Toll样受体4及其调控的信号通路关键因子在HIV合并马尔尼菲篮状菌感染患者单核巨噬细胞中的表达水平及临床意义

目的 探讨Toll样受体（TLR）4及其调控的信号通路关键因子在HIV合并马尔尼菲篮状菌（T.marneffei）感染患者外周血单核巨噬细胞的表达水平及临床意义。方法 将35例HIV感染者按是否合并T.marneffei感染分为合并T.marneffei感染组（15例）和单纯HIV感染组（20例）。收集两组患者的临床资料,并应用流式细胞术检测两组患者外周血单核巨噬细胞中TLR2、TLR4、TLR9的蛋白表达水平,TLR4信号通路中间因子TANK结合激酶1（TBK1）、髓样分化因子88（MyD88）、干扰素调节因子7（IRF7）的蛋白表达水平,以及下游炎症因子白细胞介素6（IL-6）、γ干扰素的蛋白表达水平。比较合并T.marneffei感染组和单纯HIV感染组间,以及CD4⁺T淋巴细胞计数<200个/μL和CD4⁺T淋巴细胞计数<100个/μL患者中合并T.marneffei感染组和单纯HIV感染组间上述指标的差异。结果 合并T.marneffei感染组的CD4⁺T淋巴细胞计数低于单纯HIV感染组,TLR4、...     

双氢青蒿素对类风湿关节炎患者外周血单个核细胞TLR/MyD88信号通路的影响研究

背景　类风湿关节炎（RA）的发病机制复杂,已有研究证实Toll样受体（TLR）在RA的发病中起关键作用,其表达于树突状细胞、巨噬细胞、T细胞、B细胞等细胞表面,识别病原体不同的分子结构,进而上调炎性细胞因子和趋化因子,激活细胞内的信号转导通路,引起宿主细胞发生自身炎性反应,在自身免疫性疾病中发挥重要作用。目的　观察双氢青蒿素（DHA）对RA患者外周血单个核细胞（PBMCs）TLR4/MyD88信号通路及蛋白表达的影响。方法　选取2017年10月-2018年12月于内蒙古科技大学包头医学院第二附属医院就诊的活动期RA患者10例为观察组,同时随机选取本院体检中心健康体检者10例为对照组。取两组外周血PBMCs分离培养,将PBMCs分为5组,每组设5个复孔。（1）对照组：健康志愿者外周血PBMCs,不给予干预TLR介导的信号通路;（2）RA组：RA患者外周血PBMCs,不给予干预TLR介导的信号通路;（3）TLR2抑制剂组：RA患者外周血PBMCs,给予100 μg/L的TLR2抑制剂干预TLR介导的信号通路;（4）DHA低剂量组：RA患者外周血PBMCs,给予200 μmol/L的DHA干预TLR介导的信号通路;（5）DHA高剂量组：RA患者外周血PBMCs,给予1 000 μmol/L的DHA干预TLR介导的信号通路。检测并比较5组TLR2阳性率、TLR2 mRNA、MyD88 mRNA、TLR2、MyD88、肿瘤坏死因子α（TNF-α）及白介素6（IL-6）水平。结果　RA组TLR2阳性率高于对照组、TLR2抑制剂组（P<0.05）;DHA低剂量组TLR2阳性率高于DHA高剂量组（P<0.05）。RA组TLR2 mRNA、MyD88 mRNA高于对照组、TLR2抑制剂组（P<0.05）;DHA低剂量组TLR2 mRNA、MyD88 mRNA高于DHA高剂量组（P<0.05）。TLR2抑制剂组、RA组、DHA低剂量组、DHA高剂量组TLR2、MyD88高于对照组（P<0.05）。RA组TLR2、MyD88高于TLR2抑制剂组（P<0.05）;DHA低剂量组TLR2、MyD88高于DHA高剂量组（P<0.05）。TLR2抑制剂组、RA组、DHA低剂量组、DHA高剂量组TNF-α、IL-6水平高于对照组（P<0.05）。RA组TNF-α、IL-6水平高于TLR2抑制剂组（P<0.05）;DHA低剂量组TNF-α、IL-6水平高于DHA高剂量组（P<0.05）。结论　DHA可抑制RA患者的PBMCs中TLR2、MyD88表达和上清液中TNF-α及IL-6水平,可能与其可抑制TLR4/MyD88信号通路介导的炎性反应有关。     

