甜菜碱调控RhoA/ROCK信号通路抑制大鼠急性心肌缺血损伤

目的探讨从枸杞中分离得到的甜菜碱对异丙肾上腺素(ISO)诱导的大鼠急性心肌缺血损伤的保护作用机制。方法大鼠分别灌胃给予不同剂量甜菜碱(100、200和400 mg/kg)共40 d,于第39天和第40天皮下注射ISO85 mg/(kg·d)诱发大鼠急性心肌缺血。取大鼠心肌组织进行病理学观察,ELISA法测定血清TGF-β1与ET-1的水平,并采用Western-blot法测定相关蛋白的表达。结果与模型组比较,甜菜碱(100、200和400 mg/kg)明显改善心肌组织坏死,炎细胞浸润及间质水肿。甜菜碱(100、200、400 mg/kg)可明显降低血清TGF-β1及ET-1的水平(P0.01),抑制心肌组织Rho A、ROCK1、ROCK2蛋白表达的升高(P0.01)。结论甜菜碱可通过调控Rho A/ROCK信号通路保护ISO诱导的大鼠急性心肌缺血损伤。     

针刺人迎穴对自发性高血压大鼠血压、内皮素及一氧化氮的影响

目的:研究针刺人迎穴对自发性高血压大鼠(SHR)血压的影响,并通过内皮素(ET)、一氧化氮(NO)水平以探讨其内在机制。方法:选16周龄、雄性、体重220~270 g的SHR 30只,东京威斯特大鼠(WKY)10只作为对照。将SHR随机分为3组,即空白对照组、卡托普利组、人迎组,每组10只。WKY组、空白对照组大鼠予相同抓取,卡托普利组给予灌胃,人迎组针刺双侧人迎穴。实验时间每周连续5天,每天1次,休息2天,共4周。在首日、1~4周的每周第5天干预前、干预后1 h、干预后6 h,用日本软隆BP98A小动物无创血压仪采集鼠尾收缩压(SBP)血压数据。4周后,取血测定ET、NO含量。结果:与空白组比较,卡托组的1周、2周、4周的干预前SHR参数降低(P0.05),人迎组的2周、4周的SHR参数降低(P0.05);与空白组比较,卡托组的1周、2周、3周、4周的干预后1 h SHR参数降低(P0.05),人迎组的首日、1周、2周、3周的SHR参数降低(P0.05);与空白组比较,卡托组的2周、3周的干预后6 h SHR参数降低(P0.05);与卡托组比较,人迎组干预前、干预后1 h、干预后6 h SBP参数的差异(P﹥0.05),无显著性意义。与空白组比较,卡托组、人迎组的NO参数升高(P0.05);与卡托组比较,人迎组ET差异无显著性意义(P﹥0.05)。结论:针刺人迎穴在一定程度上能降低血压,其降压效果与卡托普利相当。针刺人迎穴降压机制之一,是通过升高NO、降低ET参数对血压进行良性调节。     

针刺太冲穴、人迎穴对自发性高血压大鼠降压效果比较

目的:探讨针刺太冲穴、人迎穴对自发性高血压(SHR)大鼠降压效果的差异.方法:6只Wistar大鼠为对照组,24只SHR大鼠随机分为模型组、太冲组、人迎组和非穴组,每组6只.每天固定时间针刺治疗1次,共14d.采用无创尾动脉血压测量技术检测血压.结果:与对照组比较,模型组大鼠同期收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、平均...     

针刺足三里通过调控ROCK1/AKT信号通路防治脓毒症致肌萎缩的作用机制

目的 探讨针刺足三里通过Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK1)/蛋白激酶B(AKT)信号通路防治脓毒症后肌萎缩的作用及机制。方法 8周龄SPF级雄性小鼠45只,随机分为3组,分别为对照(Sham)组、脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)组、针刺(LPS+acupuncture)组,其中LPS组和针刺组分别给予腹腔注射LPS诱导脓毒症模型,对照组腹腔注射等体积生理盐水。苏木素-依红染色法检测小鼠肌肉组织结构变化;酶联免疫吸附剂测定法(Enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)测定促炎因子白细胞介素1β(Interleukin1β,IL-1β)、白细胞介素(Interleukin 6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α),抗炎因子白细胞介素10(Interleukin 10,IL-10)、转化生长因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-β),以及骨骼肌损伤相关指标肌红蛋白(Myoglobin, MYO)、肌酸激酶MB同工酶(Creat...     

