人脑肌酸激酶单克隆抗体的制备及鉴定

用事故死亡者脑组织中提纯的人脑肌酸激酶（ＣＫ－ＢＢ）对ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠进行免疫，应用杂交瘤技术将免疫小鼠脾细胞分别与２种骨髓瘤细胞（ＮＳ－１，６５３）融合，筛选得到８株能稳定分泌ＩｇＭ抗体的杂交瘤细胞。对分泌抗体经酶联免疫电泳转移试验（Ｗｅｓｔ－Ｂｌｏｔ）进行了鉴定，其中４种抗体能特异地与ＣＫ－ＢＢ的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳带结合。提示这些单克隆抗体有可能应用于肌酸激酶的结构功能研究和临床检验中。     

分泌抗——HBe单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用ＨＢｅＡｇ阳性血清纯化ＨＢｅＡｇ，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合，反复克隆化培养，最终获得４株分泌抗－ＨＢｅ单克隆抗体的杂交瘤细胞株。对其中两株进行了鉴定。其细胞培养上清中的ＥＬＩＳＡ效价的分别为１：８００和１：５００，诱生同属小鼠腹水中的ＥＬＩＳＡ效价均为１：１０００，特异性试验表明，两株杂交瘤分泌的抗体为特异性抗体，小鼠Ｉｇ亚类鉴定，两株抗体均为ＩｇＧ１亚类球蛋白。细胞染     

分泌抗丙型肝炎病毒NS5蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建？…

目的 建立能稳定分泌抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ５重组蛋白单克隆抗体（ＭｃＡｂ）,并对其生物学活性进行实验室鉴定。方法 用重组ＨＣＶ ＮＳ５区蛋白为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞ＳＰ２／０进行融合,经有限稀释克隆３次后制备分泌ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株,并用酶免疫（ＥＩＡ）法对其分泌抗体进行初步鉴定。结果 融合后的阳性克隆中筛选出６株能稳定分泌ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株,命名为２Ｃ８,２     

甲状腺球蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用ＳＰ２／０骨髓瘤细胞与经人甲状腺球蛋白免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的脾细胞进行融合，融合率９０．３％，抗体阳性率３．１％，经３～４次克隆化，筛出４株稳定分泌甲状腺球蛋白（ＴＧ）ＭｃＡｂ的细胞株，用放射免疫分析方法（ＲＩＡ）检测小鼠腹水，抗体效价在１０－４时，抗体结合率为４３．２％。用酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）方法检测小鼠腹水，抗体效价达１０－５。琼脂糖免疫双扩试验，均显示为ＩｇＧ１亚型。染色体计数证明为杂交瘤细胞。     

分泌抗人促甲状腺激素（hTSH）单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用ＳＰ２／０骨髓瘤细胞与经人促甲状腺激素（ｈＴＳＨ）免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的脾细胞融合，融合率６０．４％，抗体阳性率４．３％，经３－４次克隆化，筛出３株稳定分泌ＴＳＨＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株。用放射免疫分析法（ＲＩＡ）检测小鼠腹水，抗体效价为１０＾－４时，抗体结合率为４５．５％。用ＥＬＩＳＡ方法检测小鼠腹水，抗体效价达１０＾－５。其中３株细胞做琼脂糖免疫双扩散试验，均显示为ＩｇＧ１，亚类。染色体计数     

抗丙型肝炎病毒核心抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初…

用丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心区合成肽作抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细节与骨髓瘤细胞ＳＰ＾２／０进行融合。经有限稀释法克隆３代后获得一株抗ＨＣＶ核心抗原ＣＰ１０的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株３Ｅ７，并对其分泌抗体进行初步鉴定。杂交瘤细胞培养上清的抗体滴度为１：３２０，诱生同系小鼠腹水的滴度为１：１２８００，该ＭｃＡｂ能与ＣＰ１０特异性结合，杂交瘤细胞染色体数目为１０６条。分泌的抗体为ＩｇＧ     

抗人粒细胞集落刺激因子单克隆抗体的研制

应用杂交瘤技术，用重组人Ｇ－ＣＳＦ（ｒｈＧ－ＣＳＦ）免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，然后将其脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＮＳ－１融合，成功地获得了多种能够分泌抗ｒｈＧ－ＣＳＦ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交癌细胞。对其中的２株杂交瘤细胞２Ａ６和２Ｃ２分泌ＭｃＡｂ的研究表明，它们能够特异性地和ｒｈＧ－ＣＳＦ结合，而与重组的人ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－２α和ＴＮＦ细胞因子无交叉反应，为抗Ｇ－ＣＳＦ特异性ＭｃＡｂ。这些杂交瘤细胞经反复冻存和复苏后，仍能稳定地分泌ＭｃＡｂ。     

人白细胞介素2单克隆抗体的制备

作者采用自行制备ＩＬ－２纯品及免疫ＢＡＬＢ／Ｌ小鼠，将脾细胞与ＮＳ－１细胞融合，获得具有分泌稳定性抗体的高效价杂交瘤细胞株，细胞连续舆传４２代仍稳定分泌单克隆抗体，该抗体与ＩＬ－２有特殊吸附，杂交瘤核型呈双亲染色体特点。连续传代未见变异。     