湿性年龄相关性黄斑变性患者外周血单个核细胞Toll样受体3的表达及意义

目的：探索 Toll 样受体（toll-like receptors,TLRs）3/4在湿性年龄相关性黄斑变性（age-related macular degeneration,AMD）患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）的表达及其意义。方法：25例湿性AMD患者和24例正常对照纳入本研究。患者与正常对照组均不患有糖尿病、冠心病、高血压等慢性疾病或免疫性疾病及与免疫相关的疾病。采用real-time PCR 的方法检测TLR3/4的基因水平的表达,流式细胞术检测 TLR3蛋白水平的表达。TLR3特定的配体PolyI∶C刺激后,ELISA检测白介素（interleukin,IL）-6、IL-8、单核细胞趋化蛋白1（monocyte chemotactic protein 1,MCP-1）的表达。结果：在PBMCs水平,AMD组TLR3在mRNA及蛋白水平表达均显著高于正常对照组,而TLR4的mRNA水平表达在2组之间无统计学差异。与对照组PBMCs相比,AMD组PBMCs IL-6及IL-8的表达明显升高,TLR3的配体PolyI∶C刺激后,AMD组PBMCs IL-6的表达显著增多,MCP-1、IL-8的表达在2组之间无统计学差异。结论：TLR3在AMD组表达上调,活化后可促进IL-6表达增多。由此推测TLR3信号通路可能通过促进促炎性细胞因子的表达在湿性AMD的发病发展中发挥着重要作用。     

HIV-1感染者合并HBV、HCV感染情况分析

目的 分析人类免疫缺陷病毒（HIV）感染者合并乙型肝炎病毒(HBV)或/和丙型肝炎病毒(HCV）感染的情况。方法 对260例HIV感染者的HBV或/和HCV合并感染情况进行回顾性分析,对HIV单独感染者、HIV/HBV合并感染者、HIV/HCV合并感染者及HIV/HBV/HCV合并感染者的CD4+T细胞数、CD4+/CD8+细胞比值及HIV-RNA载量水平进行比较分析。结果 在260例HIV感染者中,60例为HIV/HCV合并感染（23.1%）,29例为HIV/HBV合并感染（11.2%）,8例为HIV /HBV/HCV合并感染（3.1%）;男性的HIV/HCV合并感染率显著高于女性 （P<0.01）; HIV-1/HBV和HIV-1/HCV合并感染者的CD4+/CD8+ 细胞比值均显著低于HIV单独感染者（P<0.05）;HIV-1/HCV合并感染者的CD4+细胞数显著低于HIV单独感染者（P<0.05）;三组合并感染者的HIV-RNA载量与HIV单独感染者之间差异不显著。结论 HIV/HCV合并感染率显著高于HIV/HBV合并感染率;HIV感染者合并HBV、HCV感染可能进一步加重HIV/AIDS患者的细胞免疫功能损伤,以HIV/HCV合并感染尤甚。     

白藜芦醇对外周血单个核细胞中IL-1β、IL-6、MCP-1及SOCS1/3表达的影响

目的观察白藜芦醇对体外培养的人外周血单个核细胞(PBMCs)分泌白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6),单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及对细胞因子信号抑制因子1和3(SOCS1/3)表达的影响。方法实验分5组,分别用0、3.13、6.25、12.5、25μg/mL的白藜芦醇作用于PBMCs,用实时荧光定量PCR、ELISA实验测定不同浓度白藜芦醇对PBMCs分泌IL-1β、IL-6及MCP-1的mRNA和蛋白的表达,测定SOCS1/3mRNA的表达。结果与对照组相比,应用白藜芦醇后PBMCs分泌IL-1β、IL-6及MCP-1的量减少,SOCS1/3的量增多。在蛋白水平,白藜芦醇浓度为25μg/mL时,IL-1β及IL-6表达明显减少(P<0.05),尤其浓度为6.25μg/mL到25μg/mL时,MCP-1的表达明显减少(P<0.05)。在mRNA水平,各组的IL-1β、IL-6及MCP-1表达均明显降低(P<0.05),而SOCS1/3表达均明显增高(P<0.05)。结论白藜芦醇在剂量依赖性抑制PBMCs促炎性细胞因子IL-1β、IL-6及MCP-1产生的同时,还可以促进免疫负调控分子SOCS1/3的mRNA表达,这可能是白藜芦醇的抗炎作用及作用机制之一。     

