白、细胞角蛋白18和19染色阳性,白蛋白及白细胞共同抗原(LCA)染色阴性。分离所得底层细胞,光镜下表现大小不等、不规则圆形细胞,体积较小,细胞核/浆比例较大,电镜下细胞表面可见少量短而小的微绒毛状突起,余同增殖细胞特点,免疫组化染色与增殖细胞表现相同细胞表型特点。结论本方法可成功诱导、分离、纯化大鼠肝卵圆细胞,符合肝卵圆细胞的形态特点、超微结构及细胞表型标志特点。     

人外周血树突状细胞-乳腺癌细胞融合细胞

目的：探讨树突状细胞—肿瘤细胞融合细胞的形态特性，为研制融合细胞疫苗提供形态学依据。方法：将免疫磁珠法分离的人外周血树突状细胞与人乳腺癌细胞株MCF7融合，瑞氏—姬姆萨染色观察；扫描电镜观察树突状细胞、融合细胞的表面超微结构。结果：树突状细胞与MCF细胞按10：1比例融合后，一个乳腺癌细胞可以与一个或多个树突状细胞相融合；扫描电镜下可见分离的树突状细胞表面有突起，树突状细胞/MCF7融合细胞具两种亲代细胞的表面超微结构特点。结论：树突状细胞与人乳腺癌细胞融合后无明显的形态改变。     

人羊膜上皮细胞上清液对人肝癌BEL-7402细胞的体外抗肿瘤作用

目的探讨人羊膜上皮细胞(h AECs)上清液对体外培养的肝癌细胞系BEL-7402细胞迁移、增殖与凋亡的影响。方法 BEL-7402细胞随机分为5组,其中对照组不加h AECs上清液,其余4组加入体积分数分别为6.25%、12.5%、25%和50%的h AECs上清液作用24 h后,通过划痕实验、MTT试验和流式细胞术检测BEL-7402细胞迁移、增殖和凋亡;Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达量。结果 h AECs上清液能剂量依赖性地抑制BEL-7402细胞迁移、增殖并诱导凋亡(P0.05);25%和50%h AECs上清液组BEL-7402细胞caspase-3和caspase-8蛋白的切割片断蛋白定量明显高于对照组(P0.05)。结论 h AECs上清液对体外培养的BEL-7402细胞具有一定的抗肿瘤作用。     

两种不同纯度的嗅鞘细胞在体外存活与生长的比较

比较80%和50%两种纯度的嗅鞘细胞在体外培养条件下的存活与生长,为嗅鞘细胞体内移植选用最佳纯度提供依据。分离、培养并纯化成年SD大鼠嗅鞘细胞,将纯化的嗅鞘细胞和收集到的贴壁成纤维细胞进行约80%和50%的比例混合后接种,继续培养1d或3d。所有细胞于不同时间点行P75免疫细胞化学荧光染色,以鉴定嗅鞘细胞的初始及其后培养过程中数量和纯度的变化。观察细胞状态,计数细胞总数和P75免疫阳性细胞数目,求得各组嗅鞘细胞数量和纯度并行统计学分析。结果显示:两种不同纯度嗅鞘细胞在培养1d时形态正常,3d时纯度为50%的嗅鞘细胞胞体依然饱满,突起更加纤长,数量和纯度亦无明显下降。而纯度为80%的嗅鞘细胞在培养3d时已出现胞体萎缩和突起变短,数量从1d时每一观察区域内的35±13显著下降为23±5(P=0.02),但纯度未发生明显变化。结果表明50%纯度嗅鞘细胞的存活及生长状态优于80%者,提示细胞体内移植时应考虑选取50%纯度的嗅鞘细胞。     

The molecular makeup and function of regulatory and effector synapses

Summary:  Physical interactions between T cells and antigen-presenting cells (APCs) form the basis of any specific immune response. Upon cognate contacts, a multimolecular assembly of receptors and adhesion molecules on both cells is created, termed the immunological synapse (IS). Very diverse structures of ISs have been described, yet the functional importance for T-cell differentiation is largely unclear. Here we discuss the principal structure and function of ISs. We then focus on two characteristic T-cell–APC pairs, namely T cells contacting dendritic cells (DCs) or naive B cells, for which extremely different patterns of the IS have been observed as well as fundamentally different effects on the function of the activated T cells. We provide a model on how differences in signaling and the involvement of adhesion molecules might lead to diverse interaction kinetics and, eventually, diverse T-cell differentiation. We hypothesize that the preferred activation of the adhesion molecule leukocyte function-associated antigen-1 (LFA-1) and of the negative regulator for T-cell activation, cytotoxic T-lymphocyte antigen-4 (CTLA-4), through contact with naive B cells, lead to prolonged cell–cell contacts and the generation of T cells with regulatory capacity. In contrast, DCs might have evolved mechanisms to avoid LFA-1 overactivation and CTLA-4 triggering, thereby promoting more dynamic contacts that lead to the preferential generation of effector cells.     

Harnessing innate and adaptive immunity for adoptive cell therapy of renal cell carcinoma

The development of immunotherapies for renal cell carcinoma (RCC) has been the subject of research for several decades. In addition to cytokine therapy, the benefit of various adoptive cell therapies has again come into focus in the past several years. Nevertheless, success in fighting this immunogenic tumor is still disappointing. RCC can attract a multitude of different effector cells of both the innate and adaptive immune system, including natural killer (NK) cells, γδ T cells, NK-like T cells, peptide-specific T cells, dendritic cells (DC), and regulatory T cells (Tregs). Based on intensive research on the biology and function of different immune cells, we now understand that individual cell types do not act in isolation but function within a complex network of intercellular interactions. These interactions play a pivotal role in the efficient activation and function of effector cells, which is a prerequisite for successful tumor elimination. This review provides a current overview of the diversity of effector cells having the capacity to recognize RCC. Aspects of the functions and anti-tumor properties that make them attractive candidates for adoptive cell therapies, as well as experience in clinical application are discussed. Improved knowledge of the biology of this immune network may help us to effectively harness various effector cells, placing us in a better position to develop new therapeutic strategies to successfully fight RCC.     

皮肤树突状细胞亚群研究进展

皮肤树突状细胞(DC)作为重要的抗原提呈细胞,在机体免疫应答或自身耐受的发生中扮演着非常重要的角色.皮肤免疫系统中定居着多种DC亚群,主要包括表皮层中的郎格汉斯细胞(LC)与真皮层中的各种真皮DC亚群.健康皮肤中的DC亚群主要有表皮LC、真皮DC(dDC)和浆细胞DC(pDC),dDC又分为Langerin+ dDC及Langerin-dDC等.但在炎症性皮肤,如过敏性皮炎、银屑病等病变皮肤中则存在着炎症性DC亚群.DC由于其复杂的异质性群体,导致了其各亚群的特殊化功能.皮肤DC亚群的特殊化功能,为皮肤性疾病的临床治疗及新型疫苗的研发设计等都提供了良好的新策略.