高效液相色谱法同时测定血清色氨酸和犬尿氨酸浓度的方法建立及应用

目的建立一种高效液相色谱-紫外检测法同时测定血清中色氨酸(Trp)和犬尿氨酸(Kyn)浓度的方法。方法色谱柱采用Agilent Hypersil ODS(125.0mm×4.0mm,5μm),流动相为15mmol/L乙酸钠缓冲液(pH4.0)和乙腈95∶5(V/V),流速为0.8ml/min,柱温25℃,紫外检测λKyn=360nm,λTrp=278nm。结果Kyn和Trp的保留时间分别为3.3min和5.2min,线性范围分别为0.083~21.000μmol/L和2.650~678.000μmol/L,检测限分别为0.028μmol/L和0.053μmol/L,日内和日间相对标准偏差分别低于5%和10%,回收率分别为91.99%~113.89%和95.81%~118.82%。结论该方法简便、快速、特异,适合于临床检测。     

高效液相色谱-荧光法测定SLE患者血清色氨酸及其代谢产物

目的建立一种同时测定血清色氨酸(tryptophan,Trp)、犬尿氨酸(kynurenine,Kyn)和犬尿喹啉酸(kynurenic acid,Kyna)的高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FD),并用此法检测SLE患者血清中Trp及其代谢产物Kyn、Kyna的含量。方法血清标本经0.624 mol/L的高氯酸溶液去除蛋白质后取上清液20μl直接进样分析测定。色谱柱为Hypersil C18柱,流动相为0.20mol/L醋酸锌、8.3 mmol/L醋酸和2.5%的乙腈;流速为1.5 ml/min;荧光检测激发波长和发射波长在0~11 min分别为365nm和480 nm,11~15.5 min变换为344 nm和404 nm,15.5~20 min为254 nm和404 nm。采用建立的方法测定体检健康者和SLE患者血清Trp、Kyn和Kyna的含量。结果Trp的线性范围为0.610~196μmol/L,最低检出浓度为0.005μmol/L,平均回收率为103.71%;Kyn线性范围为0.049~98μmol/L,最低检出浓度为0.025μmol/L,平均回收率为97.45%;Kyna线性范围为1.05...     

HPLC-UV检测法同时测定血浆色氨酸和犬尿氨酸的方法学研究

目的 建立一种同时测定血浆中Trp和Kyn浓度的HPLC-UV检测法.方法 以3-硝基酪氨酸(3-N-Tyr)为内标,采用Agilent Hypersil ODS色谱柱进行分离.流动相中醋酸缓冲液( 15 mmol/L,pH 5.5):乙腈为94∶ 6(v/v);流速为0.8 ml/min;柱温:25℃;紫外程序化检测波长:0～4 min,360 nm;4～5 min,302 nm.选取2010年9-12月重庆市九龙坡区第一人民医院15例慢性乙型肝炎患者、8例慢性肾炎患者、10例血小板减少性紫癜患者以及15名健康体检者,用该方法检测其血浆Trp、Kyn水平并计算Kyn/Tp比值;各指标在上述4组间的比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK法.结果 Kyn与Trp的保留时间分别为2.9 min和4.4 min,线性范围分别为0.44～18.30μmol/L和3.67～470.00 μmol/L,检测限分别为0.014 μmol/L和0.122 μmol/L.Kyn与Trp的日内变异均小于3％,日间变异均小于4％.平均回收率均在92.29％～104.40％之间.用该方法测定临床标本,健康对照组、慢性肾炎组、血小板减少性紫癜组以及慢性乙型肝炎组血浆中Kyn浓度分别为(1.59±0.28)、(2.73±0.56)、(2.69±0.44)和(1.54±0.48) μmol/L,Trp浓度分别为(59.8±10.0)、(46.1±11.7)、(58.5±8.0)和(41.4±13.1)μmol/L,Kyn/Trp比值分别为(0.027 4±0.007 5)、(0.061 6±0.0165)、(0.0467±0.0091)和(0.038 3±0.007 5),差异均有统计学意义(F值分别为23.734,8.463和20.921,P均＜0.01).结论 所建立HPLC-UV检测法可同时测定血浆中Kyn和Trp浓度,适合于临床检测.     

