KLF6、Sp1蛋白在肝癌、肝硬化组织中的表达及意义

目的研究转录因子KLF6、Sp1在人肝细胞癌与肝硬化组织中的表达和意义。探讨KLF6、Sp1在肝癌、肝硬化中发生发展的作用机制及KLF6与Sp1之间的相关性。方法用免疫组化法对51例肝癌组织、35例癌旁肝硬化组织、10例良性病变而切除的正常肝组织转录因子KLF6、Sp1进行蛋白检测。结果KLF6、Sp1蛋白在肝癌组织表达率高于癌旁肝硬化组织，正常肝组织中全部呈阴性表达（P〈0．001）。结论KLF6、Sp1蛋白过表达在肝细胞癌、肝硬化的发生发展中可能起重要作用，在肝硬化组织中KLF6与Sp1具有正相关性。     

抑癌基因kruppel样因子6及其剪接体蛋白对HepG2细胞增殖和分化的影响

目的 研究抑癌基因Kruppel样因子(KLF)6及其剪接体蛋白对肝癌细胞株HepG2细胞增殖和分化的影响. 方法 RT-PCR扩增肝细胞癌组织中KLF6剪接体cDNA并测定其序列;构建KLF6剪接体真核表达质粒pcDNA3.1A(-)/KLF6V.转染HepG2细胞后,经G418筛选获得稳定表达KLF6全长和其剪接体蛋白的HepG2细胞,分别命名为HepG2/KLF6和HepG2/KLF6V.四甲基偶氮唑盐法测定该两种HepG2细胞的增殖活性;同时分别以放射免疫法或Western blot技术测定白蛋白、甲胎蛋白或P21WAF1,细胞周期素D1蛋白在HepG2/KLF6或HepG2/KLF6V细胞中的表达情况.结果从肝细胞癌组织中扩增出一种KLF6剪接体,序列分析提示该剪接体缺失127 nt,引起KLF6蛋白近羧基端缺失42个氨基酸;KLF6V mRNA在肝癌及癌旁组织均有表达,但癌组织表达水平明显增高.HepG2/KLF6细胞生长速度较慢而HepG2/KLF6V细胞增殖较快,同时HepG2/KLF6细胞P21WAF1蛋白表达及白蛋白分泌水平明显高于HepG2/KLF6V细胞,而细胞周期素D1表达及甲胎蛋白分泌水平在HepG2/KLF6V细胞高于HepG2/KLF6细胞.结论 肝细胞癌组织中存在KLF6剪接体,该剪接体能对抗全长KLF6基因抑制细胞生长、促进细胞分化等的功能.     

基于Oncomie和Kaplan-Meier Plotter数据库分析LF5在胃癌中的表达及其与患者预后相关性

背景胃癌(gastric cancer, GC)为临床上常见的消化系统肿瘤,确诊时大多为晚期患者预后不良,且临床上缺乏预后预测相关因子.目的应用Oncomie和Kaplan-Meier Plotter数据库分析Kruppel样因子5(kruppel-likefactor5,KLF5)在GC中的表达及其与患者预后相关性.方法收集Oncomie和Kaplan-Meier Plotter数据库中关于KLF5基因表达的相关数据集,深入挖掘KLF5基因在GC组织与正常胃组织中的差异表达情况,根据KLF5中位表达水平分为高表达组和低表达组,绘制生存曲线并用Log-rank检验比较KLF5高、低表达组患者总生存及无疾病进展生存是否存在差异.同时回顾性分析天津市宝坻区人民医院收治并手术治疗的41例GC患者的临床资料,采用免疫组化检测41例患者癌组织中KLF5表达情况,探讨KLF5表达与患者临床病理特征的关系.结果Oncomine数据库共收录了424个关于KLF5基因表达水平的相关研究,其中在癌组织vs正常组织中差异表达的有35个,与正常组织相比, 8个数据集结果提示KLF5在癌组织中高表达, 27个数据集在癌组织中低表达.聚类分析显示, KLF5与ST14, TMEM125等20个基因存在共表达情况(在GC中共同低表达或高表达),提示这些共表达基因在功能上可能存在相关性.Oncomine数据库中10个KLF5表达芯片数据集对比分析了GC组织与正常组织中KLF5基因的差异表达情况,其中有4个芯片数据提示了GC组织中KLF5表达水平明显升高. Kaplan-Meier Plotter数据库中, 2个相关基因芯片数据分析了KLF5表达与GC患者预后的关系, Long-rank检验显示KLF5高表达患者总生存和无疾病进展生存均小于低表达组(P0.05).免疫组化分析显示41例GC患者中, KLF5阳性表达者29例,阳性率为70.7(29/41). KLF5阳性表达与患者临床病理特征如性别、年龄、肿瘤分期、分级等无明显相关性(P0.05).结论KLF5在GC中高表达并与患者的不良预后有关,而KLF5表达与患者临床病理特征无关.     

