砷雌激素样效应及对HeLa细胞生长的影响

目的 观察砷雌激素样效应及对HeLa细胞体外生长的影响作用.方法 实验分为8组,RPMI1640培养液分别含雌二醇(E2,1 nmol/L)、三氧化二砷(A82O3,0.5、1.0、5.0 μmol/L)、雌二醇拮抗剂(ICI,500nmol/L)、E2(1 nmoL/L)+ICI(500 nmol/L)、As2O3(1.0μmol/L)+[CI(500 nmol/L)以及对照组,以含有不同处理因素的RPMI 1640培养液培养HeLa细胞24、48、72 h.光镜下观察72 h时HeLa细胞生长状况,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各时间点HeLa细胞存活率,流式细胞计量术检测48 h时HeLa细胞周期.结果 形态学观察E2组和0.5μmol/L As2O3组细胞数量明显多于对照组,长势旺盛.24、48、72 h E2组和0.5μmoL/L As2O3组对HeLa细胞的增殖促进率分别为6.35%、11.56%、38.33%及6.35%、8.50%、20.26%.两组作用效果相似,对细胞生长起到增殖促进作用.与对照组[(41.68±1.05)%]比较,E2组[(55.72±2.31)%]和0.5μmol/L As2O3组[(47.82±1.41)%]S期细胞有增多趋势,其他各组则减少,其中5.0 μmol/L As2O3组[(21.1l±4.99)%]、ICI组[(20.16±4.76)%]明显减少,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 小剂量As2O3具有雌激素样效应,可促进HeLa细胞的生长.     

亚砷酸钠对体外培养人淋巴细胞金属硫蛋白基因亚型表达的影响

目的 探讨不同剂量亚砷酸钠对体外培养人淋巴细胞金属硫蛋白(MT)基因表达的影响及MT表达与细胞存活率的相互关系.方法 无菌抽取健康人血液,分离出淋巴细胞,分别用0(对照)、2、5、10、15、30、60μmol/L亚砷酸钠作用于淋巴细胞,于24、48、72 h后,以四噻唑蓝比色法测定细胞存活率;染毒72 h后采用RT-PCR法检测MT-1、MT-2基因表达情况.结果 2、5μmol/L染毒组细胞存活率[(115.50±11.80)%、(130.49±8.28)%]高于对照组[(100.00±0.00)%,P均<0.05];10、15、30、60μmol/L染毒组细胞存活率[(78.12±9.33)%、(71.62±10.82)%、(52.06±3.05)%、(40.98±5.41)%]随染毒剂量增高而逐渐降低,与对照组及2、5μmol/L组比较差异有统计学意义(P均<0.05).不同剂量亚砷酸钠作用72 h,对照组及2、5、10、15、30、60μmol/L染毒组MT-1基因表达(0.925±0.123、1.082±0.504、1.103±0.170、0.927±0.056、0.730±0.307、0.604±0.173、0.540±0.075)组间比较差异无统计学意义(P均>0.05);2、5 μmol/L染毒组(1.503±0.212、1.557±0.377)与对照组(0.762±0.112)比较MT-2表达上调(P均<0.05),且较其他各组表达增加(P均<0.05),而10、15、30、60μmoL/L染毒组MT-2表达(0.814±0.139、0.679±0.201、0.607±0.229、0.533±0.102)呈下降趋势,但组间比较差异无统计学意义(P均>0.05).MT-1、MT-2表达水平与细胞存活率之间存在正相关关系(r值分别为0.955、0.909,P均<0.05).结论 10 μmol/L以上剂量的砷可能对淋巴细胞MT表达有抑制作用,而低剂量(2、5μmol/L)砷可能刺激淋巴细胞的MT-2表达上调,提高细胞MT水平,起到保护细胞、提高细胞存活率的作用.     

砷暴露对大鼠原代星形胶质细胞分泌胶质细胞源性递质的影响

目的 观察砷暴露对大鼠原代星形胶质细胞(astrocyte,AST)分泌胶质细胞源性递质的影响,探讨砷对学习记忆功能损伤的作用机制.方法 出生1～3 d的Wistar大鼠仔鼠,取双侧大脑半球,经处理获得原代培养脑AST,并通过胶质纤维酸性蛋白免疫荧光染色鉴定.AST分别在含0.0、2.5、5.0、10.0μmol/L亚砷酸钠的培养液中培养24h,荧光双波长分光光度计法检测细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i);高效液相色谱(HPLC)法检测细胞培养液谷氨酸、D-丝氨酸、甘氨酸和γ-氨基丁酸含量.结果 胶质纤维酸性蛋白免疫荧光染色,AST纯度＞95％.不同浓度砷暴露组间AST内[Ca2+]i比较差异有统计学意义(F=20.030,P＜0.05),其中10.0 μmol/L砷暴露组AST内[Ca2+]i[(263.27±14.80)nmol/L]明显高于0.0、2.5、5.0μmol/L砷暴露组[(204.24±27.21)、(214.49±21.85)、(232.74±23.14)nmol/L,P均＜0.05].不同浓度砷暴露组间AST分泌的D-丝氨酸、甘氨酸和γ-氨基丁酸比较差异均有统计学意义(F值分别为26.599、33.539、5.599,P均＜0.05),其中2.5、5.0、10.0 μmol/L砷暴露组AST分泌的D-丝氨酸[(21.580±1.313)、(21.936±1.539)、(23.401±1.648)μmol/L]、甘氨酸[(26.353±2.449)、(29.711±1.530)、(29.234±2.057)μmol/L]和γ-氨基丁酸[(27.277±3.421)、(30.213±2.098)、(29.364±2.588) μmol/L]均高于0.0 μmol/L砷暴露组[(16.017±1.046)、(16.763±3.007)、(22.736±4.139) μmol/L,P均＜0.05].结论 砷暴露可引起原代AST分泌胶质细胞源性递质增加,可能会损伤学习记忆功能.     