再生障碍性贫血中色氨酸和犬尿氨酸的检测方法及意义

目的 建立检测再生障碍性贫血(Aplastic Anemia,AA，)血清中必需氨基酸——色氨酸（Trp）及其代谢产物犬尿氨酸（Kyn）水平的方法，探讨其与疾病之间的关系。方法 应用反向高效液相色谱法检测，以荧光检测器检测色氨酸、以紫外检测器检测犬尿氨酸的血清水平 结果 再障患者血清Trp浓度明显低于正常对照，Kyn浓度明显高于正常对照；再障动物模型结果与患者血清结果相同（P<0.05）。结论 在再障发病过程中，色氨酸限速酶IDO的表达水平和活性均较正常明显增高，促进色氨酸向犬尿氨酸转化，色氨酸的不足导致细胞内的“色氨酸饥饿状态”从而抑制T细胞的活化和增殖，是机体免疫系统自我调节的一种重要保护机制。     

血清醛固酮候选参考测量程序的建立及性能评估

目的建立基于同位素稀释液相色谱-串联质谱(ID-LC-MS/MS)的血清醛固酮候选参考方法。方法以甲基叔丁基醚为萃取剂,采用液液萃取方式进行样本前处理。以醛固酮-2H7为内标,采用电喷雾离子源(ESI)负离子模式建立检测血清醛固酮的ID-LC-MS/MS方法,并对方法的准确度、精密度、灵敏度、线性等基本分析性能进行验证。结果 ID-LC-MS/MS测定血清醛固酮的线性范围为0.08～3.55 nmol/L,检测限和定量限(LOQ)分别为0.012 nmol/L和0.045 nmol/L。批内和批间变异系数(CV)分别为5.0%和4.1%。平均加标回收率为98.52%～100.14%。测定国际临床化学和检验医学联合会参考实验室外部质量评价计划(RELA)样本的结果偏移1.6%。结论建立的测定血清醛固酮的ID-LC-MS/MS方法准确、精密,有望作为测定血清醛固酮的参考方法。     

超高效液相色谱－串联质谱联用检测血清胆汁酸谱方法的建立及初步临床应用

目的 建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)联用方法检测血清中胆汁酸表达的方法,并初步探讨胆汁酸亚型与肥胖的关系.方法 采用固相萃取方法处理血清标本,经UPLCHSS T3色谱柱梯度洗脱后,用负离子多反应监测模式对血清中的胆汁酸组分进行质谱检测,并根据中国国家食品药品监督管理局(SFDA)的指导原则对该方法的特异性、线性范围、灵敏度、不精密度和相对回收率进行性能验证.利用UPLC-MS/MS方法检测10例单纯性肥胖者和10名健康对照者血清胆汁酸浓度,并采用秩和检验进行统计分析.结果 UPLC-MS/MS方法可同时检测人血清中14种胆汁酸亚组分,在10～20 000 nmol/L范围内线性相关良好.其对不同亚组分的最低检出限(LOD)为0.02～7.90 nmol/L,最低定量限(LOQ)为0.07～44.20 nmol/L;其日内不精密度为0.35％～12.41％;日间不精密度为1.11％ ～13.04％;相对回收率为89.8％～114.6％.初步临床应用显示,单纯性肥胖者及健康对照者血清胆汁酸谱色谱图有一定差异,单纯性肥胖者血清中游离胆汁酸和结合胆汁酸浓度分别为0.49(0.45 ～1.90)、1.44(0.84～3.72) μmol/L,均低于健康对照组的0.98(0.53～3.06)、1.99(0.67 ～2.88) μmol/L,但差异均无统计学意义(Z=-0.958、-0.801,P均＞0.05).结论 建立的UPLC-MS/MS方法可有效分离并定量检测血清中各种胆汁酸亚型,其线性范围广、灵敏度高、精密度好,可用于临床标本游离胆汁酸和结合胆汁酸的分析测定.     

