TLR7在呼吸道合胞病毒感染A549细胞诱导I型干扰素中的作用

目的：探讨 Toll 样受体7（TLR7）在呼吸道合胞病毒（RSV）感染 A549细胞诱导产生 I 型干扰素（IFN）抗病毒免疫反应中的作用。方法实验分正常对照组、RSV 感染组、TLR7 siRNA 沉默组,分别于感染的4、8、12、24 h 后收集各组细胞以及培养上清液。TLR7 siRNA 通过瞬时转染 A549细胞,半定量 RT-PCR 法检测 TLR7基因沉默效果;TRIzol 试剂提取细胞总 RNA,检测 TLR7、干扰素调节因子7（IRF7）、IFN-α、IFN-β的 mRNA 表达量变化;通过 Western blot 法检测 TLR7蛋白表达量;ELISA 法检测感染不同时间点 A549细胞培养上清液中 IFNα／β含量的变化。结果①转染24 h 后 TLR7 siRNA-2有效抑制 TLR7 mRNA 表达;② RSV 感染A549细胞后,TLR7、IRF7、IFN-α／β的 mRNA 以及 TLR7蛋白的表达量均升高,并与 RSV 感染之间存在时间依赖性关系;沉默 TLR7后,TLR7、IRF7、IFN-α／β的 mRNA 以及 TLR7蛋白的表达量较感染组均有明显下降;③ RSV 感染 A549细胞后,明显上调细胞培养上清液中 IFN-α／β的水平,TLR7 siRNA 沉默组 IFN-α／β的表达水平较 RSV 感染组均下降,差异有统计学意义,且 IFN-α的表达量下调更为显著。结论RSV 感染A549细胞后,TLR7被活化能够诱导产生I 型IFN,发挥抗病毒作用,且TLR7诱导产生的I 型IFN 以IFN-α为主。     

奥洛他定联合卡介菌多糖核酸对慢性荨麻疹患者的免疫应答机制探讨

目的 研究奥洛他定联合卡介菌多糖核酸治疗前后慢性荨麻疹患者Toll 样受体2（TLR2）表达 量的变化及其与免疫球蛋白E（IgE）、补体C3、补体C4、细胞因子含量的相关性。方法 选取2016 年1 月- 2016 年11 月在佛山市中医院接受奥洛他定联合卡介菌多糖核酸治疗的慢性荨麻疹患者作为研究对象。治 疗前和治疗后2、4 及6 周时,采集外周血并测定TLR2、TLR4、TLR7、TLR9 的表达量,采集血清并测 定IgE、C3、C4、Th1、Th2 细胞因子的含量。结果 治疗后2、4 及6 周时,外周血单个核细胞中TLR2 的 mRNA 含量均低于治疗前,TLR4、TLR7 及TLR9 的mRNA 含量与治疗前比较,差异无统计学意义（P >0.05）; 血清中IgE、白细胞介素4（IL-4）、白细胞介素10（IL-10）的含量均低于治疗前,C3、C4、IFN-γ、白细 胞介素2（IL-2）的含量高于治疗前;外周血中TLR2 的表达量与血清中IgE、IL-4、IL-10 的含量呈正相关, 与C3、C4、IFN-γ、IL-2 的含量呈负相关。结论 奥洛他定联合卡介菌多糖核酸治疗可能通过TLR2 通路 调节慢性荨麻疹患者体内的免疫应答。     

