丹参注射液对体外培养家兔关节软骨细胞的影响

采用家兔关节软骨细胞体外培养的方法，观察丹参注射液对软骨细胞增殖以及对软骨细胞中超氧化物歧化酶(SOD)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的影响。结果表明丹参注射液可促进软骨细胞的增殖，显提高SOD的活性，降低iNOS的活性，从而保护软骨细胞免受肿瘤坏死因子等细胞因子的损害。其机制可能是丹参通过提高自由基清除水平，调节软骨细胞的合成代谢，达到治疗骨性关节炎的目的。     

体外传代培养对关节软骨细胞成软骨能力的影响

目的　研究不同代体外培养关节软骨细胞成软骨能力 ,选择软骨组织工程最佳种子细胞。方法　将兔膝关节软骨消化分离出软骨细胞 ,传代培养至第 6代 ,每代细胞与模板支架材料Pluron icF 12 7混匀形成复合物 ,使细胞浓度达 5× 10 7/ml,将复合物注射于自体兔背部皮下 ,9周后取材 ,进行大体观察、新生软骨湿重与体积测量、组织学观察。结果　体外培养关节软骨细胞随传代次数的增加 ,形态从圆形逐渐向梭形转变。 1～ 3代软骨细胞成软骨能力最强 ,新生软骨的湿重与体积最大 ,组织结构与正常软骨相同 ;第 4代成软骨能力减弱 ,软骨基质分泌减少 ,新生软骨湿重和体积减小 ,与前 3代比较差异有显著性 ;第 5代仅形成分散于纤维组织内的软骨细胞团 ;第 6代则未发现有软骨样组织形成。结论　①在体外单层培养条件下 ,随传代次数的增加关节软骨细胞逐渐去分化 ,成软骨能力逐渐降低直到完全丧失。②前 3代软骨细胞均具备形成正常软骨的能力 ,都可用作组织工程的种子细胞 ,但传代培养的目的是使细胞得以最大限度扩增 ,因此第 3代关节软骨细胞是可被应用的最佳种子细胞     

人胎关节软骨细胞体外培养的生物学特性

目的：研究软骨组织工程中传软软骨细胞与原代的差异，方法：用5个月人胎关节软骨分离培养细胞，观察细胞存活率，贴壁率，生长曲线和组织形态学的改变。结果：（1）软骨块在4℃下，3天内细胞存活率可达93．4％－97．6％。（2）原代细胞为圆形或三角形；第4代有一半转变成梭形，到第6代全部变为长梭形。（3）传代细胞贴壁时间（2－3h)短于原代（4－7h)。玻璃瓶内贴壁率传代细胞为78．7％－85．5％，原代8．8％。（4）生长曲线表明，从原代到第4代都有高增殖力；到第8代时增殖降低；到第12代几乎丧失细胞增殖。结论：软骨块4度冷藏，3天内对细胞存活率无明显影响。第4代细胞壁壁快，增殖 ，适于作为组织工程用细胞，第8代以后不适合。     

体外培养软骨细胞方法及其影响因素的研究进展

体外软骨细胞的培养是了解软骨细胞生物学性状的重要方法.了解软骨细胞分化、增殖及软骨基质合成等诸多影响因素,有助于研究骨性关节炎发病机制,促进软骨组织工程的发展.随着近年来相关研究的飞速发展,人们发现软骨细胞可用多种方法进行体外培养,并受到众多因素的调控.本文对其调控因素的研究进展综述如下.     