健康国人血清犬尿氨酸和犬尿氨酸/色氨酸含量比值参考值范围的建立

目的建立我国正常人血清犬尿氨酸(KYN)及犬尿氨酸/色氨酸含量(KT)比值参考值范围。方法采用高效液相色谱-紫外法(HPLC-UV)检测86名健康成人血清KYN和色氨酸(TRP)含量,并计算KT比值。结果正常成人血清KYN为0·364~3·022μmol/L,平均(1·426±0·542)μmol/L,KT比值为11·008~47·528mmol·L-1·M-1,平均(29·271±9·315)mmol·L-1·M-1。不同年龄组之间,血清KYN、TRP含量及KT比值差异均无统计学意义(P>0·05);性别之间,血清KYN、TRP含量及KT比值差异均有统计学意义(P<0·05)。结论建立了健康国人KYN及KT比值参考范围,为相关疾病的辅助诊断、疗效观测及发病机制等研究提供相应参数。     

高效液相色谱-荧光法测定血清犬尿喹啉酸和色氨酸方法的建立

目的建立同时检测血清犬尿喹啉酸（kynurenic acid，KYNA）和色氨酸（tryptophan，Trp）的高效液相色谱-荧光法。方法采用高效液相色谱在线衍生技术，通过对最佳检测波长、流速、流动相中醋酸锌浓度和乙腈比例等因素的探讨，得出测定Trp和KYNA的最优实验方案，并对其进行方法学评价；测定50名正常人血清KYNA和Trp含量。结果KYNA保留时间约为8．1min，线性范围为1．05～2093nmoL／L，最低检出浓度为0．05nmoL／L，平均回收率为101．19％；Trp保留时间约为11．3min，线性范围为0．49～196μmoL／L，最低检出浓度为0．001μmoL／L，平均回收率为104．43％，二者日内、日间测定的变异系数均小于5％，苯丙氨酸、酪氨酸、5-羟色胺和犬尿氨酸等物质对该法均无干扰。健康成人血清KYNA和Trp含量分别为（24．25±9．11）nmol／L和（49．05±11．67）μmol／L。结论建立的方法简便、快速、稳定、可行，适用于临床和科研工作。     

高效液相色谱法在类风湿关节炎患者血清TRP和KYN检测中的应用与临床价值

目的 探讨高效液相色谱荧光检测法(HPLC-FLD)同时测定血清色氨酸(TRP)和犬尿氨酸(KYN)对诊断类风湿关节炎(RA)的临床意义.方法 血清标本加等量5%(V/V)高氯酸溶液去除蛋白,离心取上清液20 μl,直接进样分析.色谱柱为HpemilC_8柱(300 mm×6.0 mm i.d,10 μm);流动相为0.25 mol/L醋酸锌和50 mmol/L醋酸溶液(含3%乙腈),流速为1.5 ml/min;0～10 min荧光检测器的激发波长和发射波长分别为365 nm和480 nm,10 min后激发波长和发射波长分别变换为254 nm和404 nm.同时,用该方法测定120名健康成人和110例RA患者血清TRP、KYN和TRP/KYN比值(K/T),并评价其诊断RA的敏感度、特异度和方法学效能.结果 血清标本的KYN和TRP保留时间分别为8.1和11.5 min,两者分离良好.KYN线性范围为0.098 ～19.600 μmol/L,最低检测浓度为0.04 μmol/L;回收率为90.8%～96.2%,日内变异系数为3.68%,日间变异率为4.97%.TRP的线性范围为4.9～196.0μmol/L.最低检测限为0.005 μmol/L,回收率为92.6～106.9%,13内变异系数为3.63%,日间变异系数为4.44%.在本试验的色谱条件下测定苯丙氨酸(Phe)、酪氨酸(Tyr)、犬尿喹啉酸(KYNA)、5-羟色胺(5-HT)和Cr均无干扰.RA组患者血清KYN含量和K/T比值[(2.06±0.38) μmol/L和(55.46±5.81)×10~(-3)]与健康对照组[(1.51±0.35)μmol/L和(32.54 ±9.00)×~(-3)]比较,均显著升高(U=3 251.0,t=10 741,P均为0.000),而RA组TRP含量[(38.24±5.27)μmol/L]与健康对照组[(47.52±5.79)μmol/L]比较,则显著降低(t=10.399,P=0.000).K/T比值诊断RA的敏感度、特异度分别为83.6%(92/110)、85.8%(103/120).结论 HPLC-FLD同时测定血清TRP和KYN的方法精密度、回收率、抗干扰能力、线性范围等均符合临床检测要求.K/T比值可作为RA的辅助性诊断指标.     

