兔骨髓单个核细胞自体移植对缺血心肌修复重建及心功能的改善

目的:观察兔骨髓单个核细胞自体移植至缺血心肌后的修复重建能力,以及心功能的改善状况。方法:实验于2005-07/2006-04在安徽省干细胞研究和治疗中心完成。①选取清洁级健康雄性新西兰白兔20只,随机数字表法分为心肌梗死模型组、骨髓单个核细胞组,10只/组。②两组兔均于左心耳下缘结扎前降支冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型,心电图出现S-T段弓背样抬高为结扎成功。③2周后于股骨处行骨髓穿刺取5mL骨髓,分离纯化骨髓单个核细胞。骨髓单个核细胞组将Dil标记的含2.5×107细胞数目的细胞悬液400μL注射至心肌梗死周边区域,心肌梗死模型组仅注射等量L-DMEM培养基。③两组分别于造模前、细胞移植前及细胞移植后2,4周行多普勒心脏超声心动图检查,计算左室射血分数、左室短轴短缩率,进行心功能评价。④细胞移植8周后处死全部动物,制备组织冰冻切片,病理学检查移植细胞在梗死区的生长状况,镜下见有Dil标记阳性的细胞认为是存活的移植细胞。普通光学显微镜200倍视野下计数毛细血管数量。结果:骨髓单个核细胞组10只均进入结果分析;心肌梗死模型组因造模死亡4只,6只兔完成整个实验过程。①不同时相点心功能指标超声心动图检查结果:两组造模前、细胞移植前、细胞移植后2周左室射血分数、左室短轴短缩率均基本相似(P>0.05);移植后4周,骨髓单个核细胞组左室射血分数、左室短轴短缩率均明显高于心肌梗死模型组犤(69.1±5.3)%,(62.4±7.8)%;(34.3±8.4)%,(27.2±5.3)%;P均<0.05犦。②骨髓单个核细胞在梗死心肌中的存活情况:荧光显微镜下,骨髓单个核细胞组梗死灶边缘有Dil标记的细胞存活,免疫组化结果显示Dil阳性细胞表达心肌细胞特异性标志α-sarcomericactin。两组均未见炎性细胞浸润,但骨髓单个核细胞组新生毛细血管密度明显高于心肌梗死模型组犤(38.5±2.0)mm-2,(21.4±3.9)mm-2,P<0.05犦。结论:兔骨髓单个核细胞自体移植8周后存活于梗死心肌中,并表达心肌细胞特异性标志,移植后可明显改善左室收缩功能,增加毛细血管密度,但短期内未减轻心室重构的进程。     

经冠状动脉移植自体骨髓单个核细胞用于治疗心肌梗死后的心力衰竭

目的：观察经冠状动脉直接注射进行自体骨髓单个核细胞移植时细胞能否进入心肌组织并有效改善心肌梗死后的心脏功能。方法：成年犬24只，随机分为对照组与移植组，移植组于移植前一天抽取骨髓液分离骨髓单个核细胞（数量约为2&;#215;10^8）。结扎冠状动脉左前降支后．移植组于冠状动脉内注射骨髓单个核细胞悬液，对照组注射培养基。6周后处死动物，比较其心肌梗死面积、瘢痕区毛细血管数量、超声心动图指标及血流动力学指标的变化。结果：对照组和移植组各死亡4只犬，分别有8只犬进入结果分析。①各组犬心脏标本病理研究结果：骨髓单个核细胞经5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记的阳性率约为50％；移植6周后于梗死区的心肌组织内能够检测到5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记阳性的细胞；移植组的梗死区面积和梗死范围比对照组分别下降了30．9％和35．0％，但无显著性差别（P均〉0．05）；瘢痕区每个高倍视野（0．2mm^2）的毛细血管数量，移植组为5．33&;#177;0．58，明显高于对照组2．03&;#177;0．46（P〈0．01）。②血流动力学指标的变化：移植组与对照组相比，6周时左室内压最大上升速率、最大下降速率及心输出量均显著上升[（3039&;#177;1164）比（1569&;#177;618）mm Hg／s，P〈0．01;（2951&;#177;793）比（1465&;#177;647）mmHg／s，P〈0．01；（1．88&;#177;0．33）比（1．41&;#177;0．29）L／min，P〈0．05]。③超声心动图心功能指标的变化：移植组左室射血分数明显高于对照组（46．01％，35．28％，P〈0．05）。④不良事件和副反应：在实验中仅在移植组l例实验犬的细胞注射部位观察发现一炎性包块，移植后6周时观察未见明确的恶性心律失常出现及肿瘤组织形成。结论：经冠状动脉直接注射进行骨髓单个核细胞移植可行且安全，它能够促进梗死区的新血管生成并有效改善心肌梗死后的心脏功能。     

骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死后细胞凋亡的影响

目的：观察骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死后心肌细胞凋亡的影响，探讨干细胞移植改善心功能机制。 方法：实验于2004—09／2005—10在郧阳医学院附属十堰市太和医院生命科学研究所完成。①21只日本大耳白兔采用随机数字法分为正常对照组、心肌梗死组及干细胞移植组，每组7只。②心肌梗死模型制作3周后，心肌梗死组及干细胞移植组分别在梗死周边区域注射100μL细胞培养基或干细胞悬液，对照组不处理。③4周后心脏超声检测心功能、左室收缩末期内径、左室舒张末期内径等评价心室重塑。处死动物后经流式细胞仪检查梗死区域细胞凋亡情况。 结果：①各组兔心脏超声检测结果：与心肌梗死组相比，干细胞移植治疗后，左心室射血分数[（56．27&;#177;1．73），（69．41&;#177;3．19）％，P〈0．001]、左室收缩末期内径[0．25&;#177;0．89），（8．13&;#177;0．79）mm，P〈0．001]、左室舒张末期内径[（13．82&;#177;1．02），（11．24&;#177;1．21）mm，P〈0．001]、室壁运动明显改善。②各组细胞凋亡检查结果：干细胞移植后，细胞凋亡显著降低[（14．00&;#177;0．31）％，（4．30&;#177;0．57）％．P〈0．001]。 结论：干细胞移植可抑制细胞凋亡，改善心功能，预防心室重塑，具有改善梗死后心脏功能的作用。     

自体骨髓单个核细胞移植对急性心肌梗死后雄兔心脏功能的影响

目的：评估未经诱导的自体骨髓单个核细胞移植于兔的心肌梗死区及周边区后对心脏功能的影响，并观察移植后细胞的存活情况。方法：采用结扎日本大耳雄兔左冠状动脉前降支的方法建立急性心肌梗死模型。将40只存活兔随机分为2组：移植组、对照组，每组各20只，其中移植组于术后第7天在梗死区及周边区注射0．7mL含3．4l&#215;10^7个自体骨髓单个核细胞的细胞悬液移植，而对照组仅在相同的部位注射等量的生理盐水。心梗前后以及细胞移植后6周，利用彩色多普勒超声心动仪评价心脏功能的改变，然后收集动物心脏，进行组织学及免疫组织化学检查。结果：心肌梗死前后，移植组与对照组的心脏功能相比较，差异无显著性意义(P&gt;0．05)。细胞移植后，移植组的心脏射血分数、左室短轴缩短率、左室壁运动幅度、左室壁收缩末期厚度及舒张末期厚度、左室壁增厚率明显高于对照组(t=2．98～6．50，P&lt;0．01)，心室率[(249．08&#177;28．52)次／min]明显低于对照组[(269．75&#177;5．21)次／mm](t=2．24，P&lt;0．05)。移植组梗死心肌及周边区内可以观察到移植细胞的存活。结论：自体骨髓单个核细胞移植可以改善发生了急性梗死的心脏功能并在心肌的梗死区及周边区存活。     

