Ⅰ型胶原-整合素α2β1系统对成骨细胞生物学特性的调控

为进一步探讨I型胶原及其受体系统是否为成骨细胞功能活动所必需, 使用Ⅰ型胶原和整合素α2β1的一抗阻断Ⅰ型胶原整合素α2β1系统,以细胞计数法比较成骨细胞的增殖能力,流式细胞仪分析成骨细胞的凋亡情况,RTPCR技术研究I型胶原、整合素α2β1 及骨钙素的mRNA表达情况。结果发现阻断I型胶原整合素α2β1系统后,成骨细胞的增殖能力减弱,凋亡率增高,Ⅰ型胶原、整合素α2β1 及骨钙素的mRNA表达减少,其中I型胶原一抗的阻断作用大于整合素α2β1的一抗,这种阻断作用具有可复性,随抗体的去除可部分恢复,表明Ⅰ型胶原整合素α2β1系统为成骨细胞功能活动所必需,构建骨组织工程的支架材料时要考虑到骨组织的基质成份,应为成骨细胞提供相对正常的胞外基质环境。     

豚鼠离焦性近视眼后部巩膜中Ⅰ型胶原、整合素α2、β1及ILK的表达

目的:本实验观察离焦性近视眼豚鼠中整合素和胶原蛋白在巩膜重塑中的作用。方法:-7D的凹透镜离焦14天建立豚鼠光学离焦性近视眼模型,RT-PCR法和免疫组化染色法检测各实验组后部巩膜中I型胶原α1(1)链、整合素α2、β1及ILK的mRNA及蛋白表达。结果:Ⅰ型胶原α1(1)链、整合素α2、β1和ILK在离焦组和恢复组的实验眼的mRNA水平及蛋白表达均减弱,与自身对照眼比较差异有显著统计学意义(P<0.01),去除离焦恢复2d后,上述指标表达回升,但与对照眼相比有统计学意义(P<0.05)。结论:整合素α2、β1、Ⅰ型胶原、LIK参与实验性近视眼巩膜重塑过程,是其早期调节因子。     

外源性Ⅰ型胶原对人胚骨膜成骨细胞生物学特性的影响

OBJECTIVE: To study the influence of type I collagen (COL I) on the cell behavior of human periosteous osteoblasts (OB) and the application of type I collagen in constructing bioactive artifical bone. METHODS: OB were cultured on dishes coated with bovine type I collagen in different final concentrations. The cell adhesion was examined by the methods of cell count, the proliferation of OB was studied by 3H-TdR, and the osteoblastic ability was assessed by the synthesis of collagen, osteocalcin and alkaline phosphatase (ALP). RESULTS: OB cultured on type I collagen layer had the following characteristics: 1. The amounts of adhesive cells were maximal top in 25 micrograms/ml final concentration; 2. The proliferation of OB was decreased above 12.5 micrograms/ml final concentration (P < 0.05); 3. The synthesis of type I collagen was reduced slightly (above 25 micrograms/ml, P < 0.05); 4. The secretion of osteocalcin was increased markedly (above 6.25 micrograms/ml, P < 0.05, which reached maximally in 25 micrograms/ml); 5. The ALP activity was also increased (above 12.5 micrograms/ml, P < 0.05). CONCLUSION: Type I collagen promotes the expression of osteoblastic phenotype and cell adhesion. When the scaffold materials for bone tissue engineering are coated with type I collagen, the osteogenesis of OB is enhanced to accelerate the transformation course from artificial bone to biological bone, the best final concentration is 25 micrograms/ml.     

人鼠同源Ⅰ型胶原siRNA对TGF-β1诱导Ⅰ型胶原表达的抑制效应

目的 观察人鼠同源Ⅰ型胶原siRNA抑制TGF-β1诱导的Ⅰ型胶原高表达的有效性.方法 首先构建人鼠同源的Ⅰ型胶原siRNA表达质粒.转染大鼠系膜细胞,用KT-PCR.方法 观察对Ⅰ型胶原的直接抑制作用;经不同浓度(1 ng、5 ng、10 ng)的TGF-β1刺激后,再转染Ⅰ型胶原siRNA质粒,KT-PCK方法观察其抑制效应.结果 1～4 μg的Ⅰ型胶原siRNA质粒均能使COL1A1基因条带表达下调,并随siRNA质粒浓度增加,抑制作用逐渐增强.大鼠系膜细胞经TGF-β1刺激,Ⅰ型胶原基因表达明显增强,并具剂量依赖性.再转染Ⅰ型胶原siRNA质粒后,TGF-β1+Ⅰ型胶原siRNA质粒各组与相应浓度的单纯TGF-β1各组比较COL1A1基因条带均减弱,显示出抑制效应.结论 本实验构建的人鼠同源Ⅰ型胶原siRNA质粒,在大鼠系膜细胞内不仅能够直接抑制Ⅰ型胶原的基因表达,而且对TGF-β1诱导的Ⅰ型胶原表达增加同样具有较好的抑制作用.本实验结果可望为肾脏纤维化的防治提供思路.     