血清总同型半胱氨酸候选参考测量程序(液相色谱串联质谱法)的建立及性能评估

目的建立一种基于液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术的血清总同型半胱氨酸(Hcy)候选参考测量程序并对其性能进行评价。方法采用一种简单的蛋白沉淀方法对血清样本进行前处理,然后采用LC-MS/MS定量检测总Hcy,参照美国临床实验室标准化协会(CLSI) C62-A文件和C50-A文件对建立的候选参考方法进行线性、检测限与定量限、基质效应、精密度、正确度等基本分析性能验证。结果 LC-MS/MS检测总Hcy的线性范围为0.5～200.0μmol/L。定量限和检测限分别为0.31 nmol/g、0.06 nmol/g。3种不同比例(1∶1、80∶20、20∶80)的血清与溶液混合物的相对基质效应分别为1.94%、1.91%、1.78%。批内、批间变异系数(CV)分别为2%和1%。3种浓度(30.58、49.21、65.42 nmol/g)的加标样本平均加标回收率分别为99.8%、100.2%、100.8%。测定NIST SRM 1950标准物质的结果偏移1%。样本处理后分别在室温[(23±2)℃]和自动进样器(温度为10℃)中放置24 h,检测结果均非常稳定。结论成功建立了基于LC-MS/MS技术的血清总Hcy候选参考测量程序。该参考测量程序准确度高、精密度好,能够用于常规临床检验方法的量值溯源,保证测定结果的准确性。     

IDO激活剂治疗再生障碍性贫血的实验研究

目的 探讨IDO参与再生障碍性贫血(Aplastie Anemia,AA)的免疫系统异常活化的发病机制,观察IDO特异性激活剂--3,4-DAA治疗再障的疗效.方法 建立免疫介导的再障小鼠模型,用反向高效液相色谱法检测色氨酸(Trp)和其代谢产物犬尿氨酸(Kyn)的血清水平,用RT-PCR方法检测骨髓单个核细胞IDO mRNA的表达水平,探讨IDO在疾病进程中的异常表现;给予3,4-DAA治疗后检测相应指标的变化.结果 模型小鼠Trp浓度明显低于正常小鼠.Kyn浓度明显高于正常小鼠(P＜0.05),模型小鼠的单个核细胞IDO mRNA表达水平较正常小鼠高(P＜0.05);给予3,4-DAA治疗后上述指标差异更具统计学意义(P＜0.01).结论 在再障发病过程中,色氨酸限速酶IDO的表达水平和活性均较正常明显增高,促进色氨酸向犬尿氨酸转化,色氨酸的不足导致细胞内的"色氨酸饥饿状态"从而抑制T细胞的活化和增殖,是机体免疫系统自我调节的一种重要保护机制,IDO激活剂理论上是一种治疗再障的新策略.     

