CIK、DC-CIK细胞抗鼻咽癌CNE2细胞的作用比较

目的:研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)与树突状细胞(DC)共培养后DC-CIK细胞抗鼻咽癌CNE2细胞的作用.方法:正常人外周血单个核细胞诱导DC和CIK细胞,加入CNE2细胞冻融液,将DC与CIK共培养,以CIK细胞单独培养为对照.用MTT法测定杀伤活性.结果:DC-CIK细胞杀伤鼻咽癌细胞活性高于CIK细胞(P<0.05).结论:DC-CIK细胞抗鼻咽癌CNE2细胞的作用显著,为DC-CIK细胞免疫治疗提供了实验和理论依据.     

DC-CIK细胞抗鼻咽癌细胞的作用

目的：研究细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）与树突状细胞（DC）共培养后DC—CIK细胞抗鼻咽癌细胞的作用。方法：正常人外周血单个核细胞诱导DC和CIK细胞,加入CNE1或CNE2细胞冻融液,将DC与CIK共培养,以CIK细胞单独培养为对照。用M1Tr法测定杀伤活性。结果：DC—CIK细胞杀伤鼻咽癌细胞活性高于CIK细胞（P〈0．05）;杀伤CNEl细胞活性高于CNE2细胞（P〈O．05）。结论：DC-CIK细胞抗鼻咽癌细胞的作用显著,为DC—CIK细胞免疫治疗提供了实验和理论依据。     

DC-CIK细胞抗鼻咽癌细胞的作用

目的:研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)与树突状细胞(DC)共培养后DC-CIK细胞抗鼻咽癌细胞的作用.方法:正常人外周血单个核细胞诱导DC和CIK细胞,加入CNE1或CNE2细胞冻融液,将DC与CIK共培养,以CIK细胞单独培养为对照.用MTT法测定杀伤活性.结果:DC-CIK细胞杀伤鼻咽癌细胞活性高于CIK细胞(P＜0.05);杀伤CNE1细胞活性高于CNE2细胞(P＜0.05).结论:DC-CIK细胞抗鼻咽癌细胞的作用显著,为DC-CIK细胞免疫治疗提供了实验和理论依据.     

DC—CIK细胞在乳腺癌治疗中的研究现状

细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine—induced Killer，CIK）和树突状细胞（dendritic cell，DC）是肿瘤免疫治疗的两个重要部分，DC与CIK细胞共培养的细胞（DC—CIK）具有更强的杀伤活性和增殖能力，成为过继性免疫治疗研究领域的重点。目前，DC—CIK细胞在乳腺癌免疫治疗中的作用已有一定的研究报道并且临床上亦有初步应用，DC—CIK细胞在乳腺癌患者的治疗中发挥抗肿瘤作用的同时也起到提高免疫力的作用。本文就目前DC—CIK细胞在乳腺癌免疫治疗中的研究现状做一综述。     

DC 与同源 CIK 细胞抗急性粒系白血病细胞作用的研究

目的：探讨急性白血病细胞免疫治疗的新途径。方法：自正常健康人外周血分离淋巴细胞进行培养,于不同时间分别加入相应的细胞因子,培养9天后收获 CIK 和 DC 细胞。按照1：5的比例将 DC 细胞与CIK 细胞混合培养,收集共培养的细胞,以不同比例与急性粒系白血病细胞共培养测定细胞杀伤活性。结果：DC 细胞与 CIK 细胞共培养后,其细胞增殖能力、细胞毒活性与单独 CIK 细胞相比有统计学差异。在同一效靶比对急性粒系白血病细胞均有杀伤作用,随着效靶比的增高对急性粒系白血病细胞的杀伤活性增强。结论：DC 细胞可增强 CIK 细胞的杀伤活性。     

CIK、DC-CIK细胞对神经母细胞瘤细胞杀伤作用的研究

目的：研究细胞因子诱导的杀伤细胞（ CIK）与树突状细胞（ DC）共培养后对神经母细胞瘤（ neuro-blastoma,NB）细胞株的杀伤作用。方法：取健康人和肿瘤患者外周血单个核细胞（ PBMC）,加入不同的细胞因子分别诱导出DC和CIK细胞,用流式细胞术测定诱导培养前后DC和CIK细胞的表型,MTT法测定不同组CIK细胞对NB细胞株的杀伤活性。结果：流式细胞仪检测健康人PBMC培养后CD3＋CD56＋淋巴细胞百分比以及对NB细胞株的杀伤活性均显著高于肿瘤患者（ P〈0.05）。此外,与单纯CIK细胞相比,DC-CIK细胞具有更强的杀伤NB细胞株的活性（ P〈0.05）。结论：DC-CIK细胞是一种细胞毒作用高于单纯CIK细胞的免疫活性细胞。健康人和肿瘤患者的PBMC经诱导培养获得的CIK细胞有显著差别,为临床进一步提高CIK细胞的治疗效果提供了实验依据。     