猪耳廓软骨细胞体外培养

目的 为组织工程化软骨修复机体软骨缺损提供实验基础。方法 用消化组织块培养法体外培养猪耳廓软骨细胞。结果 软骨细胞在ＰＨ值为７．２０,含１０％胎牛血清的Ｆ１２培养基中生长良好,可传代４～５代,细胞数目扩增为原来的１０～２０倍。结论 消化组织块方法培养软骨细胞是一种可以扩增软骨细胞数目的确实可行的方法。     

透明质酸对体外培养半月板纤维软骨细胞的影响

目的观察体外培养半月板纤维软骨细胞的生长特点及生物学特性,研究中分子量透明质酸(hyaluronic acid, HA)对体外培养半月板纤维软骨细胞的影响.方法机械分离和胰酶、胶原酶联合消化,将兔半月板纤维软骨细胞进行体外分离培养,动态观察细胞形态变化和生长情况.设立对照,观察中分子量透明质酸HA(分子量2×106)对细胞生长增殖的影响,利用同位素标记技术,测定细胞对培养基中 3H-TdR、 3H-Pro和Na35SO4的摄取量,比较细胞DNA、胶原蛋白和蛋白多糖合成的速度.结果体外培养的半月板细胞呈多角形、有突起、富含分泌颗粒.当培养基中加入HA后,细胞 3H-TdR、 3H-Pro和Na35SO4的摄取量不同程度高于对照组,统计学相差显著(P＜0.05).结论中分子量透明质酸能促进体外培养半月板纤维软骨细胞增殖和细胞外基质合成.     

猪关节软骨细胞体外培养及其形成糖胺多糖能力的实验研究

目的:观察软骨细胞体外培养的情况及其合成糖胺多糖的特点。方法:通过Ⅱ型胶原酶消化法获得高活性的软骨细胞,定量接种6×106个细胞于培养皿,加入培养基,每周传代一次,连续5周,留取所有培养液用阿利新蓝法(AlcianBlue)测定软骨细胞外分泌基质糖胺多糖(GAG)的变化;利用倒置显微镜观察原代及传代软骨细胞的生长情况。结果:软骨细胞在pH值为7.0,含10%胎牛血清的DMEM培养液中生长良好,体外培养的软骨细胞从传代后合成糖胺多糖类基质,第二代传代细胞分泌GAG的能力最强。结论:软骨细胞体外培养生长良好,合成大量的糖胺多糖类基质。传代第二代是最佳接种时间。     

一氧化氮对兔关节软骨细胞凋亡的影响

目的 :从细胞凋亡的角度探讨一氧化氮 (NO)对软骨细胞的影响。方法 :利用透射电镜技术、流式细胞术 ,脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法 (TUNEL) ,观察细胞凋亡现象。结果 :硝普钠 ( 3mmol L)诱导下 ,随着作用时间的延长 ,透射电镜可观察到细胞从核边集到核裂解等超微结构的变化过程 ;加药后 12h ,流式细胞术检测到凋亡率为 ( 12 71±3 2 6) % ,随作用时间延长 ,凋亡率逐渐增高 ,2 0h的凋亡率已达 ( 93 4 7± 4 12 ) % ;TUNEL染色法亦得到相应的结果 ;用6mmol L硝普钠诱导 ,透射电镜下可见细胞出现肿胀、破裂成碎片等坏死变化。结论 :高浓度的NO可诱导兔关节软骨细胞凋亡 ,2 0h的凋亡率达到高峰 ;过高浓度的NO可引起细胞坏死。提示细胞凋亡率异常增高是影响组织工程化软骨修复软骨缺损的原因之一     

地塞米松磷酸钠对兔关节软骨细胞体外培养的影响

目的探讨地塞米松磷酸钠对体外培养兔关节软骨细胞的影响。方法兔关节软骨细胞常规培养后随机分为对照组和实验组,对照组用不合地塞米松磷酸钠的DMEM培养液培养,实验组则分别加入含不同浓度地塞米松磷酸钠的DMEM培养液,应用流式细胞术及免疫细胞化学法检测软骨细胞增殖情况及其合成Ⅱ型胶原能力,并应用透射电子显微镜观察软骨细胞超微结构的变化。结果实验各组软骨细胞进入S期、G2＋M期的细胞比率较对照组软骨细胞减少、进入G0／G1期的细胞比率增加,免疫细胞化学阳性信号的平均灰度值与对照组平均灰度值的差异均有显著性,电镜下见软骨细胞线粒体、粗面内质网数量减少。结论地塞米松磷酸钠可抑制软骨细胞的增殖,可能与抑制关节软骨细胞的Ⅱ型胶原和蛋白合的合成能力有关。     

