三氧化二砷抗肝癌及其肾毒性的实验研究

探讨三氧化二砷 (Ａｓ2 Ｏ3)抗大鼠肝癌作用及其对肾脏的毒副作用。材料与方法1.药品及试剂 :Ａｓ2 Ｏ3(Ｓｉｇｍａ公司 ) ,顺铂 (齐鲁制药厂 ) ,二乙基亚硝胺(ｄｉｅｔｈｙｌｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅ ,ＤＥＮ ,Ｓｉｇｍａ公司 ) ,小鼠ｂｃｌ 2 (ＩｇＧ1)单抗 ( 1∶5 0 ,ＳａｎｔａＣｒｕｚ)、小鼠抗大鼠增殖细胞核抗原 (ＰＣＮＡ)单抗( 1∶10 0 ,北京中山生物技术有限公司 )。ＨｉｓｔｏｓｔａｉｎＴＭ Ｐｌｕｓ免疫组化试剂盒 (Ｚｙｍｅｄ公司 )。ＡＰＯ ＢＲＤＵＴＭ凋亡定量检测试剂盒 (ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ公司 )。2 .模型制…     

抗氧化剂茶多酚对环孢菌素A诱导慢性肾毒性时细胞凋亡的影响

目的　探讨抗氧化剂茶多酚 (teapolyphenols,TP)对环孢菌素A(cyclosporineA ,CsA)诱导慢性肾毒性时细胞凋亡的影响。　方法　采用大鼠CsA慢性肾毒性动物模型 ,分CsA溶剂oliveoil组(n =6)、TP组 (n=6)、CsA组 (n =8)与CsA +TP组 (n =8) ,处理 4周后观察肾功能与组织学改变 ,TUNEL法检测肾细胞凋亡 ,RT PCR检测肾组织caspase 3mRNA的表达 ,并测定caspase 3酶活性。结果　与CsA组相比较 ,CsA与TP联用显著改善CsA诱导的肾功能损伤与组织学改变 ;CsA与TP合用组肾小管及间质凋亡细胞数明显少于CsA组 (7 7± 1 4vs 1 8 9± 3 3 ,P <0 0 5) ,并明显减少CsA诱导的caspase 3mRNA的表达及其酶活性 (P <0 0 5)。　结论　抗氧化剂茶多酚具有抑制CsA诱导慢性肾毒性时肾小管和间质细胞凋亡的作用 ,提示减少CsA诱导的细胞凋亡是茶多酚保护肾功能与组织结构的机理之一。     

三氧化二砷和细胞分化剂诱导肝癌细胞凋亡的阈值

目的：探讨三氧化二砷（As2O3)诱导肝癌细胞凋亡的阈值以及与细胞分化剂（CDA－Ⅱ）的协同效应。方法：1．0－5．0μmol/L的As2O3和1.0-5.0g/L的CDA－Ⅱ分别以及联合与肝癌细胞株Bel-7402、HepG2共孵育一定时间后，用活细胞荧光染色法、DNA电泳和流式细胞术分析细胞凋亡率。结果：单用As2O3 1.0μmol/L与对照组比较，差异无显著性（P＞0．05），凋亡阈值是5．0μmol/L；单用CDA－Ⅱ 3．0g/L以上与对照组比较，差异有显著性（P＜0．05）。但两药联合应用的凋亡阈值是1.0μmol/L As2O3＋1.0g/L CDA－Ⅱ。结论：CDA－Ⅱ可以降低肝癌细胞的凋亡阈值，增加肝癌细胞对As2O3的敏感性。     

冬虫夏草对环孢素A急性肾毒性保护作用的实验研究

利用急性环孢素Ａ肾毒性动物模型，观察冬虫夏草对大鼠肾功能、尿钠、钾排出量、肾组织促上皮生长因子及对肾皮质线粒体酶功能的保护作用，并与异博定治疗组相对照。实验证明：冬虫夏草对环孢素Ａ急性肾毒性有明显保护作用，且部分作用优于异博定。     