冠心病患者血清Hcy、M-CSF、UA、血小板相关指标及微量元素的变化

目的:观察冠心病心绞痛患者血清同型半胱氨酸(Hcy)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、尿酸(UA)、血小板相关指标及微量元素的变化。方法:选择2010年10月~2013年10月本院收治的58例冠心病心绞痛患者为心绞痛组,同期58名体检健康者为健康对照组,比较冠心病患者及健康者的Hcy、M-CSF、UA、血小板相关指标[血小板分布宽度(PDW),CD61,CD63]及微量元素水平。结果:与健康对照组比较,心绞痛组的血小板相关指标及血清Hcy、M-CSF、UA、Zn、Fe水平均明显升高,而血清Mn水平则显著降低(P均0.05);与稳定型心绞痛患者比较,不稳定型心绞痛患者血清PDW[(13.37±1.61)比(17.86±1.99)],CD61[(45.26±5.11)比(58.40±7.20)],CD63[(14.05±1.96)比(18.78±2.95)]及Hcy[(13.47±1.52)mmol/L比(21.96±2.23)mmol/L]、M-CSF[(289.73±31.68)pg/ml比(401.56±48.96)pg/ml]、UA[(287.95±36.49)μmol/L比(373.45±45.26)μmol/L]、Zn[(15.76±1.84)μmol/L比(19.55±1.98)μmol/L]、Fe[(12.68±1.50)mmol/L比(15.71±1.83)mmol/L]水平均显著升高,Mn[(2.21±0.34)μmol/L比(1.60±0.21)μmol/L]水平显著降低(P均0.05),且随着冠脉病变血管支数增加,上述指标(除Mn显著降低外)均明显升高(P均0.05)。结论:冠心病心绞痛患者血清Hcy、M-CSF、UA、血小板相关指标及多数微量元素水平显著上升,且其异常程度受心绞痛类型与病变血管支数的影响较大。     

日本血吸虫可溶性成虫抗原和虫卵抗原对CD4~+ T淋巴细胞凋亡和细胞周期的影响

目的观察并比较日本血吸虫可溶性成虫抗原(SWA)、可溶性虫卵抗原(SEA)对小鼠CD4+T淋巴细胞凋亡和细胞周期的影响。方法以免疫磁珠分选正常小鼠脾细胞中的CD4+T淋巴细胞后,与羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯标记的抗原递呈细胞共培养,并分别以PBS、SWA、SEA刺激。36h后以流式细胞术(FCM)结合caspase-3荧光抗体标记技术检测CD4+T淋巴细胞的凋亡水平;96h后以碘化丙锭染色结合FCM分析CD4+T淋巴细胞周期分布情况。结果凋亡分析结果显示,经SEA和SWA刺激后,外周CD4+T细胞的凋亡百分比分别为(1.24±0.29)%和(1.52±0.38)%,两者差异无统计学意义(P0.05)。细胞周期分析表明,SWA组处于G1期、S期和G2/M期的细胞百分比分别为(78.91±2.98)%、(7.39±0.85%)和(10.69±1.05)%;与之相比,SEA组G1期细胞百分比[(59.42±1.32)%]显著降低,S期[(21.07±0.88)%]和G2/M期[(18.88±1.21)%]显著增加,差异均有统计学意义(P均0.01)。结论SWA、SEA均可诱导CD4+T淋巴细胞凋亡,SEA促进CD4+T淋巴细胞进入分裂周期的作用更明显。     