大鼠下颌髁突软骨细胞体外培养研究

下颌髁突软骨的生长改建一直是人们关注的焦点。本实验选用ＳＤ大鼠下颌髁突软骨,分离２髁突软骨细胞,用倒置显微镜,扫描电镜,酶组织化学,免疫组织化学等方法研究了培养突软骨细胞的生物学特征。     

体外低氧培养系统下的高质量早期人胚形态学特征

目的：探讨低氧（7.5%O2）和高氧（20%O2）培养体系对人早期胚胎（D1-D3）体外发育及胚胎移植临床结局的影响．方法选取2012年2月至2013年8月在云南省第二人民医院生殖医学中心接受常规IVF-ET治疗,行D3新鲜胚胎移植的周期资料,共280个周期,比较7.5%O2低氧组（120个周期）和20%O2高氧组（160个周期）早期胚胎体外发育的结果和胚胎移植的临床结局．结果低氧组D3优级胚胎形态外观上明显有别于次优级胚胎（即传统优级胚胎）,呈卵裂球紧贴,裂球边界渐模糊的形态学特征,且优级胚胎率显著高于高氧组（66.22%与47.54%）,但2组受精率、卵裂率和可用胚胎率比较差异无统计学意义．低氧组胚胎的着床率显著高于高氧组（42.94%与31.01%）,生化妊娠率（62.22%与47.06%）和临床妊娠率（53.33%与39.22%）也均比高氧组高．结论体外低氧培养系统能产生质量更高的人早期胚胎,对提高IVF临床结局有益．     

大鼠膝关节软骨细胞体外培养去分化时间的实验研究

目的:观察大鼠膝关节软骨细胞体外培养后自然退变时间,为骨关节炎研究提供合适靶细胞。方法:大鼠膝关节软骨细胞体外培养,传代,行甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原染色鉴定软骨细胞,通过Western Blot检测其特征性Ⅱ型胶原的表达情况对传代软骨细胞表型进行鉴定。结果:大鼠膝关节第5代软骨细胞和前4代比较,Ⅱ型胶原表达明显减少(P<0.05),结论:大鼠膝关节软骨细胞体外培养前4代能维持正常的软骨细胞表型,第5代开始发生退变,前4代可以做为软骨细胞研究的靶细胞。     

IGF-1对成兔关节软骨细胞体外增殖的影响

目的研究单独应用胰岛素样生长因子1(IGF-1)对成兔的关节软骨细胞体外增殖的促进作用,为成人关节软骨的体外培养扩增的理论提供新思路。方法通过细胞形态学,细胞计数、细胞计量检测成兔关节软骨细胞的存活及增殖。结果成兔关节软骨细胞增殖活跃。结论在IGF-1的单独作用下成兔关节软骨细胞在体外增殖能力明显增强。     

一氧化氮对体外培养大鼠软骨细胞Caspase-3及PKC-α表达的影响

目的:研究NO对大鼠软骨细胞Caspase-3及蛋白激酶C(PKC)-α(PKC-α)表达的影响,探讨NO诱导软骨凋亡的机制.方法:软骨细胞用不同浓度的NO处理24 h后,用TUNEL、MTT法和流式细胞术检测细胞凋亡和细胞活力.Western blot检测Caspase-3及PKC-α的表达.结果:NO处理后软骨细胞TUNEL阳性率明显增高,细胞核片段损害明显,Caspase-3的表达升高,同时抑制PKC-α的表达.结论:NO诱导的软骨细胞凋亡可能通过促进Caspase-3表达,作用机制与抑制PKC-α有关.     

