日本血吸虫不同发育阶段与旋毛虫抗原交叉性的研究

运用ＥＩＴＢ技术分析日本血吸虫（Ｓｊ）尾蚴、肝期童虫及雌雄成虫与旋毛虫（Ｔｓ）肌蚴抗原的交叉性。结果显示：Ｓｊ尾蚴、肝期童虫、成虫各阶段不同程度地被抗－ＴｓＳＡＲＳ，ＴｓＩＲＳ识别，其识别的抗原分子量在１５～１００（尤５０～７０）ｋＤ之间，两种抗血清识别的带型基本相同。所识别的各期Ｓｊ抗原中以尾蚴抗原最多，次为肝期童虫。３０天成虫仅雌虫抗原与上述两种抗血清在９７ｋＤ处显出一条弱带。抗－ＳｊＡＲＳ，ＳｊＩＲＳ识别ＴｓＳＡ中抗原成份分子量基本在３４ｋＤ以上，以３４ｋＤ和３５～３８ｋＤ带最为明显。提示Ｔｓ与Ｓｊ之间存在较多的交叉抗原，主要在幼虫阶段，各阶段之间有较大差异     

猪囊尾蚴融合蛋白电泳分析

猪囊尾蚴２８ＫＤａ、１８ＫＤａ、３４ＫＤａ抗原片段经培养、诱导、表达４种β－半乳糖苷－猪囊尾均重组基因融合蛋白电泳４种融翕旧白经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳主以其为抗原对囊虫病人进行简化－Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ （ｓｉｍｐｌｉｆｉｅｄ－Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ，ＳＷＢ）检测，结果发现，融合蛋白与粗制抗原相比组合 分明显减少且具有高度的特异性和敏感性。     

人体与猪体内囊尾蚴蛋白质和同工酶的初步研究

报道人体与猪体内囊尾蚴的蛋白质组分及酯酶同工酶(EST)、乳酸脱氢酶同工酶(LDH)的带谱。人和猪脑囊尾蚴液的蛋白质PAGE区带各见10和9条,猪囊尾蚴仅有1条主带,而入囊尾蚴具有2条主带;头节囊壁蛋白质PAGE区带各见18和16条,二者带谱基本相似。肌肉皮下囊尾蚴囊液蛋白质区带各有12条,猪囊尾蚴有4条带,人囊尾蚴仅有2条主带,且迁移率也有明显差别。人体和猪体内囊尾蚴囊液的LDH酶带各有4条,其迁移率略有差异;EST各见1条酶带,酶谱基本一致。肌肉皮下囊尾蚴头节囊壁LDH各见2条,EST则见3条,其迁移率也有不同。同时将两种同工酶的活性作了比较。     

融合蛋白dot-ELISA法检测猪囊尾蚴病人循环抗体

目的 检测用基因重组技术所获得的融合蛋白的特异笥与敏感性。方法 用猪囊尾蚴ｃＤＮＡ文库筛选的含编码２８，１８，１４，３４ＫＤａ抗原的基因片段阳性克隆，等比联合使用，比液相培养法经ＩＰＴＧ诱导重组噬菌体ｇｔ１１／Ｅ．ＣｏｌｉＹ１０９０表达融合蛋白，并用做抗原，用ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法诊断囊虫病。结果 血清１：５０倍稀释，囊虫病人血清３份，阳性率８３．３％，正常人和肝吸虫病人血清３０份，包虫病人血清１６     

猪囊尾蚴抗原的异质性分析

目的：分析猪囊尾蚴抗原的异质性。方法：采用间接型ＥＬＩＳＡ法，以正常猪血清（ＮＰＳ）为抗原，对用猪囊尾蚴抗原（ＣＦＡ）免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠杂交瘤细胞的培养上清液进行检测。同时设猪囊尾蚴抗原组。结果：ＮＰＳ阳性２１孔，阳性率２４．７１％（２１／８５）。ＣＦＡ阳性２４孔。结论：猪囊尾蚴抗原含有宿主的蛋白质成分。     

