蜕皮甾酮对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞影响机制的研究

观察蜕皮甾酮对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞（MCs）细胞外基质的影响并初步探讨其可能的作用机制。方法：体外培养大鼠Mes细胞株,分低糖组、高糖组、甘露醇组、乙醇对照组、高糖＋蜕皮甾酮组（EDS组）、高糖＋苯那普利组,分别作用12h、24h、48h,免疫细胞化学法检测细胞Col1V蛋白的表达,RT—PCR检测TGF—β1及Smad7mRNA的表达。结果：（1）c01Ⅳ表达的变化：与低糖组比较,高糖组colⅣ表达显著增加（P〈0．01）;与高糖组比较,EDS组及苯那普利组Col1V表达显著减少（P〈0．01）,EDS组与苯那普利组无显著差异（P〉0．05）;（2）TGF—p1及Smad7mRNA的表达：与低糖组比较,高糖组24hSmad7基因表达明显增加（P〈0.01）,24h、48hTGF—B1基因表达均显著增加（P〈0．01）;与高糖组比较,24h、48hEDS组及苯那普利组Smad7基因表达均明显增加（P〈0．01）,TGF—B1基因表达均显著减少（P〈0．01）,EDS组与苯那普利组之间Smad7、TGF—B1基因表达无显著差异（P〉0．05）。结论：（1）蜕皮甾酮能减少高糖培养大鼠MCs细胞外基质的增加。（2）蜕皮甾酮能下调TGF—β1 mRNA的表达、上调Smad7 mRNA的表达,从而发挥对肾脏的保护作用。     

川芎嗪对高糖环境大鼠肾小球系膜细胞增殖及其细胞外基质含量的影响

目的：探讨川芎嗪对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞（MCs）增殖及其细胞外基质含量的影响。方法：体外培养大鼠肾小球系膜细胞株,分对照组、高糖组、TMP组,分别培养12h、24h、48h,CASY细胞计数仪计数细胞存活率;以CCK-8法检测细胞增殖;以ELISA法检测细胞上清液细胞外基质ColⅣ及FN的含量。结果：各TMP浓度组之间存活率无统计学差异（P〉0.05）;与对照组比较,高糖下培养24h、48hMCs增殖显著增快（P〈0.01）,分泌的ColⅣ及FN含量增多（P〈0.05）;与高糖组比较,TMP各组MCs增殖显著减慢（P〈0.01）,分泌ColⅣ及FN减少（P〈0.01或P〈0.05）。结论：川芎嗪可以有效抑制高糖的促增殖作用并能减少系膜细胞外基质的增加。     

肌肽对高糖作用下肾小球系膜细胞的影响

目的探讨肌肽对体外高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞MCs生长的影响。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞（mesangial cells,MCs）,分为正常对照组（NG）、高糖组（HG）、高渗甘露醇组（HM）、正常糖加20 mmol/L肌肽组（NG＋C20）和高糖加20 mmol/L肌肽组（HG＋C20）5组。采用MTT法测定肾小球系膜细胞24 h、48 h的增殖情况。结果在24 h、48 h时间段,在与正常对照组相比高糖组出现明显的增殖现象（P〈0.01或P〈0.05）;高糖加20 mmol/L肌肽组与高糖组相比,具有显著的抑制作用（P〈0.01）。结论肌肽通过抑制高糖条件下肾小球系膜细胞的增殖来对糖尿病肾病起到保护作用,为糖尿病肾病的防治提供新途径。     

姜黄素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维连接蛋白表达的影响

目的:研究姜黄素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维连接蛋白(FN)表达的影响.方法:以大鼠系膜细胞(MCs)为受试对象,将MCs分为7组:①正常对照组(5 mmol/L葡萄糖,NG组),②高糖组(30 mmol/L葡萄糖,HG组),③高糖 6.25 μmol/L姜黄素组,④高糖 12.5 μmol/L姜黄素组,⑤高糖 25μmol/L姜黄素组,⑥高糖 50 μmol/L姜黄素组,⑦高糖 100μmol/L姜黄素组.分别作用24 h后,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖情况,用Western Blot法测定细胞内FN蛋白表达.结果:作用24 h后,高糖明显诱导MCs增殖并上调细胞内FN表达.不同浓度姜黄素均能抑制高糖诱导的细胞增生,并抑制FN蛋白表达增加.结论:姜黄素能抑制高糖诱导的MCs增殖,并下调FN蛋白表达,提示姜黄素可能通过阻抑FN表达减少细胞外基质积聚,从而发挥对糖尿病肾脏的保护作用.     