银杏叶片对砷暴露大鼠免疫毒性的干预作用

目的 探讨银杏叶片对砷暴露大鼠免疫毒性的干预作用,为砷中毒的预防和治疗提供实验依据.方法 40只Wistar大鼠,使用随机数字表法,按照体质量随机分为4组:对照组、染砷组、银杏叶片治疗组、自然恢复组,每组10只,对照组大鼠自由摄取正常普通饲料90d;其他组大鼠自由摄取含砷饲料90 d;自然恢复组大鼠自由摄取含砷(100 mg/kg)饲料90d后,再给予正常普通饲料饲养45 d;银杏叶片治疗组大鼠自由摄取含砷饲料90 d后,再给予银杏叶片溶液(25 mg/kg·bw)灌胃,6d/周,治疗45 d,治疗期间喂饲正常普通饲料.然后收集大鼠24 h尿液,测定大鼠尿砷含量,采集大鼠静脉血,检测T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+阳性率,血清抗体IgG、IgM、IgA及补体C3、C4含量.结果 染砷组、自然恢复组、银杏叶片治疗组大鼠尿砷几何均数(2.991、0.421、0.334 mg/g)均高于对照组[0.141 mg/g,P均＜0.05].自然恢复组、银杏叶片治疗组大鼠尿砷均低于染砷组(P均＜ 0.05),自然恢复组大鼠尿砷含量与银杏叶片治疗组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).染砷组CD3+、CD4+细胞阳性率[(31.31±7.73)％、(25.94±12.49)％]、CD4+/CD8+比值(0.91±0.50)均低于对照组[(60.83±17.64)％、(42.11±12.92)％、1.80±0.88,P均＜0.05],血清中补体C4含量[(81.18±13.23) mg/L]高于对照组[(64.23±6.97) mg/L,P＜0.01];自然恢复组CD3+、CD4+细胞阳性率[(32.35±19.84)％、(28.00±16.10)％]、CD4+/CD8+比值(0.98±0.29)、血清IgG、IgA、IgM、C3、C4含量[(897.23±23.55)、(1032.72±0.35)、(443.65±1.02)、(557.33±39.86)、(76.92±17.99)mg/L]与染砷组[(31.31±7.73)％、(25.94±12.49)％,0.91±0.50,(917.02±15.96)、(1032.96±1.32)、(444.43±1.82)、(560.15±39.57)、(81.18±13.23)mg/L]比较差异均无统计学意义(P均＞ 0.05);银杏叶片治疗组CD3+、CD4+细胞阳性率[(54.00±19.31)％、(39.93±8.63)％]均高于染砷组[(31.31±7.73)％、(25.94±12.49)％,P均＜0.05],血清中补体C4含量[(66.99±5.66)mg/L]低于染砷组[(64.23±6.97) mg/L,P＜0.05];染砷组、自然恢复组、银杏叶片组CD8+细胞阳性率以及血清IgG、IgA、IgM、C3含量[(31.38±11.40)％,(917.02±1596)、(1 032.96±1.32)、(444.43±1.82)、(560.15±39.57)mg/L;(27.90±13.22)％,(897.23±23.55)、(1 032.72±0.35)、(443.65±1.02)、(557.33±39.86)mg/L; (28.21±8.42)％,(905.83±24.16)、(1 032.10±0.80)、(442.65±1.32)、(554.41±41.21)mg/L]与对照组[(27.22±13.00)％,(903.02±14.69)、(1 032.04±0.64)、(443.41±0.93)、(536.61±32.92)mg/L]比较差异均无统计学意义(P均＞ 0.05).结论 砷暴露可引起大鼠体内细胞免疫功能紊乱;停止砷暴露后,自然恢复效果欠佳;银杏叶片可提高砷中毒大鼠的免疫功能.     

曲古菌素A对人胃癌细胞增殖和细胞周期的作用

目的 观察曲古菌素A(TSA)对人胃癌细胞株SGC-7901细胞增殖及细胞周期的影响,探讨其可能的机制.方法 TSA干预人胃癌SGC-7901细胞24 h后.采用四甲基偶氮唑盐法检测其对细胞增殖的影响,流式细胞技术检测细胞周期,实时PCR检测细胞周期素D1和p21 mRNA的表达情况.结果 经TSA干预24 h后,人胃癌SGC-7901细胞增殖受抑制,TSA 0.1、0.5和2.0μmol/L组抑制率分别为3.52%±6.11%、13.29%±4.13%和14.24%±2.80%;同时TSA 0.5μmol/L组(71.26%±0.51%)和TSA 2.0μmol/L组(71.03%±0.12%)的G0/Gl期细胞比例明显高于对照组(51.12%±1.17%);TSA 0.5μmol/L组(13.55%±0.44%)和TSA 2.0 μmol/L组(10.63%±0.63%)的S期细胞比例明显低于对照组(34.60%±0.60%).出现G0/G1细胞周期阻滞.TSA干预后细胞周期相关基因细胞周期素D1 mRNA表达下调和p21 mRNA表达上调.结论 TSA通过调控细胞周期相关基因细胞周期素D1和p21的表达,抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,引起G0/G1期细胞周期阻滞,最终影响肿瘤细胞的生长.     