miR-383增强SLE患者外周血单个核细胞Foxp3mRNA的表达

目的初步探讨microRNA-383（miR-383）对IL-2信号介导的系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中Foxp3mRNA转录的影响。方法采用Westernblot方法检测14例SLE患者PBMCs中SOCS3蛋白表达水平,通过相关microRNA软件预测和Westernblot鉴定靶向SOCS3的microRNA,RT—PCR方法检测miR-383转染SLE患者的PBMCs中转录因子Foxp3mRNA的转录水平。结果Westernblot结果发现,SLE患者的PBMCs中SOCS3蛋白表达水平显著增加,miR-383抑制SOCS3蛋白表达。SLE患者PBMCs转染miR-383后Foxp3mRNA的转录水平显著增高。结论miR-383靶向抑制SOCS3,上调IL-2信号介导的SLE患者的PBMCs中Foxp3mRNA的转录水平。     

呼吸道合胞病毒感染通过上调细胞因子信号抑制因子调节Ⅰ/Ⅱ型细胞因子的表达

目的:研究呼吸道合胞病毒(RSV)对细胞因子信号抑制因子(SOCS)3,Toll样受体(TLR)3、TLR4 mR-NA表达影响,探讨SOCS3在病毒感染上皮细胞后对Ⅰ/Ⅱ型细胞因子的调节效应。方法:设计人SOCS3特异小干扰RNA(si-RNA),转染上皮细胞A549,RSV感染后不同时段,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测细胞不同时间点细胞SOCS3、TLR3、4 mRNA的表达,ELISA法检测培养上清中干扰素(IFN)-β和白细胞介素(IL)-8的浓度。结果:RSV感染上调A549细胞TLR3、4和SOCS3 mRNA的表达。SOCS3在感染后1 h升高,2 h达到峰值,分别为0 min的2.1倍和6.2倍(P<0.05),随后逐渐恢复至基础水平;TLR3、4在感染后2 h增加,并在24 h内持续表达较高水平。IL-8于24 h开始增高,24 h较基础水平增加25倍;IFN-β虽增高,但与基础水平无统计学差异。抑制SOCS3,对TLR3、TLR4 mRNA无显著性影响,但早期上调IFN-β的表达,IL-8虽有增高,但显著低于对照组。结论:RSV感染早期通过上调SOCS3表达调节上皮细胞差异表达Ⅰ/Ⅱ型细胞因子。     

穿心莲内酯通过下调miR-342-3p抑制结核分枝杆菌感染的巨噬细胞焦亡

【目的】探讨穿心莲内酯（Andro）是否通过下调miR-342-3p抑制结核分枝杆菌（Mtb）感染的巨噬细胞焦亡。【方法】构建Mtb H37Ra感染的小鼠RAW264.7巨噬细胞模型。实验分5组：Control组（对照组）为未作处理的巨噬细胞；Mtb组为经Mtb感染的巨噬细胞；Mtb+Andro组为巨噬细胞经Mtb感染后，给予Andro处理；Mtb+Andro+miR-NC组或Andro+Mtb+miR-342-3p组为巨噬细胞经Mtb和Andro联合处理后，分别转染miR-NC或miR-342-3p mimic。各组处理后，利用细胞流式术分析细胞凋亡，乳酸脱氢酶（LDH）释放试验检测LDH活性，酶联免疫吸附法（ELISA）测定细胞焦亡相关的炎性因子白细胞介素（IL）-6和IL-18含量，荧光实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）法测定miR-342-3p表达，Western Blot法检测GSDMD、Caspase-1、核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素氧化酶1(HO-1)蛋白表达。【结果】与Control组比较，Mtb组和Mtb+Andro组的细胞凋亡率，LDH活力，IL-6...     

