β2糖蛋白Ⅰ及其抗体在抗磷脂综合征中的作用

β2糖蛋白Ⅰ（beta-2-glycoprotein Ⅰ,β2GPⅠ）是肝细胞产生的存在于血浆中的一种糖蛋白,由Schultzer于1961年最初发现.在血浆中β2GPⅠ参与组成乳糜微粒、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白和极低密度脂蛋白等,并参与脂肪的代谢和转运,故称为载脂蛋白H（apoliprotein H,apoH）,属于CCP（complement control protein）家族成员,亦是SCR（short consensus repeat superfamily）超家族的一员.近年研究发现,β2GPⅠ是抗磷脂抗体的主要抗原,与相应抗体（anti-β2GPⅠ）在抗磷脂综合征的病理机制中发挥重要作用.     

猪卵透明带抗独特型抗体对鼠免疫抗生育作用的研究

目的评价猪卵透明带抗独特型抗体的免疫对生育功能的作用。方法利用一株鼠抗猪卵透明带单克隆抗体（１７Ｄ３ｍＡｂ）,通过异种动物免疫及亲和层析纯化制备猪卵透明带抗独特型抗体（Ａｂ２）。结果用Ａｂ２免疫小鼠,妊娠率有下降趋势,平均胚胎数明显低于对照组（正常兔ＩｇＧ免疫的小鼠）（Ｐ＜００５）。卵巢组织形态学显示,Ａｂ２只影响晚期生长卵泡。结论虽然Ａｂ２组对卵巢的损伤程度较热溶解透明带组明显减轻,但抗生育效果不完全,可能与Ａｂ２中内影像结构仅占Ａｂ２分子的成份较低有关。因此,未来通过基因工程筛选Ａｂ２内影像表位并连续表达,可能是克服这一障碍的有效手段。     

鼠李糖乳杆菌对感染人轮状病毒乳鼠空肠黏膜上皮细胞的保护作用

目的观察鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus GG,LGG)对感染人轮状病毒(human rotavirus,HRV)乳鼠空肠黏膜上皮细胞的保护作用。方法将60只昆明种乳鼠均分为4组:灌服HRV作为感染组;灌服HRV前和后灌服LGG作为预处理组和治疗组;正常对照组灌服细胞培养液。从第4天开始,连续5d观察各组乳鼠的临床症状,每天2次检测乳鼠大便HRV抗原。在实验的第9天随机处死每组中的8只乳鼠,取出空肠段苏木精-伊红染色,利用Image-Pro Plus 5.1图像软件分析各组乳鼠空肠黏膜厚度、绒毛高度和隐窝深度。利用光学显微镜和透射电子显微镜观察乳鼠空肠黏膜上皮细胞的病理变化。结果至第9天,对照组乳鼠无腹泻、无死亡。HRV感染组、预处理组、治疗组乳鼠腹泻率和死亡率分别为100.00%、46.67%,13.33%、0%,26.66%、6.67%。对照组、HRV感染组、预处理组、治疗组乳鼠空肠黏膜隐窝深度分别为(35.2±2.4)、(45.9±3.6)、(35.8±5.6)和(38.9±2.9)μm,HRV感染组明显高于其它3组(均P<0.01)。病理检测发现HRV感染组乳鼠空肠黏膜上皮细胞出现广泛的空泡样变性,而预处理组和治疗组乳鼠空肠黏膜上皮细胞空泡样变性的情况均有减少。预处理组与治疗组相比,前者对乳鼠空肠黏膜上皮细胞的保护效果更好。结论 LGG对感染HRV的乳鼠空肠黏膜上皮细胞有一定的保护作用,感染前灌服LGG的保护效果好于感染后灌服。     

人轮状病毒感染昆明小鼠乳鼠模型的建立

目的 建立人轮状病毒G3型709株感染4 d龄昆明小鼠乳鼠模型.方法 通过灌胃病毒的方式造模,观察乳鼠被病毒攻击后不同时间其临床表现、小肠组织病理改变、小肠组织上皮细胞超微结构改变.酶联免疫吸附法检测轮状病毒抗原在乳鼠粪便中的表达,免疫荧光法检测轮状病毒在乳鼠小肠组织中的表达.结果 4 d龄昆明小鼠乳鼠被轮状病毒攻击24 h后出现腹泻表现和小肠组织病理改变,72 h最严重,之后腹泻率下降,病理改变减轻,第7天腹泻停止,病理改变消失.乳鼠小肠上皮细胞出现糖、脂肪代谢紊乱,其粪便和小肠组织中都可以检测出轮状病毒抗原表达.结论 4 d龄昆明小鼠乳鼠被人轮状病毒A组G3型709株经口攻击后病毒能够在其体内复制,出现腹泻表现.该病毒感染腹泻过程具有自愈特点.     