针刺“人迎”穴对自发性高血压大鼠下丘脑基因表达的影响

目的探讨针刺人迎穴治疗高血压病的可能作用机制。方法将20只自发性高血压大鼠(SHR)随机分为人迎组和模型组,每组10只。10只WKY大鼠作为空白组。人迎组每天针刺大鼠"人迎"穴20 min,每6天休息1天,共28天;模型组和空白组不做任何干预。于针刺干预第1、5、9、13、17、21、25和28天测量血压,实验结束后取材下丘脑进行基因芯片分析,并采用PCR技术检测关键基因5-羟色胺1A受体(5-HT1A)与胱硫醚β合成酶(CBS)mRNA表达。结果与空白组比较,模型组大鼠收缩压在第1、5、9、13、17、21、25、28天升高(P<0.01);与模型组比较,人迎组在第5,9,13,21,25,28天收缩压降低(P<0.05或P<0.01)。与本组前一观察点比较,模型组第21、25、28天血压均升高,人迎组仅第21天血压升高(P<0.05)。与空白组比较,模型组129个基因上调,243个基因下调(P<0.05);与模型组比较,人迎组167个基因上调,188个基因下调(P<0.05)。与空白组比较,模型组5-HT1A mRNA、CBS mRNA表达下降(P<0.01);与模型组比较,人迎组5-HT1A mRNA、CBS mRNA表达升高(P<0.01)。结论针刺"人迎"穴对于降低SHR血压有效,影响下丘脑的基因表达如促进神经递质和交感神经的兴奋性等可能是其作用机制。     

温针内、外膝眼穴对膝骨性关节炎大鼠RhoA/ROCK信号通路的影响

目的:探讨温针内、外膝眼穴对膝骨性关节炎大鼠RhoA/ROCK信号通路上关键因子的影响,进一步明确温针的作用靶点,为临床中使用温针治疗KOA提供分子理论依据。方法:将24只SPF级雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组与温针组,每组各8只。采用木瓜蛋白酶法复制膝骨性关节炎模型;空白组与模型组同等抓取固定,温针组采用温针治疗;期间观察大鼠的一般情况。HE染色法观察膝关节软骨组织形态学变化,实时荧光定量PCR法(q-PCR)检测大鼠膝关节软骨组织内RhoA、ROCK与ERK1/2的基因表达。结果:空白组大鼠软骨组织四层结构规整清晰,基质染色均匀,未见异常。与空白组相比,模型组大鼠膝关节软骨表层可见局部缺损,软骨细胞排列紊乱,基质染色变浅,RhoA mRNA、ROCK mRNA及ERK2 mRNA的表达均明显上调,差异具有统计学意义(P<0.01),ERK1 mRNA表达变化未见明显差异(P>0.05)。温针组软骨组织形态总体优于模型组,ROCK mRNA的含量相较于模型组显著下降(P<0.01),其余指标两组间统计学差异不显著(P>0.05)。结论:本研究结果表明Rho...     

