STAT3在肺腺癌细胞中的活化与肺腺癌发生机制的研究

目的：探讨STAT3,CyclinDl,CyclinB1,Bcl-2蛋白在肺癌发病中的作用。方法：采用Western-blot检测人肺腺癌细胞A549和正常人胚肺细胞HELF中STAT3,CyclinD1,CyclinB1,Bcl-2蛋白的表达。结果：①STAT3,CyclinDl,CyclinB1,Bcl-2蛋白在人肺腺癌细胞A549和正常人胚肺细胞HELF中均呈阳性表达,且二者表达均有统计学意义（P〈0．05）;②在人肺腺癌细胞A549中,STAT3蛋白的表达与CyclinD1,Bcl-2蛋白的表达成线性相关,而与CyclinB1蛋白的表达则无明显相关性。结论：STAT3信号转导通路可能通过对下游靶基因CyclinD1,Bcl-2蛋白的调控在肺癌的发生中起着重要的作用,但其具体机制还有待进一步深入研究。     

STAT3 siRNA对肺腺癌A549细胞STAT3及其下游基因表达的影响

目的：观察RNA干扰沉默STAT3基因对人肺腺癌A549细胞STAT3、CyclinD1、Bcl-2、BAX、Caspase-9蛋白表达的影响及其相关性及对细胞生长的影响,探讨肺癌基因治疗的新途径。方法：采用化学合成法,合成针对STAT3基因不同位点设计的3条小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）序列（siRNA1-3）和1条带有荧光标记的应用STAT3-siRNA转染处理人肺腺癌细胞系A549,转染16h后荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR检测STAT3基因表达的变化,蛋白免疫印迹法检测转染后A549细胞STAT3,CyclinD1,BAX,Bcl-2,Caspase-9蛋白表达,AM-BLUE检测A549细胞生长情况。结果：经RNA干扰能有效减低A549细胞STAT3mRNA表达水平（P〈0.05）,转染后A549细胞STAT3、CyclinD1、Bcl-2蛋白的表达水平均显著降低（P〈0.05）,而BAX、Caspase-9蛋白的表达水平升高（P〈0.05）。STAT3蛋白表达分别与CyclinD1、Bcl-2蛋白表达呈正相关（r=0.854,0.910,P〈0.05）;与BAX蛋白表达程负相关性（r=-0.848,P〈0.05）;与Caspase-9蛋白表达程无相关性（r=-0.787,P〉0.05）。RNA干扰法沉默STAT3基因后,A549细胞增殖受到明显抑制。结论：STAT3-siRNA可有效抑制STAT3、CyclinD1、Bcl-2在人肺腺癌A549细胞中的表达,升高BAX、Caspase-9在人肺腺癌A549细胞中的表达,抑制A549细胞生长。     

肺腺癌A549细胞STAT3基因沉默对细胞周期分布和凋亡水平变化的影响

目的：研究沉默STAT3基因表达前后肺腺癌A549细胞的细胞周期分布状况和细胞凋亡水平变化及其意义。方法：利用流式细胞仪（FCM）检测RNA干扰（RNAi）技术沉默STAT3基因表达前后肺腺癌A549细胞的细胞周期状况和细胞凋亡水平变化。结果：STAT3沉默后,肺腺癌A549细胞大量处于G0／G1期（P〈0．05）,而S、G2／M期的细胞相对减少（P〈0．05）;并且细胞凋亡明显增多,前48h增长明显（R0．05）,48h后增长趋于平稳（P〉0．05）,但仍能较长时间维持较高水平。结论：STAT3siRNA能阻断A549细胞的细胞周期,使细胞周期停留在G0／G1期,不能进入S期,不能完成DNA的合成,无法进入M期,未完成细胞的分裂,并能诱导肺腺癌A549细胞的凋亡,提示STAT3的表达与A549细胞的细胞周期和凋亡密切相关。     

