人牙胚发育过程中Smad3的表达变化及其意义

目的：观察转化生长因子β（TGF-β）特异的细胞内信号转导分子Smad3在人牙胚发育过程中的时空表达,探讨Smad3对牙胚发育的作用。方法：运用免疫组化方法观察Smad3在人牙胚发育各期的表达分布和表达变化情况。结果：Smad3在牙胚发育各期均有表达,但表达模式不尽相同,总的趋势是随着成釉细胞和成牙本质细胞的分化成熟而逐渐增强。结论：观察到Smad3在人牙胚发育不同时期的表达及其表达变化,提示Smad3可能在TGF-β调节成釉细胞和成牙本质细胞分化的信号转导过程中发挥一定的作用。     

Smad4在人牙胚发育各期的表达与分布

目的：观察转化生长因子β超家族（transforming growthfactor-βsuperfamily,TGF-β superfamily)细胞因子细胞内共同的信号转导分子Smad4在人牙胚发育过程中的表达与分布变化,探讨Smad4在牙齿发育过程中的作用。方法：制备人牙胚发育各期标本,免疫组化方法观察。结果：Smad4在牙胚发育的各个时期在特异的时空分布模式。结论：首次观察到Smad4信号分子在人牙胚发育过程中的表达,Smad4作为TGF－β超家族细胞内信号分子,可能参与上皮间充质的相互作用,同时也参与成釉细胞和成牙本质细胞的分化以及牙釉质和牙本质的形成。     

人牙胚发育过程中Smad2分子的表达与分布变化

目的 观察转化生长因子β（transforming growth factor－β，TGF－β）特异的细胞内信号转导分子Smad2在人牙胚发育过程中的表达与分布变化，探讨Smad2在牙发育过程中的作用。方法 制备人牙胚发育各期标本，免疫组化方法检测Smad2分子的表达。结果 Smad2在牙胚发育的各个时期存在特异的时空分布模式，其分布与TGF－β有相似之处。结论 首次观察到Smad2信号分子在人牙胚发育过程中的表达，Smad2作为TGF－β细胞内信号分子，可能参与上皮－间充质的信号诱导，同时也参与成釉细胞和成牙本质细胞的分化本质细胞原分化以及牙釉质和牙本质的形成。     

Smad1在人牙胚发育过程中的表达变化

观察骨形成蛋白特异的细胞内信号转导分子Ｓｍａｄ１在人牙胚发育过程中的表达变化,探讨Ｓｍａｄ１在牙齿发育过程中的作用,方法制备人牙发育各期标本,免疫组化方法观察Ｓｍａｄ１在人牙胚发育过程中的表达情况。结果：Ｓｍａｄ１在牙胚发育的不同时期均见不同的时表达模式。     

阻遏蛋白β-TrCP在小鼠牙胚不同发育时期的表达与意义

目的观察Sonic hedgehog（shh）信号转导通路的阻遏蛋白β- TrCP在小鼠牙胚发育不同时期的表达情况，探讨β- TrCP在晚期牙胚发育中的作用与意义。方法取不同发育时期的鼠胚、乳鼠鼠头标本，用标记生物素链亲和素LsAB法观察β- TrCP蛋白在不同发育时期牙胚组织的表达情况。结果β- TrCP在胚胎10.5、13.5、14.5、16.5、18.5 d的小鼠牙胚上皮层与间充质层，以及出生后0、3、6 d的小鼠成釉细胞与成牙本质细胞胞浆呈特征性表达。结论β- TrCP在正常发育小鼠牙胚及成釉细胞与成牙本质细胞特征性表达，提示β- TrCP在牙胚发育中维持/限定shh信号通路的正常信号转导具有重要意义。     

新基因mcpr1在小鼠牙胚发育中的时空表达和意义

目的:探讨mcpr1在牙胚发生过程中的可能作用。方法:采用免疫组化LsAB法观察MCPR1在小鼠牙胚发育各个时期的表达分布及其变化情况。结果:MCPR1在小鼠牙胚各个时期均有表达,但各期分布模式有所不同,帽状期开始在成釉器上皮细胞表达,在釉结节内亦呈现强阳性表达,在分化成熟的成牙本质细胞及成釉细胞内呈现出强阳性表达。结论:mcpr1可能通过上皮-间充质之间的信号传递及相关基因的相互调控,参与成釉器的成熟及牙胚的发育。     