脂联素对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖及粘附分子1表达的影响

目的探讨脂联素（ADPN）对高糖环境下肾小球系膜细胞（MCs）增殖及细胞间粘附分子1（ICAM-1）表达的影响。方法将MCs分为三组：①正常组（5．5mmol／L葡萄糖）,②高糖组（25mmol／L葡萄糖）,③ADPN组（25mmol／L葡萄糖,2．5ug／mlADPN）运用MTT测定（24h,48h,96h）后MCs的增殖情况;再将MCs分为三组：①正常组（5．5mmol／L葡萄糖）,②高糖组（25mmol／L葡萄糖）,⑤ADPN组（25mmol／L葡萄糖2．5,5,7．5,10,15,20ug／mlADPN）,作用48小时后运用ELISA法测定各组MCs上清液中ICAM--1的含量。结果高糖组抑制细胞增殖,加A．ADPN后促进细胞增殖。ICAM--1在高糖组表达较高,加入低浓度ADPN对于ICAM--1表达影响不大,10--20mg／LADPN组和高糖组相比,ICAM--1的表达下降,差异有统计学差异（P〈O．05）,且呈剂量依赖性。姑论低浓度ADPN可以促进MCs增殖;中等以上浓度ADPN可以抑制ICAM--1在Mcs的表达。提示ADPN可能通过阻抑ICAM-1表达发挥对DN的保护作用。     

硫化氢通过调控沉默信息调节子1抑制高糖诱导的人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤

目的 观察外源性硫化氢（H2S）对高糖诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）氧化应激损伤的保护作用及其可能机制。方法 用25 mmol/L D-葡萄糖（高糖）、外源性H2S供体硫化氢钠（NaHS）（5×10-5、1×10-4、5×10-4、1×10-3和5×10-3mol/L）及沉默信息调节子1（SIRT1）特异性抑制剂尼克酰胺（40 mmol/L）处理HUVECs细胞株24 h。实验分为对照组、高糖组、甘露醇组、NaHS（5×10-5、1×10-4、5×10-4、1×10-3、5×10-3mol/L）组、高糖＋NaHS（5×10-5、1×10-4、5×10-4、1×10-3和5×10-3mol/L）组和高糖＋NaHS（10-3 mol/L）＋尼克酰胺组。采用MTT比色法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞内的内活性氧（ROS）水平,Western bolt法检测SIRT1的表达。结果 与对照组比较,高糖组细胞活力显著降低[OD值分别为（0.76±0.09）和（0.18±0.01）,t=5.34,P〈0.05],细胞内ROS水平显著增加[ROS水平分别为（356.18±42.96）au和（1183.63±84.31）au,t=6.72,P〈0.05]。与高糖组比较,高糖＋NaHS（5×10-4、1×10-3和5×10-3 mol/L）组细胞活力显著增加[OD值分别为（0.18±0.01）、（0.39±0.05）、（0.68±0.04）和（0.51±0.08）,t1=3.16,t2=3.95,t3=3.86,均P〈0.05],细胞内ROS水平显著降低[ROS水平分别为（1183.63±84.31）、（874.32±85.36）、（628.65±54.27）和（439.56±53.64）au,t1=3.46,t2=3.97,t3=5.13,均P〈0.05]。与对照组比较,高糖组细胞中SIRT1蛋白表达显著下调[蛋白相对表达量分别为（0.48±0.04）和（0.17±0.03）,t=3.94,P〈0.05]。与高糖组比较,高糖＋NaHS（10-3mol/L）组细胞中SIRT1表达显著上调[蛋白相对表达量分别为（0.17±0.03）和（0.59±0.08）,t=4.36,P〈0.05]。SIRT1抑制剂尼克酰胺取消了NaHS抑制高糖诱导的HUVECs细胞活力的降低[高糖＋NaHS组和高糖＋NaHS＋尼克酰胺组OD值分别为（0.52±0.04）和（0.23±0.03）,t=2.98,P〈0.05]和细胞内ROS水平的增加[高糖＋NaHS组和高糖＋NaHS＋尼克酰胺组ROS水平分别为?     