单克隆抗体双夹心ELISA检测血吸虫循环抗原对抗血吸虫药疗效考核的价值

应用日本血吸虫抗３１／３２ｋＤ（１Ｄ＝０．９９２１ｕ）单克隆抗体双夹心酶联免疫吸附试验（双夹心ＥＬＩＳＡ）检测血吸虫循环抗原，用于城市急性血吸虫病经吡喹酮治疗５年后无再次感染患者的疗效考核，阳性率为１２．２０％。与快速法ＥＬＩＳＡ检测循环抗原的符合率为９６．３４％。与常用检测抗体的ＩＨＡ、ＥＬＩＳＡ法平行对照，阳性率基本一致。与改进的粪便孵化法比较，两法的符合率为８５．３６％。无疫水接触史健康人未见阳性反应。对肝病患者无交叉反应。结果显示双夹心ＥＬＩＳＡ法检测循环抗原敏感性高，特异性强，具有良好的抗血吸虫药物疗效考核价值。     

日本血吸虫不同发育阶段与旋毛虫抗原交叉性的研究

运用ＥＩＴＢ技术分析日本血吸虫（Ｓｊ）尾蚴、肝期童虫及雌雄成虫与旋毛虫（Ｔｓ）肌蚴抗原的交叉性。结果显示：Ｓｊ尾蚴、肝期童虫、成虫各阶段不同程度地被抗－ＴｓＳＡＲＳ，ＴｓＩＲＳ识别，其识别的抗原分子量在１５￣１００（尤５０￣７０）ｋＤ之间，两种抗血清识别的带型基本相同。所识别的各期Ｓｊ抗原中以尾蚴抗原最多，次为肝期童虫。３０天成虫仅雌虫抗原与上述两种抗血清在９７ｋＤ处显出一条弱带。抗－Ｓｊ♂ＡＲＳ     

猪囊尾蚴病快速诊断方法的实验研究

目的：应用金标免疫反应，建立快速诊断猪囊尾蚴病诊断试剂，方法：通过对金微颗粒标记猪囊尾蚴特异性蛋白分子物质，与待测样本中相对应蛋白质进行抗原抗体免疫结合，检测猪囊尾蚴特异性抗原或抗体。结果：检测32份临床确诊猪囊尾蚴病患血清CAg和CAb的敏感性分别为93．75％和87．5％，检测8份肺吸虫病，肺吸虫病，旋毛虫病的10份健康血清的CAg和CAb均为阴性，特异性100％。检测最低蛋白含量为0．2μg/ml，结论：金标快速检测试剂对猪囊尾蚴病具有高特异，高敏感，高稳定，操作简便的诊断价值。     

单克隆抗体双夹心ELISA检测血吸虫循环抗原对抗血吸虫药…

应用日本务虫抗３１／３２ＫＤ单克隆抗体双夹关免疫吸附试验检测血吸虫循环抗原，用于城市急性血吸虫病经吡喹酮治疗５年后无再次感染患者的疗效考核，阳性率为１２．２％。与快速法ＥＬＩＳＡ检测循环抗原的符合率为９６．３４％。与常用检测抗体的ＩＨＡ、ＥＬＩＳＡ法平行对照，阳性率基本一致     

旋毛虫成虫可溶性抗原SDS—PAGE及Western—blot分析

目的：初步分析旋毛虫成虫可溶性抗原的蛋白组份及免疫原性。方法：采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和氨银染色对该抗原进行蛋白组份的分析，采用Ｗｅｓｔｅｒｍ－ｂｌｏｔ分析该抗原的免疫原性。结果：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ可显示４０条多肽，其中主 ８条；抗血清可特异性地识别１６条多肽抗原，其中有３条主带。结论：实验结果表明旋毛虫成虫可溶性抗原的蛋白组份及抗原性均较复杂。     

