肿瘤相关巨噬细胞对胃癌MGC-803 细胞恶性生物学行为的影响

[摘要] 目的：探讨肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophage，TAM）对胃癌MGC-803 细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法：体外培养人单核细胞株THP-1，加入佛波酯（PMA）和IL-4 后，用ELISA法检测细胞培养上清液中IL-12、IL-10 的水平。取对数生长期MGC-803 细胞和M2 型TAM，根据培养方式不同分为单独细胞培养组、非接触共培养组和接触共培养组，用MTT法、Transwell小室法分别检测MGC-803 细胞的增殖、迁移和侵袭能力，用AnnexinV-FITC/PI 双染流式细胞术检测MGC-803 细胞的凋亡和细胞周期变化，用qPCR、Western blotting 分别检测MGC-803 细胞中MMP-9、MMP-2 mRNA和蛋白的表达水平。结果：与PMA组相比，PMA+IL-4 组细胞上清液中IL-12 水平显著降低、IL-10 水平显著升高（均P<0.05），成功将THP-1细胞诱导分化为M2型TAM。与单独细胞培养组相比，非接触共培养组、接触共培养组（: 1）MGC-803细胞的增殖率显著升高（均P<0.05）；（2）细胞的迁移、侵袭数量升高（均P<0.05）；（3）细胞凋亡率显著降低（均P<0.05）；（4）S、G2 期细胞的数量升高、G1 期数量降低（均P<0.05）；（5）细胞中MMP-9、MMP-2 mRNA和蛋白的表达水平均显著升高（均P<0.05）。结论：TAM可促进胃癌MGC-803 细胞增殖、迁移和侵袭，解除细胞G1期阻滞，减少细胞凋亡，其机制可能与上调胃癌细胞MMP-9、MMP-2表达有关。     

bcl-2反义核酸提高γ线对恶性淋巴瘤细胞凋亡的作用

目的研究bcl-2反义核酸能否增加^60Coγ线对恶性淋巴瘤细胞凋亡的作用。方法采用细胞染色方法观察细胞凋亡的形态，原位末端标记法检测凋亡细胞，流式细胞仪检测细胞的DNA含量和bcl-2蛋白的表达。结果1～8Gyγ线和10～40μmol/L bcl-2基因反义核酸均能抑制B淋巴瘤细胞株Raji细胞生长，诱导细胞凋亡。流式细胞仪检测亚G1期细胞增多，bcl-2蛋白表达降低，呈现时间剂量依赖效应，联合应用比单独应用抑制作用显著。结论bcl-2反义核酸能够增加^60Coγ线对恶性淋巴瘤细胞凋亡的作用。     

miRNA-126-3p调控人单核细胞白血病THP-1细胞的增殖和周期变化

目的探讨miRNA-126-3p(miR-126-3p)对人单核细胞白血病THP-1细胞增殖和周期的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-126-3p在THP-1细胞和从2022年5月至2023年1月山西省肿瘤医院收集的4名健康体检者外周血分离的单核细胞中的表达情况。构建过表达miR-126-3p载体, 转染THP-1细胞(过表达miR-126-3p组), 以转染空载体的THP-1细胞为对照。采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力, 采用流式细胞术检测细胞周期。应用TargetScan软件预测miR-126-3p靶基因为RGS3, 通过双荧光素酶报告基因实验进行验证。采用蛋白质印迹法检测过表达miR-126-3p组THP-1细胞RGS3蛋白表达水平。结果 PCR检测结果显示, 与健康人外周血分离的单核细胞相比, THP-1细胞miR-126-3p表达水平低(P<0.05)。与对照组比较, 过表达miR-126-3p组THP-1细胞在培养48 h和72 h后增殖能力均低(均P<0.05), 且细胞G1期阻滞[G1期细胞比例:(58.2±2.8)%比(44....     