同位素稀释液相色谱串联质谱法测定血清可替宁

目的 建立一种同位素稀释液相色谱串联质谱(ID-LC/MS/MS)测定血清可替宁的方法,以评价不同吸烟状况健康人的吸烟暴露水平分布状况.方法 以[D3]-可替宁作内标,乙腈沉淀蛋白、离心后吸取上清液、氮气挥干、流动相重组,液相分离后进人串联质谱分析;然后,采用多离子反应监测模式,以标准品制作标准曲线,结合同位素内标法定量建立同位素稀释液相色谱串联质谱法.用以对0 68、48.42、94.34、250.95、287.04 μg/L 5个水平血清样本进行5次重复分析,每次每种血清重复分析3份,以考察方法的精密度;同时测定与评价血清样本添加不同浓度标准品的加样回收率和样本在常温、4℃、-80℃保存的稳定性,以及2010年10月至12月期间94名健康志愿者在不同吸烟状况下的血清可替宁分布情况.并用Mann-Whitney U检验分析60名非吸烟、14名戒烟与20名吸烟健康志愿者血清可替宁含量的差异.结果 用ID-LC/MS/MS检测血清可替宁在本试验条件下分离良好,无内源性物质的干扰,具有较好的特异性;血清可替宁、内标峰面积比与可替宁浓度的线性相关系数≥0.9993;测定5个水平血清样本的总变异系数(CV)分别为4.71％、1.40％、1.98％、1.10％和1.03％;批内CV分别为2.19％、0.78％、0.75％、0.65％和0.67％,ID-LC/MS/MS的检测限(LOD)和定量限(LOQ)分别为0.013和0.050 μg/L,具有较高的灵敏度;3次试验的加样回收率范围为99.22％ ～ 102.67％;样本在常温条件下放置2d、4 ℃放置7d以及-80℃冻存保存3个月测定结果的准确度为99.28％～ 100.87％,批间CV均＜5％.检测94名健康人血清可替宁水平呈偏态和尖态分布(偏度2.71,峰度6.65),其中,20名吸烟者的可替宁浓度为116.40 (63.17 ～241.12) μg/L,14名已成烟者为0.67 (0.15～0.95) μg/L,60名非吸烟者为0.22 (0.15 ～0.42) μg/L;已戒烟者(Z=-2.12,P＜0.05)和吸烟者(Z=-6.67,P＜0.001)血清可替宁浓度分别显著高于非吸烟者.结论 建立的ID-LC/MS/MS测定血清可替宁方法操作简便、特异、灵敏,可望在吸烟暴露水平评价及暴露与疾病发生危险的研究中提供有效技术平台.     

孕妇孕期血清维生素A、D和E的水平变化趋势研究

目的采用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)定量检测孕妇孕中期维生素浓度, 探究孕妇孕期血清维生素A、D和E的水平变化趋势。方法纳入2021年10月1日至2022年10月31日武汉大学人民医院产科建档720例孕妇, 年龄(29.7±4.4)岁, 孕期12～22周。采用HPLC-MS/MS测定维生素A、D和E的含量, 统计分析各分组的浓度水平, 并计算缺乏率。结果维生素A、D和E分布范围(95%CI):0.74～2.74 μmol/L、2.88～25.37 ng/ml 和 6.18～35.08 μmol/L, 缺乏率分别为9.30%、93.76%和35.83%, 双胎组的维生素A、D和E水平分别为(1.67±0.51)μmol/L、(13.18±7.44)ng/ml和11.97(8.85, 14.60)μmol/L, 均高于单胎组(1.45±0.36)μmol/L、(10.87±5.26)ng/ml和10.46(6.99, 14.11)μmol/L, 独立样本t检验有统计学意义(P<0.001)。VitD在体重指数较低组(<22 kg/m2)浓度为(12.54±5....     

一种脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)活性检验方法的评估

目的 验证一种新上市的脂蛋白磷脂酶 A2(Lp-PLA2)活性测定的方法学性能。方法 性能验证使用苏州博源公司生产的Lp-PLA2,验证该检测试剂的正确度、精密度、线性、LOQ、LOD、携带污染和参考区间,方法学验证采用上海德赛的试剂作为参比试剂,对临床样本进行评价。结果 Lp-PLA2水平1(400U/L)和水平2(800U/L)浓度校准品的相对偏倚分别为1.13%、0.93%;Lp-PLA2低(394.1U/L)、中(785.3U/L)、高(1048.7 U/L)三个浓度标本的变异系数(CV)分别为0.90%、1.90%、2.30%;线性范围为44.4U/L～1660U/L(R2=0.9997);LOQ为4.22U/L,LOD为0.89 U/L ;携带污染率绝对值＜3%;参考区间验证分别收集20例健康男性和20例健康女性血清样本,测定结果均小于670U/L。方法学比对收集病人及体检血清样本(n=40),分别使用苏州博源(实验方法,Y)与上海德赛(参考方法,X)的Lp-PLA2试剂进行检测,Deming回归方程为Y=1.016X+3.90,R2=0.975。结论 苏州博源Lp-PLA2试剂盒的正确度、精密度、线性、LOQ、LOD、携带污染率和参考区间满足性能验证要求,样本比对结果与德赛试剂具有一致性,可满足临床应用要求。     