骨髓增生异常综合征患者骨髓CD34+细胞亚群及细胞周期分析

目的 探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓CD34+细胞亚群及细胞周期分布异常的临床意义.方法 采用流式细胞术检测50例(17例低危、33例高危)MDS患者、8例MDS转化的急性髓系自血病(MDS-AML)及25例对照组原代骨髓CD34+CD38+、CD34+CD38-细胞亚群及G0/G1期、S期和G2/M期细胞比例.结果 高危和MDS-AML组骨髓CD34+细胞比例[(2.29±2.17)%、(18.69±17.47)%]明显高于对照组[(0.36±0.49)%,P＜0.05].低危、高危及MDS-AML组CD34+CD38+细胞相对比例[(86.09±7.79)%、(81.68±11.82)%、(82.88±2.60)%]显著低于对照组[(92.21±3.85)%,P＜0.05],而CD34+CD38-细胞比例[(13.91±7.79)%、(18.32±11.82)%、(17.13±2.60)%]显著高于对照组[(7.79±3.85)%,P＜0.05].MDS组CD34+CD38-细胞比例与国际预后积分系统(IPSS)(r=0.493,P=0.001)、WHO分型预后积分系统(WPSS)积分(r=0.586,P=0.000)均呈正相关.低危、高危及MDS-AML组骨髓单个核细胞(BMMNC)中G0/G1期细胞比例[(94.52±4.32)%,(96.07±3.88)%,(94.65±4.55)%]明显高于对照组[(88.94±7.30)%,P＜0.01],而3组S期[(4.63±3.34)%,(3.45±3.80)%,(5.12±4.55)%]和G2/M期[(0.84±1.52)%,(0.48±0.74)%,(0.22±0.34)%]细胞比例明显低于对照组[(9.06±6.50)%,(2.00±2.93)%,P值均＜0.05],3组S+G2/M期细胞比例明显高于对照组(P＜0.01).CD34+CD38-细胞比例≤12.0%的MDS患者治疗有效率高于CD34+CD38-细胞比例＞12.0%的患者,但差异无统计学意义.结论 MDS患者原代骨髓CD34+细胞亚群分化异常,BMMNC存在G1期阻滞现象,提示CD34+细胞亚群和细胞周期测定可能有助于MDS患者的辅助诊断以及疗效和预后判断.     

视神经脊髓炎血清尿酸水平与临床相关性研究

目的 研究急性期视神经脊髓炎患者血清尿酸水平和临床特点的关系.方法 尿酸酶-过氧化物酶耦联法检测65例视神经脊髓炎患者与对照组76例多发性硬化,126例脑血管病,130例健康者的血清尿酸水平.视神经脊髓炎组采用扩展残疾状态量表评价疾病严重程度,行核磁并强化评估受累病灶,细胞免疫荧光法检测水通道蛋白(AQ)P4抗体.分析尿酸与病程、疾病轻重、受累病灶、AQP4等临床特点的相关性.结果 男性视神经脊髓炎组尿酸[(298.90±74.14)μmol/L]显著低于脑血管病组[(355.37±50.30)μ.mol/L]和对照组[(340.33±58.23)μmol/L,P＜0.05],与多发性硬化组[(292.36±92.95)μmol/L]差异无统计学意义.女性视神经脊髓炎组尿酸[(198.21±62.62)μmol/L]显著低于脑血管病组[(274.51±70.66)μmol/L]和对照组[(243.26±60.65)μmol/L,P＜0.05],与多发性硬化组[(232.29±71.95)μmol/L]差异无统计学意义.视神经脊髓炎组尿酸在男性[(298.90 ±74.14)μmol/L]与女性[(198.21±62.62)μmol/L]、扩展残疾状态量表评分＞5分[(195.48±83.70)μmol/L]与＜5分[(241.00±63.20)μmol/L]的患者相比差异有统计学意义(P＜0.05),与病程、脊髓受累节段、病灶强化,AQP4阳性无关(P＞0.05).结论 急性期视神经脊髓炎患者血清尿酸降低,并且与疾病严重程度有关.     

投氟不同时间大鼠血清氧化应激和碱性磷酸酶活性的变化研究

目的 观察过量氟处理的大鼠在不同时间内氧化应激态与碱性磷酸酶(ALP)活性的变化.方法 24只Wistar大鼠,按体质量随机分成对照组、高氟组,每组12只.对照组大鼠饮用自来水(氟化钠<1 mg/L),高氟组大鼠饮用自来水中加入剂量为221 ms/L的氟化钠.实验期间动物自由进食、饮水,每周测体质量1次.实验时间分别为l、4、 8、 12周.通过生化方法检测大鼠血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、尿酸和ALP活性.结果 投氟与时间两因素对ALP活性影响有交互作用(F=4.690,P<0.05).投氟1周与12周大鼠血清的ALP活性[(19.29±3.69)、(15.72±0.79)kU/L]较对照组[(14.08±1.99)、(12.91±3.97)kU/L]明显升高(P均<0.05);投氟1周和4周大鼠血清MDA[(13.37±4.38)、(11.82±2.08)μmol/L]较对照组[(8.75±3.24)、(7.42±2.62)μmol/L]明显增高(P均<0.05);高氟组SOD、GPx与对照组比较,差异无统计学意义(P均>0.05);投氟1、4周大鼠血清尿酸[(89.53±13.21)、(88.47±19.78)μmol/L]较对照组[(77.79±11.43)、(65.42±13.42)μmol/L]明显增高(P均<0.05),而投氟8、12周大鼠尿酸[(67.21±9.44)、(73.95±9.52)μmol/L]低于对照组[(77.79±11.43)、(65.42±13.42)μmol/L,P均<0.05].结论 投与过量氟大鼠的ALP活性变化具有一定的时间依赖性;而投氟刺激大鼠氧化应激水平增强,这种刺激与投氟时间没有明显关联.     