凋亡相关基因bcl-x、bax在霍奇金病中的表达及其意义

目的探讨凋亡相关基因bcl－x、bax在霍奇金病R-S细胞凋亡调控中的作用及其意义。方法采用免疫组化法检测bcl-x、bax基因在霍奇金病组织中的表达;应用免疫荧光汉标记,激光共聚焦显微镜下检测bcl－2与上述基因是否在同一R-S细胞内共表达。结果85．4％、70．8％的霍奇金病例R－S细胞及霍奇金细胞bcl－x、bax阳性;bcl-2与bcl-x、bcl-2与bax可以共存于同一R－S细胞胞质。结论bcl-x、bcl-2、bax基因可能共同参与部分霍奇金病R－S细胞及霍奇金细胞的凋亡调控。     

miRNA-618对急性单核细胞白血病THP-1细胞增殖和凋亡调控的研究

目的探讨miRNA-618(miR-618)对急性单核细胞白血病THP-1细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-618在THP-1细胞和健康人外周血分离的单核细胞中的相对表达量。构建过表达miR-618质粒载体,以空载体作为阴性对照,将二者分别转染THP-1细胞,设定为miR-618过表达组和阴性对照组。采用CCK-8法和流式细胞术分别检测各组THP-1细胞增殖和凋亡情况。采用TargetScan软件预测miR-618靶基因,通过荧光素酶报告基因实验对其进行验证。采用蛋白质印迹法检测miR-618过表达组或阴性对照组的THP-1细胞和健康人外周血单核细胞中预测的miR-618靶基因蛋白表达的水平。结果PCR结果显示,与健康人外周血分离的单核细胞相比,THP-1细胞中miR-618表达量低(P<0.05)。CCK-8法检测结果显示,与阴性对照组比较,miR-618过表达组THP-1细胞增殖能力降低(转染0、24、48、72 h细胞吸光度值:0.20±0.03比0.20±0.03、0.28±0.02比0.35±0.03、0.34±0.03比0.43±0.04、0.39±0.02比0.53±0.05,均P<0.05),细胞晚期凋亡率升高[(27.1±0.1)%比(14.9±0.1)%,t=2.13,P=0.03]。TargetScan软件预测miR-618靶基因为ARPP19。荧光素酶报告基因实验结果显示,转染野生型ARPP19基因质粒+miR-618基因质粒组的THP-1细胞相对荧光素酶活性均高于空白对照组和转染野生型ARPP19基因质粒+miR-618空载质粒组(0.170±0.003比0.100±0.004、0.100±0.001,均P<0.05)。蛋白质印迹法检测结果显示,miR-618过表达组THP-1细胞ARPP19蛋白表达水平低于阴性对照组,而两组健康人外周血单核细胞中ARPP19蛋白表达水平相近。结论miR-618可能通过抑制急性单核细胞白血病THP-1细胞ARPP19的表达而抑制细胞增殖、促进细胞凋亡。     

miR-let-7c-5p靶向c-myc在白血病细胞定向单核/巨噬细胞分化中的作用机制研究

目的 探讨miR-let-7c-5p/c-myc信号轴在白血病细胞定向单核/巨噬细胞分化中的调控作用。方法 采用PMA+LPS+IFN-γ诱导THP-1白血病细胞向单核/巨噬细胞定向分化,PBS作为对照组。诱导48 h后CCK8法测定细胞增殖水平;流式细胞仪测定细胞CD11b与CD14分化抗原表达水平;RT-qPCR检测白血病细胞分化前后miR-let-7c-5p和c-myc的表达变化;蛋白质印迹法检测c-myc蛋白表达变化;双荧光素酶结合实验检测miR-let-7c-5p与c-myc的3′UTR靶向结合和活性调控关系;转染miR-let-7c-5p mimic观察c-myc表达变化后细胞的增殖分化水平变化;过表达c-myc拯救实验观察miR-let-7c-5p对PMA+LPS+IFN-γ诱导的THP-1细胞增殖分化的影响。THP-1细胞转染miR-let-7c-5p inhibitor,观察c-myc表达变化对THP-1定向分化为M1样巨噬细胞的影响。结果 与PBS对照组相比,PMA+LPS+IFN-γ诱导48 h后,THP-1细胞的增殖能力明显降低(0.64±0.01 vs 0.3...     