外源性Ⅰ型胶原对人胚骨膜成骨细胞生物学特性的影响

目的　研究 型胶原对人胚骨膜来源成骨细胞生物学特性的影响 ,为 型胶原在组织工程人工骨中的应用提供依据。方法　在不同浓度 型胶原涂层上培养成骨细胞 ,用细胞计数法研究成骨细胞粘附情况 ,3 H- Td R掺入实验观察成骨细胞增殖能力 ,通过检测成骨细胞胶原、骨钙素和碱性磷酸酶的合成情况 ,以不涂层 型胶原为对照组 ,比较骨膜来源成骨细胞成骨能力的改变。结果　 型胶原对成骨细胞发挥以下作用 :1增加粘附细胞数量 ,且在 2 5 μg/ m l浓度达最大效应 ;2减弱成骨细胞增殖能力 ,且以 12 .5 μg/ ml以上浓度作用显著 ( P<0 .0 5 ) ;3轻度减弱成骨细胞 型胶原合成能力 ,以 2 5 μg/ ml以上浓度作用显著 ( P<0 .0 5 ) ;4增加骨钙素合成 ,以6 .2 5 μg/ m l以上浓度作用显著 ( P<0 .0 5 ) ,2 5 μg/ m l浓度达最大效应 ;5增加成骨细胞碱性磷酸酶活性 ,以 12 .5 μg/ml以上浓度作用显著 ( P<0 .0 5 )。结论　 型胶原能促进成骨细胞的粘附与分化 ;支架材料上复合 型胶原涂层可增强成骨细胞的成骨能力 ; 型胶原最佳复合浓度为 2 5 μg/ ml     

绝经后妇女骨密度与Ⅰ型胶原α1链及α2链基因多态性相关性研究

目的探讨人Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)及α2链(COL1A2)基因型与绝经后妇女骨密度相互关系.方法选取年龄≥42岁绝经后妇女(自然绝经≥2年)231例,采用双能X线吸收法(DEXA)测定其全身、腰椎2～4(L2～4)、股骨颈(Neck)、Ward'三角和大转子区等部位的骨密度(BMD)值,并采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测外周血白细胞基因组Ⅰ型胶原α1链及α2链基因型.结果231例受试对象中,Ⅰ型胶原α1链PCR扩增产物未发现ACCB7I酶切位点,Sp Ⅰ结合位点不存在G→T突变,Ⅰ型胶原α1链基因型均为SS型;Ⅰ型胶原α2链基因型分别为EE型113例,Ee型91例,ee型27例(分别占48.9%、39.4%、11.7%),等位基因频率E和e各为68.6%、31.4%.基因型分布符合Hardy-weinberg定律.携带EE基因型的个体比Ee基因型和ee基因型个体的骨密度值为低,但只在腰椎侧位(L2-L4)、股骨颈(Neck)、大转子(Troch)、Ward's三角(Ward's)等部位的骨密度值EE基因型比Ee基因型携带者明显降低(P＜0.05).结论广州地区绝经后妇女COL1A1 Sp Ⅰ结合位点不存在G→T突变.COL1A2基因EE型个体较Ee基因型及ee基因个体的骨密度值低,绝经后妇女骨密度与COL1A2基因多态性存在一定相关性.     

胃癌组织整合素α2β1的表达和意义

目的：：探讨整合素α2β1在胃癌组织中的表达和意义。方法：采用免疫组化SP法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测85例胃癌组织和50例癌旁正常胃组织整合素α2β1蛋白和mRNA的表达情况。结果：胃癌组织整合素α2β1蛋白和mRNA的表达均明显高于癌旁正常胃组织(P＜0.05)。胃癌组织整合素α2β1蛋白和mRNA的表达与患者年龄、性别无关(P＞0.05）;与胃癌的分化程度、TNM分期、淋巴结转移和浸润深度有关(P＜0.05)。结论：整合素α2β1与胃癌的浸润、转移密切相关,有望成为胃癌检测、评估恶性程度及预后的重要指标。     