肾上腺髓质素对上皮性卵巢癌细胞增殖的影响

目的观察肾上腺髓质素（AM）对体外培养的人上皮性浆液性卵巢癌细胞株（CAOV3细胞）增殖的影响。方法将CAOV3细胞进行体外培养,以不同浓度的AM（1-52）（1×10-9mol/L、1×10-8mol/L、1×10-7mol/L、1×10-6mol/L）分别处理CAOV3细胞24小时、48小时、72小时,四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞的增殖率。结果在AM（1-52）浓度为1×10-9mol/L、1×10-8mol/L、1×10-7mol/L、1×10-6mol/L时均可促进CAOV3细胞增殖（P〈0.05）,随着AM（1-52）浓度的增高及作用时间的延长细胞的增殖率呈增高趋势（P〈0.05）。结论AM能促进CAOV3细胞的增殖。     

血府逐瘀汤对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖及细胞外基质的影响

目的：研究血府逐瘀汤对血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）诱导的心肌成纤维细胞增殖及细胞外基质合成的影响,探讨其抑制心肌纤维化可能的作用机制。方法：采用胰酶消化法分离培养乳鼠心肌成纤维细胞（cardiac fibroblast,CF）,建立AngⅡ诱导的心肌纤维化模型。实验分组为：空白对照组,AngⅡ组,5%、10%、15%血府逐瘀汤组和缬沙坦组。空白对照组以对照组鼠血清温育,其余各组先以AngⅡ10-6mol/L刺激24h后,再分别以对照组鼠血清,5%、10%、15%血府逐瘀汤含药血清,缬沙坦含药血清温育24h。采用四氮唑蓝比色法检测CF增殖,羟脯氨酸法检测胶原含量,放射免疫法检测细胞培养上清中透明质酸（hy-aluronic acid,HA）和Ⅲ型前胶原（procollagenⅢ,PCⅢ）水平,酶联免疫吸附测定法检测上清中纤维连接蛋白（fibronectin,FN）表达。结果：与空白对照组比较,AngⅡ10-6mol/L作用CF24h显著上调CF增殖指数和DNA合成（P〈0.01）,增加胶原含量（P〈0.01）,增加上清液中FN、HA和PCⅢ含量（P〈0.01）。与AngⅡ10-6mol/L相比,血府逐瘀汤含药血清下调CF增殖指数和DNA合成,降低胶原含量（P〈0.05）,减少上清液中FN、HA和PCⅢ含量（P〈0.01）。结论：AngⅡ能够促进CF增殖及细胞外基质合成,具有促进心肌纤维化作用;血府逐瘀汤能改善心肌纤维化,机制可能与抑制AngⅡ诱导CF增殖,抑制细胞外基质胶原蛋白、HA、PCⅢ及FN合成有关。     

阻断p38 MAPK信号通路对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞增殖和氧化应激的影响

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）信号通路的阻断对高糖培养的肾小球系膜细胞增殖和氧化应激的影响。方法 大鼠肾小球系膜细胞（mesangial cells MCs）分别培养在低糖浓度（5．5mmol／L，LG组），高糖浓度（25mmol／L，HG组）及25mmol／L葡萄糖＋10μmol／L SB203580（p38抑制剂）。CCK-8测定MCs增殖，比色法检测细胞培养液中的超氧化物歧化酶（SOD）活性和谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）含量的变化。结果 高糖组MCs出现增殖增加，SOD、GSH下降，MDA增加，SB203580干预能抑制MCs的过度增殖，使SOD、GSH增加、MDA减少。结论 抑制p38MAPK途径能抑制高糖环境下的系膜细胞增殖．并显著减少高糖诱导的氧化应激水平。     

己酮可可碱联合霉酚酸酯对高糖诱导人肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1和纤维连接蛋白表达的影响

目的探讨高糖对人肾小球系膜细胞（human mesangial cells,HMCs）单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoat-tractant protein-1,MCP-1）及细胞外基质的主要成分（extracellular matrix,ECM）纤维连接蛋白（fibronectin,FN）表达的影响及己酮可可碱（pentoxifylline,PTX）联合霉酚酸酯（mycophenolate,MMF）对上述指标的干预作用。方法将培养的HMCs分为8组：正常对照组（NG,5 mmol/L葡萄糖）;高糖组（HG,30 mmol/L葡萄糖）;甘露醇渗透压对照组（Man,5 mmol/L葡萄糖＋25 mmol/L甘露醇）;高糖＋PTX-0.03组（P1,30 mmol/L葡萄糖＋0.03 mg/mL PTX）;高糖＋PTX-0.3组（P2,30 mmol/L葡萄糖＋0.3 mg/mL PTX）;高糖＋MMF-10组（M1,30 mmol/L葡萄糖＋10μg/mLMMF）;高糖＋MMF-100组（M2,30 mmol/L葡萄糖＋100μg/mL MMF）;高糖＋PTX＋MMF组（P＋M,30 mmol/L葡萄糖＋0.3 mg/mL PTX＋100μg/mL MMF）,分别在24、48、72 h采用RT-PCR法和ELISA法检测PTX、MMF及PTX＋MMF对高糖条件下MCs内MCP-1 mRNA及蛋白、FN表达的影响。结果高糖组HMCs MCP-1 mRNA、蛋白的表达及FN的分泌较正常对照组显著增加（P〈0.01）,且48 h表达最高;不同浓度的PTX、MMF均能下调MCP-1 mRNA、蛋白及FN的表达（P〈0.01）;不同浓度的MMF对MCP-1 mRNA、蛋白的表达及FN分泌的抑制程度不同,呈时间剂量依赖性（P〈0.05）;不同浓度的PTX则随着时间的延长对其抑制作用无明显差别;PTX联合MMF组比单独PTX各组在各时间点的抑制程度更明显（P〈0.01）,比单独MMF各组在各时间点抑制作用增强,（24 h,P〈0.05）,但随着时间延长,差异无统计学意义。结论 PTX及MMF可能通过阻抑MCP-1的表达及FN的分泌延缓糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）中肾小球硬化及间质纤维化的进展,联合给药组作用优于单药,可能从改善血流动力及抗炎角度解释了PTX联合MMF对DN肾脏的协同保护作用。     