丹参酮ⅡA抑制髓系白血病细胞株增殖及诱导凋亡的研究

目的 探讨丹参酮ⅡA（TanⅡA）对髓系白血病细胞株NB4、K562、THP-1增殖抑制作用及促凋亡作用.方法 将不同浓度TanⅡA与NB4、K562、THP-1细胞共培养24、48、72 h,以柔红霉素为阳性对照,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测TanⅡA对白血病细胞株的增殖抑制作用,AnnexinV-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,紫外分光光度法检测Caspase-3蛋白表达.结果 TanⅡA作用24、48、72 h对NB4细胞的IC50值分别为24.11、9.60、7.28 μmol/L,对K562细胞IC50值分别为31.75、11.88、6.81 μmol/L,对THP-1细胞IC50值分别为111.10、32.82、11.82 μmol/L.流式细胞术检测结果显示：与空白对照组相比,TanⅡA与各白血病细胞株作用48 h后,细胞凋亡明显增加,G1期细胞数增加,Caspase-3蛋白表达显著升高（P＜0.05）.结论 TanⅡA对白血病细胞具有增殖抑制与促凋亡作用,其作用强度从高到低依次为NB4、K562、THP-1细胞.其抗癌作用机制可能与阻滞细胞于G1期,上调Caspase-3表达有关.     

肿瘤相关巨噬细胞来源外泌体通过miR-21促进前列腺癌细胞紫杉醇耐药的机制研究

目的:探究外泌体(Exos)对miR-21的调控作用及对前列腺癌(PC)细胞紫杉醇耐药的影响。方法:取前列腺癌组织及癌旁组织,免疫组化法检测CD68、M1型巨噬细胞表面标记(CD86)、M2型巨噬细胞表面标记(CD206)阳性表达,以鉴定巨噬细胞浸润及表型变化;取人巨噬细胞株THP-1诱导建立M2型巨噬细胞极化模型,差速离心法提取Exos,与前列腺癌细胞PC-3共培养,设置为：PC-3组、PC-3+Exos组、PC-3+多西紫杉醇(DTX)组、PC-3+Exos+DTX组;CCK-8法检测细胞增殖活性;Transwell检测细胞迁移能力;qRT-PCR法检测Exos及细胞中miR-21表达;Western blot法检测细胞耐药蛋白(P-gp、Txr1)水平。敲低Exos中miR-21表达或阻断巨噬细胞Exos分泌后,与PC-3共培养,并植入裸鼠皮下,给予DTX干预治疗,测量瘤体体积及瘤体重量,以验证Exos对miR-21调控及PC-3耐药性的影响。结果:PC癌组织中主要以M2型巨噬细胞为主。M2型Exos直径约为100 nm,呈杯状粒子形状,可被PC-3细胞摄取,其高表达miR-21...     

白花蛇舌草通过PI3K/Akt信号通路抑制人非霍奇金淋巴瘤Raji细胞增殖

目的:探讨白花蛇舌草对人非霍奇金淋巴瘤Raji细胞增殖及PI3K/Akt信号通路的影响。方法:将人非霍奇金淋巴瘤细胞Raji分为对照组、白花蛇舌草组、LY294002组、白花蛇舌草+LY294002组,采用CCK-8法检测各组Raji细胞培养12 h、24 h、48 h、72 h时细胞增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞周期分布情况,Western blot检测培养48 h时各组细胞CyclinD1、CyclinD3、CDK4、PAK2、p-PI3K、p-Akt蛋白水平。结果:白花蛇舌草组、LY294002组、白花蛇舌草+LY294002组Raji细胞增殖抑制率随着处理时间延长而增加,在相同时间点时,白花蛇舌草+LY294002组Raji细胞增殖抑制率均高于白花蛇舌草组、LY294002组（P＜0.05）;细胞周期检测结果显示:与对照组相比,白花蛇舌草组、LY294002组、白花蛇舌草+LY294002组G0/G1期细胞比例增多、S期细胞比例降低（P＜0.05）,而白花蛇舌草组、LY294002组G0/G1期、S期细胞比较差异无统计学意义（P＞0.05）,白花蛇舌草+LY294002组G0/G1期、S期细胞均低于白花蛇舌草组、LY294002组（P＜0.05）;Western blot检测结果显示:白花蛇舌草组、LY294002组、白花蛇舌草+LY294002组CyclinD1、CyclinD3、CDK4、PAK2、p-PI3K、p-Akt蛋白水平均低于对照组（P＜0.05）,白花蛇舌草+LY294002组CyclinD1、CyclinD3、CDK4、PAK2、p-PI3K、p-Akt蛋白水平均低于白花蛇舌草组、LY294002组（P＜0.05）,白花蛇舌草组、LY294002组各种蛋白水平比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:白花蛇舌草对Raji细胞增殖有抑制作用,可能与抑制PI3K/Akt信号通路活化有关。     