抗人成骨肉瘤杂交瘤细胞系的建立及单克隆抗体特性

目的：建立抗人成骨肉瘤单克隆抗体杂交瘤并对杂交瘤细胞及抗体特性进行研究。方法 利用我室自建成骨肉瘤细胞系（ＯＳ－９６０７）免疫ＢＡＬＢ／c小鼠，取其脾细胞与骨髓 瘤细胞Ｓp２／０两便，经筛选和克隆化，制备杂交瘤细胞系，用免疫组化ＡＢＣ方法研究交瘤细胞分泌的单克隆抗体特性。结果：制得２株能持续、稳定分汔抗体的杂交瘤细胞系。其中６Ｅ７和５Ｄ３株杂交瘤细胞经过１００d连续培养，背地里克隆抗体６Ｅ７mＡb和５     

分泌抗—HBe单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用ＨＢｅＡｇ阳性血清纯化ＨＢｅＡｇ，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合，反复克隆化培养，最终获得４株分泌抗－ＨＢｅ单克隆抗体的杂交瘤细胞株。对其中两株进行了鉴定。其细胞培养上清中的ＥＬ／ＩＳＡ效价分别为１：８００和１：５００，诱生同属小鼠腹水中的ＥＬＩＳＡ效价均为１：１０００，特异性试验表明，两株杂交瘤分泌的抗体为特异性抗体，小鼠Ｉｇ亚类鉴定，两株抗体均为ＩｇＧ１亚类球蛋白。细胞染色体数为９５～１１０条。结果证明，此细胞株为特异性分泌抗—Ｈｋｅ单克隆抗体细胞株。     

一株抗人胆管癌相关抗原杂交瘤细胞株的建立及鉴定

目的 建立能分泌与人胆管癌组织特异结合的高效价抗人胆管癌相关抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法 用２的人胆管癌细胞系Ｓｋ－ＣＨＡ－１免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠后，获取免疫小鼠的脾细胞。与小鼠骨髓瘤ＳＰ２／０融合，ＥＬＩＳＡ方法及免疫荧光染色法筛选细胞晤后生成的杂交瘤细胞株。结果 ＥＬＩＳＡ方法及免疫荧光染色法共筛选出５株能持续稳定分泌抗人胆管癌相关抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其中２Ｆ４Ｅ８杂交瘤细胞株     

建立分泌抗猪精液抑制素杂交瘤细胞株及其McAb的研究

用猪精液抑制素免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的脾细胞与ＮＳ－１小鼠髓瘤细胞融合，获得３株分泌抗猪精液抑制素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为２Ｄ、５Ｄ和６Ｇ，其分泌的抗体均为ＩｇＧ１型，不与大鼠ＬＨ、ＦＳＨ和ＰＲＬ产生交叉反应，杂交瘤细胞染色体平均为８５－１００条。细胞经反复冻存、复苏和传代，仍稳定分泌特异性抗体。     

黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备和鉴定

以自由合成的黄曲霉毒素Ｂ１－人血清白蛋白（ＡＦＴＢ１－ＨＳＡ）偶联物免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，应用杂交瘤技术，建立了两株能持续分泌抗ＡＦＴＢ１单克隆抗体（ＡＦＴＢ１ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株，命名为１Ｂ５和２Ｆ１，接种ＢＡＬＢ／ｃ鼠腹腔均能诱产生含特异性抗体的腹水。     

建立分泌抗猪精液抑制素杂交瘤细胞株及其McAb的研究

用猪精液抑制素免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的脾细胞与ＮＳ－１小鼠骨髓瘤细胞融合，获得３株分泌抗猪精液抑制素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为２Ｄ、５Ｄ和６Ｇ，其分泌的抗体均为ＩｇＧ１型，不与大鼠ＬＨ、ＦＳＨ和ＰＲＬ产生交叉反应。杂交瘤细胞染色体平均为８５～１００条。细胞经反复冻存、复苏和传代，仍稳定分泌特异性抗体。     

分泌抗丙型肝炎病毒NS5蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

目的建立能稳定分泌抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ５重组蛋白单克隆抗体（ＭｃＡｂ）,并对其生物学活性进行实验室鉴定。方法用重组ＨＣＶＮＳ５区蛋白为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞ＳＰ２／０进行融合,经有限稀释克隆３次后制备分泌ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株,并用酶免疫（ＥＩＡ）法对其分泌抗体进行初步鉴定。结果融合后的阳性克隆中筛选出６株能稳定分泌ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株,命名为２Ｃ８,２Ｄ２,１Ｄ６,２Ｇ２,１Ｆ５和１Ｆ１０。这６株ＭｃＡｂ与ＮＳ５重组抗原均有良好的反应性,杂交瘤培养上清的ＥＩＡ抗体滴度为１∶４００～１∶１６００,其中１株诱生的同系小鼠腹水滴度为１∶８００００。这６株ＭｃＡｂ均为ＩｇＧ１亚型。结论该ＭｃＡｂ的制备,可为ＨＣＶ感染者血清和肝组织中抗原检测方法的建立和生物工程药物的研制创造条件。     

