冻存增强人外周血单个核细胞产生IL－2的机理初探

作者用ＥＬＩＳＡ法研究了冻存对人外周血革个核细胞（ＰＢＭＣ）产生白介素２（ＩＬ－２）的影响。结果表明，冻存后ＰＢＭＣ产生ＩＬ－２能力明显增强；去除ＣＤ８＋细胞或加入消炎痛后，ＰＢＭＣ产生ＩＬ－２能力增强，且与ＰＢＭＣ冻存后产生ＩＬ－２水平相同。研究提示：冻存过程有可能通过抑制ＰＧＥ２分泌细胞及使ＣＤ８＋细胞失活，使ＰＢＭＣ增加ＩＬ－２的产生。     

外周血造血干细胞的检测及冻存技术

0　引言　化疗是治疗恶性肿瘤的有效方法 [1 ,2 ] ,自体外周血干细胞移植 (APBSCT)治疗实体瘤是技术 .利用流式细胞术(FACS)检测采集的自体外周血干细胞 (APBSC)中 CD34+ 细胞及其亚群 ,对准确及时判断干 /祖细胞数量有重要意义 [3] ,分离液的冻存更是 APBSCT中的关键技术 .我们通过对临床2 4例肿瘤患者 APBSCT中干细胞的检测及冻存技术的研究 ,制定标准技术方法 ,稳定临床治疗效果 .1　对象和方法1.1　对象　肿瘤患者 2 4例 ,男 13例 ,女 11例 ;年龄 2 9～ 73(中位 4 9)岁 .肿瘤类型 :乳腺癌 8例 ,肺癌 9例 ,精原细胞癌 2例 ,…     

建立MTT法测定人外周血IL—2活性

建立ＭＴＴ法测定人外周血ＩＬ－２活性田垒杨翼枫张家华（徐州医学科学研究所２２１００２）关键词ＭＴＴ测定人外周血ＩＬ－２活性中图法分类号Ｒ４４６．６１ＭＴＴ测定方法灵敏度高，较胎盼蓝染色法灵敏得多，与同位素渗入法测定结果相同［１］。由于ＭＴＴ法具有以...     

重症肝炎病人外周血单个核细胞IL－2的产生及其受体表达

观察外周血单个核细胞经植物血凝素刺激２４ｈ后ＩＬ－２受体表达情况，结果如下：２９例重症肝炎病人ＩＬ－２受体为３８．０８±１４．０１％，１３例慢活肝病人为３５．５０±１３．００％，２０例正常人为６０．５５±１７．７９％。重症肝炎、慢活肝病人ＩＬ－２受体表达功能明显受损，且与正常人有较大重叠，与病情轻重无密切关系。ＩＬ－２受体表达下降由多种因素所致。     

肺癌患者外周血单个核细胞分泌白细胞介素—2受体的研究

采用ＥＬＩＳＡ法对３３例肺癌和２８例健康人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）分泌可溶性白细胞介素－２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）能力的研究显示：肺癌患者ＰＢＭＣ分泌ｓＩＬ－２Ｒ能力明显高于健康人（Ｐ〈０．０１）。但鳞癌、腺癌、小细胞未分化癌之间，ＰＢＭＣ分泌ＳＩＬ－２Ｒ能力无差别，三者分别较显著增高（Ｐ〈０．０１）。在肺癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期之间，ＰＢＭＣ分泌ＳＩＬ－２Ｒ能力亦显显著性差异。     

IL—2和IL—6基因在急性移植物抗宿主病患者外周血单个核细胞…

目的：研究ＩＬ－２及ＩＬ－６在急性ＧＶＨＤ中的表达状态。方法：采用细胞原位杂交方法，对骨髓移植后发生急性ＧＶＨＤ患者的外周血单个核细胞检测其ＩＬ－２和ＩＬ－６的表达水平，测定积分光密度值。结果：ＩＬ－２表达在急性期与缓解后比较，ｔ＝５．９９，Ｐ〈０．００１，差异非常显著；ＩＬ－６表达在急性期与缓解后比较，ｔ＝３．５９，Ｐ〈０．０１。差异显著。结论：ＩＬ－２和ＩＬ－６在急性ＧＶＨＤ时表达升高，在缓解     