CA916798基因通过PI3K/AKT/mTOR通路参与顺铂耐药的机制分析

摘要：目的观察阻断PI3K/AKT/mTOR通路对人肺腺癌细胞A549 及多药耐药人肺腺癌细胞A549/CDDP内CA916798 基因
mRNA表达的影响。方法以雷帕霉素、LY294002分别作用于人肺腺癌细胞A549和多药耐药人肺腺癌细胞A549/CDDP,检测
顺铂作用后细胞生长及增殖情况,RT-PCR 检测CA916798 基因mRNA表达水平。结果以雷帕霉素和LY294002 分别阻断
A549、A549/CDDP细胞的PI3K/AKT/mTOR通路后,细胞对于顺铂的耐药性均显著下降（P<0.05）,CA916798基因的表达均显
著下调（P<0.05）。结论CA916798基因位于PI3K/AKT/mTOR通路下游,可能是CA916798诱导肺癌顺铂耐药的机制之一。
     

5种血清肿瘤标志物测定对诊断老年人肺癌的临床应用价值

目的了解5项肿瘤标志物与肺癌的相关性,从而为多指标联合诊断提供依据。方法取确诊肺癌老年患者治疗前后血清测定CEA、CA125、NSE、CA199、CA242与非肺癌患者对照。结果肺癌各组的CEA、CA125均值均高于正常参考值．肺腺癌组与健康对照组比较有姥著统计学差异（P〈0．01）。健康对照组及肺癌各组CA199、CA242的检测值均在正常范围内。健康对照组及肺癌、肺鳞癌的NSE在正常参考值内,只有小细胞肺癌的NSE明显高于正常参考值,与健康对照组比较,有显著统计学差异（P〈0．01）。符项标志物的特异性均较高,但灵敏度不同。肺腺癌的CEA、CA125、CA242的灵敏度较高,小细胞肺癌的CEA、CA125、NSE的灵敏度较高。选择两项阳性作为诊断指标,则肺癌、肺腺癌、小细胞肺癌的阳性率均达50％以上,与健康对照组比较均有娃箸统计学差异（P〈001）。结论CEA、CA125、CA242可作为肺腺癌;NSE、CA125、CEA可作为小细胞肺癌较好的肿瘤标志物。联合检测中两项阳性率对肺癌诊断最有价值。     

叉头蛋白3对肺腺癌细胞增殖和化疗药物顺铂敏感性的影响

目的：观察叉头蛋白3（FOXP3）在人肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞增殖和顺铂敏感性的影响，阐明肺腺癌细胞对顺铂耐药的相关机制。方法：收集肺腺癌患者术后石蜡标本50例和正常肺组织10例。免疫组织化学染色方法检测肺腺癌组织和正常肺组织中FOXP3和Ki-67的表达，分析肺腺癌组织和正常肺组织中FOXP3阳性表达率的差异，Pearson相关分析法分析FOXP3和Ki-67表达的相关性。选取对数生长期的人肺腺癌A549细胞进行siRNA转染，将A549细胞分为Mock组（转染脂质体）、Control-siRNA组（转染Control-siRNA）和FOXP3-siRNA组（转染FOXP3-siRNA）。RT-qPCR法检测各组A549细胞中FOXP3 mRNA表达水平，Western blotting法检测各组A549细胞中FOXP3蛋白表达水平，CCK-8法检测各组A549细胞增殖活性及不同浓度（0、0.63、1.25、2.50和5.00mg·L^-1）顺铂作用后各组A549细胞生长抑制率，RT-qPCR和Western blotting法检测顺铂作用后各组A549细胞中FOXP3 mRNA和蛋白表达水平。结果：FOXP3在肺腺癌和正常肺组织的阳性表达率分别为62.0%和13.3%，组间比较差异有统计学意义（P<0.05）；FOXP3和Ki-67在肺腺癌组织中表达呈正相关关系（r=0.370，P<0.01）；FOXP3-siRNA组A549细胞中FOXP3 mRNA和蛋白表达水平均明显低于Mock组和Control-siRNA组（P<0.01）；顺铂作用48和72 h后，FOXP3-siRNA组A549细胞增殖活性明显低于Mock组和Control-siRNA组（P<0.05）；1.25、2.50和5.00 mg·L^-1顺铂作用后，FOXP3-siRNA组A549细胞生长抑制率均高于Mock组和Control-siRNA组（P<0.05）；1.25和2.50 mg·L^-1顺铂组A549细胞中FOXP3 mRNA和蛋白表达水平均明显高于0 mg·L^-1顺铂组（P<0.05）。结论：沉默FOXP3可抑制肺腺癌细胞的增殖，增加肺腺癌细胞对顺铂的敏感性。     