番茄红素对人骨肉瘤细胞生长的影响及机制研究

目的 研究番茄红素(Lycopene,LP)对人骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡的影响并初步探讨其机制。方法 取处于对数生长期的人骨肉瘤MG-63细胞,设空白对照组,LP低、中、高剂量组(5、10、20μg/mL)和顺铂(40μg/mL)组;给药干预48h,观察细胞生长状况,MTT比色法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测细胞周期、细胞凋亡状况并计算凋亡率,逆转录PCR(RT-PCR)法检测凋亡相关基因Bax mRNA、bcl-2 mRNA表达并计算Bax/bcl-2值,免疫蛋白印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白caspase-3表达。结果 光学显微镜下观察可见,空白对照组人骨肉瘤MG-63细胞呈贴壁生长,增殖迅速,而LP组细胞增殖受到抑制,细胞数明显减少,呈现回缩、脱落现象。与空白对照组比较发现经LP干预48h能够显著提高人骨肉瘤MG-63细胞增殖抑制率,显著延长细胞周期G₀/G₁期并缩短S期、G₂/M期,显著提高细胞凋亡率(Apoptosis index,AI),上调Bax mRNA表达并下调bcl-2 mRNA表达,显著提高Bax/bcl-2比值,显著上调caspase-3蛋白表达,差异均具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。结论 LP具有抑制人骨肉瘤细胞增殖并促进其凋亡的药理学作用,机制可能与阻滞细胞周期和影响凋亡调控基因、蛋白表达有关。     

除莠霉素A对Karpas299和L428细胞增殖与凋亡的比较研究

目的:探讨酪氨酸激酶抑制剂除莠霉素A(HA)对CD30+间变性大细胞淋巴瘤细胞株Karpas299和霍奇金淋巴瘤细胞株L428细胞增殖和凋亡的影响.方法:采用免疫细胞化学检测Karpas299和L428细胞ALK的表达,MTT法检测HA对两株细胞增殖活力的影响,流式细胞仪检测HA处理后两株细胞的细胞周期、凋亡率的变化,HE染色观察细胞凋亡改变.结果:Karpas299细胞表达ALK,L428细胞则不表达;HA对两株细胞的增殖活力均有抑制作用,呈剂量和时间依赖性,P＜0.05;HA对Karpas299细胞的作用比L428更为显著,P＜0.05;用HA处理24 h,G1期细胞和凋亡率均高于时照组,P＜0.05;Karpas299细胞高于L428细胞,P＜0.05;两株细胞均出现凋亡形态改变.结论:HA明显抑制两株细胞增殖,阻滞细胞周期于G1期,以Karpas299细胞作用更为明显,其机制可能与该细胞表达酪氨酸激酶受体ALK蛋白有关.     

牙周膜干细胞对口腔表皮样癌KB细胞增殖影响的研究

目的探讨牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)对口腔表皮样癌细胞系KB细胞增殖的影响及其机制。方法取拔除的阻生第三磨牙和正畸减数牙,采用酶消化法分离PDLSCs。应用Transwell培养小室将PDLSCs和KB细胞以不同的比例混合培养,建立共培养体系。48h后,应用MTT法观察KB细胞增殖情况。在部分实验的培养体系中加入抗IL-6抗体,同法观察KB细胞增殖。收集共培养48h的KB细胞,通过流式细胞术检测其凋亡情况,RT-PCR法检测其Caspase-3的表达,蛋白质印迹法检测其β-catenin表达情况。收集PDLSCs,采用RT-PCR法检测其IL-6的表达。结果 PDLSCs与KB细胞共培养48h,PDLSCs∶KB细胞数量比为1∶1时,吸光度值为1.33±0.18,与单独KB细胞组的2.65±0.33相比,差异有统计学意义,P=0.041;PDLSCs∶KB细胞数量比为5∶1时,吸光度值为1.06±0.18,与单独KB细胞组相比,差异有统计学意义,P=0.001。表明PDLSCs能够显著抑制KB细胞的增殖。PDLSCs∶KB细胞数量比为1∶1时,KB细胞的凋亡率为(39±5)%,与单独KB细胞组的(15±4)%相比,P=0.022;PDLSCs∶KB细胞数量比为5∶1时,KB细胞的凋亡率为(51±7)%,与单独KB细胞组相比,P=0.001。在PDLSCs与KB细胞的共培养体系中,加入抗IL-6抗体后,PDLSCs抑制KB细胞的增殖作用显著减轻。RT-PCR实验发现,共培养48h后的PDLSCs的IL-6表达升高。蛋白质印迹法检测结果发现,培养48h后的KB细胞β-catenin表达无明显变化。结论 PDLSCs能抑制口腔表皮样癌KB细胞的增殖和促进KB细胞凋亡。     