同位素稀释-超高效液相色谱串联质谱法测定人体血清/全血中维生素B1

目的建立快速、灵敏测定人体血清/全血中维生素B_1的稳定同位素稀释-超高效液相色谱串联质谱(ID-UPLC-MS/MS)法。方法血清/全血样本经蛋白质沉淀处理,上清液用双蒸水稀释,采用Thermo Hypersil GOLD a Q色谱柱分离,以10 mmol/L甲酸铵水溶液~乙腈为流动相,梯度洗脱。采用电喷雾离子源电离,正离子模式下,采用多反应监测(MRM)扫描方式检测,维生素B_1和同位素内标的离子通道分别为m/z 265.2→122.0和269.2→122.0。结果维生素B_1在0.446~89.2 ng/m L范围内线性关系良好,r=0.999 6;低、中、高质控样本的日内、日间精密度的相对标准偏差(RSD)均5.34%;平均加样回收率在96.9%~102.6%,RSD均6.61%。结论建立的方法简单快速、灵敏度好、准确度高,可用于人体血清/全血中维生素B_1的测定。     

高效液相色谱-荧光法同时测定血清中的色氨酸和酪氨酸

目的建立一种高效液相色谱（HPLC）-荧光法（FD）同时测定血清色氨酸（Trp）和酪氨酸（Tyr）的方法。方法色谱条件：Megres C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,内径为5μm）,流动相为10%乙腈溶液,流速为1.2 mL/min,Tyr和Trp的荧光检测激发波长和发射波长分别为λexTyr=228 nm、λexTrp=285 nm和λemTyr=306 nm、λemTrp=353 nm。血清样本经5%高氯酸溶液去除蛋白质后取上层清液直接进样进行分析测定。且对样本的保存方法进行了探讨。结果 Tyr的保留时间为3.4 min,线性范围为0.275~275μmol/L,最低检出浓度为0.004μmol/L,回收率为90.5%~108.8%。Trp的保留时间为7.6 min,线性范围为0.490~196μmol/L,最低检测浓度为0.005μmol/L,回收率为88.8%~97.2%。Tyr和Trp的日内、日间测定的相对标准偏差均〈5%,苯丙氨酸、5-羟色胺、犬尿喹啉酸、犬尿氨酸和肌酐等物质对该法均无干扰。样本应-20℃冰冻保存。结论该方法简便、快速、敏感、特异,可同时测定血清Tyr和Trp,适合于临床和科研应用。     

食管癌术后吻合口延迟愈合对机体免疫及预后的影响

目的:探讨胸内吻合口延迟愈合是否会引起机体的免疫学变化及这些变化对患者长期生存的影响。方法:根据术后吻合口是否发生线状瘘并延迟愈合将全部41例患者分为L组(21例)和N组(20例)。另设健康对照5例(H组)。分别检测3组研究对象外周血中色氨酸(Trp)、犬尿氨酸(Kyn)、IL-2、TNF-α浓度及NK细胞杀伤活性。分析L和N组患者预后的差别。结果:L组与N组相比Kyn/Trp比值明显降低(P<0.05),而IL-2、TNF-α浓度和NK细胞杀伤活性则显著提升(P<0.05)。L、N组分别与H组比较发现Kyn/Trp比值和IL-2浓度组间差异均有统计学意义(P<0.05)。随访结果显示L组患者较N组预后好。结论:胸内吻合口延迟愈合通过相关机制使体内吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)活性下调,同时IL-2、TNF-α等细胞因子上调,促进NK细胞的活化,降低局部复发和远处转移的风险。     