兔下颌骨髁状突软骨细胞体外培养及生物学特性的研究

为探讨兔下颌骨髁状突软骨细胞的体外培养方法及其生物学特性，用胰酶及胶原酶联合消化法获取软骨细胞，并在ＤＭＥＭ培养基中进行原代及传代培养；通过形态学观察及免疫组织化学染色对软骨细胞的贴壁率、生长曲线及表型等细胞生物学特性进行了研究。结果：所获软骨细胞主呈多角形，第３代软骨细胞１２ｈ贴壁率达９５％，软骨细胞倍增时间约５５．１ｈ，６代以内软骨细胞的Ⅱ型胶原蛋白稳定表达。结果表明：本方法获软骨细胞具有稳定     

体外培养大鼠耻骨联合软骨细胞的生物学特性

[目的]通过对大鼠耻骨联合软骨细胞的分离及体外培养,观察其生长、表型等一般生物学特点.[方法]采用胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶序贯消化法,从SD大鼠耻骨联合软骨组织中分离出软骨细胞,用含150mL/L胎牛血清的DMEM/F-12培养液原代和传代培养.分别以2g/L胶原酶消化2、6、12 h,分析不同消化时间获取的细胞数量及生长情况.对6 h消化组细胞进行Ⅱ型胶原免疫组化染色,并观察第1、4、7代的生长曲线.[结果]经胶原酶消化2、6、12 h后,平均每100mg耻骨联合软骨获取的原代细胞数之间有统计学显著差异（P＜0.01）.消化6 h组可以获取数量丰富的原代细胞,生长状态好.大鼠耻骨联合细胞原代呈短梭形、三角形或多角形,有短细胞突起.Ⅱ型胶原免疫组化染色在第1、4代培养细胞均呈阳性,第7代培养细胞呈阴性.第7代细胞生长增殖比第1、4代慢.[结论]耻骨联合软骨细胞体外培养时属于有限细胞系.培养初期（第4代之前,含第4代）的细胞较好地保持了软骨细胞的表型,且增殖能力强,有可能作为软骨组织工程的种子细胞.     

体外培养大鼠耻骨联合软骨细胞的生物学特性

 [目的]通过对大鼠耻骨联合软骨细胞的分离及体外培养,观察其生长、表型等一般生物学特点.[方法]采用胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶序贯消化法,从SD大鼠耻骨联合软骨组织中分离出软骨细胞,用含150mL/L胎牛血清的DMEM/F-12培养液原代和传代培养.分别以2g/L胶原酶消化2、6、12 h,分析不同消化时间获取的细胞数量及生长情况.对6 h消化组细胞进行Ⅱ型胶原免疫组化染色,并观察第1、4、7代的生长曲线.[结果]经胶原酶消化2、6、12 h后,平均每100mg耻骨联合软骨获取的原代细胞数之间有统计学显著差异（P＜0.01）.消化6 h组可以获取数量丰富的原代细胞,生长状态好.大鼠耻骨联合细胞原代呈短梭形、三角形或多角形,有短细胞突起.Ⅱ型胶原免疫组化染色在第1、4代培养细胞均呈阳性,第7代培养细胞呈阴性.第7代细胞生长增殖比第1、4代慢.[结论]耻骨联合软骨细胞体外培养时属于有限细胞系.培养初期（第4代之前,含第4代）的细胞较好地保持了软骨细胞的表型,且增殖能力强,有可能作为软骨组织工程的种子细胞.     

兔骨髓基质干细胞体外定向分化为软骨细胞

目的体外诱导兔骨髓基质干细胞（BMSC）向软骨细胞定向分化，并对分化后的细胞进行鉴定。方法选用16周新西兰大白兔，于胫骨或股骨抽取骨髓，经梯度离心、培养、扩增，取第3代BMSC按一定比例种植于6孔板中，并加入含有转化生长因子β1、地塞米松和维生素C的培养液、于不同时间点取材固定，甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组化鉴别、结果诱导的软骨样细胞甲苯氨蓝异染性；II型胶原免疫组化阳性。结论在本实验条件下，获取的兔BMSC生长稳定、增殖快，并成功地诱导其向软骨细胞表型转化。