亚砷酸钠和砷酸钠染毒大鼠尿液砷形态分析

目的 分析亚砷酸钠和砷酸钠染毒大鼠尿液中砷形态代谢产物水平,寻找不同价态砷代谢的差异,为进一步探讨砷代谢产物与砷毒性作用机制间的关系提供基础数据.方法 Wistar大鼠70只,体质量80～120 g,按体质量随机分为7组,即对照组、亚砷酸钠高、中、低剂量组和砷酸钠高、中、低剂量组,每组10只.各组大鼠染毒1个月后,收集12 h尿液,采用高效液相色谱-氢化物发生原子荧光光谱法(HPLC-HGAFS)测定尿液中砷形态代谢产物水平,并通过二甲基砷酸(DMA)加标回收率测定来评价结果准确度.结果 亚砷酸钠中剂量组尿液中各种代谢物[3价无机砷(iAs~(3+))、5价无机砷(iAs~(5+))、DMA]水平[(121.66±1.26)、(10.26±2.68)、(204.91±0.56)μg/L]高于高剂量组[(113.20±0.75)、(5.16±1.32)、(147.70±0.77)μg/L,P均<0.05]和低剂量组[(79.35±2.12)、(5.13±2.25)、(56.35±1.23)μg/L,P均<0.05];砷酸钠中剂量组尿液中iAs~(3+)和DMA水平[(315.81±1.69)、(245.12±1.18)μg/L]高于高剂量组[(85.03±0.56)、(110.34±1.04)μg/L,P均<0.05]和低剂量组[(22.97±2.67)、(15.75±2.15)μg/L,P均<0.05].亚砷酸钠高、低剂量组尿液中iAs~(3+)和DMA水平高于砷酸钠组(P均<0.05);而亚砷酸钠中剂量组尿液中iAs~(3+)和DMA水平低于砷酸钠组(P均<0.05).亚砷酸钠高、中、低剂量组DMA的平均加标回收率为94.80%～102.70%,砷酸钠高、中、低剂量组DMA的平均加标回收率为95.33%～108.40%.结论 染砷价态及外暴露剂量不同,大鼠体内砷代谢物的形态和水平就不同;不同价态无机砷在大鼠体内的代谢径路不完全相同.     

亚砷酸钠诱导人膀胱上皮永生化细胞氧化损伤作用观察

目的 观察亚砷酸钠(NaAsO2)诱导人膀胱上皮永生化细胞(SV-HUC-1)氧化损伤作用.方法 以不同浓度NaAsO2[0(对照)、1、2、4、8、10μmol/L]对SV-HUC-1细胞染砷24 h,利用流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平,采用酶联免疫吸附实验(EHSA法)检测细胞内硝基酪氨酸(NT)含量和细胞培养液中8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷(8-OHdG)水平.结果 1、2、4、8、10 μmol/L染砷组SV-HUC-1细胞ROS水平(81.76±4.91、95.23±2.17、126.61±17.95、126.74±27.77、114.18±9.65)明显高于对照组(69.84±1.28,P＜ 0.05或＜ 0.01),ROS水平与染砷剂量呈显著正相关(r=0.818,P＜ 0.01).10 μmol/L染砷组SV-HUC-1细胞内NT含量[ (919.66±206.33)μg/L]显著高于对照组[(238.19±38.28) μg/L,P＜ 0.01],NT含量与染砷剂量呈显著正相关(r=0.617,P＜0.01).各组细胞培养液中8-OHdG含量比较,差异无统计学意义(F=2.127,P＞0.05).结论 NaAsO2能够引起SV-HUC-1细胞氧化损伤.     

燃煤型砷中毒患者外周血淋巴细胞表型特征及临床意义

目的 探讨燃煤型砷中毒患者免疫功能改变及其规律,为肿瘤风险评估提供依据.方法 70例患者均系贵州省黔西南州燃煤型砷中毒高发区既往经临床及实验室确诊的燃煤型砷中毒病例,其中男性44例,女性26例,年龄24～71岁,平均年龄41岁.按病程及是否癌变分为4组:<10年组,23例;10～19年组,21例;≥20年组,20例;癌变组(病程≥20年),6例.对照组为健康职工和大学生自愿者,26例.采静脉血,流式细胞仪分析各组人群外周血淋巴细胞亚群CD3+(总T细胞)、CD3+D4+(诱导性/辅助性T细胞)、CD3+CD8+(抑制性/细胞毒性T细胞)、CD19+(B淋巴细胞)和CD56+CD16+(自然杀伤细胞,NK)细胞组成比例.并对淋巴细胞膜人类白细胞组织相容性抗原-DR(HLA-DR)、细胞表面抗原(CD)25和CD38分子表达率进行检测.结果 <10年组、10～19年组、≥20年组和癌变组人群外周血CD3+细胞百分率分别为(63.76±9.32)%、(55.63±12.97)%、(51.00 ±12.23)%、(49.83 ±9.89)%,均低于对照组[(68.10±8.62)%],组间比较差异有统计学意义(F=12.862,P<0.05).CD3+CD4+细胞比例上述各组分别为(31.35±6.62)%、(28.38±8.66)%、(24.13±6.46)%、(19.17±4.96)%,明显低于对照组[(34.28±7.32)%],组间比较差异有统计学意义(F=10.455.P<0.05).≥20年组和癌变组CD19+细胞百分率[(9.00±5.32)%、(9.00±3.29)%]低于对照组和<10年组[(11.80±3.43)%、(12.35 ±4.53)%],组间比较差异有统计学意义(P<0.05);其余各组之间两两比较差异均无统计学意义(P>0.05).癌变组淋巴细胞CD25和CD38表达率[(17.96±4.98)%、(41.38±8.54)%]明显高于对照组[(13.10±3.38)%、(28.60±5.51)%].组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05);HLA-DR表达率在10～19年组[(18.20±6.25)%]明显高于对照组[(10.72±7.06)%]和<10年组[(11.78±5.13)%],≥20年组[(20.30±8.01)%]与癌变组[(21.82±10.97)%]在同一水平.结论 砷所致机体细胞免疫功能削弱可能是燃煤型砷中毒患者皮肤癌变的重要机制,细胞免疫功能状态可作为燃煤砷中毒患者皮肤癌变的预警信号.     