重组人红细胞生成素对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖和TGF-βmRNA的影响

目的探讨重组人红细胞生成素(rHuEPO)对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞(MCs)增殖和表达TGF-βmRNA的影响。方法以大鼠M Cs为研究对象,分为正常对照组(NC组,葡萄糖浓度为5 mmol/L),高糖组(HG组,葡萄糖浓度为10、20、30、40、50 mmol/L),其中30 mmol/L的高糖组分别以不同浓度rHuEPO(1、10、50、100、1 000 U/mL)分别干预24、48、72 h,Cell Counting Kit-8(CCK-8)比色法检测细胞增殖情况。用RealtimePCR法测定干预24、48、72 h时细胞TGF-βmRNA表达水平。结果在30 mmol/L以下时,葡萄糖能明显刺激M Cs的增殖,以30 mmol/L培养72 h反应最佳,rHuEPO在低于100 U/mL时能促进高糖诱导的M Cs增殖。rHuEPO在1 000 U/mL时,细胞毒性明显,大部分细胞死亡。结论高糖在一定时间和浓度内有刺激大鼠M Cs增殖的效应,rHuEPO在一定浓度和时间内能刺激高糖培养的MCs增殖,抑制高糖培养的MCs表达TGF-βmRNA。     

霉酚酸酯对高糖所致大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的：观察霉酚酸酯(mycophenolate mofetil MMF)对高糖环境大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cells MCs)增殖及Ⅳ型胶原的影响。方法：以30?mmol/L葡萄糖刺激体外培养的大鼠MCs增殖,加入不同浓度的MMF,采用MTT比色法观察6、12、24、48?h系膜细胞的增殖情况;放射免疫法测定细胞上清液中Ⅳ型胶原的含量。结果：葡萄糖对系膜细胞的增殖效应呈浓度和时间依赖性,反应最佳浓度为30?mmol/L,最佳时点为24?h。MMF有抑制高糖所致MCs增殖、减少细胞外基质的作用,并呈剂量时间依赖性。结论：高糖在一定浓度和一定时段内有刺激大鼠系膜细胞增殖的效应,MMF对高糖所致MCs增殖具有抑制作用,且随MMF剂量增大,作用时间的延长,抑制作用增强。     

TRB3在非诺贝特抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖中的作用及其机制

目的探讨TRB3在非诺贝特抑制高糖诱导下肾小球系膜细胞增殖中的作用及作用其机制。方法将细胞分为正常对照
组（N,5.5 mmol/L 葡萄糖）、高糖组（H,25 mmom/L 葡萄糖）、高糖+不同浓度的非诺贝特组（FN,10、50、100 μmol/L）。采用
CCK-8法检测细胞增殖率,Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态学改变,流式细胞术检测细胞周期改变,免疫细胞化学染色观
察TRB3表达,Western Blot检测细胞中TRB3、P-AKT蛋白的表达。结果高糖能够诱导肾小球系膜细胞增殖（P<0.001）;非诺贝
特能够抑制肾小球系膜细胞增殖（P<0.001）,且具有浓度依赖性。非诺贝特干预后细胞出现凋亡形态学改变;非诺贝特可以使
系膜细胞发生G1/S期阻滞;正常组、高糖组胞浆有少量TRB3蛋白表达,但高糖不能促进TRB3表达增多,随着非诺贝特浓度的
增加TRB3表达量增多,P-AKT表达逐渐降低。结论非诺贝特可以促进TRB3的表达;TRB3可能通过抑制AKt的磷酸化使肾
小球系膜细胞发生G1/S期阻滞从而抑制其增殖。
     

