应用原位分子杂交技术检测实验性肝癌中c—fos基因的表达

目的：探讨实验性肝癌中ｃ－ｆｏｓ基因的表达及其意义。方法：采用二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌模型，应用核酸原位分子杂交和细胞图像分析技术，检测肝癌细胞ｃ－ｆｏｓ基因的表达。结果：肝癌细胞胞浆中ｃ－ｆｏｓ基因呈阳性表达，ｃ－ｆｏｓ基因表达的强度差异与癌周肥大细胞数量变化呈平行一致关系（Ｐ〈０．０５），癌巢周围组织及正常肝组织ｃ－ｆｏｓ基因呈阴性。结论：ｃ－ｆｏｓ基因与肝癌的发生、发展密切相关，肝癌细胞ｃ－     

c—fos基因在衰老的成纤维细胞核染色质中结构状态的研究

为探讨衰老过程中促增殖基因在染色质结构存在的状态，用表皮生长因子（ＥＧＦ）刺激不同代龄的人胚肺成纤维细胞（２ＢＳ细胞）再用ＤＮａｓｅⅠ超敏感方法对ｃ－ｆｏｓ基因进行检测，发现衰老２ＢＳ细胞ｃ－ｆｏｓ基因对ＤＮｅｓｅⅠ的敏感性降低，并且不能通过ＥＧＦ的刺激而发生结构状态的改变，提示衰老细胞促增殖基因可能多处于“关闭”状态，与衰老细胞的增殖下降有关。     

c-Jun氨基末端激酶活性测定

丝裂素活化蛋白激酶（ｍｉｔｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ，ＭＡＰＫｓ）是细胞内重要的信号转导酶类，它们被细胞外刺激因子激活后，可通过使不同的转录因子磷酸化，调节特定基因的表达，转导细胞增殖、肥大或细胞分化的信号。研究表明，ＭＡ...     

肝癌内高表达新基因的部分cDNA克隆

目的寻找人肝癌相关的基因。方法应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术，对表达序列标记（ＥｘｐｒｅｓｓｅｄＳｅ－ｑｕｅｎｃｅｔａｇｓ，ＥＳＴ）基因克隆进行筛选，以得到的基因片段为探针，筛选人胎肝ｃＤＮＡ文库。结果得到一个在肝癌内高表达的ＥＳＴ基因片段。进一步筛选人胎肝ｃＤＮＡ文库，得到一命名为ＦＬ６的ｃＤ－ＮＡ克隆，核苷酸序列测定表明，ＦＬ６长度为１４６４个碱基，检索最新版本ＧｅｎｅＤａｔａｂａｓｅｓ（ＥＭＢＬ９６．６），未发现同源基因。实验结果还显示该基因在胎儿各组织内有不同的表达特性。结论该基因可能与细胞的增殖、癌变过程相关。     

氧化修饰高密度脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞原癌基因c—fo …

动脉平滑肌细胞（ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ,ＳＭＣ）的增殖在动脉粥样硬化（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ,ＡＳ）的形成过程中极其重要利用体外培养的人主动脉ＳＭＣ,观察了天然高密度脂蛋白（Ｎａｔｉｖｅ ｈｉｇｈ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ＮＨＤＬ）及氧化修饰ＨＤＬ（ＯＸ－ＨＤＬ）对培养的人主动脉ＳＭＣ原癌基因ｃ－ｆｏｓ及ＰＤＧＦ受体基因转录表达的影响。     

腺病毒介导的LacZ基因在乳腺癌细胞中的表达

目的：观察腺病毒介导的基因转移在乳腺癌细胞的转导效率及腺病毒转导对细胞生长的影响。方法：腺病毒介导的基因转导。结果：在病毒的重复感染率（MOI）为500时细胞的转导效率达到100％；不同数量的病毒转导乳腺癌细胞对癌细胞的生长没有明显影响。低温冻存可使病毒的感染性明显下降。结论：腺病毒介导的基因转移在乳腺癌细胞中有高的转导效率，而病毒载体本身对细胞的生长没有影响，可用作乳癌特异药物前体酶激活基因治疗的基因转移方法。     

绞股蓝总甙对培养的兔动脉平滑肌细胞c-fos基因表达的影响

采用ＲＮＡ斑点杂交技术，应用地高辛标记的ｃ ｆｏｓ基因探针检测培养的兔动脉平滑肌细胞中ｃ ｆｏｓｍＲＮＡ水平。结果显示绞股蓝总甙对ｃ ｆｏｓ基因甙的表达有抑制作用（Ｐ＜０．０１）；并且与绞股蓝总甙浓度呈依赖性负相关。推测绞股蓝总甙可能对动脉平滑肌细胞有抑制增生的药理作用。     