TLR2和TLR4在大鼠光滑念珠菌肺部感染中的表达及意义

目的：研究Toll样受体2（TLR2）和TLR4在光滑念珠菌肺部感染大鼠中的作用。方法将36只大鼠分为3组,每组12只：对照组（A组）、未免疫抑制肺部光滑念珠菌感染组（B组）及免疫抑制肺部光滑念珠菌感染组（C组）。每组分别在造模成功后第1、3天各处死大鼠6只,观察肺组织病理变化,用逆转录PCR（RT-PCR）法检测肺组织 TLR2、TLR4 mRNA的表达、酶联免疫吸附实验（ELISA）法测定TNF-α蛋白水平。结果 A组肺组织正常;B组部分肺泡塌陷、炎症细胞浸润,未见孢子或菌丝;C组大部分肺泡塌陷,部分扩张,大量炎症细胞浸润、并有孢子菌丝聚积。第1、3天 TLR2 mRNA和 TNF-α蛋白表达水平C组明显高于其他两组（P＜0．01）,B组高于A组（P＜0．05）;C组第3天 TLR2、TLR4 mRNA ,TNF-α表达水平高于第1天（P＜0．05,P＜0．01）,且TLR4表达高于A组（P＜0．05）。结论 TLR2和 TNF-α可能参与光滑念珠菌肺部感染的发生发展,TLR4可能起协同作用。     

mDC中A20失调促使HCV感染慢性化

【目的】 全世界有1.7亿丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)携带者,其中80%以上的HCV感染会慢性化,由其所致的肝硬化、肝癌发病率逐年升高。针对丙肝,世界公认的方法是干扰素(interferon,IFN)治疗,但其副作用较多,且对部分患者疗效不佳。新近研究表明髓样树突状细胞(myeloid dendritic cells, mDCs)功能失调可能是HCV感染慢性化的重要原因,但其具体机制尚不明确。胞内泛素剪辑蛋白A20,又称肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(tumor necrosis factor alpha-induced protein 3,TNFAIP3),作为新近被发现的免疫负调控分子,可通过负反馈机制调控TNFR、RIG-1及TLR信号通路诱导的免疫反应,但目前其在HCV感染病程中的作用尚不清楚。本实验拟通过检测不同人群中mDC中A20表达及其对不同刺激的反应,同时分析其与相关免疫促进/抑制分子的关系,揭示mDC中A20分子在HCV慢性感染中的作用,为丙肝治疗提供新靶点。 【方法】 (1)收集健康及丙肝患者外周血并分为4组:健康组、未治疗组(HCV感染时间>1年)、治疗组(IFN-α治疗1~6个月)、持续病毒学反应组(丙肝治愈),分离外周血单核细胞并提纯mDC,用流式细胞术测定mDC纯度,用RT-PCR法测定各组A20 mRNA表达;(2)体外用poly-IC和(或)IFN-α刺激健康组及未治疗组mDC,用RT-PCR法测定A20表达;(3)处理同(2),用流式细胞术测定HLA-DR、CD86、CCR7、IL-10、IL-12等细胞因子的表达水平,分析A20与其相关性。 【结果】 与健康组相比,治疗组mDC中A20表达显著下降,另两组则无统计学差异。与健康组相比,单用poly-IC处理时,未治疗组A20水平下降不明显;而单用IFN-α或poly-IC+IFN-α处理则无上述差异。IFN-α刺激后各组mDC中A20、IL-12表达较未处理前下调,HLA-DR、CD86、CCR7则上调;A20表达水平与HLA-DR、CD86、CCR7及IL-12呈负相关,与IL-10正相关。 【结论】 HCV感染后mDC失能,其A20持续处在正常水平,阻碍免疫反应活化致使感染慢性化;该过程可能与HLA-DR、免疫共刺激分子CD86、CCR7及免疫活化因子IL-12表达下调,免疫抑制因子IL-10上调有关。相反,IFN-α可以改善mDC功能并下调A20表达,增强机体免疫功能、促进HCV清除。因此,A20沉默法可能成为丙肝治疗新策略。     