CIK细胞联合树突状细胞抗肿瘤作用的研究进展

树突状细胞（dendritic cell，DC）是当今肿瘤免疫治疗领域备受关注的热点之一。由DC激活的细胞免疫在机体抵御恶性肿瘤中发挥着十分重要的作用。细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine—induced killer cells，CIK）是一种高效的肿瘤杀伤细胞。研究表明树突状细胞联合CIK细胞可更有效地杀伤肿瘤细胞。现就树突状细胞联合CIK细胞抗肿瘤作用的基础和临床研究进展做一综述。     

抗原致敏树突状细胞诱导CIK对肺癌细胞杀伤作用的研究

[目的]研究肿瘤抗原致敏的树突状细胞（DC）诱导淋巴因子激活的杀伤细胞（LAK）和细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）对肺癌细胞株A549和肺腺癌原代细胞的杀伤作用。[方法]取健康人外周血单个核细胞,常规诱导出DC、CIK、LAK细胞。用肺癌A549细胞提取的肿瘤抗原冲击DC,倒置显微镜下观察DC形态。流式细胞仪检测DC经抗原冲击和未经抗原冲击后其表型变化。LDH释放法测定杀伤活性。[结果]DC经肿瘤抗原冲击后在镜下呈典型成熟形态,其表面分子CD40、CD80、CD86和HLA-DR的表达明显较未经肿瘤抗原冲击的DC高。DC＋CIK细胞对A549和肺腺癌原代细胞的杀伤活性高于CIK细胞、LAK细胞和DC＋LAK细胞（P〈0.05）,随着效靶比的升高,其杀伤效应随之增强（P〈0.05）。[结论]肿瘤抗原致敏的DC可诱导特异性CIK细胞,DC＋CIK细胞对A549和肺腺癌原代细胞的杀伤作用明显高于DC＋LAK、CIK、LAK细胞。     

抗原致敏DC联合CIK细胞对肺癌细胞杀伤作用的研究

[ 目的]研究肿瘤抗原致敏的树突状细胞（DC）联合细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）对肺腺癌原代细胞的杀伤作用，及肺癌细胞杀伤作用中细胞因子水平。[方法]取健康人外周血单个核细胞（PBMNC），常规诱导出DC、CIK、LAK细胞；用肺癌A549细胞提取的肿瘤抗原冲击DC，倒置显微镜下观察DC形态，流式细胞仪检测DC经抗原冲击和未经抗原冲击后其表型变化：把CIK细胞、DC-CIK细胞、LAK细胞和DC-LAK细胞作为效应细胞，肺腺癌原代细胞作为靶细胞，共分为4组，在10：1、20：1、50：1的效靶比时，进行杀伤试验，使用LDH释放法测定杀伤活性；ELISA法检测杀伤试验中细胞因子IL-2、IL-12、IFN-γ的分泌水平。[结果]DC经肿瘤抗原冲击后在镜下呈典型成熟形态；DC—CIK细胞对肺腺癌原代细胞的杀伤活性高于CIK细胞、LAK细胞和DC—LAK细胞（P〈0．05），随着效靶比的升高，DC—CIK细胞对肺癌细胞的杀伤效应随之增强（P〈0．05）；细胞杀伤试验中DC—CIK细胞组中IFN-γ、IL-12的分泌量明显高于其它3组（P〈0．05）：而IL2的分泌量以DC-LAK细胞组为最高，DC—LAK和LAK细胞组明显高于其他2组（P〈0．05）。[结论]肿瘤抗原致敏的DC可诱导特异性CIK细胞，显著提高CIK细胞对肺腺癌原代细胞的杀伤作用，其杀伤作用可能与IFN-γ、IL12的分泌量有关。     

抗原负载的树突状细胞介导的抗慢性粒细胞白血病作用

目的：研究慢性粒细胞白血病（CML）细胞冻融抗原(CLA)负载的树突状细胞（DC）对特异性抗白血病T细胞的作用。方法：将健康人外周血单个核细胞来源的DC在体外用CLA负载,再与CML患者的经细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）共同培养,应用乳酸氢酶释放法观察其对自身CML细胞杀伤活性,与未负载的DC与CIK共培养组、CIK组分别进行比较。结果：DC经抗原负载后介导的特异性抗白血病T细胞对CML细胞杀伤活性明显增强。结论：用CLA负载可进一步提高DC介导的特异性抗白血病T细胞对CML细胞的杀伤活性。     