化疗对骨肉瘤患者血中整合素α2β1的影响

目的整合素α2β1为整合素家族成员之一,近来发现整合素在肿瘤的发生发展中起重要作用。文中研究化疗对骨肉瘤患者血中整合素α2β1的影响,探讨其临床意义及在骨肉瘤诊断和治疗中的应用前景。方法收集骨肉瘤患者化疗阶段前后的血浆标本,用ELISA法检测整合素α2β1水平。结果化疗前血浆中整合素α2β1水平为(2.41±0.77)μg/L,化疗后为(1.73±0.56)μg/L,与化疗前相比明显降低,P<0.01。结论化疗能促使骨肉瘤患者血中整合素α2β1下降,提示有效的化疗可能下调骨肉瘤细胞中整合素α2β1的表达,从而改变其相应的生物学活性。整合素有可能成为判断骨肉瘤化疗预后的血液指标。     

整合素α3β1对肝癌细胞与Ⅳ型胶原粘附与趋化行为的影响

目的　定量描述整合素α3β1 对肝细胞癌 (HCC)细胞与Ⅳ型胶原裱衬表面粘附力特性和HCC细胞对Ⅳ型胶原趋化行为的影响。方法　采用微吸管实验技术测定HCC细胞与Ⅳ型胶原裱衬表面的粘附力 ;进一步加入针对整合素α3β1 的单克隆抗体 (Anti α3,Anti β1 )处理HCC细胞 ,观察Anti α3、Anti β1 对细胞与Ⅳ型胶原裱衬表面的粘附力的影响。采用双微吸管实验法进行HCC细胞趋化实验 ,在微管内加入 60 0 μg/ml的Ⅳ型胶原 ,并引导微管尖端与同一细胞紧密接触 ,动态观察细胞伪足形成过程 ;在微吸管内分别加入Anti α3、Anti β1 ,观察整合素亚单位阻断对HCC细胞伪足形成的影响。利用流式细胞仪对HCC细胞表面整合素α3、β1 亚单位的表达进行分析。结果　HCC细胞与 5μg/mlⅣ型胶原裱衬表面之间的粘附力为 932± 1 34(× 1 0 - 1 0 N ,n =60 ) ,加入 5μg/mlAnti α3粘附力减小到 536± 1 2 2 (× 1 0 - 1 0 N ,n =60 ) ;加入 1 0 μg/mlAnti α3时粘附力减小到 476± 63(× 1 0 - 1 0 N ,n= 50 )。加入 5μg/mlAnti β1 粘附力减小到 449± 1 1 9(× 1 0 - 1 0 N ,n =60 ) ;加入 1 0 μg/mlAnti β1 时粘附力减小到 2 2 0± 78(× 1 0 - 1 0 N ,n =55)。双微吸管趋化实验表明 :两侧微吸管加入相同浓度Ⅳ型胶原 ,     

CD44v4、整合素α2β1与胃癌

我国是胃癌高发国,根据世界卫生组织统计及2012年中国肿瘤登记年报数据显示：2009年,胃癌位居我国恶性肿瘤发病率前列,发病人数及死亡人数均占全球胃癌发病总人数的一半左右[1]。如何防治胃癌一直是研究的重点、热点,随着研究的深入,人们逐渐从分子和基因水平上发现了细胞黏附分子在胃癌的各个阶段中扮演着重要作用。CD44v4和整合素α2β1均属于黏附分子,它们在肿瘤的浸润、转移过程中起着重要的作用,但在胃癌浸润、转移中的研究均未见于文献报道,因此,对于CD44v4分子和整合素α2β1在胃癌中的浸润、转移的作用值得探讨。     

二期骨折愈合中Ⅰ、Ⅱ型胶原的表达

目的 揭示二期骨折愈合中Ⅰ、Ⅱ型胶原表达的变化规律，加深对骨愈合机制的认识。方法 利用大鼠肌骨二期骨折愈合模型，分别于骨折后3天和1、2、3、4周取材，制片，HE、阿尔新蓝染色及Ⅰ、Ⅱ型胶原免疫组化染色。结果 1周时，免疫组化染色显示Ⅰ、Ⅱ型胶原均有表达。Ⅱ型胶原表达第3周时达峰值，Ⅰ型胶原表达3周后急剧上升，第4周达较高水平。结论 在骨折愈合的不同时期，软骨痂内软骨细胞的组织形态变化以及不同类型胶原的表达均与其修复功能密切相关。     

