姜黄素和儿茶素联用对二甲基肼诱导的大鼠大肠癌变过程中环氧合酶2表达的影响

目的 探讨姜黄素和儿茶素联用对二甲基肼(DMH)诱导的大鼠大肠隐窝异常病灶(aberrantcryptfoci,ACF)的数量及其对大鼠大肠组织环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达的影响。方法 利用DMH诱导大鼠大肠癌模型,研究姜黄素、儿茶素单独及联合应用对诱癌初期大鼠大肠ACF数量和对大鼠大肠癌发生的影响。同时应用RT-PCR方法检测了姜黄素和儿茶素对大鼠大肠癌变早期肠粘膜和癌瘤形成后肿瘤组织COX-2mRNA表达的影响。结果 与阳性对照组相比,姜黄素和儿茶素和两者联用均可以显著抑制DMH诱导的大鼠ACF的数量和大鼠大肠癌的发生,两者联用的抑制作用明显高于两药单独应用。DMH可以诱导大鼠大肠组织COX-2mRNA的表达。姜黄素和儿茶素联用对抑制诱癌早期大鼠肠粘膜COX-2mRNA的表达有协同作用,但对大肠癌形成后肿瘤组织COX-2mRNA的表达无明显抑制作用。结论 姜黄素和儿茶素联合应用对抑制DMH诱导的大鼠大肠癌的形成有协同作用,这种作用可能主要是通过抑制诱癌早期ACF的数量和COX-2mRNA的表达实现的。     

PPARγ配体扎鲁司特对氧化偶氮甲烷诱导的大鼠大肠癌的预防作用

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的合成配体扎鲁司特,对氧化偶氮甲烷(AOM)诱导的大鼠人肠畸变隐窝病灶(ACF)形成及大肠癌的化学预防作用.方法 利用AOM诱导大鼠大肠癌模型,实验大鼠随机分为3组:对照组、AOM组(AOM诱癌)、扎鲁司特预防组(AOM诱癌+0.15%扎鲁司特).应用美蓝染色法观察各组第12周人鼠大肠ACF、大肠畸变隐窝(AC)的数量以及计算各组第32周时大鼠大肠癌的发生率,并加以比较.结果 实验第12周时除对照组外,AOM组及扎鲁司特预防组均有ACF形成,扎鲁司特预防组大肠ACF和AC的平均数明显低于AOM组(P均<0.05);实验第32周时除对照组外,AOM组、扎鲁司特预防组大鼠均检出大肠癌,大肠癌的发生率分别为72.22%(13/18)、42.11%(8/19),扎鲁司特预防组大肠煽的发生率明显低于AOM组(P<0.05).结论 扎鲁司特能抑制大鼠诱痛早期ACF的数量,对AOM诱导的大鼠大肠有明显的化学预防作用.     

巨噬细胞移动抑制因子抗体对大鼠大肠异常隐窝病灶及大肠癌的影响

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)抗体对二甲基肼诱导的大鼠大肠异常隐窝病灶(ACF)、癌瘤数目及大肠癌变过程中MIF表达的影响.方法 二甲基肼诱导建立大鼠大肠癌癌变模型,观察MIF抗体对ACF及癌瘤数量的抑制作用,并采用ELISA及免疫组化方法检测MIF抗体对早期癌变肠黏膜及癌瘤形成后MIF表达的影响.结果 MIF抗体干预后可明显抑制ACF及癌瘤的数量(P＜0.01).大鼠大肠癌模型中MIF的表达明显高于癌前病变ACF模型中MIF的表达(P＜0.01),应用MIF抗体可明显抑制大鼠ACF及大肠癌模型中MIF表达.结论 MIF抗体可明显抑制大鼠大肠黏膜癌变,可能与抑制ACF数量及MIF表达有关,MIF抗体有望成为大肠癌预防和治疗的新靶点.     

二甲肼诱发大鼠大肠癌的组织学动态观察

作者对DMH诱发大鼠大肠癌过程进行了动态研究,结果显示40只大鼠在DMH作用下,大肠粘膜显示不同程度的病变。实验第8周,大肠粘膜呈现早期增生性改变;第10～15周主要表现为粘膜轻、中度不典型增生;第18～32周除粘膜不典型增生外,大肠腺瘤和癌逐渐形成,其中检出腺瘤14个,原位癌10个,浸润性癌35个。20只对照大鼠大肠粘膜无明显病变。提示大肠癌的组织发生系经过粘膜增生→不典型增生或腺瘤→原位癌→浸润性癌的发展过程,证实不典型增生是大肠癌重要的癌前病变。     