糖尿病合并肺结核与单纯肺结核患者血清细胞因子水平、临床疗效和转归比较

目的比较糖尿病合并肺结核与单纯肺结核患者血清细胞因子水平、临床疗效和转归,分析其相关性,并探讨相关影响因素。方法选取2016年1月至2018年1月在新乡医学院第一附属医院诊治的98例糖尿病合并肺结核患者(糖尿病合并肺结核组)、60例单纯肺结核患者(肺结核组)及同期50例健康体检者(健康对照组)作为研究对象。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测三组患者血清中Toll受体4(TLR4)、白介素-6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平;收集糖尿病合并肺结核组和肺结核组两组的抗痨和临床转归情况,并分析其细胞因子表达差异;采用Logistic回归模型分别探讨抗痨耐药和临床转归影响因素。结果糖尿病合并肺结核组、肺结核组和健康对照组三组TLR4、IL-6、IFN-γ和TNF-α表达水平比较差异均有统计学意义(P0.05),糖尿病合并肺结核组肺结核组健康对照组。经治疗,糖尿病合并肺结核组临床疗效和临床转归成功率均明显低于肺结核组,差异有统计学意义(P0.05)。治疗无效者和临床转归未成功者TLR4、IL-6、IFN-γ和TNF-α表达水平均明显高于有效者和成功者,差异有统计学意义(P0.05)。经Logistic回归分析得知,肥胖体质(BMI25kg/m2)、耐药、TLR4和合并糖尿病是影响肺结核患者临床疗效的关键因素(P0.05);耐药和合并糖尿病是影响肺结核患者临床转归的关键因素(P0.05)。结论血清TLR4、IL-6、IFN-γ和TNF-α表达水平在糖尿病合并肺结核者中均高于单纯肺结核者,有望成为预测临床疗效和转归的有效指标,其中耐药和合并糖尿病是影响肺结核预后的关键因素。     

慢性HCV感染患者PBMC体外Th1类细胞因子分泌及其相关因素分析

目的：研究慢性HCV（丙型肝炎病毒）感染患者外周血单个核细胞（PBMC）体外Th1细胞因子的分泌，进一步了解HCV感染慢性化和肝损伤机制．方法：体外培养慢性HCV感染患者PBMC72h后，ELISA检测培养上清Th1类细胞因子（IL-2，IFN-γ，TNF-α），荧光定量PCR检测患者血清HCVRNA含量，RT-PCR检测HCVRNA亚型．结果：与正常人相比，IFN-γ在HCV RNA阴性患者中明显增高，而在RNA阳性患者中无明显升高．TNF-α则不论RNA滴度的高低均较正常人显著增高．RNA阳性患者ALT（丙氨酸氨基转移酶），AST（门冬氨酸氨基转移酶）水平明显高于阴性患者．不同HCV基因型感染的患者IFN-γ，TNF-α的分泌无显著差异．结论：IFN-γ在清除病毒中起重要作用，TNF-α是引起肝脏损伤的重要因素之一．     

Toll3受体在呼吸道合胞病毒感染中作用的实验研究

目的探讨呼吸道合胞病毒（RSV）感染人肺上皮A549细胞后,Toll样受体3（TLR3）的水平变化及其产生的I型干扰素的抗病毒作用。方法RSV感染体外培养的人肺上皮A549细胞,并给予TLR3特异性抗体处理,分别感染4h、8h、12h、16h和24h后收集各组细胞。未感染病毒的细胞作为对照组。lit—PCR法检测TLR3、IFN-α、IFN—β,RSVF蛋白的mRNA表达水平变化。结果RSV感染A549细胞后,TLR3、IFN—α、IFN-β,RSVF蛋白的mRNA表达量均升高且有时间依赖性。结论RSV感染A549细胞后可上调TLR3表达,其活化细胞介导产生的I型干扰素能起到抗病毒作用。     