PDGF与肝素对动脉SMCI,Ⅲ型前胶原mRNA表达及胶原蛋白合成？…

目的 研究,探讨血小板源生长因子（ｐｌａｔｅｌｅｔｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＰＤＧＦ）和肝素对人主动脉平滑肌细胞（ｈｕｍａｎａｏｒｔａａｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅ,ｃｅｌｌ,ｈＡＳＭＣ）增殖,胶原蛋白的合成,分泌以及Ｉ,Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ表达和转移生长因子β（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒβ－ＴＧＦ－β）ｍＲＮＡ表达的调节作用,方法＾３Ｈ－ＴｄＲ,＾３Ｈ－脯氨酸掺入及Ｎ     

骨关节炎软骨下骨的成骨细胞生物学表型研究

目的 培养骨关节炎患者软骨下骨成骨细胞,探讨硬化区和非硬化区软骨下骨成骨细胞的生物学特性.方法 收集本科2009年10月至2010年3月拟行全膝关节置换入院的骨关节炎患者7例,男性5例,女性2例,平均年龄68(55-79)岁,留取术后遗弃的胫骨平台骨组织.应用Ⅰ型胶原酶消化联合贴壁培养方法,培养软骨下骨的成骨细胞,光镜下观察细胞形态,免疫组化检测Ⅰ型胶原,NBT/BCIP染色法检测碱性磷酸酶,茜素红染色检测矿化结节,油红O染色检测脂质成分.应用实时定量RT-PCR技术检测并比较硬化区和非硬化区软骨下骨成骨细胞相关基因[碱性磷酸酶(ALP),骨钙蛋白(OCN),转化生长因子β1(TGF-β1),胰岛素样生长因子1(IGF-1),Ⅰ型胶原(COL1)A1/(COL1)A2,基质金属蛋白酶13(MMP-13),骨桥蛋白(OPN),肿瘤坏死因子(TNF-α),白介素(IL)-6和IL-8]的表达.应用茜素红染色比较两种细胞矿化能力.结果 光镜下观察到细胞渐从骨片中爬出的生长过程,免疫组化证实细胞表达Ⅰ型胶原,NBT/BCIP染色显示细胞表达碱性磷酸酶,茜素红染色显示细胞能形成矿化结节,油红O染色显示细胞内无脂质成分,证实Ⅰ型胶原酶消化联合贴壁培养方法能较好的培养出成骨细胞.茜素红染色显示软骨下骨硬化区成骨细胞矿化能力低于非硬化区[(0.92±0.06),(1.32±0.15),P＜0.01].RT-PCR显示,硬化区软骨下骨成骨细胞比非硬化区软骨下骨成骨细胞高表达基因OPN[(2.62±1.47)×10-2,(9.63±3.37)×10-4,P＜0.05]、OCN[(6.04 ±6.27)×10-6,(4.84±2.18)×10-6,P＜0.05]、ALP[(73.62±15.75)×10-4,(3.10±0.33)×10-4,P＜0.01]、IGF-1[(14.84±1.23)×10-4,(6.33±2.80)×10-4,P＜0.01]、IL-6[(8.24±1.05)×10-4,(2.64±0.37)×10-4,P＜0.01]、IL-8[(14.68 ±6.97)×10-6,(2.60±0.89)×10-6,P＜0.01]、MMP-13[(1.50±0.11)×10-3,(1.23±0.10)×10-3,P＜0.05]、TGF-β1[(4.41±0.42)×10-3,(2.96 ±0.36)×10-3,P＜0.01]、COL1A1[(55.44±21.61)×10-2,(9.17 ± 3.30)×10-2,P＜0.01];而TNF-α[(5.62±2.03)×10-6,(5.62±3.146)×10-6]和COL1A2[0.64±0.07,0.46±0.12]表达水平没有明显差异(P＞0.05).结论 硬化区软骨下骨成骨细胞的生物学表型变化是骨关节炎患者病变的重要特征之一.     