基质溶素与早期大肠癌发生发展的相关性

目的 :探讨基质溶素 (matrilysin ,MMP 7)与早期大肠癌发生、发展的关系。方法 :用逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)检测早期大肠癌和进展期大肠癌、正常肠粘膜、大肠腺瘤、变性隐窝病灶 (aberrantcryptfoci,ACF)中MMP 7mRNA的表达 ;用免疫组织化学SP法检测早期大肠癌癌灶周围肿瘤细胞MMP 7蛋白的表达。结果 :90 %(2 7 30 )的早期大肠癌MMP 7mRNA阳性表达 ,而相应正常粘膜几乎不表达 ;4 5例ACF只有 7例MMP 7mRNA弱阳性表达 ,10例腺瘤、2 0例进展期大肠癌均阳性表达。由正常肠粘膜、ACF、腺瘤、早期大肠癌到进展期大肠癌MMP 7mRNA表达水平逐渐增高 (P <0 .0 1)。 4 6 .7% (14 30 )早期大肠癌癌灶周围肿瘤细胞MMP 7蛋白阳性表达。早期大肠癌MMP 7的表达与肿瘤侵袭深度相关 (P <0 .0 5 ) ,有转移者MMP 7水平高于无转移者 (P <0 .0 5 )。结论 :MMP 7的高表达可能在早期大肠癌的发生、发展中具有重要作用     

柞蚕抗菌肽对大鼠大肠癌的防治作用

目的观察柞蚕抗菌肽体外抗肿瘤作用及对大鼠大肠肿瘤发生的影响。方法采用MTT法检测柞蚕抗菌肽对人结肠癌细胞株LS-174T、人胃粘膜上皮细胞株GES-1的杀伤作用。以二甲肼(DMH)诱发的Wistar大鼠大肠肿瘤为模型,观察柞蚕抗菌肽对大鼠大肠肿瘤的防治作用;DMH诱癌及柞蚕抗菌肽灌胃均18周,第33周结束实验。结果柞蚕抗菌肽在体外对人结肠癌细胞株具有选择性杀伤作用;灌胃可明显降低大鼠大肠肿瘤发生率(65%,P<0.01),但大肠癌平均个数及肿瘤质量指数无显著性差异(P>0.05)。结论柞蚕抗菌肽对DMH诱导的大鼠大肠癌具有预防作用。     

甲基化干预对小鼠大肠癌生长及p16/CDKN2基因表达的影响

目的 探讨甲基转移酶抑制剂5-氮-2'脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对小鼠大肠癌发生发展的影响及其与细胞周期依赖性激酶抑制因子p16/CDKN2 mRNA表达的关系.方法 40只雄性KM小鼠按随机数字表法随机分为2组:1,2-二甲肼(DMH)诱癌组和甲基化干预组,每组20只.小鼠皮下注射DMH 25 mg/kg,每周1次,连续22周,以诱发小鼠大肠癌,甲基化干预组于12周开始皮下注射5-Aza-CdR.另选同来源雄性KM小鼠作为未诱癌对照组(阴性对照组)10只,于皮下按25mg/kg注射生理盐水,每周1次,连续22周."席卷法"收集肿瘤组织,HE染色观察肿瘤发生的数目、类型及浸润程度;免疫组织化学染色观察细胞增殖核抗原(PCNA)蛋白表达情况;原位杂交技术检测肠癌组织抑癌基因p16/CDKN2 mRNA的表达.结果 (1)DMH诱癌组肿瘤数达(7.6±3.1)个/只,而甲基化干预组诱癌数为(3.4±1.8)个/只,且以重度异性增生为主,浸润癌的发生率明显低于DMH诱癌组(P＜0.05).(2)DMH诱癌组19只小鼠中PCNA阳性表达16只,明显多于甲基化干预组(19只中11只阳性表达)及未诱癌对照组(0只,均P＜0.05).(3)DMH诱癌组有明显p16/CDKN2 mRNA杂交信号(蓝紫色),主要位于胞质,但甲基化干预组染色显然较DMH诱癌组强,尤其以瘤灶部位明显.结论 早期5-Aza-CdR的干预能显著抑制小鼠大肠癌的发生发展,其抑制肿瘤机制可能是通过激活抑制因子p16/CDKN2的表达.