不同人羊膜间充质干细胞冻存液冻存细胞效果比较

目的:筛选冻存人羊膜间充质干细胞效果较好的冻存液.方法:①不同配方的细胞冻存液对细胞冻存效果的影响.人羊膜问充质干细胞培养至第三代后分为10组,分别加入以下10种不同组成的冻存液.A组:70%DMEM/F12+20%胎牛血清+10%DMSO;B组:60%DMEM/F12+30%胎牛血清+10%DMSO;C组:40%DMEM/F12+50%胎牛血清+10%DMSO;D组:90%胎牛血清+10%DMSO;E组:70%DMEM/F12+20%胎牛血清+10%甘油;F组:60%DMEM/F12+30%胎牛血清+10%甘油;G组:40%DMEM/F12+50%胎牛血清+10%甘油;H:90%胎牛血清+10%甘油;I组:90%DMEM/F12+10%DMSO;J组:90%DMEM/F12+10%甘油.调整细胞密度为5×106mL-1,放入程序降温盒中,入-80℃低温冰箱保存.1个月后复苏,MTT法筛选出吸光光度值较高的一种冻存液.②相同血清含量细胞冻存液对细胞冻存效果的影响.含体积分数为50%胎牛血清的细胞冻存液分3组保存细胞.K组:45%DMEM/F12+50%胎牛血清+5%DMSO;L组:40%DMEM/F12+50%胎牛血清+10%DMSO;M组:35%DMEM/F12+50%胎牛血清+15%DMSO;复苏冻存的细胞后.将细胞按冻存前的数量调整至5×1O5mL-1,台盼蓝染色后,计算细胞的成活率.在倒置相差显微镜下观察细胞的生长状况.结果及结论:配方为45%DMEM/F12+50%胎牛血清+5%DMSO的冻存液冻存复苏人羊膜间充质干细胞后细胞的成活率最高(P<0.05);冻存复苏后细胞的生长状况较好.     

-80℃冻存外周血造血干细胞的应用研究

目的:探求一种操作简便实用、造血干细胞回收率和存活率高、成本低的外周血造血干细胞的冻存方法。方法:CP-1和5%白蛋白作保护剂在?80℃条件下直接冻存,并检测冻存前后外周血干细胞的活性,单个核细胞(MNC)和CFU-GM、CD34 细胞的回收率。结果:冻存前后外周血干细胞活性,单个核细胞(MNC)和CFU-GM、CD34 细胞的回收率无明显差异(P>0.05),输注后造血均重建。结论:CP-1和5%白蛋白作保护剂在?80℃条件下直接冻存干细胞是一种简便、可靠、安全、成本低的外周血干细胞冻存方法,具有广泛的临床推广价值。     

微量元素锌对人TH细胞IL2产生的增强作用

本文报道了应用改进的四甲基偶氮唑盐(MTT)比色分析法检测不同浓度微量元素锌对人 T_细胞 IL_3产生能力的影响。结果表明,微量元素锌在0.153～765μmol/L 浓度范围均有显著增强 IL_2产生的作用。1.53μmol/L 的锌浓度的增强作用非常显著(P<0.01)。本研究证明,锌制剂增强 IL_2产生的作用并非该制剂的直接作用所致。     

合胞病毒感染患儿外周血单个核细胞多种表面标记及IL—2和sIL…

研究呼吸道合包病毒感染患儿的免疫功能。用ＡＰＡＡＰ技术及ＥＬＩＳＡ同时检测患儿外周血单个核细胞多种表面标记及血浆白细胞介素２与可溶性白细胞介素２受体。ＣＤ３，ＣＤ４，ＣＤ８均明显下降，分别为５５．０８±７．２０，３７．。６７±７．４９，２２．１２±４．３９，与对照组比较非常显著。     

骨肉瘤患者外周血单个核细胞IL—6和NO的测定

从32例骨肉瘤患者和20例健康志愿者的外周血中分离出单个核细胞,经脂多粮诱生培养48h,收集上清液,用酶联免疫吸附法测定IL-6的含量,用镀铜镉还原法测定NO的含量。结果发现：骨肉瘤组IL-6和NO水平明显高于对照组（P＜0.01)。骨肉瘤患者IL-6与NO水平呈正相关（r=0.652,P＜0.01)。提示骨肉瘤患者外周血单个核细胞处于激活状态可产生高水平的IL-6及NO;可能与骨肉瘤的发病机制有关。     