传染性单核细胞增多症患儿外周血淋巴细胞亚群、 细胞因子、TLRs 的表达变化及其临床意义

目的 检测Epstein-Barr 病毒（EBV）感染的传染性单核细胞增多症（IM）患儿外周血淋巴细胞亚群、 细胞因子及Toll 样受体7（TLR7）、TLR9 的表达变化及其临床意义。方法 选取2019 年1 月—2019 年 12 月杭州市儿童医院收治的98 例感染EBV 致IM 急性期患儿作为研究对象,另外选择50 例EBV 感染阴性 儿童作为对照组。采用流式细胞术和酶联免疫吸附试验分别检测IM 患儿急性期、恢复期（病程满1 个月后 复查）外周血淋巴细胞亚群和细胞因子水平。另外分离外周全血单个核细胞（PBMC）,采用qRT-PCR 检测 TLR7 和TLR9 mRNA。结果 与对照组比较,IM 急性期患儿外周血CD3+、CD8+、白细胞介素-1β（IL- 1β）、IL-6、IL-8、IL-10、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、γ 干扰素（IFN-γ）、TLR7 和TLR9 mRNA 相 对表达量升高（P <0.05）;CD4+、CD19+、CD16+56+ 降低（P <0.05）。IM 急性期患儿EBV DNA 载量与血清 IL-1β、TLR9 mRNA 呈正相关（r s =0.247 和0.348,P <0.05）,与其他指标无关（P >0.05）。IM 患儿在恢复 期时,外周血CD3+、CD8+、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-γ、TLR7 和TLR9 mRNA 相对 表达量降低（P <0.05）;CD4+、CD19+、CD16+56+ 升高（P <0.05）。结论 监测IM 患儿外周血淋巴细胞亚群、 细胞因子及TLR7、TLR9 的表达变化,尤其是重点关注血清IL-1β 和TLR9 mRNA 的表达,有助于了解病 情进展和转归。     

乙型肝炎病毒e抗原对Bewo细胞Toll样受体3表达的影响

目的探讨乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)对Bewo细胞Toll样受体3(TLR3)表达的影响。方法首先用TLR3配体polyI∶C处理Bewo细胞,观察细胞TLR3 mRNA表达的动力学变化。然后将2μg和8μg HBeAg重组质粒pcDNA3.1(+)-HBe转染Bewo细胞,48 h后,用TLR3配体polyI∶C处理12 h。最后,用不同浓度的IFN-β处理Bewo细胞12 h。采用实时荧光定量RT-PCR和ELISA分别检测细胞TLR3 mRNA表达及细胞上清IFN-β水平。结果 polyI∶C可显著诱导Bewo细胞TLR3 mRNA表达(P0.05或0.001),且呈时间和剂量依赖性;与对照组相比,转染8μg HBeAg重组质粒组polyI∶C诱导Bewo细胞TLR3表达及IFN-β水平显著下降(P0.001),IFN-β可显著诱导Bewo细胞表达TLR3 mRNA(P0.001),且呈剂量依赖性。结论 HBeAg可能通过下调IFN-β的产生而抑制Bewo细胞TLR3 mRNA的表达,为防治HBV宫内感染提供了新的途径。     

支气管肺泡灌洗对慢性阻塞性肺疾病患者外周血Toll样受体4表达的影响

目的：探讨支气管肺泡灌洗（BAL）对慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease,COPD）机械通气患者外周血Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）表达水平的影响及意义.方法：选择70例COPD机械通气的患者,其中34例行常规机械通气为对照组,36例行BAL为观察组,应用荧光定量PCR测2组外周血的TLR4表达水平,同时采用ELLSA法测定血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-6、IL-8水平.结果：2组治疗后第1天外周血TLR4、TNF-α、IL-6和IL-8表达水平差异均无统计学意义（P＞0.05）;观察组治疗后第5天TLR4、IL-6和IL-8及治疗后第3天和第5天TNF-α均明显高于对照组（P〈0.01）.观察组在机械通气并BAL治疗后第1、3和5天TLR4、TNF-α、IL-6、IL-8表达水平差异均有统计学意义（P〈0.01）,且两两表达水平差异亦均有统计学意义（P〈0.05~P〈0.01）.对照组在机械通气治疗后第1、3和5天TLR4、TNF-α、IL-6和IL-8表达水平差异均无统计学意义（P＞0.05）.观察组中TLR4表达水平与TNF-α、IL-6、IL-8细胞因子水平均呈正相关关系（P〈0.05）.观察组在肺部感染控制窗时间、总机械通气时间、住呼吸重症监护室时间、首次撤机成功率、再上机率与同期对照组比较差异性均具有统计学意义（P〈0.05）.结论：BAL能够提高COPD机械通气患者外周血TLR4表达水平,增加脱机成功率,提示COPD治疗与机体的固有免疫相关性.     