Abstract：

Objective To explore the effects and relationship of specific demethylation agent 5-Aza-2'-deoxycytidine (5-Aza-CdR) on colorectal cancer ( CRC ) induced by 1,2-dimethylhydrazine ( DMH ) in mouse and the in vivo expression of cyclin-dependent kinases inhibitor p16/CDKN, mRNA. Methods A total of 40 male KM mice were randomized into 2 groups and CRC was induced by a 22-week injection of DMH. One group was interfered by specific DNA methyltransferase inhibitor 5-Aza-CdR. Another 10 the same source male KM mice were induced by a 22-week injection of saline as none induced cancer control group (negative control group ). All mice were sacrificed to examine for colorectal neoplasm.Immunohistochemical staining was used to assess the expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA). The expression of p16/CDKN2 mRNA was detected by in situ hybridization. Results The average numbers of neoplasm was higher in the DMH group (7. 6 ±3. 1 ) than that of the group DMH +5-Aza-CdR (3.4 ± 1.8, P ＜0. 05). Immunohistochemical staining showed there was a significant elevation of PCNA in the group DMH(16/19) as compared with that in the group DMH +5-Aza-CdR ( 11/19, P ＜0. 05 ). In situ hybridization revealed that the level of tumor suppressor gene p16/CDKN2 mRNA was significantly lower in the group DMH than that in the group DMH +5-Aza-CdR. Conclusion The specific demethylation agent 5-Aza-2'-deoxycytidine may inhibit the carcinogenesis of CRC. Its mechanism may be related with a high expression of p16/CDKN2 mRNA.     

黄芪总苷对二甲肼诱导大鼠结直肠异性隐窝灶和肝微粒体代谢酶的影响

目的 观察黄芪总苷对二甲肼诱导大鼠产生异性隐窝和肝微粒体细胞色素P450(cytochrome P450 S,CYP450)含量、谷胱甘肽转移酶(glutathione-S-transferase, GST)活力的影响.方法 40只SD大鼠随机分为空白对照组、黄芪组、DMH组、黄芪+DMH组,每组10只.黄芪总甙干预和二甲肼诱癌后脱颈处死动物,取结直肠和肝组织.美蓝染色结直肠后观察、计数ACF的个数,差速离心法分离出大鼠肝微粒体.采用一氧化碳还原差示光谱法测定总酶含量,通过采用分光光度计法检测GSH浓度的高低来反应GT活力的大小.结果 黄芪总甙+DMH组比DMH组诱导大鼠产生ACF和大型ACF数量均显著下降(P<0.05).DMH组与空白对照组、黄芪组、黄芪+DMH组比较,CYP450酶含量显著降低、GST酶活力显著上升(P<0.05).结论 黄芪总苷有可能通过降低肝微粒体CYP450酶含量、提高GST活力,从而减少二甲肼诱导大鼠结直肠产生异性隐窝灶数量.     

血管内皮抑素转基因制剂的体外抗肿瘤作用及对大鼠大肠癌的影响

目的 研究血管内皮抑素转基因双歧杆菌口服冻干粉剂(endostatin transfected bifidobacterium oral powder prepara-tion,ETB-2)体外抗肿瘤作用及对大鼠大肠痛的影响.方法 采用MTT法检测ETB-2对人结肠癌细胞株LS-174T、人胃黏膜上皮细胞株GES-1的作用.以二甲肼(DMH)为诱发剂,观察ETB-2对大鼠大肠癌的防治作用;DMH诱癌及ETB-2灌胃时间为18周,在第33周结束实验.结果 ETB-2在体外对人结肠癌细胞株具有显著的选择性杀伤作用,体内给药可明显降低大鼠大肠癌发生率(60%:100%,P<0.01),但大肠癌平均个数及肿瘤体积指数的差异无显著性(P>0.05).结论 ETB-2对DMH诱导的大鼠大肠癌具有预防作用.     

丁酸钠对小鼠大肠组织抑癌基因表达的影响

目的：观察大肠癌变过程中不同类型腺体组织抑癌基因p21waf1、bax、gadd45的表达及丁酸钠对其表达的影响。方法：利用二甲基肼（DMH）制作昆明小鼠大肠癌模型,通过免疫组化和RT-PCR分别检测大肠癌变过程中,小鼠大肠粘膜不同病理状态下3种抑癌基因的表达与变化。结果：在正常粘膜发展至腺瘤的过程3种基因的表达水平逐渐升高,而癌组织中3种抑癌基因的表达不同程度的降低。丁酸钠灌肠组各基因表达明显高于对照组和DMH组,其中以p21waf1的升幅最大。结论：大肠粘膜癌变与抑癌基因p21waf1、bax、gadd45的表达有关,丁酸钠可以通过调控3种抑癌基因的表达发挥抗肿瘤作用。     