全自动酶法测定血清总和游离卡尼汀浓度及临床应用

目的　建立自动化测定血清总和游离L 卡尼汀浓度的酶分光光度法 (CAT BTND)。方法　对卡尼汀酯水解条件及 pH和L 卡尼汀乙酰基转移酶浓度等反应条件作最佳化研究 ,同时对该法进行方法学评估 ,并用该法测定了 119名正常人的血清样本。结果　该法最低检出限为 4 81μmol/L ,线性范围可达 150 μmol/L(r =0 999)。批内和批间的平均CV分别为游离卡尼汀 5 52 %和5 90 % ,辛酯卡尼汀为 5 78%和 6 14 %。平均回收率为 98 5%和 98 4%。在胆红素≤ 12 0 μmol/L ,血红蛋白≤ 7g/L和抗坏血酸≤ 50 0 μmol/L的情况下 ,对测定结果无显著性影响。正常参考范围 :成人 :男 (3 2名 )总卡尼汀 (48 5± 17 7) μmol/L ,游离卡尼汀 (3 9 2± 14 2 ) μmol/L ,卡尼汀酯 (9 3±5 3 ) μmol/L ;女 (3 1名 )总卡尼汀 (42 7± 17 3 ) μmol/L ,游离卡尼汀 (3 2 4± 18 0 ) μmol/L ,卡尼汀酯(10 5± 5 5) μmol/L。儿童 (年龄 9～ 12岁 ) :男 (3 1名 )总卡尼汀 (57 3± 19 3 ) μmol/L ,游离卡尼汀(45 1± 14 4) μmol/L ,卡尼汀酯 (12 3± 10 4) μmol/L ;女 (2 5名 )总卡尼汀 (59 4± 15 7) μmol/L ,游离卡尼汀 (46 6± 12 6) μmol/L ,卡尼汀酯 (12 8± 7 8) μmol/L。 结论　该法正确快速 ,可作为L 卡尼汀缺乏症     

原发性高血压患者血浆色氨酸、犬尿氨酸和犬尿喹啉酸浓度的变化

目的通过测定血浆色氨酸(TRP)、犬尿氨酸(KYN)和犬尿喹啉酸(KYNA)浓度,探讨外周吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)和犬尿氨酸氨基转移酶(KAT)活性与原发性高血压(EH)的关系。方法采用高效液相色谱法(HPLC)测定100例EH患者和80名健康体检者(对照组)血浆TRP、KYN和KYNA浓度,计算产物/底物的百分比来评价酶活性,即IDO活性=KYN/TRP×100%,KAT活性=KYNA/KYN×100%。结果 EH组血浆TRP浓度为(59.85±9.89)μmol/L,明显高于对照组[(48.19±7.72)μmol/L,P<0.001];KYN浓度为(2.01±0.48)μmol/L,明显低于对照组[(2.17±0.43)μmol/L,P<0.05]。EH组和对照组血浆KYNA浓度分别为(24.10±9.12)、(23.59±7.27)μmol/L,二者差异无统计学意义(P>0.05)。EH组IDO活性为3.40%±0.85%,明显低于对照组(4.54%±0.81%,P<0.001);而KAT活性为1.20%±0.36%,明显高于对照组(1.09%±0.27%,P<0.05)。EH组血浆TRP浓度与年龄呈负相关(r=-0.316,P=0.001),而对照组二者之间无明显相关性(r=-0.208,P=0.064)。EH组和对照组血浆IDO活性均与年龄呈正相关(EH组:r=0.264,P=0.008;对照组:r=0.305,P=0.006)。2组血浆KYN、KYNA浓度及KAT活性与年龄均无明显相关性。结论EH组血浆TRP浓度明显增高而KYN浓度明显降低,提示外周TRP-KYN代谢途径的IDO活性可能与EH有关。     

液相色谱串联质谱法检测血浆12种神经酰胺方法建立与性能评价

目的建立一种稳定、灵敏的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测人血浆12种神经酰胺方法。方法收集2021年10月至2022年10月在遵义医科大学及其各附属医院健康体检的438名表观健康人群, 建立12种神经酰胺生物参考区间。采用氘代同位素作为内标, 使用ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×50 mm, 1.7 μm)色谱柱进行分离, 流动相为水(含0.1%甲酸)和异丙醇:乙腈(1∶1, v/v, 含0.1%甲酸), 流速0.4 ml/min, 梯度洗脱。使用Qlife Lab 9000 Plus三重四极杆质谱建立LC-MS/MS检测12种神经酰胺的方法。并从线性、定量下限、精密度、回收率和稳定性几个方面对该方法进行性能评价。结果该方法通过了线性、定量下限、回收率、精密度、稳定性的性能评价。12种神经酰胺批内和批间精密度为1.3%～14.3%, 正确度通过加标回收实验验证, 回收率在91.9%～111.0%, 最低定量下限范围为0.001～0.100 μmol/L, 标准曲线显示出良好的线性关系(r>0.990), 稳定性实验显示12种神经酰胺在生物基质中及不...