应用荧光定量PCR和Western—blot检测RNA干扰肺腺癌A549细胞STAT3基因表达水平的实验研究

目的：研究RNAi技术对人肺腺癌A549细胞系中STAT3基因的阻断效应,探讨STAT3在肺癌中的重要作用,为肺癌的基因治疗寻找新的靶点。方法：将化学合成siRNA用脂质体介导法转染肺腺癌A549细胞,应用荧光定量PCR法检测RNA干扰后STAT3 mRNA表达量,得出抑制率。应用Western-blot检测RNA干扰后对STAT3蛋白表达的影响。结果：成功将siRNA转染肺腺癌A549细胞,荧光定量PCR结果显示,在转染24h、48h、72h后,各干扰组与阴性组比较STAT3基因表达量明显下调（P〈0.05）,Western blot显示转染前后STAT3蛋白的表达水平明显受到抑制,干扰组与阴性组空白组相比具有显著差异（P〈0.05）,内参基因在各组的表达量无明显差异。结论：将合成的STAT3 siRNA能有效抑制STAT3蛋白的表达、降低STAT3 mRNA水平,对STAT3有高效和特异的沉默作用,以STAT3为靶点的RNA干扰技术可望成为肺癌基因治疗的新策略。     

五种血清肿瘤标志物联合检测对肺癌的临床诊断价值

目的探讨五种血清肿瘤标志物癌胚抗原（CEA）、细胞角蛋白19片段（CYFRA21—1）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、糖类抗原125（CA125）和糖类抗原242（CA242）联合检测对肺癌临床诊断的价值和意义。方法选择57例初诊肺癌患者作为实验组,选择同期55例良性肺疾病患者作为对照组。采用化学发光法（CLIA）检测血清肿瘤标志物CEA、CYFRA21—1、NSE、CA125和CA242的水平,比较分析五种血清肿瘤标志物检测在肺癌临床诊断中的价值。结果实验组五种肿瘤标志物的水平均明显高于对照组（P均〈0．05）;且五种血清肿瘤标志物在不同病理类型肺癌中有不同水平,CEA、CA125、CA242在腺癌中表达较高,而CYFRA21。1在鳞癌中表达较高,NSE在小细胞癌中表达较高;联合检测时对诊断的灵敏度和准确率分别为92．8％和89．6％,明显高于各单项检查（P均〈0．05）。结论血清肿瘤标志物CEA、CYFRA21—1、NSE、CA125和CA242联合检测可以提高肺癌诊断的灵敏度和准确率,可应用于肺癌的生物学诊断。     

血清肿瘤标志物联合检测在肺癌诊断中的应用

目的：探讨糖类抗原125（CA125）、糖类抗原242（CA242）、癌胚抗原（CEA）、细胞角蛋白19片段（CYFRA21-1）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）等5项肿瘤标志物联合检测对肺癌的诊断价值。方法：采用流式荧光发光法,对肺癌组80例和肺良性疾病组46例的血清CA-125、CA242、CEA、CYFRA21-1和NSE等5项肿瘤标志物进行检测。结果：CA125、CA242、CEA、CYFRA21-1和NSE在肺癌组中的表达均显著高于肺良性疾病组（P〈0.01）。CEA在肺腺癌中的水平较高,CA125、CA242在鳞癌和小细胞肺癌中的水平较高。单项肿瘤标志物在肺癌诊断中灵敏度：CYFRA21-1〉CEA〉CA125〉NSE〉CA242;在腺癌中CYFRA21-1灵敏度最高（50.00%）,鳞癌中CYFRA21-1灵敏度最高（48.94%）,小细胞肺癌中CA125和NSE灵敏度最高（48.15%）。CA125、CA242、CEA、CYFRA21-1和NSE的ROC曲线下面积分别为0.669±0.095、0.608±0.097、0.682±0.096、0.714±0.090、0.660±0.096。在肺癌诊断中CA125＋CA242＋CEA＋CYFRA21-1＋NSE组合灵敏度最高（70.00%）,特异性也较好（84.78%）;腺癌诊断中联合检测灵敏度与单项CYFRA21-1检测灵敏度相同（50.00%）,但联合检测的约登指数大于单项CYFRA21-1;鳞癌诊断中CA125＋CA242＋CEA＋CYFRA21-1组合灵敏度最高（72.34%）,小细胞肺癌中CA125＋CA242＋CEA＋CYFRA21-1＋NSE组合灵敏度最高（88.89%）。结论：CA125、CA242、CEA、CYFRA21-1和NSE对肺癌的诊断均有一定意义,但单一指标诊断的灵敏度和特异性都有一定局限,联合检测可有效提高肺癌诊断的灵敏度和特异性。     