日本血吸虫成虫和虫卵主要血清学抗原的鉴定和理化学分析

应用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳、化学染色和免疫印斑对日本血吸虫成虫和虫卵的主要血清学抗原进行了鉴定和理化学分析。成虫有8个主要的血清学抗原分子,其分子量和化学性质分别为152kDa、脂蛋白;145kDa、脂蛋白;32kDa、脂蛋白;30kDa、脂蛋白;28kDa、糖脂蛋白;15kDa、糖脂蛋白;12kDa、糖脂蛋白;11kDa、糖脂蛋白。虫卵有7个主要血清学抗原分子,其分子量和化学性质性质分别为32kDa、脂蛋白;28kDa、脂蛋白;15kDa、糖蛋白;12.5kDa、脂蛋白;12kDa、糖蛋白;11kDa、糖蛋白;10.5kDa、糖蛋白。     

免疫印迹技术诊断旋毛虫病的效果

旋毛虫幼虫可溶性抗原(TSA)经SDS-PAGE和Western blot试验,用旋毛虫病人血清识别,显示18条蛋白染色带,分子量范围在80～30 kD之间,有7条清晰而明显的主带,分子量分别为80、74、66、63、55、42和40 kD,其中66、63和55 kD为旋毛虫特异性的蛋白带。TSA与日本血吸虫病人血清抗体应答有11条染色带,分子量范围在42～25 kD之间。根据蛋白染色带分子量的差异,可以进行两种病的鉴别诊断,与正常人和其它8种寄生虫病人血清反应均未见清晰的蛋白染色带。     

采用Western blotting的方法分析蚕蛹致敏原成份

目的应用Western blotting的方法检测蚕蛹(silkworm chrysalis)浸出液中致敏原的成份,为蚕蛹致敏原的研究和临床诊断提供依据.方法取蚕蛹浸出液,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶分离,再转印到PVDF膜上,封闭后将血清与膜条共同孵育,后与辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgE抗体反应,显色底物用对氨基联苯胺.结果SDS-PAGE显示蚕蛹可辨条带有12条,分子量在14～94 kD之间,其中主带有8条,分子量依次为80 kD、68 kD、62kD、50 kD、29 kD、28 kD、18 kD、16 kD.Western blotting结果表明,22例蚕蛹过敏患者血清全部呈阳性反应,浸出液中共有6条致敏条带,其中分子量68 kD和29 kD是主要致敏组份,阳性反应率均为100%.结论蚕蛹分子量68 kD和29 kD的组份为主要致敏组份,结果可为开发适合我国特色的蚕蛹变应原提供依据.     

梭子蟹过敏原致敏组分的分析研究

目的应用免疫印迹(Western blotting)的方法分析梭子蟹[Portunus pelogicus(Linnaeus)]的致敏组分,为蟹过敏原的纯化和标准化变应原疫苗的研制提供理论依据。方法取常规方法制备的梭子蟹浸出液,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离,用考马斯亮蓝染色分析其抗原蛋白的组分,同时用对蟹过敏的病人血清进行免疫印迹。结果SDS- PAGE显示梭子蟹可辨有19条蛋白带,分子量在13kD-90kD之间,其中主带有9条,分子量是20.9kD、24.2kD、27.1kD、29.2kD、33.7kD、38.9kD、48.7kD、74.7kD、89.1kD。Western blotting结果表明,16例蟹过敏患者血清全部呈阳性反应,浸出液中共有5条致敏条带,其中分子量在74.4kD、48.7kD的是主要致敏组分,阳性反应率均为100%。结论梭子蟹74.4kD和48.7kD组分为主要过敏原。     

猪带绦虫TSOL18基因在长双歧杆菌中的表达

目的在成功构建猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSOL18的基础上,研究猪带绦虫TSOL18基因在长双歧杆菌中的表达情况。方法将猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSOL18电转化入长双歧杆菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达情况。结果酶切、PCR和测序证实,重组质粒pGEX-TSOL18成功转入长双歧杆菌。SDS-PAGE显示,目的蛋白相对分子质量（Mr）约为41KD,与预期结果相一致。Western blot显示,目的蛋白能被兔抗血清、囊虫病猪血清和囊虫病患者血清所识别。结论猪带绦虫TSOL18基因能够在长双歧杆菌中获得表达,表达的目的蛋白具有抗原性。     