血红素氧合酶-1在姜黄素抑制氧化型低密度脂蛋白诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的观察姜黄素对氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响,并探讨血红素氧合酶-1(HO-1)在姜黄素抑制血管平滑肌细胞增殖中的作用及机制。方法体外分离培养大鼠血管平滑肌细胞并行免疫组化鉴定,以四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞增殖率、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测HO-1mRNA水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测HO-1及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达水平。结果 Ox-LDL呈浓度依赖性(0～150μg/mL)地诱导VSMC增殖,达到200μg/mL具有细胞毒性;姜黄素呈浓度依赖性(40、80μmol/L)地抑制Ox-LDL(100μg/mL)所诱导的VSMC增殖,HO-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ(ZnPPⅨ)可明显减弱此抑制效应;姜黄素可诱导VSMC上调HO-1mRNA和蛋白表达;姜黄素可减弱Ox-LDL诱导VSMCs增殖细胞核抗原的高表达,此效应可被HO-1抑制剂ZnPPⅨ抑制。结论姜黄素通过降低HO-1介导的PCNA表达,进而抑制Ox-LDL诱导大鼠血管平滑肌增殖。     

姜黄素促卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP凋亡机制探索

目的研究姜黄素对耐药卵巢癌细胞的促凋亡作用及其可能的机理。方法用MTT法检测不同浓度姜黄素、化疗药物〔顺铂(DDP),紫杉醇〕及姜黄素联合化疗药物(姜黄素+顺铂,姜黄素+紫杉醇)作用于卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP细胞48h后各组的细胞抑制率,并用流式细胞仪检测上述各组细胞的凋亡率。RT-PCR技术检测姜黄素、顺铂、姜黄素+顺铂作用于COC1/DDP细胞48h后各组的磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基(PI3KCA)mRNA的表达。结果不同浓度姜黄素作用COC1/DDP 48h后,细胞的抑制率和凋亡率随着姜黄素浓度的升高相应增高,姜黄素联合化疗药物作用组比单用化疗药物组的细胞抑制率及细胞凋亡率高(P<0.05)。顺铂与姜黄素联合用药与顺铂单独作用相比PI3 KCA mRNA的表达降低(P<0.05)。结论姜黄素能够促进卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP的凋亡,这一作用可能与姜黄素和化疗药物协同诱导该细胞系的凋亡有关,其机制可能为降低PI3 KCA基因的表达。     

基于NF-κB/COX-2信号通路探讨芍药内酯苷对溃疡性结肠炎模型大鼠的影响

目的:基于NF-κB/COX-2信号通路探讨芍药内酯苷对溃疡性结肠炎模型大鼠的影响.方法:采用5％2,4,6-三硝基苯磺酸(80 mg·kg-)和体积分数50％乙醇混合液灌肠制备大鼠溃疡性结肠炎模型,造模成功后将其随机分为模型组、美沙拉嗪组(0.36 g·kg-1)、芍药内酯苷高剂量组(60 mg·kg-1)、芍药内酯...     

姜黄素与顺铂联合对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡作用

目的:研究姜黄素、顺铂和两者联合应用对人肺癌A549细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法:采用MTT法观察姜黄素和顺铂对人肺癌A549细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测姜黄素、顺铂和两者联合应用对人肺癌A549凋亡和细胞周期的影响。结果:①姜黄素及顺铂能抑制人肺腺癌A549细胞的增殖,并呈浓度及时问依赖性;姜黄素10,15,20μmol/L分别与顺铂1,2 mg/L联合24,48,72 h的抑制率显著高于单用顺铂、姜黄素组(均为P<0.05),两者呈现出相加的抗瘤效果。②姜黄素和顺铂均可在一定程度上诱导细胞凋亡,并且凋亡率与浓度呈正相关。两种药物联用后,诱导细胞凋亡作用显著增强。③姜黄素将细胞周期阻滞在G2/M期(P<0.01),顺铂将细胞周期阻滞在S期(P<0.01)。结论:姜黄素、顺铂均可抑制人肺癌A549细胞的增殖、诱导细胞的凋亡,在一定浓度范围内,呈量-效关系,而且两者联合应用具有相加或协同作用。     