SOCS3基因对肺腺癌细胞株A549中c-Myc表达的影响

目的探讨SOCS3基因对人肺腺癌细胞株A549中c-Myc表达的调控作用。方法以脂质体为载体将pEFSOCS3和pSV2neo共转染至人肺腺癌细胞株A549,RT-PCR和免疫细胞化学法测定转染前后细胞中SOCS3mRNA和蛋白表达;Westernblot检测STAT3蛋白酪氨酸磷酸化水平变化;sqRT-PCR测定转染前后细胞中c-MycmRNA的表达。MTT法检测转染前后细胞增殖变化。结果RT-PCR和免疫细胞化学证实转染后细胞中SOCS3稳定表达;Westernblot证实pEFSOCS3转染组细胞STAT3蛋白酪氨酸磷酸化水平明显降低(P <0.01);sqRT-PCR显示pEFSOCS3转染组细胞中c-MycmRNA的表达显著降低。MTT法结果示pEFSOCS3转染组细胞增殖明显受到抑制。结论SOCS3蛋白可能通过抑制A549细胞中STAT3蛋白的酪氨酸磷酸化从而下调c-Myc基因的表达,最终抑制A549增殖。     

hTERT启动子特异性调控炭疽毒素致死因子表达以杀伤人肺腺癌A549细胞的研究

目的观察人端粒酶逆转录酶启动子(hTERTp)靶向调控炭疽毒素致死因子(LF)表达对人肺腺癌A549细胞活力及凋亡/坏死的影响。方法构建含hTERTp或CMV启动子(CMVp)且表达LF的真核质粒表达载体(phTERTp-LF或pCMV-LF),分别转染人肺腺癌A549细胞株和正常人胚肺成纤维MRC-5细胞株。针对A549、A549hTERTp-LF、A549CMVp-LF、MRC-5、MRC-5hTERTp-LF、MRC-5CMVp-LF六组细胞,分别采用RT-PCR和Western blot检测LF mRNA和蛋白表达,用MTT分析检测细胞活力,用流式细胞仪检测细胞凋亡/坏死。结果与A549组比较,A549hTERTp-LF组、A549CMVp-LF组均出现明显的LF mRNA和蛋白表达,以及细胞活力降低和凋亡/坏死率上升;与A549hTERTp-LF组相比,A549CMVp-LF组LF mRNA和蛋白表达更高,细胞活力降低和凋亡/坏死率上升更明显。与MRC-5组比较,MRC-5hTERTp-LF组也不能测出LF mRNA和蛋白表达,细胞活力和凋亡/坏死率亦无明显变化,但MRC-5CMVp-LF组的LF mRNA和蛋白表达上升,细胞活力降低和凋亡/坏死率增加。结论 hTERTp能特异性地驱动LF表达并杀伤人肺腺癌A549细胞,但避免了对MRC-5细胞的毒性,可望提供一种针对肺腺癌细胞且不良反应小的靶向治疗策略。     

肺腺癌细胞的STAT3信号传导途径的研究

目的:探明STAT3在肺腺癌细胞中增殖分化、抗凋亡作用与耐药之间的关系.方法:采用浓度梯度递增法诱导A549细胞株形成耐药细胞系,免疫组化及蛋白印迹法联合检测A549及耐药株中STAT3、LRP、MRP蛋白表达情况.结果:成功诱导了A549/CARP耐药细胞株.免疫组化:A549组、A549/CARP组STAT3阳性细胞数无显著性差异(P＞0.05);LRP、MRP阳性细胞数有显著性差异(P＜0.01);STAT3、LRP、MRP之间表达均无相关性(P＞0.05).蛋白印迹:A549组、A549/CARP组均存在STAT3蛋白的表达,二者无差异性(P＞0.05);STAT3、LRP、MRP之间表达均无相关性(P＞0.05).结论:STAT3参与了肺腺癌细胞的增殖分化和抗凋亡作用.并未参与介导肺腺癌的耐药;LRP、MRP均参与了诱导肺腺癌的耐药,但二者之间无相关性;LRP、MRP介导的耐药机制与STAT3信号传导途径无关;可通过破坏STAT3信号传导来控制肿瘤细胞的生长和增殖,为肺癌的治疗提供了以STAT3为靶向的基因治疗.     