氟对体外培养人牙乳头间充质细胞合成I型胶原的影响

目的:明确氟对人牙乳头细胞合成 I型胶原的影响。 方法:对人牙乳头细胞进行体外培养 ,分别给予0 .0、0 .2× 10 - 6、1.0× 10 - 6、5 .0× 10 - 6、2 5 .0× 10 - 6 g/ L 氟处理 ,采用免疫细胞化学方法染色 ,图象分析氟对细胞合成 I型胶原的影响。 结果:I型胶原在对照组和 4种氟浓度处理组细胞表达均为阳性。图象分析结果表明 ,4种氟浓度对体外培养的人牙乳头细胞合成 I型胶原量与对照组相比差异无统计学意义 (P>0 .0 5 )。结论:过量氟对牙本质基质 型胶原的影响可能不是通过影响成牙本质细胞内合成实现的     

体外诱导条件下大鼠骨髓基质细胞骨钙素和Ⅰ型胶原mRNA的表达

目的 研究体外培养大鼠骨髓基质细胞诱导条件下，成骨分化标志骨钙素和Ⅰ型胶原mRNA水平的表达。方法 采用成骨诱导剂（含地塞米松10^-8mol/L,β甘油磷酸钠10mmol/L和抗坏敌国酸AA50μg/ml)对培养状态下的不同代大鼠骨髓基质细胞进行成骨诱导，提取RNA，采用RT-PCR方法，以β-肌动蛋白cDNA为内参照，检测骨钙素和Ⅰ型胶原mRNA的表达。结果 与对照组相比，接受成骨诱导剂作用的大鼠骨髓基质细胞随诱导时间的延长骨钙素和Ⅰ型胶原mRNA出现高表达，且维生素D为诱导骨钙素mRNA表达的必需成分。结论 体外培养的大鼠骨髓基质细胞保持成骨未分化状态，无骨钙素和Ⅰ型胶原mRNA的表达，诱导后可向成骨分化，骨钙素和Ⅰ型胶原mRNA表达升高。     

Changes of type I collagen in the lungs of rats with hypoxic pulmonary hypertension]

The changes of type I collagen in the lung tissues of rats with hypoxic pulmonary hypertension (HPH) and its relationship to the mean pulmonary arterial pressure (mPAP) were investigated. The blood dynamic indexes of pulmonary circulation were measured by using Swan-Ganz. The distribution of type I collagen in pulmonary arteries, bronchi and plumonary interstitial was observed by using streptavidin peroxidase method (SP). The morphologic changes of small pulmonary arteries and the level of type I collagen were determined by image pattern analysis technique and gray scale scanning, respectively. The results showed, compared with the controls, mPAP of the hypoxic rats elevated (from 2.12 +/- 0.25 to 3.95 +/- 0.43 kPa, P < 0.01), their small pulmonary arteries, walls thickened (MT% from 16.35 +/- 2.64 to 35.83 +/- 3.55, MA% from 26.83 +/- 3.40 to 59.68 +/- 4.90, P < 0.01) and lumen narrowed. The distribution of type I collagen was mainly in the external layer of pulmonary arterial walls; the positive degrees of gray scale scanning increased and had a positive linear relationship to the mPAP and MT%. These findings suggest that the increase of type I collagen contents in pulmonary arteries is closely related to the development of HPH.     

The effect of Nifedipine on the expression of type I collagen in gingival fibroblasts

Objective:To investigate the effect of nifedipine(calciumchannel blocker)on the expression of collagen in gingival fibroblasts invitro.Methods:Primarily gingival fibroblasts were cultured and incubated with various concentrations of nifedipine(108μg/L,360μg/L and 1200μg/L)for 5 days.Gingival fibroblasts were primarily cultured derived from nifedipine responders and non-responders in the presence of 360μg/L nifedipine.Enzyme-linked immunosorbent assay was used to evaluate the amount of type I collagen.Cell proliferation was measured by cell counting with evaluating MTT value.Results:The expressions of collagen and cell proliferation were significantly different among the high concentration groups and the others on the fifth day,especially higher in 360μg/L and 1200μg/L groups and also different among nifedipine responders and non-responders.Conclusion:The expression of collagen and cell proliferation may be concerned with the biological mechanism for gingival overgrowth.     

硝苯地平对牙龈成纤维细胞Ⅰ型胶原合成的影响

目的:探讨硝苯地平对人牙龈成纤维细胞Ⅰ型胶原合成的影响.方法:用含浓度为108、360、1 200 μg/L硝苯地平的DMEM液作用体外原代培养人牙龈成纤维细胞;酶联免疫吸附试验检测细胞Ⅰ型胶原表达水平;细胞计数观察细胞增殖.结果:Ⅰ型胶原合成检测和细胞增殖试验的结果都显示在第5天,高浓度1 200 μg/L、360 μg/L组与低浓度108 μg/L之间存在显著性差异.结论:高浓度硝苯地平有促进人牙龈成纤维细胞Ⅰ型胶原合成和细胞增殖的作用.