白藜芦醇对外周血单个核细胞中IL-1β、IL-6、MCP-1及SOCSl/3表达的影响

目的 观察白藜芦醇对体外培养的人外周血单个核细胞(PBMCs)分泌白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6),单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及对细胞因子信号抑制因子1和3(SOCS 1/3)表达的影响.方法 实验分5组,分别用0、3.13、6.25、12.5、25μg/mL的白藜芦醇作用于PBMCs,用实时荧光定量PCR、ELISA实验测定不同浓度白藜芦醇对PBMCs分泌IL-1β、IL-6及MCP-1的mRNA和蛋白的表达,测定SOCS1/3mRNA的表达.结果 与对照组相比,应用白藜芦醇后PBMCs分泌IL-1β、IL-6及MCP-1的量减少,SOCS1/3的量增多.在蛋白水平,白藜芦醇浓度为25 μg/mL时,IL-1β及IL-6表达明显减少(P＜0.05),尤其浓度为6.25 μg/mL到25 μg/mL时,MCP-1的表达明显减少(P＜0.05).在mRNA水平,各组的IL-1β、IL-6及MCP-1表达均明显降低(P＜0.05),而SOCS1/3表达均明显增高(P＜0.05).结论 白藜芦醇在剂量依赖性抑制PBMCs促炎性细胞因子IL-1β、IL-6及MCP-1产生的同时,还可以促进免疫负调控分子SOCS1/3的mRNA表达,这可能是白藜芦醇的抗炎作用及作用机制之一.     

呼吸道合胞病毒激活RIG-Ⅰ/TLR3信号通路及对SOCS1/3 mRNA表达的影响

目的:探讨视黄酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)和Toll样受体3(TLR3)两受体在呼吸道合胞病毒(RSV)感染A549细胞后诱导的炎症和抗病毒反应中的作用。方法:应用Real-timePCR方法检测RSV感染A549细胞后0,2,4,8,24hRIG-Ⅰ,TLR3及细胞因子信号转导抑制因子1/3(SOCS1/3)的mRNA的表达水平;用特异性的si-RNA分别抑制RIG-Ⅰ和TLR3两个受体基因的表达,应用Real-timePCR方法检测RSV感染抑制后的A549细胞不同时间点SOCS1/3的mRNA的表达水平。结果:RSV上调RIG-Ⅰ/TLR3两受体及SOCS1/3mRNA的表达(P<0.05);抑制RIG-Ⅰ及TLR3后,SOCS1/3mRNA的表达与对照组相比无差异性(P>0.05)。结论:RSV感染A549细胞后上调负性调节因子SOCS1/3的表达,其表达不依赖RIG-Ⅰ及TLR3受体途径,可能由病毒复制直接诱导。     

呼吸道合胞病毒对上皮细胞TLR3/4和SOCS1/3表达的影响

目的:探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染上皮细胞中抗病毒信号激活以及细胞因子负调节系统对细胞因子分泌的影响。方法:应用ELISA法检测RSV感染人喉癌上皮细胞(Hep2)培养上清中0,1,2,4,8,12,24 h干扰素α(IFNα-)的浓度;RT-PCR检测病毒感染后各时段上皮细胞内细胞因子信号传导抑制因子(SOCS)1,3和Toll样受体(TLR)3,4的mRNA表达水平。结果:RSV感染上调Hep2细胞SOCS3 mRNA的表达(P<0.05),SOCS1的表达先增高后减低,但无统计学意义;TLR3,TLR4 mRNA的表达增高表现为时间依赖性(P<0.05);IFNβ-的表达在RSV感染后短暂升高而后迅速降低并低于基础表达量(P<0.05)。结论:RSV感染Hep2细胞后上调TLR3,TLR4和SOCS3 mRNA的表达,抑制IFN-α的分泌,提示病毒复制可能通过上调SOCS3而拮抗TLR途径激活的宿主抗病毒免疫应答。     