HBV转染和Loxoribine刺激对TLR7表达及IFN-α、IL-12水平的影响

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)转染和Loxoribine刺激对Toll样受体7(TLR7)表达及干扰素-α(IFN-α)、白介素-12(IL-12)水平的影响。方法采用流式细胞术检测TLR7特异性配体Loxoribine刺激前后Hep G2和Hep G2.2.15细胞株TLR7的表达情况,ELISA法检测Loxoribine刺激培养的乙肝病毒携带组、慢性乙肝患者组和健康对照组外周血单个核细胞(PBMC)上清液中IFN-α、IL-12的水平。结果 Hep G2.2.15细胞内TLR7表达量较Hep G2细胞低(P0.05),Loxoribine刺激培养后Hep G2和Hep G2.2.15细胞内TLR7的表达量均升高,但差异无统计学意义(P0.05)。乙肝病毒携带组和慢性乙肝患者组PBMC上清液中IFN-α水平较健康对照组低(P0.05),慢性乙肝患者组IL-12水平较乙肝病毒携带组和健康对照组高(P0.05);Loxoribine刺激培养后健康对照组IFN-α、IL-12升高水平与乙肝病毒携带组和慢性乙肝患者组比较,差异有统计学意义(P0.05);乙肝病毒携带组和慢性乙肝患者组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论 HBV转染可下调TLR7的表达,乙肝病毒感染者外周血单个核细胞对Loxoribine刺激后TLR7介导的INF-α、IL-12分泌调节功能下降。     

索磷布韦维帕他韦治疗不同基因型慢性丙型肝炎患者和HCV/HIV合并感染患者的临床疗效与安全性

  目的  观察索磷布韦维帕他韦治疗慢性丙型肝炎患者和HCV/HIV合并感染患者的临床疗效和安全性。  方法  将2018年6月至2020年6月就诊于云南省昆明市第三人民医院的419例慢性丙型肝炎患者和56例HCV/HIV合并感染患者纳入到研究中。观察治疗4周、12周、治疗后随访12周持续病毒学应答（SVR12）、生化学应答、肝纤维化改善和治疗期间的不良反应。  结果  停药12周后，单纯HCV患者的基因1（genotype，GT1）型的SVR12率为97.56%，GT2型的SVR12率为98.97%，3型的SVR12率为97.54%，6型的SVR12率为97.85%，P = 0.870；对于HCV/HIV合并感染患者（除抗HIV治疗外给予索磷布韦维帕他韦抗HCV治疗）治疗12周后，GT1型患者的SVR12为85.71%，GT3型患者的SVR12为92.11%，GT6型患者的SVR12为90.91%，P = 0.862；单纯HCV患者抗病毒治疗后的AST、ALT、ALB生化学指标明显好转，肾功能明显改善；单纯HCV患者的肝纤维化指标在治疗后，纤维化程度明显改善；不良反应发生的患者中GT3型出现腹泻、恶心、呕吐、乏力，其他基因型别的患者和HCV/HIV合并感染患者以乏力、头痛为主。  结论  索磷布韦维帕他韦对于治疗初治慢性丙型肝炎患者、HCV/HIV合并感染患者的抗病毒治疗有效且有较高安全性。     