三氧化二砷诱导肝癌细胞株凋亡的实验研究

目的明确三氧化二砷对人肝癌细胞体外生长的影响,并探讨其作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝法、^3H-TdR掺入法、TUNEL法、透射电镜观察及流式细胞术,观察不同浓度的三氧化二砷对体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721的生长活力、细胞凋亡、DNA合成能力的影响。结果三氧化二砷能显著地抑制人肝癌细胞SMMC-7721的生长,并且具有时间和剂量依赖性;发生作用后,细胞生长有明显的凋亡特征性改变;细胞DNA合成能力下降。结论三氧化二砷能有效地抑制体外肝癌细胞生长,其机制可能与抑制肝癌细胞DNA合成及诱导肝癌细胞凋亡有关。     

肾茶胶囊对大鼠脏器长期毒性的实验研究

目的考察肾茶胶囊对大鼠脏器的长期毒性反应及毒性程度,研究毒性靶器官及其损伤的可逆性。方法大鼠灌胃给予肾茶胶囊1．62、4．86、14．58g／kg（约相当于人拟临床等效剂量的10、30、90倍）,设空白对照组,1次／d,连续灌胃给药24周后各剂量组随机处死,系统尸解,检查脏器系数。结果12周及24周高剂量组、中剂量组、低剂量组试验大鼠脏器系数指标与对照组相比,组间未见显著差异和异常改变,也未见毒理学意义变化和延迟性毒性反应。结论肾茶胶囊对脏器的长期毒性较低,未发现毒性靶器官,可安全地应用于临床。     

肾脏疾病细胞凋亡

细胞凋亡参与肾脏正常发育及肾疾病发生等多个过程，在肾脏疾病的发生发展过程中发挥着益或有害的作用，探讨细胞凋亡在肾疾病中的作用是近年来研究的热点之一，本文就细胞凋亡在其相关肾脏疾病中的作用作一综述。     

贝那普利防护环孢素A慢性肾毒性的实验研究

目的 观察贝那普利对环孢素A（CsA)慢性肾毒性的防护作用。方法 将大鼠分为对照组、单纯级CsA组及给CsA和贝那普利组,观察给药后14d和28d各组大鼠24h 的尿量及N－乙酰－β－D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）水平,计算内生肌酐清除率及滤过钠排泄分数（FENa）,并对肾组织进行组织学观察和免疫组织化学检测。结果 CsA能诱导肾小球滤过率下降,增加尿中NAG的排泄,导致肾间质纤维化和小动脉病变等;贝那普利能改善上述改变,减低肾内转化生长因子－β1（TGF－β1）的表达。结论 贝那普利对CsA的慢性肾毒性有明显的防护作用。     