脂氧合酶抑制剂NDGA对胰腺癌细胞PCNA-1增殖和凋亡的影响

目的:探讨脂氧合酶抑制剂NDGA对人胰腺癌细胞株PCNA-1生长抑制、诱导凋亡及其对bcl-2、bax表达的影响.方法:采用MTT法检测NDGA对胰腺癌细胞株PCNA-1增殖活性的影响,流式细胞术检测NDGA处理的胰腺癌细胞株PCNA-1的细胞周期及凋亡相关蛋白bcl-2、bax的表达.结果:NDGA抑制胰腺癌细胞株PCNA-1的增殖活性,呈剂量依赖效应关系;细胞经100μmol/L的NDGA处理后G0/G1期细胞减少(P＜0.05)、S期细胞增多(P＜0.05),G2/M期细胞无明显变化;细胞经100μmol/L的NDGA处理48h后bcl-2蛋白与对照组相比表达下调(P＜0.01)、bax蛋白与对照组相比表达上调(P＜0.01).结论:NDGA对胰腺癌细胞株PCNA-1有抑制增殖、诱导其凋亡作用,诱导细胞凋亡的机制可能与细胞凋亡相关基因bcl-2表达下调、bax表达上调有关.     

雷帕霉素对人非霍奇金淋巴瘤Raji细胞生物学行为的影响及其机制研究

目的 探讨不同浓度雷帕霉素作用不同时间对人非霍奇金淋巴瘤Raji细胞生物学行为的影响及其相关机制.方法采用0、10、50、100、250、500 nmol/L雷帕霉素分别作用Raji细胞24、48、72 h,采用CCK-8法测定Raji细胞增殖抑制率;采用流式细胞术测定Raji细胞凋亡及细胞周期;采用Caspase-3、Caspase-9活性检测试剂盒检测Raji细胞中Caspase-3、Caspase-9的酶活性;采用蛋白印迹法及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Raji细胞中bcl-2、p53蛋白及其mRNA表达情况.结果作用24 h后,随着雷帕霉素浓度由0 nmol/L逐渐增加至500 nmol/L,Raji细胞增殖抑制率由(23.7±4.2)％升高至(51.7±3.7)％(P<0.01);细胞凋亡率由(4.9±1.9)％升高至(20.5±1.5)％(P<0.01);G0/G1期细胞比例由(40.8±1.4)％增加至(63.6±1.7)％(P<0.01);Caspase-3酶活性由0.16±0.05增加至1.08±0.04(P<0.01);Caspase-9酶活性由0.19±0.04增加至1.34±0.06(P<0.01);bcl-2 mRNA表达量由0.90±0.03减少至0.46±0.03,p53 mRNA表达量由2.51±0.41增加至5.85±0.21,并且bcl-2蛋白表达降低,p53蛋白表达增高.Raji细胞48 h和72 h实验结果与24 h实验结果趋势一致.结论雷帕霉素可能通过Caspase-3、Caspase-9、bcl-2、p53途径抑制Raji细胞增殖,并诱导Raji细胞凋亡.     