亚砷酸钠对大鼠外周血淋巴细胞DNA损伤的研究

目的 研究亚砷酸钠(NaAsO2)染毒对大鼠外周血淋巴细胞DNA的损伤作用.方法 Wistar大鼠32只,体质量180～200 g,雌雄各半,按体质量随机分为4组,分别为0(对照)、0.05、0.15、0.45 mg/L NaAsO2染毒组,每组8只.大鼠自由饮用含不同剂量NaAsO2的水,每天测量体质量并记录水消耗量.连续染毒30 d后,眼眶静脉采血,应用单细胞凝胶电泳试验评价大鼠外周血淋巴细胞的损伤程度.结果 0.05、0.15、0.45mg/L染砷组大鼠的体质量增长[(121.00±38.57)、(120.62±42.80)、(125.38±48.68)g]和饮水量[(36.9±6.2)、(37.9±5.8)、(39.3±4.2)ml/d]与对照组[(119.25±47.27)g、(38.4±5.1)ml/d]比较,差异无统计学意义(F值分别为0.040、0.828,P均＞0.05).0.05、0.15、0.45 mg/L染砷组大鼠的外周血淋巴细胞拖尾率[46.25%(185/400)、57.00%(228/400)、64.00%(256/400)]、彗星尾长[(32.89±17.18)、(58.74±36.28)、(77.55±35.73)μm]、尾矩[(6.29±3.74)、(11.20±9.64)、(17.30±12.60)μm]显著高于对照组[39.25%(157/400)、(18.73±15.83)、(2.61±1.05)μm,P均＜0.01];随着染砷剂量的增加,淋巴细胞拖尾率、彗星尾长和尾矩均呈上升趋势.结论 低剂量砷染毒可引起大鼠外周血淋巴细胞DNA的损伤.

Abstract：

Objective To explore the DNA damage in peripheral blood lymphocytes of rats exposed to sodium arsenite. Methods Thirty-two Wistar rats, weighing 180 - 200 g, equal male and female, were randomly divided into 4 groups, 8 in each group. Sodium arsenite 0(control) ,0.05,0.15,0.45 mg/L were given through drinking water for 30 days. Body weight and drinking water consumption were measured every day. Blood were collected and DNA damage in peripheral blood lymphocytes was examined by single cell gel electrophoresis.Results The increase of body mass[( 121.00 ± 38.57), ( 120.62 ± 42.80), ( 125.38 ± 48.68)g]and water intake [(36.9 ± 6.2), (37.9 ± 5.8), (39.3 ± 4.2)ml/d]in 0.05,0.15,0.45 mg/L sodium arsenite groups were compared with the control group[( 119.25 ± 47.27)g, (38.4 ± 5.1 )ml/d], and the difference were not significant (F = 0.040,0.828, all P ＞ 0.05). The tail ratios[46.25%(185/400) ,57.00%(228/400),64.00%(256/400)], tail lengths [(32.89 ± 17.18), (58.74 ± 36.28), (77.55 ± 35.73 ) μm]and tail moments [(6.29 ± 3.74), ( 11.20 ± 9.64),(17.30 ± 12.60)μm]in 0.05,0.15,0.45 mg/L sodium arsenite groups were significantly higher than those of the control group[39.25%(157/400), (18.73 ± 15.83),(2.61 ± 1.05)μm, all P ＜ 0.01], and the tail ratios,tail lengths and tail moments in lymphocytes increased with increased doses of arsenic concentration. Conclusions Low doses of arsenic exposure can induce DNA damage in peripheral blood lymphocytes of rats.     