抑制蛋白激酶Cα活性增加TNF-α对小鼠肝癌细胞毒性的实验研究

目的探讨肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)及联合蛋白激酶Cα (protein kinase C alpha,PKC-α)抑制剂Go6976对小鼠肝癌(H22)细胞凋亡的影响。方法将处于对数生长期的H22细胞分成两组,每组分四部分,一组仅以不同浓度的TNF-α(0,20、40、60 ng／ml)处理,另一组TNF-α处理同时以Go6976(4．6 nmol／ml)抑制PKC-α活性,分别于4 h,8 h,16 h采用流式细胞仪检测小鼠肝癌细胞的凋亡率,Western blotting方法检测PKC—α和磷酸化PKC-α蛋白的表达情况。结果 TNF-α(0、20、40、60 ng／ml)处理H22细胞4 h,细胞凋亡率分别为2．44％±0．31％、 1．80％±0．32％、2．73％±0．14％、3．05％±0．78％,PKC-α和磷酸化PKC-α表达无显著改变;同时用 TNF-α和Go6976处理H22细胞,凋亡率、PKC-α和磷酸化PKC-α的表达与单独使用TNF-α的结果相似。TNF-α处理8 h,细胞凋亡率分别为2．11％±0．43％、1．83％±0．31％、3．40％±0．47％、6．05％± 0．78％,PKC-α及磷酸化PKC-α的表达随TNF—α浓度增加而上调;TNF—α处理同时抑制PKC-α活性,细胞凋亡率显著升高,分别为2．90％±0．39％、7．76％±0．35％、11．43％±1．05％、12．96％± 2．44％,PKC-α和磷酸化PKC-α表达相应下调。仅以TNF-α处理或TNF—α处理同时抑制PKC-α活性16 h,其结果与8 h的结果基本一致;于Go6976抑制细胞PKC-α活性组,TNF-α60 ng／ml时细胞凋亡率较TNF-α40 ng／ml时有所下降,但坏死细胞的比例却明显升高。结论 TNF-α上调PKC—α和磷酸化PKC-α表达;抑制PKC-α活性,显著增加TNF-α对H22细胞的细胞毒性。     

三氧化二砷对原发性肝癌的作用及其机理研究

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对肝癌细胞系BEL-7402的影响及其作用机理,并观察不同应用途径对原发性肝癌患者的治疗效果。方法 观察As2O3作用后肝癌细胞的形态学改变、并通过流式细胞仪和DNA梯状电泳观察细胞凋亡的情况,应用逆转录聚合酶链式反应和荧光分光光度计检测半胱氨酸蛋白酶-3的变化情况。观察其对裸鼠移植瘤生长抑制的效果。并分别通过静脉滴注和动脉持续灌注观察其对原发性肝癌患者的治疗效果。结果 不同浓度的As2O3作用于肝癌细胞有明显的时间和剂量依赖性,发生作用后细胞生长明显受抑制,有明显的凋亡特征性改变;流式细胞仪分析存在G2／M期阻滞,在G1峰前出现明显的凋亡峰;琼脂糖凝胶电泳出现明显的凋亡特征性梯状条带。随着As2O3作用时间的延长,半胱氨酸蛋白酶-3的mRNA无明显变化,而半胱氨酸蛋白酶-3蛋白质的活性逐渐增高。不同浓度的As2O3对于裸鼠肝癌移植模型有明显的抑制生长作用。对28例患者的静脉输注治疗可明显改善患者的生存质量,并且具有毒副作用小的特点。43例动脉灌注治疗患者中,30例肿瘤体积缩小或不变,有效率为69．8％,19例甲胎蛋白下降或降至正常。结论 As2O3可明显抑制肝癌细胞的生长,其机理主要是诱导肝癌细胞凋亡;凋亡的可能机理是通过半胱氨酸蛋白酶-3起作用,作用位点是在酶的前体水平;应用As2O3连续区域化疗对原发性肝癌有很好的治疗效果。     

三氧化二砷抑制肾癌细胞系786-0增殖及诱导凋亡的研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对人肾癌细胞系786-0的增殖抑制和诱导凋亡的作用及可能机制。方法采用细胞增殖检测、形态学观察、琼脂糖凝胶电泳和肿瘤克隆形成等方法观察As2O3对786-0细胞的增殖抑制和诱导凋亡的作用,以免疫组织化学和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术等探讨As2O3的作用机制。结果2μmol/L以上浓度As2O3可显著抑制786-0细胞的增殖、降低细胞核分裂指数并出现凋亡的形态学改变和DNA片段化,经2.0μmol/LAs2O3处理72h后,其抑制786-0细胞增殖率为69.13%(P<0.01),使其核分裂指数由6.00降低至1.80(P<0.01),肿瘤细胞克隆形成抑制率达到100.00%。As2O3使786-0细胞内bcl-2、PCNA和Ki-67基因表达降低(P<0.01),其作用随药物浓度升高和时间延长而增加。结论As2O3对786-0细胞具有显著的增殖抑制作用,并具有浓度和时间依赖性特点,可能通过下调其PCNA和Ki-67基因表达抑制增殖,抑制bcl-2基因的表达诱导细胞凋亡。     