氯离子通道CLC-7在小鼠牙胚中的表达

目的:研究氯离子通道CLC-7在小鼠牙胚发育过程中的表达及分布,探讨其在牙齿发育过程中的作用.方法:提取小鼠牙胚中的总RNA并制备不同发育阶段的小鼠牙胚标本,应用RT-PCR和免疫荧光染色方法检测CLC-7在小鼠牙胚中的表达及分布.结果:RT-PCR检测发现新生小鼠牙胚有Clcn7 mRNA的表达.免疫荧光染色发现E18小鼠牙胚开始有CLC-7的表达,CLC-7存在于牙胚多种细胞,如内釉上皮层细胞、中间层细胞、星网状层细胞、牙乳头细胞、成釉细胞、成牙本质细胞.结论:CLC-7在小鼠牙胚中呈特异性空间分布,可能参与牙胚发育过程的调节.     

氟化物作用下体外培养人牙胚内釉上皮细胞中Smad1、5表达的变化

目的观察不同浓度的氟化物对体外培养的人牙胚内釉上皮细胞中Smad1、5表达的影响,从细胞内信号转导水平观察氟对骨形成蛋白(BMP)信号转导的影响。方法Trowell法体外培养人牙胚,分别用10mg/L和25mg/L的氟化物刺激培养的牙胚,免疫组化观察结果。结果经图像分析显示,10mg/L组和25mg/L组从第4天开始,内釉上皮细胞中Smad1、5的表达均低于对照组。结论氟化物能抑制体外培养的人牙胚内釉上皮细胞中Smad1、5表达。提示氟可能通过抑制Smad1、5分子干扰上皮和间充质之间BMP正常的信号转导,进而使釉质的分化发育受到影响,可能是氟斑牙发生的细胞内机制之一。     

氟化物作用下体外培养人牙胚内釉上皮细胞中Smad4表达的变化

目的：观察不同浓度的氟化物对体外培养的人牙胚内釉上皮细胞中Smad4表达的影响，从细胞内信号转导水平探讨发生氟牙症可能的细胞内机制。方法：Trowell法体外培养人牙胚，用10mg/L和25mg/L的氟分别刺激培养的牙胚，免疫组化观察结果。结果：免疫组化结果经图像分析显示10mg/L组从第8天，25mg/L组从第4天开始内釉上皮细胞中Smad4的表达低于对照组。结论：观察到，氟化物能抑制体外培养的人牙胚内釉上皮细胞中Smad4表达。提示：氟可能通过抑制Smad4分子来干扰上皮和间充质之间正常的信号转导，进而使釉质的分化发育受到影响。这有可能即是氟牙症发生的细胞内机制之一。     

DLX1基因在人牙齿发育中的表达

目的：研究DLX1基因在人牙齿发育中的表达模式,确定DLX1转录子亚型。方法：提取人牙胚总RNA,利用巢式RT-PCR技术克隆DLX1cDNA序列;制备地高辛标记的RNA探针,检测人磨牙发育不同时期DLX1的表达情况。结果：人牙胚中表达的DLX1为转录子亚型1。在表达模式上,11周、14周、17周和19周4个不同发育时期磨牙均有DLX1表达,11周和14周少量表达于牙上皮和间充质,17周依然在牙上皮和间充质中表达,但表达增强,19周表达主要集中在内釉上皮细胞。结论：DLX1在人牙齿发育的各个时期均有表达,表明DLX1可能是人类牙齿发育中的一个重要调节因子。     

氯离子通道CIC-5在大鼠牙胚发育过程中的表达

目的研究氯离子通道ClC-5在大鼠牙胚发育过程中的表达情况，探讨其在牙齿发育过程中的作用。方法从不同发育阶段的大鼠牙胚中提取总RNA和蛋白，应用RT—PCR和Westem blot检测ClC-5在大鼠牙胚发育过程中mRNA和蛋白的表达情况。结果ClC-5在牙胚发育的过程中存在时空特异性表达，其mRNA和蛋白都主要在牙胚发育的钟状晚期表达。结论ClC-5在大鼠牙胚发育过程中的这种时空特异性表达，提示其可能在牙齿发育的过程中发挥一定的作用。     