外周血单个核细胞产生IL-8影响因素的探讨

目的：观察Ｃ５ａ、ＰＭＡ、Ａ２３１８７、ＬＰＳ对ＰＢＭＣＩＬ－８产生的影响，为研究减轻Ｃ５ａ致病作用的途径创造条仵。方法：用ｒｈＣ５ａ、ＰＭＡ、Ａ２３１８７、ＬＰＳ诱导ＰＢＭＣ，以ＥＬＩＳＡ法测定细胞培养上清中ＩＬ－８。结果：ＰＢＭＣ经ｒｈＣ５ａ、ＰＭＡ、Ａ２３１８７和ＬＰＳ诱导后ＩＬ－８分泌水平较对照组增高。结论：激活ＰＫＣ、提高细胞内钙离子浓度可使ＩＬ－８分泌增加，提示用ＰＫＣ抑制剂、钙通道拮抗剂有可能使Ｃ５ａ介导的ＰＢＭＣＩＬ－８分泌水平降低。     

人外周血单个核细胞白细胞介素-2受体的荧光定量法研究

本文探索了应用荧光分光光度计定量测定正常人外周血单个核细胞介素-2受体(IL_2R)的方法及其条件.以PHA与ConA诱导单个核细胞IL_2R表达的最适细胞浓度为3×10~6/ml:PHA和ConA最适浓度分别为100μm/ml和10μg/ml,PHA诱导较ConA为优.PHA诱导细胞IL_2R的表达24h达到高峰,尔后逐渐下降.第一抗体(抗—Tao)和第二抗体(荧光抗体)与单个核细胞孵育时间分别以20min和10min为好.检测同一标本不同复管的细胞(1×10~6)IL_2R结合荧光抗体mol(简称M)为5.22±0.45×10~(10),变异系数(CV)为8.6％,表明该法稳定性较好.测定5例正常人细胞(1×10~6)IL_2R结合荧光抗体M为4.8±0.97×10~(10).CV为20.2％,结果表明该法能较客观检测出不同个体IL_2R表达.     

谷氨酰胺对人外周血单个核细胞细胞因子表达的影响

目的 探讨谷氨酰胺(Gln)对内毒素(LPS)刺激下健康人外周血单个核细胞(PBMC)细胞因子表达的影响.方法 取健康志愿者新鲜外周血,利用密度梯度离心法提取单个核细胞,观察内毒素刺激单个核细胞表达肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素(IL)系列(IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10),酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清中细胞因子的表达,SuperArray基因芯片技术检测细胞中细胞因子mRNA的表达,同时分别使用1、8、10和15 mmol/L Gln预处理单个核细胞0.5 h和2 h后观察细胞因子在蛋白以及基因水平的表达.结果 LPS刺激PBMC后观察部分细胞因子表达明显增强;1 mmol/L Gln组细胞因子表达无变化,8 mmol/L Gln预处理后TNF-α、IL-1β、IL-8和IL-10表达下降(P＜0.05),15 mmol/L Gln组炎症介质表达均有显著下降(P＜0.01).但与未受LPS刺激组相比炎症介质表达仍有增高(P＜0.05).Gln预处理2 h组细胞因子表达的抑制较0.5 h明显增强(P＜0.05),并且存在时间和剂量的依赖性.结论 Gln能够下调LPS刺激下PBMC细胞因子的过表达.     

结核杆菌感染外周血单个核细胞对细胞免疫功能的影响

目的 :探讨结核杆菌感染外周血单个核细胞 (PBMC)对细胞免疫功能的影响及在结核病转归中的作用。方法 :用PCR检测结核病患者PBMC中结核杆菌DNA(TB DNA) ,用生物素 链霉亲和素 (BSA)系统同步检测其T细胞亚群及经植物血凝素 (PHA)诱导前后膜白介素 2受体 (mIL 2R)水平。结果 :结核病患者T细胞亚群及mIL 2R水平与对照组相比均显著降低(P <0 .0 5～P <0 .0 1)。其中PBMC内TB DNA(+)组与TB DNA(- )组相比 ,CD3+ 、CD4+ 百分率及CD4+ /CD8+ 比值降低 ,CD8+ 百分率增高 (P <0 .0 5 ) ;PHA诱导前后mIL 2R水平较对照组相比均低下 ,差异均有显著性 (P <0 .0 1)。结论 :结核病患者体内细胞免疫功能低下 ,结核杆菌感染PBMC后可加重患者细胞免疫功能紊乱 ,抑制其mIL 2R表达。