自体骨髓单个核细胞经冠状动脉移植对心肌梗死患者心脏整体功能及局部心肌运动的影响

目的：采用经冠状动脉途径进行自体骨髓单个核细胞移植治疗心肌梗死，通过组织多普勒多巴酚丁胺负荷超声心动图检查，观察移植前后患者整体及坏死局部心脏功能变化，以了解自体骨髓单个核细胞介入移植治疗心肌梗死的可行性及有效性。方法：①选择2003—09／2004—03在哈尔滨医科大学附属第二医院心内科住院的急性透壁性心肌梗死患者68例，随机选择其中10例进行自体骨髓单个核细胞经冠状动脉移植。均为男性，平均年龄（52&;#177;10）岁。术前签署知情同意书并同意术后随访。②骨髓单个核细胞的获取：介入手术当天，约于细胞注射前3h进行。选择髂后上棘行骨髓穿刺术，抽取骨髓60～80mL，离心后，取单个核细胞层配成骨髓单个核细胞悬液。所获取的骨髓单个核细胞平均为（7．67&;#177;1．34）&;#215;10%9L^-1，细菌和真菌培养均为阴性结果。⑨骨髓单个核细胞经冠状动脉移植：细胞移植于急性心肌梗死后后第7～14天进行。将直径2．5mm的01W球囊置于心肌梗死边界区（血管堵塞部位），10min内缓慢注入骨髓单个核细胞悬液10mL。④移植后心脏整体功能和局部功能评估；组织多普勒超声心动图检查：分别于单个核细胞移植术前及术后7，30，90及180d行组织多普勒多巴酚丁胺负荷超声心动图检查。整体心功能测定：左室长轴取二尖瓣水平M型，分别测左室舒张末期内径，左室收缩末期内径、二尖瓣侧环心肌舒张早期峰值运动速度与舒张晚期峰值运动速度比值；并计算出每搏输出量、左室短轴缩短率等。Simpson法测量左室射血分数。了解坏死局部心肌运动情况：采用组织多普勒小剂量多巴酚丁胺负荷试验测量坏死局部心肌运动，在10μg／（kg&;#183;min）时心肌运动改善最明显。于静息状态、各剂量输注3min后和终止多巴酚丁胺输注5min后，连续监测超声心动图，分别取心尖四腔心、心尖两腔心、心尖长轴切面，将每个切面分成3个节段（即基底部、中间段、心尖部），并于每个切面的瓣环水平取样，测量局部节段性心肌运动的最大位移（局部心肌最大位移的大小取决于存活心肌的数量，存活的心肌细胞多则局部心肌最大位移大）。⑤随访：患者于术后7，30，90和180d在本院行组织多普勒超声心动图及上述其他检查，并观察其安全性。⑥治疗前后的比较用配对t检验。结果：心肌梗死患者10例均进入结果分析，并完成随访。①心脏整体功能：骨髓单个核细胞移植前后左室舒张末期内径，左室收缩末期内径、二尖瓣侧环心肌舒张早期峰值运动速度／舒张晚期峰值运动速度、每搏输出量、左室短轴缩短率差异不明显（P〉0．05）。②心脏局部功能：骨髓单个核细胞移植后负荷状态下局部心肌运动明显改善[最大位移：基底段术前（49．58&;#177;10．18）mm，术后6个月（61．91&;#177;16．70）mm，t=1．82，P〈0.05；中间段术前（31.89&;#177;42）mm，术后6个月（41．55&;#177;9．94）mm，t=2．97，P〈0.05；心尖部术前（13．60&;#177;6．65）mm，术后6个月（22.28&;#177;8.31）mm，t=2．33，P〈0．051。③随访过程中有1例患者出现心律失常。结论：①采用组织多普勒小剂量多巴酚丁胺负荷超声心动图检查对患者局部心肌最大位移进行定量分析，可间接评估梗死区心肌的存活情况。②骨髓单个核细胞移植可以明显增加梗死区域存活的、有功能的心肌细胞的数量增加。但是，患者心脏的整体功能无明显改善，推测可能与所选患者梗死面积较小，且均得到及时血运重建治疗，致使患者的心脏功能在细胞移植术前得到了最大的保留有关。③经冠状动脉途径移植自体骨髓单个核细胞治疗心肌梗死足比较安全的。④骨髓细胞移植的最佳的时机很可能是心肌梗死发生后的7～14d。     