氯离子通道ClC-5在大鼠牙胚发育过程中的表达

目的研究氯离子通道ClC- 5在大鼠牙胚发育过程中的表达情况,探讨其在牙齿发育过程中的作用。方法从不同发育阶段的大鼠牙胚中提取总RNA和蛋白,应用RT- PCR和Western blot检测ClC- 5在大鼠牙胚发育过程中mRNA和蛋白的表达情况。结果ClC- 5在牙胚发育的过程中存在时空特异性表达,其mRNA和蛋白都主要在牙胚发育的钟状晚期表达。结论ClC- 5在大鼠牙胚发育过程中的这种时空特异性表达,提示其可能在牙齿发育的过程中发挥一定的作用。     

BSP、OPN在小鼠牙胚发育中的表达

目的:探讨骨涎蛋白(Bone sialoprotein,BSP)、骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)在Balb/c小鼠牙胚发育各期的时空分布特点及两者在牙齿矿化过程中的作用。方法:采用免疫组化法观察Balb/c小鼠出生前后牙胚及颌骨中BSP、OPN的表达与分布。结果:BSP、OPN在牙胚发育中的时空分布模式存在差异。OPN在蕾状期的表达弱于BSP,两者在成釉器早期的发育中作用微弱;在帽状期、钟状期及牙体硬组织(牙冠、牙根)分泌形成期,OPN的表达范围及强度高于BSP,尤其在牙体硬组织形成期,OPN在牙胚各类细胞及骨组织中均呈强阳性表达。结论:BSP、OPN参与牙胚的发育及牙体硬组织的矿化成熟,在牙齿发育中发挥关键作用。     

bFGF在大鼠牙齿发育过程中表达的研究

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)在大鼠牙齿发育过程中的表达和分布变化,探讨bFGF在大鼠牙齿发育过程中的作用。方法:选用5、10、15、20、25d的大鼠,制备大鼠牙齿发育组织标本,采用免疫组织化学方法观察bFGF在大鼠牙齿不同阶段的表达情况。结果:在大鼠牙齿发育早期bFGF主要在成釉细胞表达,而在中间层和牙乳头表达较少。随着牙齿的发育,在成釉细胞、成牙本质细胞、前期牙本质和牙乳头表达逐渐加强。结论:bFGF可能与大鼠前期牙本质的沉积,牙釉质和牙本质的发育形成有关。     

Runx2/cbfa1在人牙胚发育过程中的表达

观察核心因子Runx2/cbfa1在人牙胚发育过程中的表达,探讨cbfa1在牙齿发育过程中的作用。方法:制备人牙胚发育各期标本,免疫荧光法观察cbfa1在人牙胚发育过程中的表达情况。结果:在牙胚发育的不同时期均可见不同的时空表达模式。蕾状期表达比较广泛;帽状期内外釉上皮细胞和牙囊中呈强阳性表达,中间层也为强阳性,牙乳头为弱阳性;钟状早期,前成牙本质细胞处有强阳性表达;钟状中后期,成釉细胞为强阳性,成牙本质细胞为阴性,而牙囊部位仍为强阳性。结论:Runx2/cbfa1转录因子在人牙胚整个发育过程中的表达状况,提示该因子可能在牙胚各期的发育起一定作用,参与了各种成牙相关细胞的分化和硬组织的形成。     

透明质酸在小鼠下颌第一磨牙牙胚不同发育时期的表达

目的:检测透明质酸在小鼠下颌第一磨牙牙胚不同发育时期的表达,探讨其在小鼠牙胚发育过程中的作用。方法:取不同胎龄的ICR胎鼠,制备小鼠下颌第一磨牙不同发育时期切片,用免疫组织化学实验方法检测透明质酸在下颌第一磨牙牙胚组织中的表达情况。结果:透明质酸在小鼠下颌第一磨牙牙胚的不同发育阶段表达各异。在小鼠磨牙开始发生时,透明质酸即在增厚的牙板上皮中表达,随后在蕾状期牙蕾中央的上皮细胞间可见透明质酸的表达,而在深层的牙源性间充质表达则不明显。自帽状期至钟状晚期,透明质酸在牙胚星网状层细胞间以及牙源性间充质细胞的表达逐渐增强,而在基底膜、内外釉上皮细胞、成釉细胞以及成牙本质细胞所在区域不表达。结论:透明质酸在牙胚发育过程中呈现时间-空间特异性表达。特别是其在星网状层细胞以及牙乳头间充质细胞中的表达随着牙胚的发育逐渐增强提示其可能与牙胚的形态发生密切相关。