卵巢癌抗独特型单链抗体6B11基因在大肠杆菌中的高效表达

目的制备在大肠杆菌中高效表达６Ｂ１１卵巢癌抗独特型单链抗体。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）克隆技术,将６Ｂ１１ｓｃＦｖ基因克隆到原核高效表达载体ｐＫＰＬ３ａ上,重组子转化大肠杆菌ｐｏｐ２１３６,温度诱导表达;复性蛋白经二乙氨乙基琼脂糖快速离子交换层析纯化,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶鉴定蛋白纯度;直接法和竞争抑制法ＥＬＩＳＡ检测其活性。结果６Ｂ１１ｓｃＦｖ以包涵体形式表达获高效表达;包涵体经溶解复性纯化,纯度达９５％以上;表达蛋白能与卵巢癌单抗ＣＯＣ１６６－９特异结合并能有效抑制卵巢癌抗原ＯＣ１６６－９与卵巢癌单抗ＣＯＣ１６６－９的特异结合。结论６Ｂ１１ｓｃＦｖ基因可在原核细胞中高效表达,表达产物经复性纯化后具有较好的免疫活性。     

β2糖蛋白Ⅰ、抗β2糖蛋白Ⅰ抗体与抗磷脂综合征

β2糖蛋白Ⅰ（β2-glycoproteinⅠ,β2GPI）作为抗磷脂抗体（antiphosphohpidantibody,aPL）的主要靶抗原,在抗磷脂综合征（antiphospholipidsyndrome,APS）的血栓形成过程中发挥重要作用。     

Wa株轮状病毒感染昆明小鼠乳鼠腹泻模型的建立及影响因素考察

目的：建立人源性Wa株轮状病毒感染昆明小鼠乳鼠腹泻动物模型。方法：采用不同接种方式（口服、注射）、不同滴度、不同剂量的Wa株轮状病毒感染4 d龄昆明小鼠乳鼠,观察昆明小鼠乳鼠的体征反应、腹泻率和腹泻程度;选择腹泻率和腹泻程度较高的条件进行模型的稳定性考察,观察体征反应、腹泻率、腹泻程度、小肠形态学等指标改变。结果：采用强饲法,Wa株轮状病毒滴度为10-3.3/25μL TCID50,被轮状病毒攻击24 h后出现腹泻表现,低剂量（50μL/只）病毒组及中剂量（100μL/只）病毒组腹泻率及腹泻程度较低,高剂量（200μL/只）病毒组感染后第1天（1 dpi）腹泻率可达80%,腹泻程度达3.0,连续4 d保持腹泻状态,在各剂量组中腹泻率和腹泻程度最高;采用高剂量病毒组的实验方法,扩大造模动物的数量进行验证,1 dpi乳鼠腹泻率为80.0%,腹泻程度达3.1,并连续4 d保持腹泻状态。结论：4 d龄昆明小鼠乳鼠被Wa株轮状病毒经口攻击后,病毒能够使昆明小鼠乳鼠出现腹泻表现,且腹泻率和腹泻程度与病毒滴度、剂量相关。所建模型方法简便、重现性好,可作为比较理想的动物模型用于抗RV感染的药物治疗效果评价。     

日本血吸虫抗独特型抗体NP30重链6×CDR3/IL-2融合基因构建及表达

目的:构建日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30重链可变区6×CDR3基因/IL-2融合基因,以观察其对动物的抗血吸虫感染保护作用。方法:通过PCR方法体外扩增NP30 6×V_HCDR3和IL-2基因,经测序后先后重组入原核表达质粒pET-28a(+)相应的位点上,将构建正确的6×V_HCDR3/IL-2-pET-28a(+)表达质粒转化E.coli BL21,IPTG诱导表达。结果:构建的6×V_HCDR3/IL-2融合基因中,6×V_HCDR3和IL-2序列均正确,融合基因经IPTG诱导表达重组蛋白,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析分子质量约为30ku,表达量约占菌体总蛋白的20％。结论:成功构建并原核表达了NP30 6×V_HCDR3/IL-2融合基因。     