STAT3、MRP、LRP在肺腺癌A549及A549/CARP耐卡铂细胞株中的表达及关系的研究

目的:探明STAT3与肺腺癌细胞多药耐药之间的关系.方法:采用免疫组化法测定A549及A549/CARP耐卡铂细胞株中STAT3、LRP、MRP蛋白表达情况.结果:STAT3在A549组、A549/CARP组中阳性细胞数无显著性差异(t=1.519,P＞0.05);LRP、MRP在A549组、A549/CARP组中阳性细胞数有显著性差异(t=3.350,P＜0.01)(t=3.747,P＜0.01);STAT3、LRP、MRP之间表达均无相关性(r=0.061,P＞0.05).结论:STAT3并未直接参与介导肺腺癌的多药耐药性;LRP、MRP均参与了诱导肺腺癌的耐药,但二者之间无相关性;STAT3信号传导途径与LRP、MRP蛋白的激活机制可能无关.     

WASF3反义寡核苷酸对非小细胞肺癌细胞增殖和迁移的影响及其机制

目的探讨Wiskott-Aldrich综合征蛋白家族成员3的反义寡核苷酸（WASF3-AS）对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖和迁移的影响及其作用机制。方法RT-qPCR法检测人NSCLC细胞株A549细胞和人正常肺细胞MRC-5中WASF3的表达水平。将A549细胞分为空白对照组、WASF3-NC组（阴性对照组）、WASF3-AS组（反义寡核苷酸WASF3组）,应用RT-qPCR法检测WASF3-AS对A549细胞中WASF3表达的影响;应用CCK-8法检测细胞增殖能力,克隆实验检测细胞克隆能力,Transwell法检测细胞迁移能力;RT-qPCR和Western blotting法分别检测WASF3-AS对A549细胞中磷酸酶和张力蛋白同源基因（PTEN）、磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（p-Akt）mRNA和蛋白表达水平。结果与人正常肺细胞MRC-5比较,A549细胞各组中WASF3的mRNA相对表达量均增加（P < 0.05~P < 0.01）;空白对照组和WASF3-NC组的WASF3的mRNA相对表达量差异无统计学意义（P>0.05）,但均高于WASF3-AS组（P < 0.05和P < 0.01）。与WASF3-NC组比较,转染后48、72、96 h WASF3-AS组细胞增殖水平明显降低（P < 0.05）。细胞转染14 d后,与空白对照组和WASF3-NC组比较,WASF3-AS组细胞克隆形成率和细胞迁移数目均明显降低（P < 0.05）。与WASF3-NC组比较,WASF3-AS组细胞的PTEN mRNA和蛋白相对表达量明显增加,PI3K、p-Akt mRNA和蛋白相对表达量明显减少（P < 0.05）。结论人NSCLC细胞的WASF3表达水平明显高于正常肺细胞;WASF3-AS可能通过调控PTEN-PI3K/Akt信号通路,抑制NSCLC的增殖、克隆和迁移。     

热休克蛋白在肺腺癌细胞及组织中的表达

目的:探讨热休克蛋白(heat shock proteins, HSPs)在肺腺癌A549细胞及组织中的表达情况.方法:分别以正常人支气管上皮(human bronchial epithelium,HBE)细胞和正常肺组织为对照,采用免疫印迹及RT-PCR的方法,从细胞水平和组织水平观察HSP86,HSP70及aB晶状体蛋白在肺腺癌A549细胞及组织中的表达情况.结果:与HBE细胞及正常肺组织比较,A549细胞及癌组织中HSP86,HSP70及aB晶状体蛋白的mRNA与蛋白质表达均显著增加(P＜0.05),其中以HSP70的增加最为显著(P＜0.01).结论:肺腺癌细胞及组织中HSPs的表达量高于HBE细胞及正常肺组织,其中以HSP70的增加最为显著.