亚砷酸在原发性肝癌介入治疗中的疗效观察

目的观察亚砷酸（As2O3）在原发性肝癌介入治疗中的疗效。方法对43例患者采用Seldinger技术，应用亚砷酸及碘油对原发性肝癌患者进行介入治疗。结果其中无完全缓解（CR）病例，部分缓解（PR）18例、无变化（SD）17例、进展（PD）8例，客观有效率（CR＋PR）41．86％，获益率（CR＋PR＋SD）81．39％。29例血清AFP阳性的患者AFP下降率为55．17％（16／29）。主要毒副反应有发热、食欲减退及腹胀。结论亚砷酸应用于原发性肝癌的介入治疗，疗效确切，操作简单易行，毒副作用小，值得临床推广应用。     

三氧化二砷诱导人胃癌MKN45细胞凋亡及其分子机制的初步研究

目的研究三氧化二砷(As2O3)对人胃癌细胞的生物学效应及其作用机制。方法胃癌细胞经As2O3处理后,用台盼蓝方法检测As2O3的IC50,采用流式细胞仪、DAPI荧光染色、原位末端标记(TUNEL)及DNA电泳检测细胞凋亡。结果As2O3在一定浓度范围内以浓度依赖的方式抑制胃癌细胞生长,其IC50为(11.05±0.25)μmol/L。经1～10μmol/LAs2O3处理胃癌细胞后,流式细胞仪检测出凋亡峰,流式细胞光度计下可见明显的凋亡细胞形态特征,琼脂糖凝胶电泳出现DNA梯形条带。结论As2O3在体外可诱导胃癌细胞的凋亡,这是其对胃癌细胞产生生物学效应的基础。     

维生素K3对肝癌细胞株的生长抑制作用及其与三氧化二砷的联合效果

目的 探讨维生素K3(VK3)对肝癌细胞的凋亡诱导作用及其与三氧化二砷(As2O3)的联合效果.方法 体外培养人肝癌细胞株(HepG2),分别以VK3,As2O3以及二者联合孵育细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测对肝癌细胞的抑制率,Annexin-v/Pl双染色流式细胞技术检测凋亡细胞的百分数,用激光共聚焦显微镜,TUNEL观察细胞凋亡后的形态.结果 体外实验表明VK3能抑制HepG2细胞生长并呈剂量和时间依赖性(P=0.002),细胞死亡方式以凋亡为主;VK3与As2O3联合应用时,二者具有协同作用(P=0.005).结论 笔者的研究表明VK3能抑制肝癌细胞生长,并且与As2O3联合时有协同作用,降低了As2O3的副作用,为肝癌的治疗提供了广阔的前景.     

三氧化二砷对乳腺癌细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的研究低氧条件下人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S血管内皮生长因子(VEGF)的表达及三氧化二砷(As2O3)对其表达的影响。方法建立MD-MBA-435S细胞体外低氧培养模型。采用逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)、免疫细胞化学染色和Wester blot分别检测0．5、2．0、5．0μmol／L As2O3对缺氧12h后乳腺癌细胞VEGF基因及蛋白的表达变化；噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度As2O3对乳腺癌细胞生存的影响。结果高浓度As2O3可以抑制乳腺癌细胞的生存，而低浓度则对此影响较小。缺氧12h后VEGF mRNA和蛋白皆明显增加；3种浓度As2O3对常氧下乳腺癌细胞VEGF mRNA和蛋白无明显影响，而对缺氧12h后细胞VEGF mRNA和蛋白的表达明显抑制，且呈剂量递增效应。结论缺氧可以显著增加乳腺癌细胞VEGF的表达；常氧下As2O3对乳腺癌细胞VEGF的表达无明显抑制，而在低氧下可以明显抑制，其机制可能是通过调控VEGF的上游基因实现的。     