抗β2GPI抗体测定在系统性红斑狼疮患者中的临床意义

目的探讨抗β2糖蛋白I抗体(aβ2GPI)在系统性红斑狼疮(SLE)诊治中的临床意义及与疾病活动性的关系。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定68例SLE患者及23例健康对照者血清中aβ2GPI浓度,同时记录SLE患者各项实验室指标和其他自身抗体的水平。对照分析aβ2GPI阳性与阴性患者实验室检测指标结果的差异。结果SLE患者中,aβ2GPI抗体阳性率为25%(17/68),健康对照组中未检出aβ2GPI。患者的SLE疾病活动性指数(SLEDAI)与aβ2GPI抗体浓度无相关性。aβ2GPI阳性SLE患者血小板减少、凝血酶原时间(PT)延长的发生率高于aβ2GPI阴性组(<0.05)。aβ2GPI检测结果与aCL检测结果间存在正相关性。结论部分SLE病例中可检出抗β2GPI抗体。抗β2GPI抗体浓度与SLE疾病活动性无明显相关。抗β2GPI抗体与SLE患者发生血小板减少、凝血酶原时间延长等事件相关。     

不孕不育妇女血清中抗心磷脂抗体、抗β_2糖蛋白1抗体和抗精子抗体的检测价值

目的:探讨抗心磷脂抗体(ACA)、抗β2糖蛋白1抗体(抗β2-GP1抗体)以及抗精子抗体(AsAb)在女性不孕不育患者中的检测价值。方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)和间接免疫荧光法检测102例女性不孕不育患者血清中ACA、抗β2-GP1抗体和AsAb。结果:女性不孕不育患者AsAb阳性率为35.2%,其阳性率明显高于对照组(P<0.05);ACA总阳性率为31.4%,其中ACA-IgG、ACA-IgM和ACA-IgA抗体阳性率分别为24.5%、14.7%和5.8%;抗β2-GP1抗体的总阳性率为29.4%,其中抗β2-GP1-IgG、抗β2-GP1-IgM和抗β2-GP1-IgA抗体阳性率分别为21.5%、12.7%和3.9%。ACA和抗β2-GP1抗体的IgG、IgM阳性率与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:ACA、抗β2-GP1抗体和AsAb是引起免疫性不孕不育症的重要原因,其检测有助于免疫性不孕不育症的诊断。     

自身免疫病患者血清中抗β2 糖蛋白I抗体的检测

目的:探讨抗β2糖蛋白I抗体(aβ2GPI)检测在自身免疫病(AID)诊治中的意义. 方法:用ELISA法半定量检测抗核抗体(ANA)阳性患者、抗心磷脂抗体(ACA)阳性患者以及体检健康人血清中的aβ2GPI,计算各组的阳性率. 结果:ANA阳性组、ACA阳性组及正常对照组的阳性率分别是35.2%(31/88)、70.4%(19/27)、4.0%(2/50),两组与正常对照组比较有显著性差异(P<0.01). 结论:检测aβ2GPI有助于自身免疫病的诊断,aβ2GPI是血栓性疾病重要的检测指标.     

自身免疫病患者血清中抗β2糖蛋白Ⅰ抗体的检测

目的探讨抗β2糖蛋白I抗体(aβ2GPI)检测在自身免疫病(AID)诊治中的意义. 方法用ELISA法半定量检测抗核抗体(ANA)阳性患者、抗心磷脂抗体(ACA)阳性患者以及体检健康人血清中的aβ2GPI,计算各组的阳性率. 结果ANA阳性组、ACA阳性组及正常对照组的阳性率分别是35.2%(31/88)、70.4%(19/27)、4.0%(2/50),两组与正常对照组比较有显著性差异(P<0.01). 结论检测aβ2GPI有助于自身免疫病的诊断,aβ2GPI是血栓性疾病重要的检测指标.     