骨髓基质细胞移植治疗缺血性心脏病：影像学及间接免疫荧光法评估

目的：观察超声成像及间接免疫荧光技术在骨髓基质细胞移植治疗缺血心肌病方面的评估价值。 方法：试验于2004-10／2005-10在武汉大学医学院心血管病研究所完成。选取20只大耳白兔开胸结扎左冠状动脉前降支建立心肌梗死模型后，存活18只，将其随机分为对照组和移植组两组。分别在造模前1天、造模后1周、骨髓基质细胞移植后4周行超声检查，测量左室前壁厚度、左室舒张末期内径、射血分数，左室前壁收缩期峰值速度、舒张早期峰值速度、舒张晚期峰值速度。对BrdU标记的移植细胞行抗肌钙蛋白T和Ⅷ因子免疫荧光检测，探讨其分化和转归。 结果：20只大耳兔于造模后死亡2只，进入结果分析18只。①超声检查：移植组移植4周后左室舒张末期内径较对照组明显缩小[（12．2&;#177;1．9，14．9&;#177;2．3）mm，t=2．641，P〈0.05]。移植组移植4周后射血分数、左室前壁收缩期峰值、舒张早期峰值速度明显高于对照组[（67．3&;#177;10．2，54．6&;#177;9．6）％，（10．2&;#177;1．9，7．0&;#177;2．1）cm／s，（10．9&;#177;2．7，7．9&;#177;2．6）cm／s]。②免疫荧光检测：部分移植细胞抗心肌特异肌钙蛋白T染色阳性，显示清晰的心肌横纹表明向心肌细胞分化；另有部分细胞Ⅷ因子为阳性，证实成功分化成为内皮细胞。 结论：超声能够检测到兔梗死心肌MSCs移植后心肌局部运动与心脏功能的改善，其机制与其向心肌细胞及内皮细胞分化有关。     

骨髓干细胞不同移植途径对急性心肌梗死大鼠心功能的影响

目的：观察同种异体骨髓间充质干细胞经不同移植途径对急性心肌梗死大鼠心功能的影响，同时评价干细胞移植的有效性和安全性。 方法：实验于2004-05／2005-12在哈尔滨医科大学中心实验室完成。①Wistar雄性大鼠50只，采用随机数字表法分成千细胞移植组（n=30）和心肌梗死对照组（n=20）。移植组和对照组结扎左冠状动脉前降支造成急性心肌梗死模型。②冠脉结扎后7d，移植组经股静脉和心外膜分别注入骨髓间充质干细胞（含15&;#215;10^8细胞），对照组注入等量DMEM培养液。③分别于干细胞移植前、移植后1，2和4周行心脏超声检查，术后4周行血液动力学测定，观察心功能的变化。 结果：存活43只模型制作成功的大鼠，分为干细胞移植组25只，其中股静脉注射12只，心外膜注射13只；心肌梗死对照组18只。①心肌梗死后4周，移植组左心室射血分数、左心室短轴缩短率、左心室收缩末压和左心室压力最大上升速率比对照组明显提高（左心室射血分数，股静脉：（54．3&;#177;1．8）％比（42．4&;#177;1．9）％，心外膜：（55.2&;#177;1．7）％比（43．5&;#177;2．0）％；左心室短轴缩短率，股静脉：（45．0&;#177;1．1）％比（33．5&;#177;0．9）％，心外膜：（46．5&;#177;0．9）％对（32.8&;#177;0．7）％；左心室收缩末压，股静脉：（104．2&;#177;3．8）比（98．2&;#177;4．6）mmHg，心外膜：（105．4&;#177;2．3）比（102．3&;#177;3．6）mmHg；左心室压力最大上升速率，股静脉：（8290&;#177;811）比（6987&;#177;612）mmHg／s，心外膜：（8158&;#177;745）比（7015&;#177;740）mmHg／s：P〈0．01）。②左心室收缩末直径、左心室舒张末压、左室压力最大下降速率和左心室等容舒张时间常数均明显减小（P〈0．01）。③股静脉移植组和心外膜移植组对心功能的影响差异无显著意义（P〉0．05）。 结论：经静脉和心外膜两种途径移植骨髓间充质干细胞是安全可行的．二者均能有效地改善心功能，为急性心肌梗死的治疗提供一条行之有效的新途径。     