低剂量亚慢性砷中毒家兔血液常规检查指标观察

目的 观察低剂量亚慢性砷中毒家兔血液常规检查指标的变化,为筛选低砷暴露的早期损伤指标提供依据.方法 将12只健康雄性家兔按体质量随机分为对照组和3个亚砷酸钠(NaAsO2)染毒组(低、中、高剂量组),每组3只.对照组家兔饮用自来水,3个染毒组分别饮用含砷量为10、50、250μg/L的自来水溶液.8周时于家兔耳缘静脉取50μl抗凝血,用ABX-60型全自动血细胞分析仪测定白细胞系统[白细胞(WBC)、淋巴细胞绝对值(LYM)、淋巴细胞百分比(LYM%)、中性粒细胞绝对值(GRA)、中性粒细胞百分比(GRA%)、单核细胞绝对值(MON)、单核细胞百分比(MON%)]、红细胞系统[红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞比积(HCT)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞体积分布宽度(RDW)]、血小板系统[血小板(PLT)、平均血小板体积(MPV)、血小板压积(PCT)和血小板分布宽度(PDW)],共18项指标.结果 各染毒组WBC、GRA、GRA%与对照组相比有升高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);各组间PLT、MPV比较,差异有统计学意义(F值分别为4.07、4.20,P<0.05),其中高剂量组PLT[(221.33±22.50)×109L]明显低于对照组[(292.00±16.97)×109/L,P<0.05],中剂量组MPV[(5.57±0.46)fL]也明显低于对照组[(7.10±0.99)fL,P<0.05];其余指标变化不明显.结论 低剂量亚慢性砷中毒可造成家兔血液系统改变,血液常规检查可作为砷中毒的早期损伤指标.     

饮水砷暴露对子代大鼠体内砷代谢的影响

目的 观察孕期和哺乳期砷暴露对子代大鼠脑、肝组织砷代谢与分布的影响,探讨砷在大鼠体内通过胎盘屏障、乳汁屏障以及血脑屏障的情况.方法 将Wistar雌性大鼠按体质量随机分为4组,每组12只,于妊娠第6天开始分别饮用含亚砷酸钠(NaAsO_2)0、10、50、100 ms/L的蒸馏水.于子代大鼠出生第0、15、28、42天,用氢化物发生-冷原子捕获-原子吸收分光光度法测定其体内肝、脑组织及母乳含砷量.结果 子代大鼠出生第0、42天,50、100 mg/L组仔鼠脑组织中iAs水平[(120.0±46.0)、(195.5±125.3),(216.5±278.4)、(176.6±151.8)ng/g]、MMA[(47.2±18.1)、(199.6±389.1),(47.4±55.2)、(82.7±79.2)ng/g]、DMA[(984.3±377.4)、(2222.1±1433.2),(998.1±368.3)、(1781.3±715.7)ng/g]均高于0 mg/L组[0、0、0,(7.3±6.6)、0、(44.2±27.4)ng/g,P均<0.05],在出生第15、28天,50、100mg/L组仔鼠脑组织中DMA水平[(270.3±73.1)、(323.9±72.7),(758.7±245.9)、(1020.6±383.6)ng/g]高于0 mg/L组[(13.9±18.1),(50.6±98.3)ns/g,P均<0.05).出生后第28、42天,10、50、100 mg/L组仔鼠肝组织中iAs[(37.5±28.1)、(268.8±246.4)、(307.2±339.9),(15.4±9.4)、(479.1±161.1)、(408.4±51.9)ng/g]、DMA水平[(594.5±148.8)、(3181.9±519.0)、(4834.2±2568.4),(1061.8±85.2)、(3697.1±553.7)、(4120.0±732.8)ng/g]明显高于0 mg/L组[(1.4±3.5)、(49.7±47.1),0、(100.4±30.2)ng/g,P均<0.05],而在出生第15天,10、50、100 mg/L组仔鼠肝组织DMA[(182.0±60.2)、(637.6±90.0)、(1458.7±196.3)ng/g]高于0 mg/L组[(13.2±20.5)ng/g,P均<0.05].脑、肝中各种形态砷化物均随饮水砷暴露浓度的增高而增加.第0、15天50、100 mg/L组母鼠乳汁中的DMA[(182.3±85.9)、(372.2±203.9),(124.2±33.1)、(244.4±196.5)ng/g]也明显高于0 mg/L组[(9.8±13.4),0ng/g,P均<0.05].且各组仔鼠脑、肝组织中各种形态砷化物均在出生后第15天出现一个降低的趋势,在第0、28、42天都旱现比较高的水平.结论 仔鼠脑、肝组织中砷及其甲基代谢物呈现剂量相关性分布.砷可通过胎盘屏障、血脑屏障对仔鼠产生不良影响,而乳汁屏障能够阻碍一定量的砷进入.     

三磷酸腺苷结合盒转运子A1在真核细胞中的表达及对细胞抗砷性的影响

目的 研究含有三磷酸腺苷结合盒转运子A1(ABCA1)基因的真核表达载体pcDNA3.1/ABCA1转染真核细胞后,在细胞中的表达及对细胞抗砷性的影响.方法 由脂质体介导将pcDNA3.1/ABCA1重组质粒转染入人HeLa细胞中(转染重组质粒组),同时设转染空质粒组及未转染组作为对照,用实时定量PCR法检测各组细胞ABCA1 mRNA表达水平,用蛋白免疫印记法(Western blot)检测ABCA1蛋白的表达.转染48 h后,以不同剂量[0(对照)、4、8、16、32、64、128 μmol/L]亚砷酸钠(NaAsO2)染毒,用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞生存率.结果 转染重组质粒组、转染空质粒组及未转染组ABCA1 mRNA表达量分别为(2.09±0.08)×10-4、(0.09±0.02)×10-4、(0.08±0.02)×10-4,组间比较差异有统计学意义(F=1499.23,P<0.01),其中转染重组质粒组ABCA1 mRNA表达量高于转染空质粒组和未转染组(P均<0.01).转染重组质粒组、转染空质粒组及未转染组在相对分子质量(Mr)为254 × 103处均有特异性蛋白条带,其大小与ABCA1蛋白大小相符,且转染重组质粒组蛋白表达量明显高于转染空质粒组及未转染组.在NaAsO2剂量为4、8、16、32、64、128μmol/L时,转染重组质粒组细胞生存率[(94.8±0.9)%、(86.5±2.6)%、(77.8±2.0)%、(56.0±2.0)%、(23.8±1.7)%、(18.6±0.6)%]均高于转染空质粒组[(85.3±1.1)%、(78.7±0.6)%、(67.8±2.4)%、(43.2±1.5)%、(14.5±1.3)%、(8.0±0.4)%],二者比较差异有统计学意义(t值分别为18.985、6.689、5.922、9.504、9.481、32.634,P均<0.01).结论 ABCA1基因经转染后在HeLa细胞中呈现高表达状态,并使HeLa细胞对砷的耐受性提高.     