重症社区获得性肺炎患者外周血单核细胞Toll样受体4的表达及临床意义

目的探讨重症社区获得性肺炎（SCAP）患者外周血单核细胞Toll样受体4（TLR4）的表达情况及临床意义。方法选择入住呼吸科及ICU的SCAP患者50例为SCAP组,另择同期健康体检者50例作为对照（对照组）。分离两组外周静脉血单核细胞,提取单核细胞的mRNA,采用实时定量PCR检测TLR4mRNA表达量。采用ELISA法检测两组血清TNF-α和IL等相关炎症因子水平。在两组外周静脉血中加入脂多糖（LPS）后,再次测定TLR4mRNA表达量及相关炎症因子水平。分析SCAP患者TLR4mRNA表达量与肺炎严重程度（PSI）评分的相关性。结果SCAP组外周血单核细胞TLR4mRNA相对表达量及血清TNF-α、IL-6、IL-8、C反应蛋白（CRP）、降钙素原（PCT）水平均明显高于对照组（均P＜0.05）;加入LPS后,两组TLR4mRNA的表达量及血清TNF-α、IL-6、IL-8、CRP水平均较加入LPS前升高（均P＜0.05）,但SCAP组升高的幅度小于对照组。SCAP组TLR4mRNA表达量与PSI评分呈正相关（r=0.641,P＜0.05）。结论TLR4信号通路在SCAP发展中起重要作用,外周静脉血单核细胞TLR4受体过表达诱导NF-资B活化及其下游炎症因子释放,是SCAP造成机体损伤的主要病理机制。阻断TLR4受体可以抑制炎症因子的释放,减轻肺组织病理损害,可以为临床治疗SCAP提供新的靶点。     

慢性乙型肝炎病毒感染者血清TNF-α和IFN-γ水平分析

目的：分析不同临床阶段的慢性HBV感染者血清TNF-α和IFN-γ水平差异,探讨其水平差异与慢性HBV感染结局的关系。方法：选择慢性乙型肝炎（CHB）87例,乙型肝炎肝硬化（LC）38例,HBV相关肝细胞癌（HCC）34例,应用ELISA法分别检测其血清IFN-γ和TNF-α水平。结果：在所观察的3组中,TNF-α水平均有明显升高,其中LC组和HCC组均显著高于CHB组（P〈0.001）,但LC组和HCC组间无显著性差异;而CHB、LC和HCC3组间血清IFN-γ水平无显著性差异（P=0.208）。结论：血清TNF-α水平可能与慢性HBV感染的结局相关,而IFN-γ水平与慢性HBV感染结局无明显相关性。     

HBV宫内感染中TLR4表达与细胞因子IFN—γ、IL-4水平研究

目的：研究Toll样受体4（TLR4）与干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-4（IL-4）的相关性在乙型肝炎病毒（HBV）宫内感染的意义。方法：将研究对象分为研究组[HBV表面抗原阳性（HBsAg）孕妇195例,对照组（正常孕妇）38例。采用流式细胞术测定孕妇外周血单核细胞上TLR4表达,酶联免疫吸附法（ELISA）测定孕妇外周血乙型肝炎5项指标和细胞因子IFN-γ、IL-4水平。新生儿脐血测乙型肝炎5项和HBV-DNA。结果：研究组孕妇分娩的新生儿95例有12例宫内感染,宫内感染率为12．63％。新生儿HBV宫内感染组孕妇的TLR4、IFN-γ水平显著低于HBV宫内未感染组及对照组孕妇（Pd0．01）,IL-4水平则显著高于HBV宫内未感染组及对照组孕妇（P〈0．01）。HBV宫内未感染组与对照组相比,TLR4、IFN-γ和IL-4水平差异均无统计学意义（P〉0．05）。各组孕妇TLR4表达与IFN-γ水平呈高度正相关（P〈0．01）,TLR4和IFN-γ均与IL-4呈高度负相关（P〈0．01）。结论：TLR4既可增强Th1介导的细胞免疫功能,又能调节Th1和Th2细胞因子的失衡,有望成为HBV宫内感染免疫治疗的新靶位。     