非诱导同种异体骨髓基质细胞心肌移植后细胞增殖分化的结局

背景：关于骨髓基质细胞心肌成形的研究。目前都集中在模拟自体细胞移植方面。而同种异体骨髓基质细胞心肌移植的研究，国内报道较少。目的：观察大鼠同种异体骨髓基质细胞移植到心肌梗死区后能否存活，并进一步增殖、分化，以及对宿主心脏的影响。设计：随机对照动物实验。单位：华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管内科实验室。材料：1月龄Wistar大鼠10只。雌雄不拘。体质量100-120g，用于取材培养骨髓基质细胞。3月龄雌性Wistar大鼠80只。体质量200—250g，用于制造动物模型。方法：实验于2004-06／12在华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管内科实验室完成。①80只大鼠结扎冠状动脉左前降支制作急性心肌梗死模型，45只大鼠制作模型成功。（2）4周后，取传两代非经诱导的体外培养的同种异体大鼠骨髓基质细胞，注射到大鼠心肌梗死区，为移植组（25只）。同时设置注射培养基的对照组（20只）。③移植4周后检测受体心脏的血流动力学指标。然后取标本，检测移植细胞存活、分化和组织的血管新生状况。主要观察指标：①两组大鼠血流动力学检测结果比较。②移植细胞的结局。③两组大鼠血管新生的改变。结果：细胞移植组13只，对照组11只大鼠进入结果分析。①移植组大鼠心脏血流动力学指标较对照组明显改善【左心室收缩压：（88．61&;#177;5．99），（76．93&;#177;4．75）mmHg，左心室舒张末压：（7．72&;#177;1．36），（12．77&;#177;2．76）mmHg，P均〈0．05；左心室收缩压最大变化速率：（2365．26&;#177;266．31），（2025．04&;#177;230．25）（mmHg／s），左心室舒张压最大变化速率：（2313．26&;#177;159．30），（2140．12&;#177;191．03）mmHg/s]。②同种异体骨髓基质细胞移植人心肌梗死区后能够度过急性炎症期而且不引起明显移植排斥反应；位于梗死区的移植细胞主要分化为成纤维细胞，部分位于心肌梗死区周围的细胞分化为血管内皮细胞，并促进了血管新生。⑧移植组心肌梗死区及其周围新生血管数目较对照组明显增加（P〈0．01）。结论：同种异体骨髓基质细胞移植后未能在梗死区形成心肌样细胞，但所形成的血管内皮细胞产生了促进心肌梗死后血管新生、改善心功能的作用。     