一贯煎联合骨髓间充质干细胞调控RhoA/ROCK1通路抑制大鼠肝纤维化的实验研究

目的：探究一贯煎联合骨髓间充质干细胞在治疗肝纤维化过程中对RhoA/ROCK1通路的作用。方法：将72只SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、秋水仙碱组、一贯煎高剂量组、一贯煎中剂量组、一贯煎低剂量组、干细胞组、一贯煎+干细胞组;四氯化碳腹腔注射6周制备肝纤维化动物模型,干预4周后取材。记录大鼠阴虚表征情况;检测血清谷丙转氨酶（GPT）、谷草转氨酶（GOT）含量;HE、Masson染色观察病理改变;实时PCR、蛋白质印迹法检测肝组织中RhoA、Rho相关激酶1（ROCK1）、α-SMA和COL-1 mRNA及蛋白表达;IHC检测α-SMA、COL-1阳性面积。结果：与正常对照组比较,模型对照组大鼠具有明显阴虚表征,肝脏出现明显炎症浸润和纤维增生,肝组织RhoA、ROCK1、α-SMA、胶原蛋白-1(COL-1)mRNA与蛋白表达显著升高（P<0.05）,α-SMA、COL-1阳性面积显著增加（P<0.05）;与模型对照组比较,一贯煎高剂量组、一贯煎中剂量组、一贯煎低剂量组、骨髓干细胞、一贯煎+干细胞组大鼠的阴虚表征、肝脏炎症和纤维化程度减轻,RhoA、ROCK1、α-SMA和COL-1 mRNA与蛋白表达显著降低（P<0.05）,α-SMA、COL-1阳性面积显著减少（P<0.05）,其中一贯煎+干细胞组较一贯煎中剂量组、干细胞组效果更优（P<0.05）。结论：一贯煎与骨髓干细胞可通过调控RhoA/ROCK1通路抑制肝星状细胞活化从而发挥抗纤维化的作用,二者协同作用效果优于各自单独作用效果。     

香砂六君子汤调控RhoA/ROCK2/MYPT1信号通路改善功能性消化不良大鼠胃动力的机制

目的：基于RAS同源基因家族成员A(RhoA)/Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶2(ROCK2)/肌球蛋白轻链磷酸酶靶向亚基1(MYPT1)信号通路探讨香砂六君子汤对功能性消化不良(FD)大鼠胃动力障碍的干预机制。方法：将60只SPF级雄性SD乳鼠随机分为正常组(n=10)和造模组(n=50),造模组大鼠采用综合造模法复制FD大鼠模型。模型复制成功后将造模组大鼠随机分为模型组、莫沙必利组和香砂六君子汤高、中、低剂量组,共5组,每组10只。正常组和模型组大鼠给予10 mL·kg^-1·d^-1生理盐水灌胃,莫沙必利组给予1.35 mg·kg^-1·d^-1莫沙必利灌胃,香砂六君子汤高、中、低剂量组分别给予12、6、3 g·kg^-1·d^-1香砂六君子汤汤剂灌胃,持续干预14 d。造模和给药前后观察大鼠一般生存状况,测定大鼠体质量、3 h平均进食量。给药干预结束后,测定大鼠肠推进率,采用苏木素-伊红(HE)染色观察胃组织病理改变,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定各组大...     

蟾毒灵联合索拉非尼通过RhoA/ROCK/HIF1α通路抑制肝癌HepG2细胞增殖、迁移及侵袭的机制

目的 观察蟾毒灵联合索拉非尼对肝癌HepG2细胞增殖、迁移及侵袭能力的干预作用及对Ras同源基因蛋白A(RhoA)/含Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)/缺氧诱导因子1α(HIF1α)通路相关蛋白表达的影响。方法 取对数生长期的肝癌HepG2细胞,分别加入蟾毒灵、索拉非尼单药或联合处理24 h, CCK-8方法检测细胞增殖情况,明确后续实验药物干预浓度;将肝癌HepG2细胞分为空白对照组、蟾毒灵组、索拉非尼组、蟾毒灵联合索拉非尼组,空白对照组不进行任何处理,其余组加入相应药物培养24 h,观察肝癌HepG2细胞增殖、迁移及侵袭情况,Western blot法检测RhoA/ROCK/HIF1α通路相关蛋白表达情况。结果 蟾毒灵、索拉非尼均可抑制肝癌HepG2细胞增殖,选择蟾毒灵4μg/mL、索拉非尼20μmol/L为后续实验干预浓度。各药物组肝癌HepG2细胞的迁移与侵袭率和索拉非尼组、蟾毒灵联合索拉非尼组肝癌HepG2细胞中RhoA、ROCK1、ROCK2、HIF1α蛋白相对表达量均明显低于空白对照组(P均<0.05),且蟾毒灵联合索拉非尼组肝癌HepG2细胞的迁移与侵袭率和...     