DC - CIK 治疗 43 例晚期非小细胞肺癌的近期疗效观察简

目的：探讨树突状细胞（dendritic cell,DC）共培养细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-induced killer,CIK）治疗晚期非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者的近期疗效。方法：将43例确诊的晚期非小细胞肺癌患者给予DC-CIK治疗,观察治疗前后外周血中 T细胞亚群及细胞因子的变化,卡氏评分（Karnofsky,KPS）和临床疗效,并观察其不良反应。结果：患者治疗后CD3＋、CD4＋、CD56＋和CD4＋/CD8＋的比例较治疗前增加（P＜0.05）,差异有统计学意义。免疫治疗增加了细胞因子IL-2、IL-12、IFN-γ和TNF-α的水平（P＜0.05）。治疗后疾病控制率为53.49%,KPS评分总提高率为83.72%。结论：DC-CIK治疗能提高患者的免疫功能及生活质量,有望成为非小细胞肺癌有效的过继免疫治疗方法。     

DC-CIK细胞的制备及其对恶性肿瘤的疗效观察

目的：探索DC-CIK细胞应用于临床的质量控制及对恶性肿瘤的疗效.方法：选取陕西省友谊医院肿瘤生物诊疗科中晚期恶性肿瘤患者33例（恶性黑色素瘤3例,肠癌4例,肺癌5例,胃癌3例,食管癌4例,宫颈癌7例,肾癌7例）.采集患者外周血分离PBMC,诱导DC-CIK细胞,并扩增培养.质控检测细胞数量和活细胞比例、细胞毒活性、感染源、流式细胞术检测免疫表型.将检测合格后的DC-CIK细胞分5次静脉回输入患者体内,每2天回输一次,每疗程5次,共2个疗程,观察治疗效果和不良反应.结果：经诱导后的DC-CIK细胞符合预期免疫活性细胞质控的各项要求.33例患者经治疗后,完全缓解3例,部分缓解17例,稳定9例,进展4例.总有效率60.6％,临床受益率87.8％.治疗后患者外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD3＋CD56＋T细胞比例分别为（60.25±7.75）％、（29.76±3.85）％、（30.25±4.35）％和（18.20±4.30）％,较治疗前均明显增高（P均＜0.05）.生活质量KPS评分较治疗前明显上升（P＜0.01）[（75.3±7.6）分vs（58.5±6.2）分].无严重不良反应和化验指标异常.结论：DC-CIK细胞制剂质量控制指标切实可行,对恶性肿瘤有较好的临床疗效,并能有效增强患者的免疫功能.     

来那度胺增强细胞因子诱导的杀伤细胞杀伤效应的研究

 【摘要】　目的 　探讨来那度胺调节细胞因子诱导的杀伤（CIK）细胞对淋巴瘤细胞的杀伤效应。方法　取健康志愿者外周血单个核细胞,经过干扰素-γ（INF-γ）、白细胞介素-2（IL-2）、抗CD3单抗诱导CIK细胞增殖,并对培养不同时间CIK细胞用不同浓度来那度胺进行处理。流式细胞术检测CD＋3CD＋56细胞比例;酶联免疫吸附（ELISA）法检测粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、INF-γ及肿瘤坏死因子α（TNF-α）的分泌水平;用Cell Counting Kit-8（CCK-8）试剂盒检测来那度胺作用后的CIK细胞及未处理的CIK细胞对3种淋巴瘤细胞株的体外杀伤效应。 结果　CIK细胞在多种细胞因子诱导下,CD＋3CD＋56细胞比例明显增加,0.2～5.0 μmol／L的来那度胺对其扩增分化没有影响（P＞0.05）。来那度胺作用下CIK细胞分泌GM-CSF、INF-γ、TNF-α水平有显著提高（P＜0.05）。在1.0 μmol／L来那度胺作用下CIK细胞对淋巴瘤细胞的杀伤效力明显高于未经来那度胺处理的CIK细胞[（42.53±2.19）%比（15.5±3.82）%;（44.78±4.86）% 比（29.94±6.33）%;（54.71±5.31）%比( 37.43±9.75）%]。结论　在来那度胺作用下,CIK细胞分泌功能和对3种淋巴瘤细胞的杀伤效应均有显著增强。     