猪带绦虫不同发育阶段的同功酶及蛋白质组分的比较研究

本文报告猪带绦虫虫卵、囊尾蚴头节囊壁混合物、囊液、成虫未熟和成熟节片混合物及妊娠节片等不同发育阶段的酯酶同功酶和乳酸脱氢酶与蛋白质组分的带谱。结果表明,酯酶同功酶带以虫卵阶段最多,共四条酶带;乳酸脱氢酶同功酶带以囊尾蚴头节和囊壁混合物、囊液及成虫节片阶段为最多,各为四条酶带,且各有一条主带。蛋白质组分以虫卵阶段为最复杂,至少有19条区带。经 PAS 染色后,除囊液富含糖蛋白外,其余各发育阶段均未出现糖蛋白区带;同时将各不同发育阶段两种同功酶的活性作了比较。     

感染日本血吸虫病兔循环抗原的提纯与分析

采用免疫亲和层析法,从感染日本血吸虫的兔血清中提纯日本血吸虫病循环抗原。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、PAS染色、酶联免疫印渍等方法分析,日本血吸虫病循环抗原显示7个组份,分子量分别为144、118、100、88、63、57、46kD;其中144、118、100、63、57kD为糖蛋白,并证实虫卵释放的循环抗原中含分子量分别为144、118kD的糖蛋白。     

肺吸虫成虫抗原组分分析

用 IE、SDS-PAGE 和 Western blot 对肺吸虫成虫抗原(PwA)成分进行分析.结果 IE 出现2条粗而明显的沉淀带。SDS-PAGE 显示29条蛋白带(分子量范围为90.0～6.0 kD),其中有10条主带,分子量分别为57、53、49.5、46、42、30、27、25、14和13 kD.经 Western blot 试验显示,肺吸虫病人血清(抗体)与 PwA 应答,可出现3条蛋白带,分子量分别为25、13和8 kD。     

斯氏肺吸虫成虫10—30KD抗原蛋白的分离及在免疫诊断中的应用

在酶免疫转移印渍技术（EITB）分析斯氏肺吸虫虫体成份，显示10～30KD抗原蛋白（主带22、24和26KD）对该病具免疫诊断价值的基础上，将SDS－PAGE和电洗脱技术相结合，分离并纯化出斯氏肺吸虫成虫的10～30KD蛋白组份，采用Dot－ELISA方法免疫诊断肺吸虫。10～30kD的斯氏肺吸虫成虫抗原与斯氏、卫氏肺吸虫病人血清均呈阳性反应，与其它吸虫病和健康人血清末产生反应。该结果进一步表明10～30KD斯氏肺吸虫成虫抗原的Dot－ELISA为肺吸虫病高度特异、敏感的免疫诊断方法。并为两种肺吸虫的共同抗原，可用于免疫诊断斯氏、卫氏肺吸虫病。     

刺苋花粉特异性变应原成分的分析研究

目的：分析刺苋花粉的抗原成分以及刺苋花粉特异性变应原组分,为刺苋花粉变应原的纯化和标准化变应原疫苗的研制提供理论依据.方法：取刺苋花粉浸出液,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDSPAGE）分离,以16例刺苋花粉过敏的病人血清为探针,进行免疫印迹（Western blotting）,检测刺苋花粉浸出液的致敏组分.结果：SDS-PAGE显示可辨蛋白条带有11条,分子量在15～80 kD之间,其中主带有9条,分子量依次为18 kD、24 kD、29 kD、35 kD、39 kD、40 kD、42 kD、62 kD、78kD.Western blotting结果表明,16份刺苋花粉过敏患者的血清全部呈阳性反应,浸出液中共有4条致敏条带,其中主要致敏蛋白的分子量是78 kD和40 kD.结论：刺苋花粉78 kD和40 kD的变应原为主要特异性变应原.