脂质体转染bcl-2反义寡核苷酸诱导Raji细胞凋亡的研究

目的:通过脂质体分别转染bcl-2两个靶点的反义寡核苷酸(ASODN1、ASODN2)及G3139,观察bcl-2反义寡核苷酸对淋巴瘤细胞株Raji凋亡的影响.方法:采用MTT法检测药物的半数抑制率(IC50);免疫荧光标记观察细胞bcl-2蛋白水平;用姬姆萨染色和流式细胞仪观察细胞凋亡.结果:MTT测定显示:ASODN1、ASODN2组IC50值分别与G3139组进行比较无显著差异,P＞0.05.5μmol/L ASODN1、ASODN2作用于Raji细胞72h后,姬姆萨染色均可见凋亡细胞.5μmol/L ASODN1、ASODN2和C3139作用于Raji细胞后,bcl-2蛋白阳性率均明显下降,细胞凋亡率均明显增加,P<0.05,但ASODN1、ASODN2组分别与G3139组进行比较无显著差异,P＞0.05.5μmol/L无义寡核苷酸对Raji细胞的生长活性、bcl-2蛋白水平及细胞凋亡率均无明显影响,P>0.05.结论:针对bcl-2两个靶点的反义寡核苷酸能特异性促进Raji细胞的凋亡,并且与G3139具有近似的反义效应.     

Bcl-2 shRNA对甲氨蝶呤诱导的Raji细胞凋亡及细胞增殖作用的影响

目的:探讨Bcl-2短发夹样RNA (short hairpin,shRNA)对甲氨蝶呤(methotrexate , MTX)诱导的人Burkit淋巴瘤Raji细胞凋亡的增强作用.方法:采用脂质体介导的转染方法将构建有Bcl-2 shRNA的质粒转染Raji细胞,然后加入MTX,采用RT-PCR法检测作用48 h时细胞 Bcl-2 mRNA表达水平,免疫荧光法检测细胞中Bcl-2蛋白表达水平,MTT法检测经处理24、48和72 h后细胞的增殖活性,Giemsa染色及FCM法检测细胞凋亡.结果:将Bcl-2 shRNA质粒转入Raji细胞后,Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05),转染Bcl-2 shRNA联用MTX可明显诱导细胞凋亡,细胞增殖活性显著降低,分别与MTX组、阴性shRNA联用MTX组、Bcl-2 shRNA组及空质粒+MTX组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:Bcl-2 shRNA可增强MTX对Raji细胞增殖的抑制作用,增加对细胞凋亡的诱导作用.     

葛根总黄酮诱导白血病细胞株凋亡及其分子机制的研究

 目的　探讨葛根总黄酮（PR）对慢性粒细胞白血病（CML）细胞株K562和急性早幼粒细胞白血病（APL）细胞株NB4细胞增殖及凋亡的影响。方法　采用MTT法检测PR对K562细胞、NB4细胞的增殖抑制率;光学显微镜及荧光显微镜观察细胞形态改变;Hoechest33258荧光染色AnnexinV／PI双染法检测细胞凋亡率;DNA PI染色法分析细胞周期及亚二倍体峰。Western blot分别检测NB4细胞JNK、PARP、bcl-2、Caspase3,K562细胞bcr-abl、p53、bcl-2、Fas／FasL蛋白表达的变化。结果　12.5～200 μg／ml PR均能抑制K562、NB4细胞增殖。光学显微镜及荧光显微镜下观察到核固缩、凋亡小体等典型的细胞凋亡改变;Annexin V+／PI-细胞呈时间-剂量依赖性增加;DNA PI染色法发现细胞亚二倍体比例增加,G1期比例下降、S期比例增加。PR呈时间-剂量依赖性抑制K562细胞、NB4细胞增殖,诱导细胞凋亡。不同浓度PR干预后K562细胞bcr-abl蛋白水平呈浓度依赖性下调（F＝18.74,P＜0.05）,而bcl-2则无明显变化;p53 表达呈浓度依赖性上调;Fas／FasL 表达无明显变化。NB4细胞JNK、PARP及Caspase 3蛋白表达与PR浓度呈正相关,与凋亡抑制蛋白bcl-2则呈负相关（F＝42.32,P＜0.05）。结论　PR能有效抑制K562、NB4细胞增殖,阻滞细胞周期进程,诱导细胞凋亡,但分子机制不同。提示一定浓度PR具有较广谱的抗白血病效应。     