长期培养的CIK细胞hTERT基因表达水平的动态变化

目的：初步探讨长期培养的CIK细胞hTERT基因表达水平的变化,进一步评价CIK细胞治疗的安全性。方法：抽取3名健康人外周静脉血进行CIK细胞培养,每周台盼蓝染色计数细胞,实时荧光定量PCR法检测培养第0、2、7、21及42天的CIK细胞hTERT基因的表达水平,流式细胞仪分析培养第0、7、14、28、49及56天的CIK细胞周期的改变并检测凋亡,MTT法测定培养第14、30天的CIK细胞对肺癌LTE细胞系的细胞毒活性。结果：CIK细胞在体外培养第28天至第35天细胞增殖达高峰,与第0天相比扩增约6.7至15.95倍,此后存活细胞逐渐减少,最终约60天左右细胞全部死亡,与流式细胞仪检测细胞凋亡结果一致。hTERT表达水平在培养48小时最高,较第0天增加约（2.84±1.27）倍,随后随培养时间延长表达水平下降,在培养1周时降至培养初始水平,并在此后的培养过程中维持低水平表达。在CIK培养1周时处于S期细胞比例最高,约（41.27±4.57）%,随培养时间延长G0/G1期细胞比例占绝大部分,在培养第49天G0/G1期细胞比例在90%以上[（97.56±1.17）%];CIK细胞在第14天杀瘤活性约（58.58±8.52）%,在30天时杀瘤活性明显下降,约（32.47±7.51）%。结论：长期培养的CIK细胞随培养时间延长hTERT表达水平下降,未见细胞永生化倾向。     

不同冻存时间对CIK细胞免疫表型及杀伤活性的影响

目的:探讨不同冻存时间对外周血来源的CIK细胞免疫表型及其杀伤活性的影响。方法:采集6名健康患者外周血,分离外周血单个核细胞培养,第0h加入IFN-γ,24h后加入IL-2、抗CD3单抗,每隔3天补充含CD3单抗、IL-2的新鲜培养液,培养15天进行冻存。复苏冻存1、2、3、4、5月的CIK细胞为实验组,以常规培养至15天的CIK细胞为对照组。利用流式细胞仪检测各组CIK细胞中CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD56+细胞的百分比,CCK8法检测各组CIK细胞对K562细胞的杀伤活性。结果:冻存1、2、3月的CIK细胞与对照相比CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD56+细胞比例无明显差异（P＞0.05）,冻存4、5月的CIK细胞中CD3+CD8+、CD3+CD56+细胞比例较对照组明显下降［（70.62±6.35）%、（14.36±4.28）%、（67.87±5.63）%、（12.61±6.21）% vs （84.23±5.20）%、（22.75±3.46）%］,P＜0.05。对靶细胞的杀伤能力在1、2、3月时与对照相比未见明显减弱（P＞0.05）,冻存4月、5月后的CIK细胞在各效靶比对K562细胞的杀伤活性与对照相比明显减弱（P＜0.05）。结论:冻存时间的长短对CIK细胞的免疫表型及杀伤活性均有一定的影响,且随着冻存时间的延长,CIK细胞的杀伤活性减弱。建议冻存CIK细胞的最佳时间为1、2和3月。     

纳米材料介导TNF基因转染CIK细胞对鼻咽癌细胞生长抑制研究

目的：探讨纳米材料PAMAM介导TNFα基因转染CIK细胞的可能性以及对人鼻咽癌细胞株CNE-2生长的抑制作用。方法：纳米材料PAMAM介导pEGFP-N1-TNFα转染CIK细胞,检测其转染效率,ELISA法检测转染后CIK细胞培养上清液TNF—α浓度,流式细胞术分析CIK细胞表型,MTT法检测转染后CIK细胞对鼻咽癌细胞株CNE-2的生长抑制。结果：转染后CIK细胞生长曲线与来转染CIK细胞生长曲线一致;PAMAM介导pEGFP—N1-TNF。转染CIK细胞阳性率为（71．5±2．13）％,脂质体转染效率为（78．9±1．55）％,两组比较差异无统计学意义,P〉0．05;转染PAMAM／pEGFP—N1-TNFα后CIK细胞第1、3、5和7天培养上清液中TNF-α逐步升高,转染第1天TNF—α表达量为（8．24±0．65）0g／mL,明显高于未转染PAMAM／DNA组的（6．53±0．52）ρg／mL及单纯转染PAMAM组的（6．24±0．57）9g／mL;转染第3天TNF—α表达量为（23．41±2．82）pg／mL,明显高于未转染PAMAM／DNA组的（6．89±0．61）9g／mL）gc单纯转染PAMAM组的（7．05±0．58）ρg／mL;转染第5天TNF—α表达量为（61．59±3．47）og／mL,明显高于未转染PAMAM／DNA组的（7．29±0．75）ρg／mL及单纯转染PAMAM组的（7．15±1．21）ρg／mL;转染第7天TNF-α表达量为（89．21±4．24）ρg／mL,明显高于未转染PAMAM／DNA组的（8．13±1.04）ρg／mL及单纯转染PAMAM组的（8．78±1．25）pg／mL;经组间效应检验方差分析,不同时间不同组间TNF-α表达量差异有统计学意义,P〈0．05。转染pEGFP—N1-TNFα后CIK细胞可明显抑制CNE-2细胞生长,P〈0．05。结论：纳米材料PAMAM介导pEGFP—N1-TNFα转染CIK细胞未改变CIK细胞生长特性及表型特征,转染后CIK细胞可分泌较多TNF-α,可更加有效的抑制鼻咽癌细胞生长。