竹荪多糖与多西紫杉醇联用抗肺癌效应及机制研究

目的探讨竹荪多糖与多西紫杉醇（DOC）在肺癌治疗中的协同效应及机制。方法40只C57小鼠构建路易斯肺癌（LLC）荷瘤C57小鼠模型,分别采用竹荪多糖组分ZSP1（ZSP1组）、DOC（DOC组）、ZSP1+DCC联用（联用组）及0.9%氯化钠注射液（对照组）,每组10只,在建模当天开始腹腔注射治疗,第10、12、15天时检测肿瘤体积,并采用流式细胞术检测小鼠外周血及脾中髓源抑制性细胞（MDSC）的比例。另用Toll样受体素4（TLR4）基因敲除C57小鼠（TLR4KO组）和野生型C57小鼠（WT组）构建LLC荷瘤模型,采用实时荧光定量PCR检测MDSC中IFN-γ、IL-12、CXCL-9和CXCL-2mRNA表达水平,Westernblot法检测IL-12蛋白表达水平。结果与对照组相比,ZSP1组、DOC组和联用组小鼠的肿瘤体积在第10、12、15天均明显为小（均P＜0.01）;TLR4KO组较WT组小鼠的肿瘤体积在第10、12天均明显为小（均P＜0.01）;第12、15天联用组小鼠的MDSC比例均明显低于对照组、ZSP1组和DOC组,差异均有统计学意义（均P＜0.01）;与WT组相比,TLR4KO组IFN-γ、IL-12和CXCL-9mRNA表达水平均明显增加（均P＜0.01）,IL-12蛋白表达水平有所增加。结论DOC与竹荪多糖联用抗肿瘤效果优于单用,其作用机制与下调荷瘤小鼠外周血中MDSC比例有关,其作用受体可能为TLR4。竹荪多糖与DOC联用可以上调IL-12的转录水平和表达水平。     

血清模式识别受体表达水平联合检测对血流感染脓毒症的诊断价值

目的 探讨血清模式识别受体表达水平联合检测对血流感染（BSI）脓毒症的诊断价值。方法 选择2021年1月至2022年7月河北北方学院附属第一医院收治的242例脓毒症患者,抗感染治疗前检测血清模式识别受体Toll样受体2(TLR2)、Toll样受体4(TLR4)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)水平,进行血培养,并根据结果将入组患者分为BSI组（n=178）和非BSI组（n=64）,将BIS组分为革兰氏阳性菌（G+）感染者（n=65）和革兰氏阴性菌（G-）感染（n=113）者。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清TLR2、TLR4、NLRP3水平对BSI的诊断价值。结果 BSI组患者血清TLR2水平为（8.37±1.46）pg/mL、TLR4为（11.25±2.21）pg/mL、NLRP3为（766.97±150.08）ng/mL,均高于非BSI组,差异有统计学意义（P<0.05）;BSI组中,G-患者的血清TLR2水平为（8.92±1.41）pg/mL、TLR4为（11.86±2.07）pg/mL、NLRP3为（824.39±129.43）ng/mL,均高于G+患者,差异有统...     

呼吸道合胞病毒感染BALB/c鼠活化TLR7介导的抗病毒作用研究

目的探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染BALB/c鼠后,肺内Toll样受体7(TLR7)的水平变化,初步研究TLR7活化在RSV感染中介导产生的I型干扰素(IFN)抗病毒作用及其可能的调控机制。方法以RSV滴鼻感染BALB/c鼠建立急性肺炎模型,并预先给予TLR7特异性激动剂咪喹莫特(Imiquimod)处理,分别于感染后4、8、12、24 h不同时间点处死小鼠取肺组织,并以未感染病毒的BALB/c鼠为正常对照组。①HE染色观察肺的病理学改变;②用TRIzol提取肺组织总RNA,RT-PCR法检测鼠肺内TLR7、干扰素调节因子3(IRF3)、干扰素调节因子7(IRF7),干扰素α(IFN-α),干扰素β(IFN-β)及RSV融合蛋白基因(F基因)mRNA的表达;③Western blot法检测鼠肺组织TLR7蛋白的表达变化;④空斑形成实验(PFU)测定各组不同时间点肺组织匀浆中RSV滴度。结果①HE染色显示肺部炎性细胞浸润及肺泡结构破坏程度随感染时间延长而加重,经Imiquimod干预后肺部炎性细胞浸润程度及肺泡结构破坏较RSV感染组明显减轻;②在mRNA转录水平,RSV感染早期,感染组上调TLR7、IRF3/7、IFN-α/β、RSV F基因的表达;在预先给予TLR7特异性激动剂Imi-quimod处理组,TLR7、IRF7、IFN-α的mRNA比感染组相同时间点的表达量明显升高,且升高有显著性差异,而IRF3、IFN-β表达量在Imiquimod干预后与RSV感染组相比升高不明显;而RSV F基因的mRNA表达量较RSV感染组明显下降;③在蛋白水平,RSV感染组上调TLR7蛋白的表达;在预先给予TLR7特异性激动剂Imiquimod处理组,TLR7蛋白表达量较感染组显著升高;④RSV感染BALB/c鼠肺后,肺组织匀浆中RSV滴度随感染时间的延长而增加;给予TLR7激动剂Imiquimod处理组,RSV复制滴度水平较感染组明显减少。结论 RSV感染BALB/c鼠后通过活化TLR7,诱导Ⅰ型IFN的产生。用Imiquimod激动TLR7后,Ⅰ型IFN表达量较RSV感染组明显升高,RSV F基因和肺组织匀浆中RSV滴度水平明显减少,以及肺部炎症减轻,表明RSV引起的抗病毒免疫机制与TLR7活化的转导途径有关;而且激动TLR7后,IRF7和IFN-α的表达较IRF3和IFN-β明显升高,表明了IFN-α可能是主要通过IRF7通路由TLR7诱导产生的最主要Ⅰ型IFN。     