脂氧合酶抑制剂NDGA对胰腺癌细胞PCNA-1增殖和凋亡的影响

目的：探讨脂氧合酶抑制剂NDGA对人胰腺癌细胞株PCNA-1生长抑制、诱导凋亡及其对bcl-2、bax表达的影响。方法：采用MTT法检测NDGA对胰腺癌细胞株PCNA-1增殖活性的影响,流式细胞术检测NDGA处理的胰腺癌细胞株PCNA-1的细胞周期及凋亡相关蛋白bcl-2、bax的表达。结果：NDGA抑制胰腺癌细胞株PCNA-1的增殖活性,呈剂量依赖效应关系;细胞经100μmol／L的NDGA处理后G0／G1期细胞减少（P〈0．05）、S期细胞增多（P〈0．05）,G2／M期细胞无明显变化;细胞经100μmol／L的NDGA处理48h后bcl-2蛋白与对照组相比表达下调（P〈0．01）、bax蛋白与对照组相比表达上调（P〈0．01）。结论：NDGA对胰腺癌细胞株PCNA-1有抑制增殖、诱导其凋亡作用,诱导细胞凋亡的机制可能与细胞凋亡相关基因bcl-2表达下调、bax表达上调有关。     

辛伐他汀通过调控Chk1基因的表达对宫颈癌细胞增殖、凋亡以及放疗敏感性的影响

目的:探讨辛伐他汀（simvastatin,SVA）通过调控细胞周期检测点激酶1（checkpoint kinase 1,Chk1）基因表达对宫颈癌细胞增殖、凋亡及放疗敏感性的影响。方法:体外培养宫颈癌Hela细胞,采用不同浓度（3.25 μmol/L、6.25 μmol/L、12.5 μmol/L、25 μmol/L、50 μmol/L)SVA处理细胞,以0 μmol/L SVA为空白组（Con组）。采用MTT法检测SVA对细胞的增殖抑制率,筛选SVA最适浓度（SVA组）用于后续研究。流式细胞术检测各组细胞凋亡率。采用2、4、6、8 Gy剂量X射线照射细胞。将Chk1阴性对照质粒、Chk1 siRNA分别转染至Hela细胞,分别命名为si-NC、si-Chk1组;重组pcDNA 3.1/Chk1基因过表达质粒及空载体对照质粒分转染至SVA组细胞中,分别命名为SVA+pcDNA-Chk1组、SVA+pcDNA组。采用qRT-PCR与Western blot法检测各组细胞中Chk1 mRNA及蛋白表达水平;MTT法检测各组细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;克隆形成实验检测细胞放疗敏感性。结果:随着SVA浓度的增加Hela细胞增殖抑制率明显升高且呈剂量依赖性,SVA浓度为12.5 μmol/L时Hela细胞增殖抑制率约为50%,以此用作后续实验研究。SVA组Hela细胞凋亡率显著高于Con组,且不同剂量X射线照射后Hela细胞存活分数明显降低（P＜0.05）;SVA处理Hela细胞后可显著降低Chk1 mRNA及蛋白表达水平（P＜0.05）;si-Chk1组Hela细胞中Chk1蛋白表达水平及细胞存活分数均显著低于si-NC组（P＜0.05）,细胞增殖抑制率及凋亡率均显著升高（P＜0.05）;SVA+pcDNA-Chk1组Hela细胞增殖抑制率及细胞凋亡率均显著低于SVA+pcDNA组（P＜0.05）,细胞存活分数显著升高（P＜0.05）。结论:SVA可通过下调Chk1基因表达进而抑制宫颈癌细胞增殖并促使细胞凋亡,同时能够增强宫颈癌细胞放疗敏感性。     

bcl-2基因的反义寡核苷酸与三氧化二砷联合对恶性淋巴瘤细胞系凋亡的影响

目的：研究bcl-2基因的反义寡核苷酸与三氧化二砷（As2O3）联合对恶性淋巴瘤细胞系凋亡的影响。方法：采用细胞染色方法观察细胞凋亡的形态，原位末端标记法（TUNEL）检测凋亡细胞，流式细胞仪检测细胞的DNA含量和bcl-2蛋白的表达。结果：10－40μmol/l bcl-2基因的反义寡核苷酸和0．5－2．0μmol/L三氧化二砷均能抑制恶性B淋巴瘤细胞系Raji细胞生长，诱导细胞凋亡，流式细胞仪检测Raji细胞，发现亚G1期细胞明显增多，bcl-2蛋白的表达明显降低，呈现时间剂量依赖效应，两者联合应用比单独应用抑制作用显著。结论：bcl-2基因的反义寡核苷酸与三氧化二砷联合应用，明显抑制恶性B淋巴瘤细胞系生长，促进细胞凋亡。