早期显性梅毒患者外周血单个核细胞Toll样受体2mRNA表达的研究

目的研究早期显性梅毒患者外周血单个核细胞（PBMCs）Toll样受体2（TLR2）mRNA的表达情况,探讨其在梅毒发病机制中的作用。方法采用实时定量PCR方法检测30例显性梅毒患者外周血PBMCs中TLR2mRNA的表达水平,并与20例正常人作对照。结果早期显性梅毒患者外周血PBMCs中qZR2mRNA的表达水平升高,与正常对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．001）;早期显性梅毒患者外周血PBMCs中IZR2mRNA的表达水平与血清RPR滴度不存在相关关系（P〉0．05）。结论TLR2可能参与了免疫细胞对梅毒螺旋体的识别和信号转导,TLR2的表达水平升高提示梅毒患者可能存在细胞免疫功能失调和细胞免疫功能抑制。     

基于TLR4/NF-κB/NLRP3通路探讨参芪调肾方改善CSE诱导小鼠肺泡巨噬细胞炎症反应的作用机制

目的：基于TLR4/NF-κB/NLRP3通路探讨参芪调肾方（SQTS）改善香烟烟雾提取物（Cigarette smoking extract, CSE）诱导小鼠肺泡巨噬细胞（MH-S）炎症反应的作用机制。方法：以MH-S细胞为研究对象，通过CCK-8法分析SQTS对MH-S细胞的安全性及药效浓度；随后MH-S分为空白组、模型组（8%CSE）和SQTS低、中、高剂量组（40、80、160 mg/L）。ELISA检测细胞上清TNF-α、IL-1β和IL-6含量；DCFH-DA荧光探针法检测细胞中ROS水平；Westernblot检测TLR4/NF-κB/NLRP3通路蛋白的表达，使用TLR4抑制剂TAK-242验证SQTS在TLR4/NF-κB/NLRP3通路上的作用。结果：与空白组比较，CSE组细胞活力降低，炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量增加（P<0.05）,ROS荧光表达水平显著升高（P<0.01）,TLR4/NF-κB/NLRP3通路蛋白表达明显增加（P<0.05）；与模型组比较，参芪调肾方各剂量组细胞活力升高，以上各指标表达水平均有所降低（P&l...     

白头翁汤正丁醇提取物对白念珠菌作用下Caco- 2细胞中细胞因子、防御素及Toll样受体表达的影响

目的 从细胞因子、人β- 防御素（human beta defensin,HBD）及Toll样受体（toll- like receptors,TLRs）途径探究白头翁汤正丁醇提取物（butyl alcohol extract of Baitouweng Decoction,BAEB）抗白念珠菌的机制。方法 以Caco- 2细胞为实验模型,先以BAEB作用Caco- 2细胞24 h,再加入热灭活的白念珠菌SC5314孢子(Candida albicans,C.A)共培养24 h,以MTT法测定Caco- 2细胞存活率;采用酶联免疫吸附试验检测Caco- 2细胞上清液白细胞介素- 6（interleukin- 6, IL- 6）、IL- 8、IL- 1β、HBD- 2、HBD- 3水平;采用普通PCR法检测Caco- 2细胞TLR1、TLR2、TLR4、TLR5 mRNA的表达水平。结果 与对照组比较,C.A单独作用的Caco- 2细胞中IL- 6、IL- 8、IL- 1β、HBD- 2、HBD- 3表达水平显著升高（P<0.05）,TLR1、TLR2、TLR4、TLR5 mRNA表达水平显著上调（P<0.05）;与C.A单独作用相比,BAEB预保护Caco- 2细胞后,Caco- 2细胞中IL- 6、IL- 8、IL- 1β及HBD- 2、HBD- 3表达水平明显降低（P<0.05）,TLR1、TLR2、TLR4、TLR5 mRNA表达水平也显著下调（P<0.05）,BAEB高剂量的效应最明显。结论 BAEB抗白念珠菌的机制与下调细胞因子、HBD及TLRs表达有关。     