自体骨髓间质干细胞移植治疗急性心肌梗死

目的：将大体动物自体骨髓间质干细胞移植至心肌梗死后的心肌瘢痕组织中，观察细胞在梗死区的存活以及对心功能的改善情况。方法：实验于2003-04／2004—03在徐州医学院第二附属医院介入导管室完成。①选择21只中国小型家猪，三四个月龄，体质量30-40kg。随机分为实验组11只和对照组10只，应用闭胸经股动脉介入的方法制作动物心肌梗死模型。②10余天后实验组将培养的自体骨髓干细胞移植于梗死区，对照组在梗死区植入营养液。（要）8周后，以心脏彩超及放射性核素心肌扫描观察梗死心肌的恢复及心功能的变化。④最后行组织学分析。结果：①21只家猪，实验过程中死亡3只，1只建模未成功，进入结果分析实验组9只，对照组8只。②心脏彩超显示实验组移植后左室射血分数较移植前增加[（42．07&;#177;2.06）％，（47．00&;#177;2．36）％，P〈0．05]。③^99Tc^m-MIBI显示实验组梗死面积比移植前缩小[（34&;#177;12）％，（21&;#177;10）％]。④实验组微血管密度较对照组显著增加（8．32&;#177;1．26）个／0．2mm^2，（4．61&;#177;1．32）个／0．2mm^2，P〈0．05]。结论：自体骨髓间质干细胞移植至梗死区后，可使梗死面积缩小，心脏功能改善。     

自体骨髓单个核细胞移植对急性心肌梗死后雄兔心脏功能的影响

目的:评估未经诱导的自体骨髓单个核细胞移植于兔的心肌梗死区及周边区后对心脏功能的影响,并观察移植后细胞的存活情况。方法:采用结扎日本大耳雄兔左冠状动脉前降支的方法建立急性心肌梗死模型。将40只存活兔随机分为2组:移植组、对照组,每组各20只,其中移植组于术后第7天在梗死区及周边区注射0.7mL含3.41×107个自体骨髓单个核细胞的细胞悬液移植,而对照组仅在相同的部位注射等量的生理盐水。心梗前后以及细胞移植后6周,利用彩色多普勒超声心动仪评价心脏功能的改变,然后收集动物心脏,进行组织学及免疫组织化学检查。结果:心肌梗死前后,移植组与对照组的心脏功能相比较,差异无显著性意义(P>0.05)。细胞移植后,移植组的心脏射血分数、左室短轴缩短率、左室壁运动幅度、左室壁收缩末期厚度及舒张末期厚度、左室壁增厚率明显高于对照组(t=2.98～6.50,P<0.01),心室率犤(249.08±28.52)次/min〗明显低于对照组犤(269.75±5.21)次/min犦(t=2.24,P<0.05)。移植组梗死心肌及周边区内可以观察到移植细胞的存活。结论:自体骨髓单个核细胞移植可以改善发生了急性梗死的心脏功能并在心肌的梗死区及周边区存活。     

护士长管理素质与护士工作压力相关性的调查与分析

目的 :探讨病房护士长的管理素质与护士工作压力的相关性。方法 :采用问卷调查法对 12 5名护士进行调查 ,调查结果用相关性分析进行统计学处理。结果 :护士长的管理素质与护士工作压力呈负相关。结论 :病房管理者只有努力提高自身的管理素质才能相应地减轻护士的工作压力     

老年脓毒血症患者胆碱酯酶水平与病情及预后的关系

目的探讨脓毒血症患者胆碱酯酶水平与患者病情及预后的关系。方法 2007年6月-2009年6月,将89例脓毒血症患者设定为脓毒血症组,进行血清胆碱酯酶测定及APACHEⅡ评分;另择82例健康人为正常组,测定血清胆碱酯酶值,比较两者之间差异;89例脓毒症患者按病况再分为存活组及死亡组,比较两者之间血清胆碱酯酶及APACHEⅡ评分差异。结果治疗前脓毒血症组胆碱酯酶水平明显低于正常组,有统计学意义（P〈0.01）;脓毒血症组APACHEⅡ评分与血清胆碱酯酶呈负相关;死亡组APACHEⅡ评分明显高于存活组,而血清胆碱酶低于存活组（P〈0.01）。结论胆碱酯酶同APACHEⅡ评分呈负相关,能明显反映脓毒症患者病情严重程度及预后。