肝癌组织中KLF4的表达及意义

目的探讨Kruppel样因子4（KLF4）在肝细胞癌（简称肝癌）中的表达及意义。方法应用寡核苷酸基因芯片、逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）、免疫组织化学技术检测KLF4在健康人、肝硬化及肝癌组织中的表达,并分析KLF4与肝癌临床病理特征的关系。结果寡核苷酸基因芯片分析,KLF4在肝癌差异表达基因谱中明显下调（Ratio=0.438）;RT-PCR及免疫组织化学方法证实,KLF4在肝癌中低表达,其表达缺失与病理学分级显著相关。结论KLF4在肝癌组织中的低表达与肿瘤分化程度密切相关。     

GRIM-19在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨GRIM-19在肝细胞癌组织中表达的临床意义.方法:用RT-PCR检测40例肝细胞癌及非癌组织中GRIM-19 mRNA表达水平,用免疫组织化学pv二步法和Western blot检测40例肝细胞癌及非癌组织中GRIM-19蛋白的表达情况,分析GRIM-19与临床病理特征的关系.结果:GRIM-19 mRNA...     

VEGF165b在肝细胞癌中的表达及其作用机制

目的:研究血管内皮生长因子165b(vascular endothelial growth factor 165b,VEGF165b)在肝细胞癌和正常肝组织中的表达情况,初步探讨其与肝细胞癌的关系和作用机制.方法:用免疫组织化学法检测28例肝细胞癌组织和30例正常肝组织中VEGF165b蛋白的表达情况;用RT-PCR法分别检测肝细胞癌和正常肝组织中VEGF165b和VEGF165 mRNA的表达情况.用Western blot法检测上述肝细胞癌组织和正常肝组织中VEGF165b和VEGF165蛋白的表达情况.用Western blot法检测上述肝细胞癌和正常肝组织中FAK和P-Akt蛋白的表达情况.结果:正常肝脏组织中VEGF165b蛋白表达率为96.67%(29/30),肝细胞癌组织中VEGF165b蛋白的表达率为21.4%(6/28),表达差异有统计学意义(P0.05).VEGF165b mRNA和蛋白在肝癌组织中的表达明显低于正常肝脏组织的表达(P0.01).VEGF165 mRNA和蛋白在肝癌组织中的表达明显高于正常肝脏组织的表达(P0.01).FAK和P-Akt蛋白在肝癌组织中的表达明显高于正常肝脏组织的表达(P0.01).结论:VEGF165b在肝细胞癌组织中的表达明显低于正常肝组织的表达,而VEGF165和FAK、P-Akt在肝细胞癌组织中的表达明显高于正常肝组织的表达.提示VEGF165b与肝癌发生、发展有关,其机制可能是VEGF165b抑制VEGF165、FAK和P-Akt表达及他们的促进血管生成、肿瘤生长作用.     

KLF4、KLF6在胃癌中的表达及临床意义

目的探讨KLF4、KLF6在胃癌组织中的表达与胃癌临床生物学行为的关系及意义。方法 RT-PCR技术检测36例胃癌手术切除标本癌组织、癌旁组织及正常胃黏膜内KLF4、KLF6的表达,并分析其与患者临床病理特征的关系,采用SPSS11.5软件进行统计学处理。结果胃癌组织中KLF4、KLF6的表达明显低于正常组织(P0.05);胃癌组织中KLF4的表达在无淋巴结转移组中显著高于淋巴结转移组(P0.05);KLF6的表达随分化程度的增加,TNM分期的增加而显著降低(P0.05),无淋巴结转移组显著高于淋巴结转移组(P0.05,P0.01)。结论 KLF4、KLF6在胃癌组织中低表达可能与胃癌的发生、发展、转移、预后有关。     