低剂量亚慢性砷染毒家兔血清酶和生物化学指标的变化

目的 观察低剂量亚慢性砷染毒家兔在染毒不同时期血清酶和生物化学指标的变化,为筛选有意义的砷中毒早期诊断血液学指标提供依据.方法 成年家兔12只,体质量2.0～3.5kg,按体质量随机分为4组,每组3只,分别饮用含亚砷酸钠0(对照)、0.01、0.05、0.25 mg/L的水.染毒8周和12周后,采用SYSMEX-180型全自动生化分析仪测定各组家兔血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)和γ-谷氨酰基转移酶(γ-GT)的活性以及总蛋白、白蛋白、球蛋白和白蛋白/球蛋白比值(简称白球比).结果 染毒家兔0.05 mg/L剂量组第12周ALT水平[(60.00±4.14)U/L]较同期对照组[(41.50±2.12)U/L]升高(P＜0.05);0.25 mg/L剂量组第8周、第12周AST水平[(46.50±3.21)、(52.33±3.81)U/L]较同期对照组[(21.33±3.53)、(29.50±3.23)U/L]升高(P均＜0.05);0.05 mg/L剂量组和0.25 mg/L剂量组第12周ALP水平[(78.68±4.85)、(103.00±7.83)U/L]较同期对照组[(45.50±5.50)U/L]升高(P均＜0.05);0.05mg/L剂量组第12周γ-GT水平[(19.33±7.50)U/L]较同期对照组[(8.50±3.53)U/L]升高(P＜0.05).各剂量组第8周和第12周的血清总蛋白、白蛋白、球蛋白水平和白球比与同期对照组比较,差异无统计学意义(F值分别为0.77、0.02、0.16、3.14和0.51、0.29、0.41、0.52,P均＞0.05).结论 0.05 mg/L及以上剂量亚慢性砷染毒主要对肝脏有一定损伤.在肝脏的相关血清酶学中,AST是较为早期的反映砷中毒肝脏损伤的敏感指标.

Abstract：

Objective To observe the sub-chronic effects of low doses of arsenic poisoning in rabbits exposed to different periods on some of the serum enzymes and biochemical indicators, and to provide the basis for screening of meaningful hematologic indicators for early diagnosis of arsenic poisoning. Methods Twelve adult rabbits,weighing 2.0 - 3.5 kg, were randomly divided into four groups, 3 in each group, and they were fed with drinking water containing sodium arsenite 0(control),0.01,0.05,0.25 mg/L, respectively. Serum alanine aminotransferase (ALT), aspartate amino transferase (AST), alkaline phosphatase (ALP), γ-glutamyl transacylase (y-GT), total protein(TP), albumin(ALB), globulin(GLP), and ALB/GLP of rabbit were measured by SYSMEX-180 automated biochemistry analyzer after 8 weeks and 12 weeks exposure. Results The results showed that ALT in 0.05 mg/Lgroup of 12 week[(60.00 ± 4.14)U/L]increased significantly compared with the control[(41.50 ± 2.12)U/L, P ＜0.05];AST in 0.25 mg/L group of 8 week and 12 week[(46.50 ± 3.21 ), (52.33 ± 3.81 )U/L]increased significantly compared with the control[(21.33 ± 3.53), (29.50 ± 3.23 )U/L, all P ＜ 0.05];ALP in 0.05 mg/L and 0.25 mg/L group of 12 week [(78.68 ± 4.85 ), ( 103.00 ± 7.83 ) U / L]increased significantly compared with the control [(45.50 ± 5.50)U/L, all P ＜ 0.05];γ-GT in 0.05 mg/L group of 12 week[(19.33 ± 7.50)U/L]increased significantly compared with the contro1[(8.50 ± 3.53)U/L, P＜ 0.05]. TP, ALB, GLP, ALB/GLP of different groups of 8 week and 12 week were not significantly different statistically(F= 0.77,0.02,0.16,3.14 and 0.51,0.29,0.41,0.52, all P ＞ 0.05). Conclusions Zero point zero five mg/L and higher doses of sub-chronic arsenic exposure has some major damage to the liver. Compared with other serum enzymes and the biochemical indexes, serum AST is a early sensitive indicator of liver injury of the arsenic poisoning.