针刺人迎穴的降压作用研究概况

人迎穴被医务工作者应用于治疗心脑血管、内分泌系统、神经系统等疾病。从天津中医药大学第一附属医院以人迎穴为主穴的方法治疗高血压病的临床相关研究,以及人迎穴的降压机理研究等方面考证相关文献,并证明其对于高血压病的治疗确实起到了良好的作用与效果。     

Effect of acupuncture at Renying(ST 9) on gene expression profile of hypothalamus in spontaneously hypertensive rats

OBJECTIVE: To investigate changes in gene expression profiles in the hypothalamus related to the effects of acupuncture at the Renying(ST 9) acupoint in spontaneously hypertensive(SH) rats.METHODS: We randomly divided 18 SH rats into Renying(ST 9) group and model control group, 9 body weight-matched Wistar-Kyoto rats were used as blank controls. Acupuncture was performed manually for 20-min daily over 28 d in the Renying(ST 9) group. Rat Gene 2.0 array technology was used for the determination of gene expression profiles and the screened key genes were verified by real-time quantitative polymerase chain reaction(RT-PCR) analyses.RESULTS: The different groups exhibited differential gene expression: compared with the blank control group, 48 genes were up-regulated and 91 genes were down-regulated in the model group;compared with the model group, 79 genes were up-regulated and 80 genes were down-regulated in Renying(ST 9) group. The RT-PCR results of the key genes including Chi3 l1, Ephx2, Klk1, 5-HT1 A and Cbs were consistent with that of gene chip analysis.CONCLUTION: Acupuncture at Renying(ST 9)could significantly lower the blood pressure of SH rats and affect their hypothalamic gene expression profile. Genes associated with the contraction of vascular smooth muscle and the regulation of inflammation, neurotransmitters may be involved in acupuncture's antihypertensive mechanism.     

针刺对自发性高血压大鼠血压的影响及其抗氧化应激机制研究

[目的]观察针刺人迎穴对自发性高血压大鼠(SHR)血压的影响以及体内活性氧(ROS)和一氧化氮(NO)/内皮型一氧化氮合酶(e NOS)的变化,探讨针刺降压的抗氧化应激机制。[方法]将SHR随机分为针刺组、模型组,以京都Wistar大鼠(WKY)作为血压正常的对照组。针刺组取双侧人迎穴,施以捻转手法,捻转频率为每分钟120~160次,行针1 min,每日针刺1次;模型组和正常组进行与针刺组相同时间、相同程度的捉抓。每天针刺前后测量收缩压和舒张压。针刺4周后,取胸主动脉,用酶联免疫法检测ROS含量,硝酸还原酶法检测NO含量,蛋白印迹法检测e NOS蛋白表达。[结果]针刺4周后SHR收缩压和舒张压均较针刺前降低,均低于模型组,其中以收缩压降低更为明显。SHR胸主动脉的ROS含量高于WKY,而NO含量和e NOS蛋白表达低于WKY(P0.05),针刺后ROS含量明显降低,而NO含量明显升高(P0.05),e NOS蛋白表达亦有升高趋势。[结论]针刺可降低SHR血压,其机制可能与降低ROS和提高NO/e NOS含量,从而提高机体抗氧化能力有关。     