晚期糖基化终产物受体在肝细胞癌患者中的表达

目的 研究晚期糖基化终产物受体(RAGE)在原发性肝细胞癌(PHC)中的表达.方法 收集10例PHC患者的肝癌组织、癌旁组织、血清及正常人的血清;用RT-PCR及Western blot分别检测组织中RAGE基因及蛋白的表达;用ELISA检测血清RAGE表达,同时用化学发光法检测血清中甲胎蛋白(AFP)表达.结果 RA...     

IL-34在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的研究白介素34(interleukin-34,IL-34)在肝细胞癌中的表达情况以及其与临床预后的相关性。方法通过逆转录荧光定量PCR检测32例肝细胞癌患者肿瘤组织及癌旁组织中IL-34的表达情况;通过免疫组化检测96例肝细胞癌患者中IL-34的表达情况,依据其表达情况分为高表达及低表达组,并与患者临床参数及生存时间行相关性分析。结果逆转录荧光定量PCR检测发现32例肝细胞癌患者肿瘤组织中IL-34基因的mRNA表达水平较癌旁组织明显减少;同样,免疫组化结果显示在肝细胞癌组织中IL-34蛋白表达较癌旁组织减少;进一步的统计学分析显示,IL-34高表达组患者的生存时间明显短于低表达组。结论 IL-34可能参与肝细胞癌的发病机制,对判断疾病的预后有重要的价值。     

p73基因在肝细胞癌组织中的表达与临床意义

本文通过检测35例原发性肝细胞癌与相对应的癌旁组织中p73基因的表达及突变情况,结合临床资料,探讨肝细胞癌组织中p73基因的表达与临床预后的关系。     

X连锁凋亡抑制蛋白在肝细胞癌中的表达及其对患者术后复发的影响

目的 探讨肝细胞癌组织中X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的表达及其对患者术后复发的影响.方法 应用免疫组织化学方法检测72例肝细胞癌组织及其癌旁组织中XJAP的表达,分析其表达与肝细胞癌临床病理因素的关系及在患者术后复发中的意义.结果 HCC组织中XIAP阳性表达率明显高于癌旁组织(x2=7.03,P＜0.01).XIA...     

细胞间粘附分子-1在乙型肝炎后肝细胞癌表达的免疫组化研究

为探讨细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）在原发性肝细胞癌的表达状况及其在肝癌发生中的作用，利用免疫组织化学技术链菌素亲生物蛋白（ＬＳＡＢ）法检测３０例乙型肝炎后肝细胞癌及癌旁肝组织ＩＣＡＭ－１的表达情况，结果 肝癌组织中，ＩＣＡＭ－１存在一定程度的表达，其中癌组织阳性率为４３．３％，多为弱表达，癌旁肝组织明显高于癌组织，阳性率为７８．６％，多呈弥漫强阳性表达，二者差异有显著性（Ｐ〈０．１０）。结论     

TIP30 inhibits growth of HCC cell lines and inhibits HCC xenografts in mice in combination with 5-FU

Hepatocellular carcinoma (HCC) is an aggressive cancer with a poor prognosis. The specific cellular gene alterations responsible for hepatocarcinogenesis are not well known. Previous works showed that loss of TIP30, also called CC3, a putative tumor suppressor, increased the incidence of hepatocellular carcinoma in mice, and some clinical samples of human HCC tissues had aberrant expression of TIP30. Here, we report that the introduction of TIP30 by an adenovirus vector into HCC cell lines that had decreased expressions of TIP30 inhibited cell proliferation, decreased anchorage-dependent growth, suppressed invasion through the extracellular matrix, and inhibited tumorigenesis in nude mice. Moreover, exogenous expression of Tip30 sensitized HCC cells to cytotoxic drugs and to apoptosis induced by tumor necrosis factor-related ligands in vitro. Ectopic expression of TIP30 in HCC cells enhanced p53 expression and decreased Bcl-2/Bcl-xL expression. Treatment of nude mice bearing subcutaneously established HCC tumors with a combination of an adenovirus expressing TIP30 and the cytotoxic drug 5-fluorouracil completely suppressed tumor growth and prolonged survival. In conclusion, TIP30 may play an important role in the suppression of hepatocarcinogenesis by acting as a tumor suppressor. Overexpression of TIP30 might be a promising candidate as a treatment for HCC that would increase sensitivity to chemotherapeutic drugs.     