MRP基因表达对NSCLC术后化疗的影响

目的 探讨多药耐药性相关蛋白基因－ＭＲＰ基因（ｍｕｌｔｉ－ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｇｅｎｅ）对肺癌患者术后化疗疗效的影响。方法 应用原位分子杂交结合免疫组化技术检测３５例非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＳ）根治术后化疗患者石蜡组织标本中肺癌细胞ＭＲＰ基因ｍＲＮＡ表达,并回顾性随访。结果 ３５例ＮＳＣＬＣ患者肺癌细胞均有不同程度的ＭＲＰ基因ｍＲＮＡ表达,其表达水平     

转染TNFα基因对胶质瘤细胞致瘤性的影响

研究转染肿瘤坏死因子α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒα,ＴＮＦα）基因的胶质瘤细胞的致瘤性。方法运用ＭｏＭＬＶ逆转录病毒载体,将ＴＮＦα基因转导至人胶质瘤细胞ＳＨＧ－４４,用Ｇ４１８筛选出阳性细胞克隆,以细胞培养检测细胞生长抑制,以裸鼠接种研究其致瘤性。结果转染细胞培养上清液中ＴＮＦα含量分别为（５１９８．７±３７５７．４）和（３２１７．４±１１８０．６）ｐｇｍｌ（Ｐ＜０．０５）,其生物活性达３２０．０ｕｍｌ。运用ＲＴ－ＰＣＲ检测ＴＮＦαｍＲＮＡ特异性表达。细胞培养发现：转染ＴＮＦα基因的细胞生长受抑制,Ｇ２－Ｍ期缩短而Ｇ０－Ｇ１期延长。裸鼠接种试验发现转染ＴＮＦα基因的胶质瘤细胞致瘤性下降,早期出现明显坏死。未转染ＴＮＦα基因的胶质瘤细胞混有１０％的转染ＴＮＦα基因的细胞,其生长也受到抑制。结论转染ＴＮＦα基因的胶质瘤细胞的致瘤性下降。     

细胞凋亡及凋亡相关基因在下肢静脉曲张中的表达及意义

目的：探讨细胞凋亡和凋亡相关基因在下肢静脉曲张中的表达及意义。方法：采用凋亡细胞原位检测、原位杂交、免疫组化研究８３例曲张静脉和１０例对照组内皮细胞和平滑肌细胞凋亡及相关基因表达。结果：①曲张静脉囊性扩张型Ｅｃｓ及ＳＭＣ凋亡指数显著增高（Ｐ＜０．０１）；②曲张静脉囊性扩张型Ｂｃｌ－２　ｍＲＮＡ阳性细胞表达率均显著低于非囊性扩张型（Ｐ＜０．０５）；③非囊性扩张型其Ｂｃｌ－２基因蛋白阳性细胞表达率均显著高于囊性扩张型和对照组（Ｐ均＜０．０５）；④囊性扩张型其Ｂａｘ　和Ｆａｓ基因蛋白阳性细胞表达率均显著高于非囊性扩张型和对照组（Ｐ均＜０．０５）；⑤Ｂｃｌ－２　ｍＲＮＡ表达阳性细胞数和表达率（０．２５±０．２３）与Ｂｃｌ－２基因蛋白（０．３０±０．２７）呈显著正相关，相关系数ｒ分别为０．７９５３８１（Ｐ＝０．００１９８１）和０．６８８２１６（Ｐ　＝０．０００８４４）。结论：①细胞过度凋亡导致静脉血管重塑，可能是静脉曲张发病机制之一；②曲张静脉囊性扩张型其ＥＣｓ和ＳＭＣ过度凋亡可能与Ｂｃｌ－２　ｍＲＮＡ、Ｂｃｌ－２蛋白低水平表达及Ｂａｘ、Ｆａｓ高水平表达相关。     

IL—2基因转导CD3AK细胞免疫学功能的研究

目的：观察白细胞介素-2（IL-2）基因转导后CD3AK细胞免疫学功能的变化。方法：应用逆转录病毒载体将IL-2基因转导入CD3AK细胞，检测转导细胞中特异性Neo^R基因、培养上清IL-2的表达水平及转导CD3AK细胞的体外地产殖活性、细胞毒活性和细胞表型。结果：从转导细胞mRNA中扩增出长度为347bp的特异性Neo^R基因片段，转导细胞培养上清的IL-2表达水平显著增高，体外增殖活性和细胞毒活性均强于未转导组细胞，CD4^ /CD8^ 值升高。结论：PLIL-2SN逆转录病毒转导CD3AK细胞后，IL-2基因得到表达并增强CD3AK细胞的免疫学功能。     

安徽人FⅧ基因内及其旁侧RFLPs的研究

研究若干不相关安徽个人体的四个凝血因子Ⅷ（ＦⅧ）基因内限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰｓ）（ＢｃｌⅠ、ＨⅢ、ＸｂａⅠ、ＭｓｐⅠ）及四个基因旁侧的ＲＦＬＰｓ（ＢｓｔｘⅠ、ＰｓｔⅠ、ＭｓｐⅠ、和ＡｃｃⅠ）。ＢｃｌⅠ／ＨｉｎｄⅢ、ＸｂａⅠ、ＭｓｐⅠ基因内多态位点的杂合子频率分别为０．２３、０．４２、０．４９６。在接近内含子２２处，发现了两个额外的ＸｂａⅠ多态位点。在基因旁侧，应用ＢｓｔｘⅠ和ＰｓｔⅠ发现安     

大肠肿瘤错配修复基因缺陷的研究状况

人类错配修复基因（ｍｉｓｍａｔｃｈｒｅｐａｉｒ，ＭＭＲ）的发现及其与微卫星不稳（ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ，ＭＩ）和肿瘤易感性的关系，已在大肠肿瘤的分子遗传学研究中得到较充分的证实。ＭＭＲ基因突变引起微卫星重复单位长度的改变，产生复制差错（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎｅｒｒｏｒｓ，ＲＥＲ），导致表达基因的突变或（和）调节失控，从而发生肿瘤［１～５］，这已被认为是大肠肿瘤发生的一种新的可能机制。目前，至少已有４种与遗传性非息肉性结直肠癌（ＨＮＰＣＣ）的发生密切相关的人类ＭＭＲ基因…     

t－PA cDNA基因在CHO细胞中的稳定表达

建立稳定表达人组织型纤溶酶原激活剂（ｔｉｓｓｕｅ－ｔｙｐｅｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒ，ｔ－ＰＡ）的细胞株。将ｔ－ｐＡｃＤＮＡ连接在真核表达载体ｐｃＤＮＡ３的ＨｉｎｄⅢ位点，构建成重组质粒ｐｃＤＮＡ３ｔＰＡ，用磷酸钙介导的贴壁细胞转染法导入哺乳动物中国仓鼠卵巢（ＣＨＯ）细胞中，Ｇ４１８筛选培养后形成阳性克隆。结果：培养液中重组ｔ－ｐＡ（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｔ－ｐＡ，ｒｔ－ｐＡ）活性＞６０００ＩＵ／１０６细胞ｄ－１．Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交证实ｔ－ＰＡｃＤＮＡ基因的转录。高表达细胞连续传代１０次后，培液中ｒｔ－ｐＡ活性未见明显变化。结论：转染ｔ－ＰＡｃＤＮＡ基因的ＣＨＯ细胞已形成稳定的工程细胞。     

人bax真核表达载体的构建及其在人胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR中的表达

目的：构建人ｂａｘ真核表达载体,经脂质体导入人胃癌耐药细胞ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ,并检测ｂａｘ基因在转导株的表达．方法：采用分子克隆技术将ｂａｘ基因插入真核表达载体ｐＢＫ－ＣＭＶ的多克隆位点之间,以脂质体介导法将目的基因导入受体细胞ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ,Ｇ４１８筛选克隆细胞,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ｂａｘ基因的表达．结果：成功地构建了重组质粒ｐＢＫ－ｂａｘ,将之转入细胞后,经Ｇ４１８筛选３０ｄ获得了稳定的细胞克隆,即ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ－ｂａｘｃｅｌｓ．Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹证实了ｂａｘ基因转导株具有明显的Ｂａｘ蛋白表达．结论：ｂａｘ真核表达载体的构建,为胃癌耐药的临床治疗打下了基础．     

绿色荧光蛋白基因在白血病细胞K562中的转导效率

目的：探讨慢病毒载体在白血病细胞中的基因转导效率,为白血病基因治疗提供关键依据。方法：应用1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)改造而成的第3代自身失活(SIN）慢病毒载体（lentiviral vector）系统,与鼠白血病病毒（MLV）SIN载体进行比较,通过荧光显微镜观察细胞内标记基因绿色荧光蛋白（GFP）的表达情况,应用流式细胞术检测基因导入细胞百分比,评价两种载体系统在人白血病细胞系K562中的基因转导效率。结果：通过荧光显微镜可定性观察GFP在K562细胞中的表达情况,在同样的基因转导条件下,HIV载体转导的白血病细胞中被转导的标记基因GFP的表达强度及GFP阳性细胞数明显高于MLV载体转导的细胞。流式细胞仪定量检测HIV载体的转导效率接近100%,而MLV低于40%,两组间转导效率比较差异有显著性（P＜0.05）。结论：基于慢病毒载体基因转导的高效性,该载体系统可作为白血病细胞基因转导的极好工具。     

原发性肝癌中 HBV X、S、Pre-S、C 基因片段整合与 ras、myc 癌基因表达的关系

用地高辛标记的ＨＢＶ基因组探针检测了６６例肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）中ＨＢＶ的存在状态，从中筛选出３２例仅有ＨＢＶＤＮＡ整合的ＨＣＣ作为研究对象，进一步检测了ＨＢＶＸ基因、Ｓ基因、Ｐｒｅ－Ｓ、Ｃ基因ＤＮＡ片段的整合情况，并探讨了ＨＢＶ４种基因亚片段整合与ｒａｓ、ｍｙｃ癌基因表达的关系。结果显示，ＨＢＶＸ、Ｓ、Ｐｒｅ－Ｓ和Ｃ基因片段的整合率分别为８７．５％（２８／３２）、６２．５％（２０／３２）、６２．５％（２０／３２）和２５．０％（８／３２）。ｐ２１ｒａｓ、ｐ６２ｍｙｃ在ＨＣＣ中的表达率分别为５０．０％（２０／４０）、８１．２％（２６／３２）。通过对ＨＣＣ中４种ＨＢＶ基因片段整合与ｐ２１ｒａｓ、ｐ６２ｍｙｃ表达之间关系的研究，显示ｐ６２ｍｙｃ的表达与ＨＢＶＸ、Ｐｒｅ－Ｓ基因整合关系密切，ｐ２１ｒａｓ的表达则主要与ＨＢＶＸ基因整合有关（Ｐ＜０．０５）。提示ＨＢＶＸ、Ｐｒｅ－ＳＤＮＡ片段在宿主细胞染色体上的整合可能直接或通过其蛋白启动ｍｙｃ和（或）ｒａｓ癌基因的表达。     

供转导PDGF-A基因的高滴度逆转录病毒的制备

目的制备高滴度供转导血小板衍生生长因子Ａ链（ＰＤＧＦ－Ａ）基因的重组逆转录病毒,为体内、外深入研究该基因表达产物自分泌和旁分泌的生物学功能奠定基础。方法将人ＰＤＧＦ－ＡｃＤＮＡ片段插入含巨细胞病毒（ＣＭＶ）启动子序列的逆转录病毒ＧＩＮａ载体的多克隆位点中,将构建的重组质粒导入病毒包装细胞ＰＡ３１７中,经Ｇ４１８筛选并扩增,以病毒液感染ＮＩＨ３Ｔ３细胞,测病毒滴度,选择出抗性克隆,进行免疫组织化学检测,表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析和３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测生物学活性。结果病毒滴度最高为１．４×１０５ＣＦＵ／ｍｌ;免疫荧光染色法和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实ＰＤＧＦ－ＡＡ的表达;抗性细胞条件培养基的细胞活性高达５１．２Ｕ／（１０６·ｄ）。结论供转导ＰＤＧＦ－Ａ基因的高滴度逆转录病毒得以制备,该基因获得有效表达,表达产物具有明显的致丝裂活性。     

一氧化氮合成酶基因家族

哺乳动物细胞存有一氧化氮合成酶（ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ＮＯＳ）基因家族，其编码的蛋白为ＮＯＳ蛋白家族。本文综述了ＮＯＳ家族的基因结构、基因表达调控、蛋白结构与功能的研究进展。     

抗凋零基因bcl－2在何杰金病中的表达及其意义

抗凋零基因ｂｃｌ－２在何杰金病中的表达及其意义陈协群，王文亮，黄高升，王成济，沈素芸（西京医院血液病科病理学教研室，生物化学教研室）关键词何杰金病；细胞凋零；ｂｃｌ－２基因；免疫组织化学中图法分类号Ｒ７３３．１人ｂｃｌ－２是细胞凋零（ａｐｏｐｔｏｓｉ...