Toll样受体2、9mRNA在感染性早产患者外周血单个核细胞的表达及意义

目的探讨感染性早产患者外周血单个核细胞Toll样受体2、9mRNA的表达。方法收集31例早产患者部分胎盘胎膜组织行病理检查,根据病检分为早产感染组(17例)和早产非感染组(14例),门诊进行孕检的正常孕妇作为正常对照组(10例)。(1)采用酶联免疫吸附法测定血清中的IL-6水平;(2)应用实时定量PCR技术检测早产患者和正常对照组孕妇外周血单个核细胞TLR2、9的mRNA表达水平。结果（1）TLR2mRNA在早产感染组患者外周血单个核细胞的表达水平显著高于早产非感染组和正常对照组（P＜0.05）;而TLR9mRNA在早产感染组、早产非感染组和正常对照组外周血单个核细胞的表达水平无差异(P＞0.05);（2）早产感染组患者血清中IL-6水平明显高于早产非感染组和正常对照组,差异有显著性（P＜0.05）,但早产非感染组和正常对照组血清中IL-6水平比较,差异无显著性(P＞0.05);（3）感染性早产患者外周血TLR2mRNA的表达水平与血清中IL-6水平呈正相关(r=0.778, P<0.01）而TLR9mRNA的表达与IL-6不存在相关关系(r=0.0355,P=0.162)。结论感染性早产患者外周血单个核细胞表面TLR2mRNA表达增强,提示TLR2参与了感染性早产的发生发展过程,其与血清中IL-6水平成正相关,可作为早期预测早产宫内感染的指标。     

副干酪乳酸杆菌通过诱导负调控因子抑制单核巨噬细胞对脂多糖刺激的炎性细胞因子应答

目的:探讨副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracacei,L.para)预刺激抑制脂多糖(Lipopolysacchride,LPS)诱导的炎性细胞因子释放的调节机制?方法:用佛波酯诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞样细胞;以L.para预刺激为实验组,小剂量LPS(10 ng/ml)预刺激和TLR2激动剂Pam3CSK4预刺激为对照组,预刺激24 h后,再用LPS大剂量(1 ?滋g/ml)刺激经分化的THP-1细胞;检测预刺激对TLR信号通路负调控因子A20?SOCS1?SOCS3?IRAK3的表达水平,对TLR4和CD14的膜表达水平和mRNA水平,以及对大剂量LPS诱导的炎性细胞因子IL-1β?TNF-α水平的影响?各目的蛋白mRNA水平检测采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法,TLR4和CD14的膜表达检测采用流式细胞术?结果:L.para等预刺激能够降低LPS诱导的IL-1β?TNF-α表达水平;并能够上调细胞TLR信号途径负调控因子A20?SOCS1?SOCS3?IRAK3的mRNA水平,但不影响细胞膜的TLR4和CD14阳性百分率;IRAK1/4抑制剂能够减弱预刺激诱导的负调控因子表达水平,并减弱预刺激对LPS诱导炎症因子释放的抑制作用?结论:副干酪乳酸杆菌预刺激能够通过上调TLR信号通路负调控因子A20?SOCS1?SOCS3?IRAK3等的表达抑制单核巨噬细胞对LPS刺激的炎性细胞因子的释放?     

血浆IL-6、IL-2、IL-21在HIV-1感染病程进展的特征性分析

目的 研究3种血浆细胞因子白介素-6(interleukin 6,IL-6),白介素-2(interleukin 2,IL-2)和白介素-21(interleukin 21,IL-21)在人类免疫缺陷病毒1型(Human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)感染者和正常人血浆表达水平及其在HIV-1感染病程进展中的相关性。方法 收集2017年1月至2019年9月未经抗病毒治疗(anti-retroviral therapy, ART)的HIV-1感染者27例(HIV组);ART后血浆病毒载量低于检测限,CD4>350cells/μl者22例(HIVⅠ组);ART后血浆病毒载量>1 000copies/ml, CD4<350cells/μl者31例(HIVⅡ组),另选30例健康体检者为对照组。采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测3种细胞因子水平,流式细胞术检测CD4细胞数量,实时聚合酶链法测定血浆病毒载量。结果 HIV-1感染者血浆IL-6水平显著高于对照组,IL...     