HCV核心蛋白、突变p53和Bcl-2在HCC中的表达及相关性

目的探讨HCC组织中的核心蛋白、突变p53、Bcl-2的表达以及其相关性,探讨HCV核心蛋白是否促进p53突变和Bcl-2的表达.方法收集手术切除HCC组织42例,采用免疫组织化学EnVision法检测HCC组织核心蛋白、突变p53、Bcl-2的表达,用统计学分析三者间的关系.结果C蛋白、p53和Bcl-2在HCC癌组织中的表达率分别为40.5%(17/42)、47.62%(20/42)、83.3%(33/42);3组强度等级资料Kruskal-Wallis秩和检验H=16.33,差异性显著,Mann-Whitney U test:C蛋白和p53、Bcl-2蛋白间的P值分别0.43、0.00;C蛋白与突变p53、Bcl-2阳性强度两者间相关性检验P值分别为0.000、0.914,相关系数rs分别为0.67、0.08;突变p53与Bcl-2两者相关性检验P值为0.27,相关系数rp为0.32.结论3种蛋白的表达有相关性;HCV核心蛋白可能促进野生型p53突变和表达;核心蛋白和突变p53都有可能促进Bcb2蛋白的表达.     

福建肝癌细胞EBV感染与HBV及P53蛋白表达的关系

目的探讨肝细胞癌（ＨＣＣ）中ＥＢＶ与ＨＢＶ感染的相关性及ＥＢＶ与Ｐ５３蛋白表达的关系．方法采用原位杂交技术以地高辛标记的单链ｃＤＮＡ探针、生物素标记的双链ｃＤＮＡ探针及免疫组化ＳＰ法检测ＨＣＣ５９例（含癌旁肝组织）和９例肝硬变组织中高拷贝数ＥＢＥＲ１（ＥＢＶ编码的小ＲＮＡ）、ＨＢＶＤＮＡ和Ｐ５３蛋白．结果肝癌细胞核内ＥＢＥＲ１阳性率为２０３％,显著高于癌旁肝组织（Ｐ＜００１）．肝癌组织内ＨＢＶＤＮＡ阳性率为５９３％,ＥＢＶ存在与ＨＢＶ感染无明显相关性（Ｐ＞００５）．肝癌组织内Ｐ５３蛋白表达率为３３９％,Ｐ５３表达与ＥＢＥＲ１无显著关系（Ｐ＞００５）．结论肝癌细胞内ＥＢＶ感染与ＨＢＶ存在无明显关系,肝癌中Ｐ５３表达与ＥＢＥＲ１无关     

Expression and significance of tumor-related genes in HCC

AIM: To investigate the expression and clinical significance of DEK, cyclin D1, insulin-like growth factor Ⅱ (IGF-Ⅱ), glypican 3 (GPC3), ribosomal phosphoprotein 0 (rpPO) mRNA in hepatocellular carcinoma (HCC) and its paraneoplastic tissues. METHODS: The expression of mRNAs of DEK, cyclin D1, IGF-Ⅱ, GPC3 and rpP0 mRNA was detected in HCC and its paraneoplastic tissues by multiplex RT-PCR. RESULTS: By the simplex RT-PCR, the overexpression of mRNAs of DEK, cyclin D1, IGF-Ⅱ, GPC3, rpP0 mRNA in HCC and its paraneoplastic tissues was 78.1%, 87.5%, 87.5%, 75.0%, 81.3% and 15.6%, 40.6%, 37.5%, 21.9%, 31.3% respectively (P<0.05). By the multiplex RT-PCR, at least one of the mRNAs was detected in all HCC samples and in 75.0% of paraneoplastic samples (P>0.05). However, all these five mRNAs were found in 68.8% of HCC samples, but only in 9.4% of paraneoplastic tissues (P<0.05). The positive expression of mRNAs of DEK, cyclin D1, IGF-Ⅱ, GPC3, rpP0 in well- and poorly-differentiated HCC was 89.0%, 66.7%, 66.7%, 66.7%, 77.8% and 73.9%, 95.7%, 95.7%, 95.7%, 82.6%, respectively (P>0.05). The expression of these genes in HCCs with α-feto protein (AFP) negative and positive was 90.0%, 80.0%, 90.0%, 90.0%, 90.0% and 72.7%, 86.3%, 77.3%, 90.9%, 68.2% respectively (P>0.05). CONCLUSION: The expression of DEK, cyclin D1, IGF-Ⅱ, GPC3, rpP0 mRNA in HCC is much higher in HCC than in its paraneoplastic tissues. Multiplex RT-PCR assay is an effective, sensitive, accurate, and cost-effective diagnostic method of HCC.     