抗β_2糖蛋白I抗体在SLE血栓形成中的临床意义

系统性红斑狼疮(SLE)是一种自身免疫介导的弥漫性结缔组织病,是继发性的抗磷脂综合征(APS)的典型代表。抗β2糖蛋白I(β2-GPI)抗体是APS的一种主要抗体,是沟通免疫和凝血两大生理系统的桥梁之一。但β2-GPI抗体阳性的SLE患者中,只有部分发生血栓/栓塞。人群中抗β2-GPI抗体不仅可分为不同的亚型,更存在不同的亚群,可识别抗原不同的功能区,并与血栓事件之间存在不同的关联性。该文就β2-GPI抗体的研究进展予以综述。     

自身免疫病患者血清中抗β_2糖蛋白Ⅰ抗体的检测

目的:探讨抗β2糖蛋白Ⅰ抗体(aβ2GPI)检测在自身免疫病(AID)诊治中的意义。方法:用ELISA法半定量检测抗核抗体(ANA)阳性患者、抗心磷脂抗体(ACA)阳性患者以及体检健康人血清中的aβ2GPI,计算各组的阳性率。结果:ANA阳性组、ACA阳性组及正常对照组的阳性率分别是35.2%(31/88)、70.4%(19/27)、4.0%(2/50),两组与正常对照组比较有显著性差异(P<0.01)。结论:检测aβ2GPI有助于自身免疫病的诊断,aβ2GPI是血栓性疾病重要的检测指标。     

缺血性中风患者抗β2GP1抗体的检测及临床意义

目的 研究缺血性中风患者抗β2GP1抗体血清水平,探讨抗磷脂抗体与缺血性中风的相关性,揭示抗β2GP1抗体的检测在临床上应用的意义.方法 检测了51例缺血性中风及40例无血栓疾患的对照组血清中的抗心磷脂抗体、抗β2GP1抗体.结果 抗β2GP1在抗体在缺血性中风组及对照组之间有显著性差异.结论 抗β2GP1抗体可能为引起患者缺血性中风的病因之一.     

抗心磷脂抗体、抗β2糖蛋白Ⅰ抗体和狼疮抗凝物检测在高原地区脑卒中的应用价值

目的:探讨血清中抗心磷脂抗体(ACA)和抗β2糖蛋白Ⅰ抗体(抗β2GPⅠ抗体)及血浆狼疮抗凝物(LAC)联合检测在青海地区脑卒中的诊断价值.方法:分别检测128例脑卒中患者为观察组和100例健康体检者为对照组的血清中抗心磷脂抗体(ACA)和抗β2糖蛋白Ⅰ抗体(抗β2GPⅠ抗体)、血浆中狼疮抗凝物(LAC)、ACA、抗β...     

鼻咽癌人源抗独特型基因工程抗体的原核表达及鉴定

目的构建鼻咽癌人源抗独特型单链抗体原核表达载体，对其产物做初步鉴定，为鼻咽癌疫苗制备奠定基础。方法采用分子克隆技术，PCR扩增G22ScFv基因，并将其克隆到原核表达载体pET25b（＋）上，将重组子转化大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导表达后，表达的蛋白经His—tag纯化试剂盒纯化后复性。SDS—PAGE及Western blot分析融合蛋白。结果构建的原核表达载体pET25b（＋）－G22经测序检测，序列正确。在大肠杆菌中G22ScFv以包涵体形式获高效表达，SDS－PAGE及Western blot鉴定表达的目的蛋白Mr为25kD，同时证实载体构建及表达均正确。目的蛋白经试剂盒纯化后电泳分析纯度达95％以上。结论利用基因重组技术，在原核细胞中表达出重组G22ScFv并得到纯化，为研究鼻咽癌疫苗打下了基础。     