基于RhoA/ROCK-1通路研究针刺干预SHR脑保护作用机制

[目的]明确自发性高血压大鼠(SHR)脑损害与RhoA、ROCK-1的相关性,探讨针刺干预SHR脑保护的Rho通路机制。[方法]将SHR随机分为模型对照组、太冲穴组,WKY大鼠设为正常对照组。太冲穴组针刺干预4周,其余两组在干预期内给予相同程度、相同时长的抓取。观测各组大鼠收缩压、舒张压、平均动脉压的改变;苏木精-伊红(HE)染色观察脑组织形态学改变;蛋白免疫印迹(Western blot)法测定各组大鼠脑组织中RhoA、ROCK-1的表达水平。[结果]在干预周期内,正常对照组收缩压、舒张压、平均压均处于正常血压范围内。与正常对照组比较,模型对照组收缩压、舒张压、平均压均较高,且有随着周龄增加而增高的趋势。与模型对照组相比,太冲穴组可有效降低收缩压,有降低舒张压、平均压的趋势。模型对照组较正常对照组脑组织细胞排列紊乱,细胞坏死及间质水肿程度加重,RhoA、ROCK-1表达升高;太冲穴组与模型对照组比较,脑细胞排列规则,细胞坏死及间质水肿消失,RhoA、ROCK-1表达下降。[结论]针刺太冲穴能有效降低SHR血压,改善脑损害,其机制可能与抑制RhoA/ROCK-1信号通路表达相关。     

桃叶珊瑚苷调节RhoA/ROCK信号通路对胶质母细胞瘤细胞活力和上皮间质转化的影响

[目的] 研究桃叶珊瑚苷（AU）对胶质母细胞瘤（GBM）细胞活力和上皮间质转化（EMT）的影响,并对其作用机制进行探讨。[方法] 将U87细胞随机分为对照组、AU低浓度组、AU中浓度组、AU高浓度组、Y-27632组、AU高浓度+Y-27632组。细胞计数器试剂盒（CCK-8）法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭,蛋白免疫印迹法（WesternBlot）检测基质金属蛋白酶（MMP）2、MMP9、波形蛋白（Vimentin）、上皮钙黏蛋白（E-cadherin）、神经钙黏蛋白（N-cadherin）、Ras同源基因家族成员A（RhoA）、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶（ROCK）1、ROCK2表达。构建GBM裸鼠模型,随机分为裸鼠对照组、AU组、Y-27632组、AU+Y-27632组,测量肿瘤质量与体积,免疫组化法检测移植瘤组织RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达。[结果] GBM细胞活力随着AU浓度的升高而逐渐降低（P<0.05）,选择U87作为后续实验细胞,选择10、25、50μmol/L浓度作为AU后续实验浓度。与对照组比较,AU低、中、高浓度组和Y-27632组细胞活力、迁移和侵袭细胞数、MMP2、MMP9、N-cadherin、Vimentin、RhoA、ROCK1、ROCK2表达显著下降,凋亡率、E-cadherin表达显著升高（P<0.05）,其中高浓度AU和Y-27632组共同处理的细胞变化更显著（P<0.05）。AU和Y-27632均能抑制移植瘤质量和体积,降低RhoA/ROCK信号通路蛋白表达（P<0.05）。[结论] AU能抑制GBM细胞活力、迁移侵袭和EMT,促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制RhoA/ROCK信号通路有关。     

Effects of osthol on blood pressure and lipid metabolism in stroke-prone spontaneously hypertensive rats

Osthol, a coumarin compound, was isolated from the dried fruits of Cnidium monnieri (Umbelliferae) and the effect of dietary osthol on hypertension and lipid metabolism was examined in stroke-prone spontaneously hypertensive rats (SHRSP). Six-week-old male SHRSP were fed the experimental diet containing 0.05% osthol by weight for 4 weeks with free access to the diet and water. Elevation of systolic blood pressure was significantly suppressed on and after 3 weeks. In addition, significant decreases in cholesterol and triglyceride contents in the liver were recognized without any significant changes in serum lipids profiles. A comparative study on hepatic mRNA expression indicated that osthol induced a significant increase in 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzymeA (HMG-CoA) reductase mRNA expression, which may lead to decrease in hepatic cholesterol pool through inhibition of the enzyme activity. Moreover, osthol induced a significant increase in acyl-CoA oxidase mRNA expression associated with an increase in carnitine palmitoyl transferase 1a mRNA expression, which suggests the acceleration of beta-oxidation of hepatic fatty acids. This may be responsible, at least in part, for the reduction of hepatic triglyceride content in SHRSP. These beneficial effects of osthol could be useful for both prevention of atherosclerosis and suppression of hepatic lipid accumulation.     