原发性肝癌组织中Kruppel样因子6基因的变异及其抗细胞增殖功能的改变

目的初步探讨基因突变对Kruppel样因子6(KLF6)抗肝癌细胞增殖功能的影响及机制。方法以聚合酶链反应(PCR)扩增原发性肝癌及其癌旁组织KLF6基因外显子2序列,对扩增的PCR产物进行双向序列测定。构建野生型及突变型KLF6真核表达质粒并分别转染人肝癌细胞株HepG2,流式细胞仪及四甲基偶氮唑盐试验观察KLF6基因对细胞周期及细胞增殖活性的影响。以western blot技术检测外源KLF6 基因对HepG2细胞p21WAF1表达的影响。结果 23例原发性肝癌组织中2例(8.7％)出现KLF6基因突变, 其中1例导致氨基酸改变(W162G)。转染野生型KLF6的HepG2细胞G0～G1期所占细胞的比例明显增高,而转染突变型KLF6实验组G0～G1期细胞无显著增加。转染野生型KLF6对HepG2细胞生长的抑制率显著高于突变型KLF6实验组和空载体实验对照组。外源野生型KLF6基因能上调肝癌细胞p21WAF1表达,而突变型KLF6基因上调p21WAF1表达的能力较低。结论 KLF6基因突变可能在原发性肝癌发病机制中起到一定作用,但基因突变可能不是KLF6基因失活的主要原因。上调p21WAF1表达是KLF6基因抑制肝癌细胞增殖的重要途径。     

肝细胞癌中DcR3表达与卵圆细胞增殖的可能关系

目的研究DcR3（一种新的凋亡相关分子）在肝细胞癌（HCC）中表达情况及其与卵圆细胞增殖之间可能存在的关系,以探讨卵圆细胞增殖活化的分子机制。方法对52例HCC组织,用免疫组织化学EnVision法同时标记肝细胞分化标记物hepatocyte paraffinl（HEP）、胆管标记物CK7/CK19、细胞增殖标记物Ki-67以及DcR3,半定量分析卵圆细胞形态数量和凋亡细胞数量的关系。结果在所有HCC肿瘤旁硬化组织的反应性小胆管中,均可见CK7、CK19和DcR3的表达,而在52例HCC中有23例见部分肿瘤细胞表达CK7和/或CK19,36例部分肿瘤细胞表达DcR3。其中23例CK7和/或CK19阳性病例中,21例同时有DcR3阳性（91.3%）,而29例CK7/CK19阴性病例中仅有15例（51.7%）DcR3阳性表达,两组间差异有统计学意义（P=0.002）。结论HCC中存在CK7和/或CK19阳性表达的卵圆细胞,表明卵圆细胞在部分HCC的发病中起重要作用,而这些病例多数有DcR3高表达,同时可见DcR3高表达于癌旁硬化组织反应性小胆管中,这些均提示DcR3的抗凋亡作用可能与卵圆细胞的增殖分化有关。     

Gene expression of hepatocyte growth factor and its receptor in HCC and nontumorous liver tissues

ＭＥＴＨＯＤＳＧｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＧＦａｎｄＨＧＦｒｉｎ２６ｃａｓｅｓｏｆＨＣＣｔｉｓｓｕｅａｎｄｔｈｅｉｒａｄｊａｃｅｎｔｎｏｎｔｕｍｏｒｏｕｓｌｉｖｅｒｔｉｓｓｕｅｓｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｗｉｔｈｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎｌａ...