耐多药结核分枝杆菌中embB基因突变与乙胺丁醇耐药的相关性研究

目的 研究耐多药结核分枝菌中embB基因突变与乙胺丁醇耐药的相关性. 方法 比例法检测84株耐多药结核分枝杆菌的乙胺丁醇(EMB)耐药性,基因测序检测embB基因的突变,2检验分析二者之间的相关性. 结果 84株耐多药结核分枝杆菌中有43株(51.2%)对EMB耐药,41株(48.8%)对EMB敏感,57株耐多药菌株(67.9%)的embB基因发生突变.在43株EMB耐药菌株中,embB基因突变的菌株为40株(93.0%),而41株EMB敏感菌株中,embB基因突变的菌株为17株(41.5%),embB基因在耐药菌株中的突变频率远高于敏感菌株(2=25.58,P=0.00).embB306是最常见的突变位点,其在耐药菌株的突变率也高于敏感菌株(2=12.37,P=0.00),embB基因和embB306位点检测EMB耐药的敏感度、特异度和准确性分别为93.0%和65.1%,58.5%和73.2%,76.2%和69.0%. 结论 EMB耐药的产生与embB基因和embB306突变有关,二者用于检测EMB耐药有一定的参考意义.     

结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药的分子机制及其快速鉴定

目的：了解结核分枝杆菌乙胺丁醇(EMB)耐药的临床分离株embB基因突变的情况，并探索快速检测结核分枝杆菌EMB耐药性的实验方法。方法：应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术和PCR扩增产物测序方法。分析结核分枝杆菌EMB耐药和敏感各30株的embB基因。结果：以结核分枝杆菌H37RV标准株为对照。发现30株EMB耐药株中有11株(36．7％)embB基因扩增产物SSCP泳动异常，部分耐药菌株测序分析证实为306位密码子突变；而30株敏感株的embB基因扩增产物SSCP泳动均无异常。结论：embB基因突变是结核分枝杆菌EMB耐药的重要机制之一；PCR-SSCP技术可能成为一种检测结核分枝杆菌EMB耐药性的准确和快速的实验方法。     

青岛地区结核分枝杆菌embB306基因突变特征与乙胺丁醇耐药的关系

目的：探讨青岛地区结核分枝杆菌 embB306突变特征与乙胺丁醇耐药的关系。方法应用聚合酶链反应（PCR）-DNA 测序法对来自青岛地区36株乙胺丁醇耐药和48株乙胺丁醇敏感的结核分枝杆菌的 embB 基因片段进行分析。结果48株乙胺丁醇敏感菌株中均未发生 embB306突变,而36株乙胺丁醇耐药菌株中有20株发生了embB306突变,突变率为55．6％;embB306突变在乙胺丁醇敏感菌株和乙胺丁醇耐药菌株中的分布差异具有统计学意义（χ2＝35．000,P ＜0．01）。结论在青岛地区,embB306的突变是青岛地区结核分枝杆菌对乙胺丁醇耐药的主要机制。     

合肥地区耐多药结核分枝杆菌异烟肼、链霉素及 乙胺丁醇耐药相关基因位点表达研究

目的研究耐多药结核分枝杆菌异烟肼(INH)、链霉素(SM)及乙胺丁醇(EMB)耐药相关基因位点的表达情况。方法选取该院2013年1月至2017年12月临床分离的101株耐多药结核分枝杆菌,利用测序法和基因芯片法分别检测INH、SM和EMB耐药相关基因及突变位点。结果 101株耐多药结核分枝杆菌中对SM耐药率69.3%;对EMB耐药率51.4%;对SM和EMB二者均耐药的耐药率44.5%。基因芯片法检出95例INH耐药相关基因突变,其中katG基因315M位点突变率为77.8%;inhA基因-15M位点突变率为89.4%。检出64例rpsL SM耐药相关基因,其中43M位点突变率为89.0%;88M位点突变率为11.0%。检出47例embB EMB耐药相关基因,以306M2位点突变为主,突变率为68.0%。测序法检出98例INH耐药相关基因突变,katG基因突变以315位点为主突变率为73.4%;inhA基因突变以-15位点为主突变率为87.7%;oxyR-ahpC基因-12和-10位点突变率分别为10.2%和8.2%。检出68例SM耐药相关基因突变,rpsL基因以43位点为主突变率为86.8%;rrs基因512、513、516位点突变率分别为5.9%、8.8%、8.8%。检出50例EMB耐药相关基因embB以306位点为主突变率为88.0%。结论耐多药结核分枝杆菌INH、SM及EMB耐药基因位点表达可作为结核分枝杆菌临床检测耐药性的有效依据,为提高耐多药结核分枝杆菌耐药性检测的敏感度,应将INH耐药相关oxyR-ahpC基因和SM耐药相关rrs基因纳入我国快速分子诊断产品中。     

浙江省丽水市结核分枝杆菌临床分离株耐药性及基因突变情况

目的 调查浙江省丽水市结核病定点医院患者结核分枝杆菌（MTB）临床分离株耐药特征及耐药基因突变情况，为该地区耐药结核病防控提供依据。方法 采用荧光PCR熔解曲线法对培养自丽水市结核病定点医院结核病患者MTB临床分离株进行抗结核药物耐药性及耐药基因突变位点检测及分析。结果 242株MTB总耐药突变占16.53%(40/242)，耐多药率为4.96%(12/242)，耐药顺位分别为异烟肼>链霉素>利福平>氟喹诺酮类>乙胺丁醇。链霉素耐药株基因突变位点主要发生在rpsL43位密码子，占比为65.00%(13/20)；异烟肼耐药基因突变位点主要发生在katG315密码子，占比为76.19%(14/21)；利福平耐药基因突变位点主要发生在rpoB基因529-533位密码子，占比为61.11%(11/18)；乙胺丁醇耐药基因突变位点主要发生在embB306位密码子，占77.78%(7/9)。结论 丽水市结核患者总体耐药突变低于全国耐药水平，但耐药模式和耐药基因突变情况仍较为复杂，需进一步加强耐药结核病监测及防控工作。     

耐药结核分枝杆菌基因突变分析

目的 探讨结核分枝杆菌耐药表型与基因突变位点之间的相互关系.方法 采用序列特异性引物分别扩增92株结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB,异烟肼耐药基因katG、inhA、ahpC,链霉素耐药基因rrs、rpsL,乙胺丁醇耐药基因embB及喹诺酮耐药基因gyrA,SSCP筛选出突变序列,DNA测序分析突变性质.结果 59株利福平耐药株rpoB基因突变检出率94.9%(56/59),以Ser450Trp突变最多;90株异烟肼耐药株中,katG基因突变检出率38.9%(35/90),以Ser315Thr最多,3株检出inhA基因突变,ahpC基因无突变检出;34株喹诺酮耐药株中gyrA基因突变检出率82.4%(28/34),主要为Asp94Gly,其次为Ala90Val;31株链霉素耐药株中,15株检出rrs突变,最常见为A514C和A1041G,10株发生rpsL Lys88Arg突变,总的链霉素基因突变检出率为77.4%(24/31);31株乙胺丁醇耐药株中embB 基因突变检出率19.4%(6/31),主要为Met306Val.结论 耐药结核分枝杆菌耐药情况较为严重,以DNA测序为基础的基因突变分析能快速有效地检测结核分枝杆菌的rpoB、katG、gyrA、rrs、rpsL、embB 等耐药分子标识,显示了西安地区耐药性结核分枝杆菌的突变特点,为结核病的临床诊断和合理用药提供了实验依据.     

广东地区结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药的pncA、rpsA、panD基因分型特征研究

目的探讨广东地区结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药与相关基因pncA、rpsA和panD的突变特征。方法收集2015年12月至2018年2月在该院就诊的327例结核病患者的痰液标本。采用结核分枝杆菌核酸检测法检测痰液中结核杆菌阳性率,采用MGIT960仪器检测吡嗪酰胺的敏感性,采用PCR DNA测序技术对pncA、rpsA和panD的基因序列进行分析。结果经结核分枝杆菌核酸检测,327份结核患者痰液标本中有317份痰液标本为阳性,阳性率为96.94%。根据吡嗪酰胺耐药结果,327株分离株中吡嗪酰胺耐药102株,吡嗪酰胺敏感225株,耐药率为31.19%。225株吡嗪酰胺敏感株中未发现pncA突变,102株吡嗪酰胺耐药株中有67株发现pncA基因突变,突变率为65.69%。102株吡嗪酰胺耐药株中检测出5株rpsA突变,突变率为4.90%;225株吡嗪酰胺敏感株中检测出1株rpsA突变,突变率为0.44%。吡嗪酰胺耐药菌株的rpsA突变率显著高于吡嗪酰胺敏感菌株(χ~2=7.476,P=0.006)。105株吡嗪酰胺耐药株中检测到1株panD突变,为G419→A突变,突变率为0.95%。吡嗪酰胺敏感株中未检测到panD突变。结论在中国广东地区,结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药率较高,其中pncA基因突变较多,突变位点较为分散;而吡嗪酰胺耐药结核分枝杆菌中rpsA和panD基因突变均值得进一步关注。     

结核分枝杆菌embB基因突变检测的研究进展

乙胺丁醇(EMB)是具有广谱抗分枝杆菌活性的一线抗结核合成药物,被广泛应用于结核分枝杆菌和鸟分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌等多种非结核分枝杆菌感染的治疗.近年来,结核病疫情呈上升趋势,其耐药问题也日趋严峻,乙胺丁醇(EMB)作为主要的抗结核药物[1],在原发和复发结核病患者中的耐药率有上升趋势[2],据报道在一些国家获得性EMB耐药率已达13.7%[3].     

结核分枝杆菌embB基因突变检测的研究进展

乙胺丁醇（EMB）是具有广谱抗分枝杆菌活性的一线抗结核合成药物。被广泛应用于结核分枝杆菌和鸟分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌等多种非结核分枝杆菌感染的治疗。近年来。结核病疫情呈上升趋势．其耐药问题也日趋严峻，乙胺丁醇（EMB）作为主要的抗结核药物，在原发和复发结核病患者中的耐药率有上升趋势．据报道在一些国家获得性EMB耐药率已达13．7％。有研究表明MTB耐乙胺丁醇与阿拉伯糖基转移酶的编码基因EMB操纵子突变或EMB蛋白过度表达有关。该操纵子由embA、embB、embC3个基因组成．其中embB基因（尤其是306位密码子）突变是EMB耐药的主要原因。现就EMB的药理作用、耐药机制、检测方法做一综述。     

西安市结核分枝杆菌耐药性初步调查

目的　了解西安市结核分枝杆菌临床分离株耐药状况。方法　采用抽样调查方法,于2005年5-8月调查收集西安市13个区（县）结防所门诊所有拟诊病例痰标本,用改良罗氏培养基进行病原分离,鉴别培养基培养法进行菌型鉴定。对分离到的结核分枝杆菌采用绝对浓度法对4种一线抗结核药物, 异烟肼（INH）、 利福平（RFP）、 链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）, 进行药物敏感性检测。结果　104株结核分枝杆菌对4种一线抗结核药物, INH、 RFP、 SM和EMB,全部敏感的菌株为71株（68.3%）;耐药菌株33株（31.7%）,其中, 单耐药菌株12株（11.5%）,耐多药菌株21株（20.2%）。结核分枝杆菌对4种一线药物INH、 RFP、 SM和EMB的耐药率分别为24.0%（25/104）、 18.7%（19/104）、16.3%（17/104）和2.9%（3/104）。结论　西安市结核分枝杆菌的耐药情况较为严重,在结核病防治工作中应给予充分重视。     

结核分枝杆菌耐乙胺丁醇分离株embB基因突变的研究

目的 了解结核分枝杆菌耐乙胺丁醇（EMB）分离株embB基因突变情况,研究其应用价值。方法 通过聚合酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP)、CPR－限制性片段长度多态性（RFLP）和PCR－直接测序技术分析102株结核分枝杆菌临床分离株embB基因。结果 以H37Rv标准株为对照,102株结核分枝杆菌临床分离株的162rDNA SSCP电泳图谱均与结核分枝杆菌标准株相同。41株药物敏感株的embB基因SSCP均泳动正常,RFLP和测序分析与对照株相同。61株耐EMB分离株可,23株（37．7％）embB基因SSCP泳动异常;8株RFLP分析异常;测序分析23株均为306位密码子突变,其EMB MICs均≥20μg/ml,其中8株为ATG→ATA或ATT突变,13株为ATG→GTG或CTG突变,后者EMB MICs均≥30μg/ml。结论 部分结核分枝杆菌耐EMB是由于其embB基因突变所致,PCR－SSCP技术可能成为测定部分结核分枝杆菌EMB耐药基因型,简便、快速的方法。     

结核杆菌耐药性调查与基因突变分析

目的了解结核分支杆菌耐药性与基因突变情况,分析耐药表型与基因突变的相关性。方法从临床标本中分离培养、鉴定结核分支杆菌;应用药敏试验、单链探针反向杂交试验技术(LiPA)和基因测序分析结核分支杆菌耐药性与基因突变情况。结果50株结核分支杆菌中,12株耐异烟肼(INH),7株耐利福平(RFP),15株耐链霉素(SM),2株耐乙胺丁醇(EMB)。LiPA检测耐RFP菌株,4株rpoB基因531位TCG→TTG突变;耐INH菌株中5株KatG基因315位AGC→ACC突变;耐SM菌株中6株、SM敏感株1株rpsl基因43位AAG→AGG突变,1株耐SM菌株rpsl基因88位AAG→AGG突变;rrs基因未检测到突变;1株耐EMB菌株与1株EMB敏感株的embB基因306位发生ATG→GTG突变。结论本市结核分支杆菌的耐药性增加的趋势显著,加强监测与综合干预非常必要。     

探针熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌利福平、异烟肼、乙胺丁醇及链霉素耐药突变

目的评价探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌利福平(RIF)、异烟肼(INH)、乙胺丁醇(EMB)及链霉素(SM)耐药突变的方法学应用价值。方法用PCR探针熔解曲线法检测110株结核分枝杆菌临床分离株RIF、INH、EMB及SM耐药突变情况,以传统的比例法药物敏感性试验检测结果为标准,评价探针熔解曲线法的敏感性、特异性和一致率,并应用测序方法分析结果不一致菌株的耐药突变位点。结果以比例法检测结果为标准,熔解曲线法检测RIF耐药的敏感性为98.51%,特异性为95.35%,诊断符合率为97.27%;检测INH耐药的敏感性为94.12%,特异性为95.24%,诊断符合率为94.55%;检测EMB耐药的敏感性为88.64%(39/44),特异性为75.76%(50/66),诊断符合率为80.91%(89/110);检测SM耐药的敏感性为82.98%,特异性为80.95%,诊断符合率为81.82%。两种检测方法结果不符菌株的测序结果大部分与熔解曲线法的检测结果一致。结论探针熔解曲线分析法检测速度快,敏感性高,特异性强,可用于结核分枝杆菌耐药突变的快速检测。     

浙江省衢州市结核分枝杆菌耐药监测调查

目的 了解浙江省衢州市结核分枝杆菌临床分离株耐药状况, 为结核病的防治提供参考依据。 方法 收集2010年全年衢州4县2区6家医院肺结核就诊病例痰标本,用改良罗氏培养基进行病原分离,鉴别培养基培养法进行菌型鉴定。对分离到的结核分枝杆菌采用比例法对4种一线抗结核药物,异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB),和二线抗结核药物氧氟沙星(OFX)、卡那霉素(KM)进行药物敏感性检测,用 SPSS 11.0统计软件进行统计分析。 结果 371 株结核分枝杆菌对4种一线抗结核药物,INH、RFP、SM和 EMB全部敏感的菌株为292株(78.71%),对二线抗结核药物OFX和KM全部敏感的菌株为337株(90.84%);耐药菌株89株(23.99%),其中,单耐药菌株51株(13.75%),耐多药菌株21株(5.66%),多耐药株14株(3.77%),广泛耐药株3株(0.81%)。结核分枝杆菌对4种一线药物INH、RFP、SM和 EMB的耐药率分别为15.36%(57/371)、7.01%(26/371)、11.86%(44/371)和3.23%(12/371);对2种二线药物OFX和KM的耐药率分别为7.82%(29/371) 和2.42%(9/371)。326例初治患者的耐药率为INH 10.12%(33/326)、RFP 2.45%(8/326)、SM 8.90%(29/326)、EMB 1.23%(4/326)、OFX 3.68%(12/326)、KM 1.53%(5/326),非耐药80.98%(264/326),耐多药1.84%(6/326);45例复治患者的耐药率为INH 53.33%(24/45)、RFP 40.00%(18/45)、SM 33.33%(15/45)、EMB 17.78%(8/45)、OFX 37.78%(17/45)、KM 8.89%(4/45),非耐药40.00%(18/45),耐多药33.33%(15/45)。 结论 衢州市结核分枝杆菌的耐药情况较为严重,每种药物复治患者的耐药率均明显高于初治患者,在制定结核病防控策略时应给予充分重视,同时进一步加强高质量的全程监督短程化疗。     

结核分枝杆菌临床分离株对吡嗪酰胺的药物敏感性分析

目的研究结核分枝杆菌临床分离株对吡嗪酰胺(Pyrazinamide,PZA)的药物敏感性,为结核病的临床用药和防治工作提供参考。方法应用Bactec MGIT 960系统,检测153株结核分枝杆菌对异烟肼(isoniazid,INH)、利福平(rifampicin,RFP)、乙胺丁醇(ethambutol,EMB)、链霉素(streptomycin,Sm)及PZA的耐药性。结果 153株结核分枝杆菌中,PZA耐药34株,耐药率22.2%,无PZA单耐药者。INH,RFP,EMB,Sm耐药和敏感患者的PZA耐药率分别为40.5%(34/84),0%(0/69);47.5%(29/61),5.4%(5/92);75%(6/8),19.3%(28/145);53.1%(26/49),7.7%(8/104)。54株耐多药菌株(multidrug-resistant tuberculosis,MDR-TB)中,有29株同时合并PZA耐药(53.7%),99株非耐多药菌株中,有5株PZA耐药(5.1%),差异有统计学意义(X~2=47.854,P0.05)。经logistic回归分析,Sm耐药、MDR-TB是PZA耐药的危险因素,OR值分别为0.270(95%CI:0.091~0.802),0.281(95%CI:0.087~0.911)。结论 MDR-TB中PZA耐药率较高,PZA的耐药性与MDR-TB及Sm的耐药性有关联,应重视对MDR患者进行PZA药敏试验。     

embB基因突变与乙胺丁醇药敏表型及耐多药关系的研究

目的 研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)embB306位点及其他突变位点与乙胺丁醇(ethambutol,EMB)的耐药表型及耐多药(multidrug resistant,MDR)的关系;分析embB基因突变与EMB药敏表型及MDR的关系. 方法 对临床分离的MTB采用BD MGIT 960 SIRE试剂比例法进行药敏试验,取48株EMB耐药、46株EMB敏感但耐其他药及7株四药均敏感MTB提取核酸并扩增embB基因全序列,对扩增产物进行测序分析embB基因序列,与H37Rv标准株序列比对,分析embB基因各突变位点、形式及频率. 结果 101株MTB发现embB基因序列上有17个不同位点突变形式.53株MTB在embB基因序列上发生突变,其中46株为EMB耐药,7株为EMB敏感;embB基因野生型的MTB有48株,其中2株为EMB耐药,46株为EMB敏感;embB突变型与embB野生型的MTB之间EMB耐药率有显著性差异(x2=68.95,P＜0.01).101株MTB中MDR有51株,其中有42株发生embB突变,9株为embB基因野生型,embB基因突变率在MDR和非MDR之间有显著性差异(x2=36.9,P＜0.01). 结论 embB306位点与EMB耐药及MDR中度相关,embB基因突变与EMB耐药及耐多药结核菌(multidrug resistant-Mycobacteriumtuberculosis,MDR-TB)高度相关,embB基因突变可作为MDR-TB的检测分子标记物,指导临床用药.     

结核分支杆菌rpoB基因突变与对利福平耐药的关系

目的:研究结核分支杆菌耐利福平(RFP)分离株rpoB基因突变情况并评价英应用价值.方法:采用多聚合酶链式反应-单链构象多态性分析法(PCR-SSCP法)对60株结核分支杆菌rpoB基因进行检测.结果:以结核分支杆菌标准株H37Rv为对照,60株PCR扩增阳性的结核分支杆菌中,共有32株发生突变,总突变率为53.3%(32/60);24株药物敏感株有4株rpoB基因有突变,突变率为16.7%;36株耐药株中,28株rpoB基因有突变,突变率为77.8%.耐药菌株突变率明显高于敏感菌株的突变率(P<0.05).结论:rpoB基因突变是耐RFP结核分支杆菌耐药性的主要分子机制;应用PCR-SSCP可快速检测结核分支杆菌对RFP的耐药性.     

2013-2018年浙江省丽水市结核病患者一线抗结核药物耐药分析

目的了解2013-2018年浙江省丽水市结核病患者对一线抗结核药物的耐药情况,为结核病疫情控制提供参考依据。方法收集2013-2018年浙江省丽水市结核病病例,分离菌株并进行菌型鉴定,测定结核分枝杆菌对异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇4种一线抗结核药物敏感性。结果共测定1883株结核分枝杆菌的耐药性,其中初治肺结核患者1770株,复治肺结核患者113株,总耐药率为17.15%,耐多药率为5.74%。初始耐药率是15.42%(273/1770),低于获得性耐药率的44.25%(50/113);初治肺结核患者耐药顺位链霉素>异烟肼>利福平>乙胺丁醇;复治患者耐药顺位为异烟肼>利福平>链霉素>乙胺丁醇。结论丽水市肺结核患者总的耐药率和耐多药率低于全省及全国耐药基线调查及丽水市上一轮的监测数据,但是耐多药形势仍较为严峻。     

新疆结核分枝杆菌临床分离株Spoligotyping基因型的初步研究

目的研究新疆结核分枝杆菌Spoligotyping基因分型,初步了解其基因型多态性状况及主要流行株。方法在新疆维吾尔自治区胸科医院收集一个连续时间段的结核分枝杆菌临床分离菌株,采用比例法检测进行耐药性检测、间隔寡核苷酸分型(Spoligotyp ing)方法进行分型研究。基因聚类分析采用B ioNum erics 5.0数据库软件,统计学分析采用χ2检验,P0.05为差异有统计学意义。结果共收集到结核分枝杆菌临床分离菌株175株,其中对利福平、异烟肼、链霉素和乙胺丁醇全敏感115株,耐药60株(包括单耐药31株和耐多药29株)。经Spoligotyp ing分型,这些菌株可分为4个基因群49种基因型,最大的1个基因群为北京家族,占68.57%(120/175)。北京家族中,敏感菌株63.87%(76/119),耐药菌株占36.13%(43/119);非北京家族中,敏感菌株68.52%(37/54),耐药菌株占31.48%(17/54),北京家族与非北京家族的耐药率之间差异无统计学意义(P=0.551)。结论新疆结核分枝杆菌临床菌株存在明显的基因多态性,主要流行菌株为北京基因型。北京基因型与耐药性无明显相关性。     

北海市结核分枝杆菌耐药监测药敏结果分析

目的了解北海市结核杆菌的耐药情况,为北海市结核病防治提供科学依据。方法对292例成功分离的结核杆菌菌株,用比例法进行药物敏感实验。结果结核分枝杆菌总耐药率20.89%,其中初始耐药17.67%,获得耐药33.33%。总耐多药(MDR)7.19%。4种药物总耐药率顺位由高到低依次为链霉素(SM)、异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)。结论北海市结核杆菌耐药情况低于全国平均水平。