针刺调控miR-10a改善VD大鼠认知并减轻神经炎症的研究

[目的]探讨针刺通过调控Micro RNA 10a(miR-10a)改善血管性痴呆（VD）大鼠认知功能并减轻神经炎症的效应及机制。[方法]采用双侧颈总动脉夹闭法制作VD大鼠模型,并分为假手术组、VD组、针刺组和各miR干预组,针刺组予以“三焦针法”进行治疗;各miR干预组给予相应的miR-10a空白溶剂或抑制剂。采用莫里斯（Morris）水迷宫评价大鼠的认知能力;实时荧光定量（RT-qPCR）法测定miR-10a表达;蛋白质印迹（Western blot）法检测核因子-κB(NF-κB)通路相关蛋白NF-κB p65、磷酸化NF-κBp65的表达。酶联免疫吸附实验（ELISA）法测定肿瘤坏死因子（TNF-α）及白细胞介素6(IL-6)水平。[结果]与假手术组相比,模型组在水迷宫隐蔽平台实验中的逃避潜伏期显著延长（P<0.01）;在空间探索实验中穿越原平台位置的次数减少、首次穿越原平台所需时间延长（P<0.01）;而针刺组对上述指标具有改善作用,与模型组相比差异显著（P<0.01）。此外,与假手术组相比,模型组海马miR-10a表达下降,NF-κB t-p65和p-p6...     

复方七芍降压片对自发性高血压大鼠血压及左室肥厚的影响

目的:探讨复方七芍降压片降压及逆转左室肥厚(LVH)的作用机制。方法:以10只14周龄WKY大鼠为阴性对照,3 2只14周龄自发性高血压大鼠(SHR)随机分为4组,分别采用尾动脉法测血压、测左心室重量指数(LVMI)、放射免疫法测定血浆及局部心肌血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)。结果:复方七芍降压片能够降低SHR血压、LVMI、血浆及心肌AngⅡ。结论:复方七芍降压片能有效地降低SHR血压及逆转左室肥厚,其作用机制与复方七芍降压片降低心脏局部AngⅡ、抑制体内肾素-血管紧张素系统(RAS)代谢有关。     

舒脑欣滴丸对自发性高血压大鼠降压及心肌保护作用研究

目的观察舒脑欣滴丸对自发性高血压(SHR)大鼠的降压及心肌保护作用。方法将SHR大鼠按血压和体质量随机分为模型组、舒脑欣滴丸(800 mg/kg)组和阳性药缬沙坦(1 mg/kg)组。以同龄同种系正常血压的京都种(WKY)大鼠作为对照组,各组ig给药,采用无创血压计测定其血压,给药6周后测定大鼠血清中一氧化氮合酶(NOS)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的水平,并利用多普勒超声心动检查方法测定左心室质量,利用HE染色观察主动脉和心肌组织形态变化。结果舒脑欣滴丸(800mg/kg)单次给药后,SHR大鼠血压在1h后降到最低,长期给药6周后,可以稳定SHR大鼠的血压;舒脑欣滴丸治疗6周后,大鼠血清中NOS水平显著高于模型组(P0.05),AngⅡ水平显著低于模型组(P0.05),舒脑欣滴丸给药组的左心室质量显著低于模型组(P0.05),且舒脑欣滴丸可改善高血压引起的胸主动脉血管和心肌形态异常。结论舒脑欣滴丸对高血压伴有心肌肥厚大鼠具有一定治疗作用,可作为高血压伴心肌肥厚病症的潜在药物进行研究。