抗β2GPI抗体促进巨噬细胞摄取oxLDL加速动脉粥样硬化进展

目的：研究抗β2糖蛋白Ⅰ(β2GPⅠ)抗体在apoE基因敲除(apoE^-/-)小鼠巨噬细胞摄取功能及动脉粥样硬化之间的关系。方法：将雄性apoE^-/-小鼠随机分为抗β2GPI抗体组和模型组,每组8只,均给予高脂饲料喂养8周,其中,抗β2GPI抗体组小鼠腹腔注射抗β2GPI抗体,模型组小鼠腹腔注射同等剂量0.9%氯化钠溶液稀释的同源对照IgG抗体。8周后解剖小鼠,分离小鼠主动脉根组织,行Movat染色、免疫组织化学染色,观察主动脉根部动脉粥样硬化斑块的病理组织学特点;Western blotting检测主动脉斑块中内质网应激和巨噬细胞的标志蛋白表达;腹腔巨噬细胞体外培养,抗β2GPI抗体组和模型组分别加入氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)+抗β2GPI抗体、oxLDL刺激24 h,观察巨噬细胞摄取oxLDL情况。结果：Movat染色显示,抗β2GPI抗体组小鼠主动脉斑块增多,斑块面积较大,胶原纤维、平滑肌纤维含量均减少,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05～P<0.01)。免疫组织化学染色显示,抗β2GPI抗体组小鼠主动脉根部斑...     

抗心磷脂抗体和抗β2糖蛋白与早期妊娠丢失关系的探讨

目的:探索抗心磷脂抗体与早期妊娠丢失的相关性临床研究。方法:选择株洲市中心医院2012年1月~2013年7月妇产科门诊接诊的98例首次早期妊娠丢失患者(包括自然流产及稽留流产),在诊断妊娠丢失时抽取外周静脉血查抗心磷脂抗体IgGIgM及抗β2糖蛋白(抗β2GP1),并将同期孕12~13周正常健康孕妇109例做为对照,查外周静脉血抗心磷脂抗体IgG、IgM及抗β2GP1,两组结果进行分析。结果:观察组抗心磷脂抗体阳性率48.98%,其中IgG及IgM均阳性者30例,仅IgG阳性者11例,仅IgM阳性者7例;抗β2GP1阳性率19.39%。对照组抗心磷脂抗体阳性率9.17%,其中IgG及IgM均阳性者1例,仅IgG阳性者5例,仅IgM阳性者3例,抗β2GP1阳性率0.92%。两组比较差异有统计学意义。结论:抗心磷脂抗体阳性、抗β2糖蛋白与早期妊娠丢失有相关性,在有妊娠丢失史的患者中,建议常规检查抗心磷脂抗体及抗β2糖蛋白。     

抗β2-AR肾上腺素受体自身抗体功能的初步研究

目的研究抗β2-肾上腺素受体(β2-adrenoceptor,β2-AR)自身抗体对乳鼠心肌细胞跳动频率的影响。方法①手术结扎大鼠冠状动脉建立心梗模型;②在大鼠心力衰竭(心衰)的不同时期采用链霉亲和素-酶联免疫吸附法(SA-ELISA)检测大鼠血清中抗β2-AR自身抗体的滴度,同时检测大鼠的心功能;③将β2-AR激动剂硫酸特布他林、抗β2-AR自身抗体的阳性血清及抗β2-AR自身抗体 β2-AR组的血清加至培养的乳鼠心肌细胞中,观察该自身抗体对乳鼠心肌细胞跳动频率的影响。结果①将β2-AR激动剂硫酸特布他林(4.5μmol/L)加入培养的乳鼠心肌细胞中,加药前心肌细胞跳动频率(次/15 s)为20.0±6.20,加入后第5,15和30 min分别为16.92±4.89,13.17±3.21和11.85±2.84。②将大鼠抗β2-AR自身抗体的阳性血清加至培养的乳鼠心肌细胞中,加样前心肌细胞跳动频率(次/15 s)为26.43±3.63,加入后第5,15和30 min分别为9.42±3.03,10.00±1.76和9.25±2.56,心肌细胞跳动频率减慢,且在观察时间内不随时间递减,表现出类激动剂样生物效应。③大鼠抗β2-AR自身抗体 β2-AR组的血清加至培养的乳鼠心肌细胞中,加样前心肌细胞跳动频率(次/15 s)为21±3.4,加入后第5,15和30 min分别为18.9±2.72,17.6±2.48和16.1±2.9,心肌细胞的跳动频率无明显减慢。结论抗β2-AR自身抗体作用于培养的乳鼠心肌细胞,可使其跳动频率减慢,且在观察时间内不随时间递减,表现出类激动剂样生物学效应,加入相应抗原后基本可中和其效应。