高糖对大鼠肾系膜细胞增殖及NF-κBp65核转位的影响

目的：探讨高糖对大鼠肾系膜细胞增殖及NF-κBp65核转位的影响。方法：大鼠HBZY-1肾系膜细胞进行体外培养,用5.6mmol/L葡萄糖（正常对照组）、10、20、30mmol/L高糖分别作用12、24、48小时,用噻唑蓝（MTT）法测各组肾系膜细胞增殖,western-blot法测各组肾系膜细胞NF-κBp65总蛋白的表达;双染免疫荧光激光共聚焦显微镜测各组肾系膜细胞NF-κBp65核转位。结果：48h内,各高糖组大鼠肾系膜细胞的增殖无统计学差异（P〉0.05）;各高糖组NF-κBp65总蛋白的表达无统计学差异（P〉0.05）;高糖组NF-κBp65核转位增加（P〈0.01）,呈时间浓度依赖性。结论：在48h内,高糖直接促进肾系膜细胞NF-κBp65核转位导致NF-κB信号通路激活,并不促进大鼠肾系膜细胞的增殖及NF-κBp65总蛋白的表达增加。     

EFFECTS OF PDGF-BB ON INTRACELLULAR CALCIUM CONCENTRATION AND PROLIFERATION IN CULTURED GLOMERULAR MESANGIAL CELLS

Objective To investigate the relationship between the alteration of intracellular calcium concentration and proliferation in cultured glomerular mesangial cells. Methods Rat mesangial cells were cultured. lntracellular calcium concentrations were measured by confocal Laser Scanning Microscopy and Fura-3 fluorescence dyeing techniques. Cell growth was measured by MTT assay. Results PDGF-BB increased intracellular calcium concentrations in a dose-dependent manner, and at the same time promote the proliferation of mesangial cells. After preincubation with calcium channel blocker nifedipine or angiotensin converting enzyme inhibitor captopril, both the increase of intracellular calcium concentrations and cell proliferations induced by PDGF-BB were inhibited. Tripteriglum Wilfordii Glycosides （TMG） significantly inhibited the mesangial cell proliferations, but it had no significant effect on intracellular calcium concentrations. Conclusion There was a positive relationship between the elevation of intracellular calcium concentration and cell proliferation in glomerular mesangial cells, but the increase of intracellular calcium concentrations wasn＇t the only way for proliferation.     

糖尿病肾病系膜细胞增殖功能、[Ca~(2 )]i和分泌纤维连接蛋白的研究

目的 :探讨糖尿病肾病系膜细胞功能改变及意义。方法 :采用STZ复制糖尿病模型 ,取肾进行系膜细胞培养 ,3 H -TdR法测定细胞增殖 ,用fluro - 3探针经共聚焦显微镜检测 [Ca2 ]i 变化 ,ELISA法测定纤维连接蛋白 (FN)分泌量。结果 :糖尿病大鼠系膜细胞3 H -TdR掺入率和FN分泌量较正常大鼠增加 ,基础 [Ca2 ]i 两组无差异 ,但糖尿病系膜细胞 [Ca2 ]i 对血管紧张素II反应明显减弱。结论 :糖尿病系膜细胞增殖和分泌FN增加参与了糖尿病肾病细胞外基质的积聚 ,其 [Ca2 ]i对AngII反应减弱可能参与了糖尿病肾病早期高滤过     

霉酚酸对高糖环境下肾小球系膜细胞炎症反应和增殖的影响

目的:观察霉酚酸对高糖诱导的肾小球系膜细胞炎症反应及增殖的影响。方法:大鼠肾小球系膜细胞分为低糖组、高糖组、高糖加不同浓度霉酚酸组培养,测定细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及神经生长因子(NGF)的表达,及细胞增殖的情况。结果:①低浓度(0.1μmol/L)霉酚酸对高糖诱导的肾小球系膜细胞ICAM-1、MCP-1和NGF的高表达有显著的抑制作用,但霉酚酸浓度的成倍增加(0.1-10μmol/L)对于以上效果并无明显的加强作用。②霉酚酸有浓度依赖性抑制高糖所致的系膜细胞增殖的作用。结论:体外霉酚酸对高糖环境下肾小球系膜细胞炎性因子ICAM-1、MCP-1和NGF的高表达和高增殖有显著的抑制作用。