抗人甲胎蛋白单克隆抗体的制备及其特性研究

本文采用亲和层析法纯化的甲胎蛋白（ＡＦＰ）抗原免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０小鼠骨髓瘤细胞系融合，获三株分泌抗人ＡＦＰ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞系。用ＥＬＩＳＡ阻断试验和夹心ＥＬＩＳＡ试验作特异性鉴定，杂交瘤细胞株染色体的众数为１０４条，三株细胞系ＭｃＡｂ均属小鼠ＩｇＧ１型。经体外连续传代３个月及冻存一年复苏后均能持续分泌抗ＡＦＰ抗体。     

分泌抗人IgMμ链McAb杂交瘤细胞株的建立

本文从正常人血清中分离纯化人ＩｇＭ，以此作为抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，根据ｋｏｈｌｅｒ和Ｍｉｌｓｔｅｉｎ杂交瘤细胞建株原理，采用本室建立的常规方法，将免疫脾细胞和小鼠ＳＰ２／０骨髓瘤细胞进行融合，建立了分泌抗人ＩｇＭμ单克隆抗体杂交瘤细胞株。经过间接ＥＬＩＳＡ双向琼脂扩散试验及封闭试验等方法证实，所分泌的抗体抗人ＩｇＭμ链ＭｃＡｂ，其中３Ａ４，３Ｄ３２株杂交瘤细胞经反复冻存，复苏及多次传匀能分泌高     

抗血管内皮细胞生长因子受体单抗的制备及鉴定

目的：制备血管内皮细胞生长因子受体（ｋｉｎａｓｅｉｎｓｅｒｔｄｏｍａｉｎｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＫＤＲ）的单克隆抗体并鉴定其特异性。方法：在大肠杆菌中表达重组ＫＤＲ融合蛋白。融合蛋白经凝胶分离纯化后免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞，用传统杂交瘤技术与小鼠骨髓瘤细胞融合及次黄嘌呤、氨基喋呤与胸苷选择性培养。单克隆杂交瘤上清经ＥＬＩＳＡ双筛和ＳＰ免疫组化筛选并鉴定其亚类。结果：经ＥＬＩＳＡ双筛和组化筛选获得了一株能稳定分泌人ＫＤＲ单克隆抗体的杂交瘤细胞株（命名为ＳＳＷ２），其分泌抗体亚类为ＩｇＧ１，产生的腹水效价可达１×１０－６。结论：ＳＳＷ２同血管内皮细胞尤其是肿瘤组织的血管内皮细胞有较强的阳性反应。     

抗ENA单克隆抗体的研制

目的：制备与分析抗可提取性核抗原（ＥＮＡ）单克隆抗体;方法：以ＥＮＡ为抗原,免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与小鼠Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合,经反复筛选和再克隆化,建立能稳定分泌抗ＥＮＡ单克隆抗体（ＭｃＡｂｓ）的杂交瘤细胞株;结果：共获得１１株能稳定分泌抗ＥＮＡ的杂交瘤细胞株。对其中的５种单克隆抗体（ＩＧ５,２Ｅ５,２Ｃ６,４Ｃ１０和４Ｅ６）进行了初步分析,结果如下：小鼠腹水抗体效价范围２×１０－５～３×１０－６;免疫球蛋白亚类鉴定,１株为ＩｇＧ２ａ,１株为ＩｇＧ２ｂ,其余３株均为ＩｇＧ１;结论：ＥＮＡ作为弱免疫原可用于制备单克隆抗体     

一种单纯疱疹病毒共有型单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的：建立能稳定分泌单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）共有型单克隆抗体（Ｍａｂ）的细胞株并进行初步鉴定。方法：本研究利用杂交瘤技术建立了 １３株能稳定分泌抗 ＨＳＶ 特异性 Ｍａｂ的杂交瘤细胞株,其中 ５株能稳定分泌抗 ＨＳＶ型共有单克隆抗体（５Ｂ４－２、５Ｂ４－６、６Ｂ３－２－３、Ｄｂ４、Ｅｂ４）,并对５Ｂ４－６株进行了初步鉴定。结果：免疫双扩散法确定Ｍａｂ５Ｂ４－６的 Ｉｇ类型为 ＩｇＧ２ｂ。经微量免疫荧光法（Ｍｉｃｒｏ－ＩＦＡ）法测定杂交瘤培养上清及腹水中单抗效价,分别为 １∶１６及１∶２０４８０。杂交瘤细胞核型分析显示其染色体数目为９１．８±６．２。杂交瘤细胞经４次克隆,传代６个月仍能稳定地分泌抗体。用免疫印渍法进一步鉴定Ｍａｂ５Ｂ４－６所结合抗原的分子量约为７７ＫＤ。结论：细胞株５Ｂ４－６能稳定分泌一种新奇的针对具有ＨＳＶ型共有抗原表位的７７ＫＤ 蛋白的特异性单抗。