软脂酸增加血管内皮细胞Toll样受体4表达及活化TLR4炎症信号通路

目的研究饱和脂肪酸软脂酸对血管内皮细胞Toll样受体4（TLR4）表达及信号转导的影响。方法采用软脂酸处理猪髋
动脉内皮细胞（PIECs）,实时荧光定量PCR检测PIECs TLR4 mRNA表达,蛋白印迹法检测PIECs TLR4及IκBα蛋白表达,流式
细胞仪检测PIECs细胞表面TLR4蛋白水平,酶联免疫吸附测定法检测细胞培养液TNF-α及IL-6水平。结果与对照组比较,
软脂酸组PIECs TLR4 mRNA及蛋白表达显著升高（TLR4 mRNA：4.73±0.61 vs 1.25±0.90,P<0.05;TLR4 蛋白：5.79±0.05 vs
4.07±0.31,P<0.05）,PIECs细胞表面TLR4蛋白水平显著增加（38.070±3.907 vs 29.390±1.072,P<0.05）;软脂酸组PIECs IκBα蛋
白表达显著降低（2.04±0.22 vs 3.98±0.18,P<0.05）,细胞培养液TNF-α及IL-6水平显著升高（TNF-α：2.52±0.30 vs 1.38±0.26,P<
0.05;IL-6：3.28±0.32 vs 1.44±0.28,P<0.05）。结论软脂酸在诱导血管内皮细胞TLR4表达的同时活化TLR4炎症信号通路。
     

Toll样受体在介导危重型手足口病炎性反应中的作用

【摘要】 目的 研究Toll样受体在介导危重型手足口病（HFMD）炎性反应中的作用。方法 选择2016年07月~2017年03月收治的47例危重型手足口病患儿（危重型组）为研究对象，另选取同期感染科收治30例普通型HFMD作为疾病对照组，门诊健康体检30例儿童为健康对照组，采集外周静脉血，分离单个核细胞（PBMCs），测定TLR2、3、4、7、8、9水平及血清TNF α、IFN γ、IL 6水平。结果 三组受试者PBMCs中TLR3、TLR4、TLR7和TLR8 mRNA表达水平差异有统计学意义（P<005），TLR2和TLR9 mRNA表达水平差异无统计学意义（P＞005）。其中危重型手足口病组PBMCs中TLR3、TLR4、TLR7和TLR8 mRNA表达水平显著高于其他两组，健康对照组最低（P<005）。三组受试者血清中TNF α、IFN γ、IL 6表达水平有显著性差异；危重型手足口病患儿血清中TNF α、IFN γ、IL 6表达水平显著高于其他两组，健康对照组最低（P<005）。Pearson相关性分析显示，PBMCs中TLR3、TLR4、TLR7和TLR8 mRNA水平与血清中TNF α、IFN γ、IL 6水平呈正相关（P<005）。结论 危重型手足口病TLR3、TLR4、TLR7和TLR8表达明显增高，进而激活相关信号通路，介导机体的炎性反应。     

肽聚葡糖对多发性骨髓瘤U266细胞株增殖的影响

目的研究浆细胞异常增生的多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）细胞在受到肽聚葡糖（peptidoglycan,PGN）刺激后对细胞增殖的影响。方法利用荧光定量聚合酶链反应（PCR）分析MM U266细胞株TLR2、IL-1β、IL-8、NF-κB、Stat3和TNF蛋白的mRNA水平,与23名正常人单个核细胞（peripheral bloodmononuclear cells,PBMCs）mRNA比较。20μg/ml PGN与U266细胞共培养,分析TLR2和NF-κB蛋白mRNA的变化情况。Western印迹法检测该药对U266细胞NF-κB蛋白的影响。MTT、流式细胞术检测PGN刺激U266后增殖情况。结果与PBMCs相比,TLR2、IL-8、TNF在U266中表达显著降低,而NF-κB表达增加（P〈0.05）。经PGN作用后,TLR2、NF-κB mRNA表达均增加,Western印迹法检测NF-κB蛋白表达明显增多。MTTT及细胞周期检测发现,PGN可使细胞由G_0/G_1期向前推进,促进细胞有丝分裂及增殖。结论PGN可能通过激活NF-κB通路促进U266增殖。