三氧化二砷对人脑胶质瘤生长的抑制作用

目的 观察三氧化二砷（As2O3）对人脑胶质瘤细胞增殖抑制作用，探讨以As2O3治疗胶质瘤的可行性。方法 将不同浓度As2O3（浓度分别为：0、0．5、1、2、3和4μmol／L）分别加入体外培养的TJ905人多形性胶质母细胞瘤，通过噻唑蓝（MTT）比色法检测体外细胞增殖率、PCNA染色检测细胞增殖活性、TUNEL法检测原位细胞凋亡和Western印迹检测bcl-2蛋白表达水平。结果 与对照组相比，治疗组TJ905细胞增殖明显下降，且各组差异均有统计学意义（P〈0．01），TUNEL法表明细胞浏亡指数上升（P〈0．01）；Western印迹显示浏亡相关基因bcl-2蛋白表达水平呈下降趋势。结论 As2O3具有抑制人啮恶性胶质瘤细咆增殖的作用，可能成为临床治疗胶质瘤的候选化疗药物之一。     

三氧化二砷抑制骨肉瘤细胞及二倍体细胞增殖的研究

目的　研究三氧化二砷 (As2 O3 )对骨肉瘤细胞及二倍体细胞增殖的影响。方法　应用噻唑蓝 (MTT)法和集落形成能力测定、形态学观察、流式细胞术和电镜观察等方法检测和观察As2 O3 对骨肉瘤细胞株MG 63及二倍体细胞株MRC 5增殖的影响。结果　As2 O3 对骨肉瘤细胞及二倍体细胞株的增殖有抑制作用 ,并具有时间依赖性和一定范围内的剂量依赖性。≥ 1μmol/L浓度的As2 O3 对MG 63骨肉瘤细胞的抑制率达 70 % ,而≥ 8μmol/L浓度的As2 O3 对MRC 5细胞的增殖才达到相近的抑制率 ;0 .5～ 2 .0 μmol/L浓度的As2 O3 对MG 63细胞的生长抑制率高 ,而对MRC 5细胞的生长抑制率低 ,表现为明显的选择性抑制 ( P <0 .0 1)。 1μmol/LAs2 O3 处理的MG 63细胞第 3天呈典型的凋亡形态学改变 ;流式细胞仪分析显示 ,在G1期细胞前出现明显亚二倍体峰 ,凋亡率与As2 O3 处理时间呈正相关 ;MRC 5细胞则未见明显凋亡峰。结论　As2 O3 通过诱导细胞凋亡抑制骨肉瘤细胞和二倍体细胞增殖 ,在一定浓度内As2 O3 可选择性抑制骨肉瘤细胞的生长增殖。     

三氧化二砷在体外对神经母细胞瘤细胞核基质蛋白的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)在体外对小鼠神经母细胞瘤细胞系(Neuro-2a)的作用。及其在早期对核基质蛋白和热休克伴随蛋白(Hsc)在核基质蛋白中表达的影响。方法用原位末端脱氧核苷转换酶标记法(TUNEL)、DNA片段电泳观察As2O3对Neuro-2a凋亡的影响。单、双向电泳和Western杂交法观察核基质蛋白分布和Hse表达的影响。结果2μmo1／L As2O3能明显地抑制Neuro-2a细胞生长；As2O3处理24h后，TUNEL分析法已能检测到Neuro-2a凋亡细胞，且能观察到核基质蛋白分布的改变及Hsc在核基质蛋白中的表达升高，但此时却不能观察到凋亡特征性DNA片段梯形带。结论对As2O3的处理、核基质蛋白的分析较DNA片段检测更为敏感。Hsc蛋白有可能是一种凋亡早期指示蛋白。