灵芪蠲肝液对大鼠TLR4信号途径的影响

目的：探讨四氯化碳（CCl4）诱导大鼠肝损伤的作用机制,并观察灵芪蠲肝液对Toll样受体4（TLR4）信号传导途径的影响。方法：雄性健康Wistar大鼠,设置模型组、灵芪蠲肝组（治疗组）和空白组。用40%CCl4花生油溶液皮下注射建立慢性肝损伤模型,以灵芪蠲肝液灌胃作治疗性研究,于第8周收集血液和肝脏组织。检测肝功能ALT、AST、白蛋白（ALB）水平;检测血清内毒素、白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平;分离枯否细胞（KCs）,采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测KCs TLR4 mRNA表达;肝组织HE染色,按Knodell HAI评分标准对肝脏炎症评分,免疫组化SP法检测肝组织TLR4和核因子κB（NF-κB）蛋白表达。结果：空白组除ALB高于模型组和治疗组外,其余指标均最低。模型组血清ALT、AST、内毒素、IL-1β、TNF-α水平明显高于治疗组（P〈0.001）,ALB水平明显低于治疗组（P〈0.05）,KCs TLR4 mRNA表达明显高于治疗组（P〈0.001）,肝组织炎症Knodell HAI评分、TLR4和NF-κB蛋白均高于治疗组（P〈0.001）。结论：①通过TLR4信号传导途径释放炎症介质致肝组织损伤可能为CCl4诱导慢性肝损伤的机制之一。②灵芪蠲肝液治疗慢性肝损伤的机制可能与抑制TLR4信号途径有关。     

生殖道支原体致不孕患者输卵管Toll样受体表达及意义

目的 探讨支原体(Mg)感染致输卵管不孕患者组织Toll样受体(TLR)表达及临床意义.方法 选择40例输卵管不孕且伴生殖道支原体感染并行手术患者及20例健康对照,采用免疫组织化学方法检测输卵管中Toll样受体2和4的表达,及ELISA法检测输卵管液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白介素-1(IL-1)的含量,并进行比较.结果 40例支原体感染致不孕者与对照组输卵管TLR2和TLR4均为阳性,支原体感染不孕者输卵管TLR2阳性细胞计数为(13.0±2.9),高于对照组(7.9±1.9);TLR4阳性细胞计数为(27.7±7.7),高于对照组(9.7±2.8),两组间差异均具有统计学意义(P＜0.01).支原体感染不孕患者输卵管液IL-1与TNF-α含量均高于对照组(P＜0.01).输卵管不孕患者TLR2表达与IL-1和TNF-α表达具有正相关性(r=0.763和0.394,P ＜0.05);TLR4表达与IL-1和TNF-α表达具有正相关性,相关系数(r=0.755和0.538,P＜0.01).结论 TLR2和TLR4在支原体所致输卵管不孕患者中表达增加,可能通过影响细胞因子而参与输卵管炎症.