姜黄素抑制人宫颈癌CaSki细胞裸鼠移植瘤的生长

目的 探讨姜黄素对人宫颈癌CaSki细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用。方法 建立人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型,35只荷瘤裸鼠随机分为5组,姜黄素高剂量(200 mg/kg)、中剂量(100 mg/kg)、低剂量(50 mg/kg)组、溶剂对照组和顺铂组(3 mg /kg),每组7只,姜黄素连续灌胃给药15 d,顺铂组每3 d腹腔注射给药,共5次。停药24 h后处死裸鼠,测量裸鼠体重、移植瘤体积、瘤重,计算抑瘤率;光镜下观察移植瘤组织形态学变化;结果 处理组的移植瘤体积均明显小于空白对照组(P结论 姜黄素对人宫颈癌CaSki细胞移植瘤的生长具有明显的抑制作用。     

实验性肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶-2和组织型金属蛋白酶抑制剂-1mRNA表达及姜黄素的作用

目的探讨大鼠肝纤维化过程中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、组织型金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）mRNA表达及姜黄素汤对其的影响。方法复制大鼠四氯化碳（CCl4）肝纤维化模型,分别以高、中、低剂量姜黄素处理,检测血清透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、三型前胶原（PCⅢ）和四型胶原（IVC）水平,检测肝组织纤维化程度和MMP-2及其抑制因子TIMP-1mRNA表达。结果CCl4成功诱导肝纤维化大鼠模型,姜黄素治疗能够降低血清肝纤维化指标及肝组织纤维化程度,姜黄素可以抑制CCl4诱导的MMP-2和TIMP-1mRNA表达,并能恢复MMP-2／TIMP-1的动态平衡。结论姜黄素可以通过减少MMP-2及其TIMP-1表达抑制肝纤维化。     

姜黄素对溃疡性结肠炎大鼠模型的疗效评价及其作用机制

目的观察姜黄素作用于大鼠溃疡性结肠炎模型的疗效及其机制。方法选用雄性健康SD大鼠60只,随机分成4组,每组15只。A组:正常对照组;B组:模型组;C组:姜黄素治疗组;D组:地塞米松治疗组。TNBS灌肠后,按DAI的标准评分,进行大体损伤评分,HE染色后组织损伤评分,记录每日的进食、进水量及死亡数。测定结肠组织中丙二醛(MDA)及谷胱甘肽过氧化物酶(GsH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和髓过氧化物酶(MPO)的活性。结果C组大鼠的病情改善、进食量和进水量均优于B、D组,死亡率低于B组与D组。DAI评分、大体损伤形态、HE染色评分均显示C、D组分别均与B组比较差异有极显著性(P<0.01),C、D组比较差异有显著性(P<0.05)。MDA和MPO活性在B组明显升高,并高于D组和C组(P<0.05),而D组低于C组(P<0.05)。SOD和GsH-Px在B组明显降低,C、D组明显高于B组(P<0.05),C组高于D组(P<0.05)。结论姜黄素是治疗溃疡性结肠炎大鼠模型的有效药物。姜黄素的疗效比地塞米松为优。姜黄素可能是通过降低肠组织中的MDA、MPO的活性和升高SOD、GsH-Px的活性达到抗炎目的。     

姜黄素对氧化型低密度脂蛋白诱导的大鼠血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1表达、细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨姜黄素对大鼠血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1表达、增殖和凋亡的影响。方法分离SD大鼠血管平滑肌细胞进行培养传代,采用不同浓度的姜黄素作用于氧化型低密度脂蛋白（Ox-LDL）诱导的大鼠平滑肌细胞,根据作用药物浓度进行分组,对照组（不加任何药物）,Ox-LDL 100μg/mL组,Ox-LDL 100μg/mL＋姜黄素20μmol/L组,Ox-LDL 100μg/mL＋姜黄素40μmol/L组,Ox-LDL 100μg/mL＋姜黄素80μmol/L组。分析姜黄素对大鼠血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的表达、对细胞的增殖的影响。按照加入药物浓度进行分组,对照组（不加任何药物）,姜黄素50μmol/L组,姜黄素100μmol/L组,姜黄素120μmol/L组,分析姜黄素对细胞凋亡的影响。结果 Ox-LDL 100μg/mL组MCP-1分泌[（812.6±78.7）ng/L]及MCP-1 mRNA表达水平[（1.18±0.11）]较对照组[（91.3±6.1）ng/L,（0.16±0.04）]显著升高,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。姜黄素对OxLDL诱导的大鼠血管平滑肌细胞MCP-1分泌及MCP-1 mRNA表达、细胞增殖具有显著的抑制作用,对细胞凋亡有诱导作用,并且随着姜黄素浓度的增加,作用越明显（P〈0.01）。结论姜黄素能够抑制Ox-LDL诱导的大鼠细胞平滑肌细胞MCP-1表达以及细胞增殖,诱导大鼠细胞平滑肌细胞凋亡。