大鼠心脏移植急性排斥合并肺部细菌感染模型的建立

目的建立大鼠心脏移植急性排斥合并肺部细菌感染模型。方法异基因大鼠心脏移植术后给予环孢霉素A(CSA)10mg·kg-1·d-1皮下注射。术后第6天将动物随机分为继续CSA治疗(A组)和生理盐水10mg·kg-1·d-1皮下注射(B组)。在术后第13天将动物进一步随机给予0.2ml,1×109cfu/ml铜绿假单胞菌气管内接种(C组)或0.2ml生理盐水气管内接种(D组)。观察各组生存率,并于术后第14天处死动物,切取移植心脏和肺脏组织做病理学检查。结果实验动物全部存活;A组动物未见明显排斥反应;B组动物移植心脏发生ISHLT3R级(重度)排斥反应;C组动物发生中-重度肺部炎症反应;D组动物肺部病理未见明显异常。结论通过急性排斥和细菌气管内接种这两种干预因素处理,成功建立了心脏移植术后急性排斥合并肺部细菌感染模型。     

TLR4信号转导途径在大鼠系膜增生性肾小球肾炎的作用机制探讨

目的 探讨Toll样受体4（TLR4）信号转导途径在系膜增生性肾小球肾炎（MSPGN）发病机制中的作用;同时观察来氟米特对该途径的影响及对MSPGN的干预作用.方法 48只SD雄性大鼠随机分为4组：A组：正常对照组（n=12）;B组：模型组（n=12）;C组：来氟米特2 mg·kg-1·d-1组（n=12）;D组：来氟米特5 mg· kg-1·d-1组（n=12）.各组大鼠均于实验4、8、12周末检测24h尿蛋白定量、血清胱抑素C、血肌酐水平;HE、PAS染色光镜下观察肾组织系膜增生程度;免疫组化两步法检测TLR4、NF-κB、细胞因子IL-6、TNF-α蛋白的表达情况;RT-PCR法检测TLR4、NF-κB、IL-6、TNF-α mRNA的表达情况.结果 B、C、D组大鼠24h尿蛋白定量、血清胱抑素C、血肌酐水平、肾组织系膜增生程度、TLR4、NF-κB及细胞因子IL-6、TNF-α的水平均高于A组（P＜0.05）,而C、D组的水平则明显低于B组（P＜0.05）.且与C组相比,D组上述指标明显减低（P＜0.05）.结论 MSPGN的发生可能与TLR4信号转导途径活化诱导的炎症反应有关,来氟米特可通过抑制该途径对MSPGN起干预作用.     

丹参酮ⅡA对腹主动脉缩窄大鼠肥厚心肌血管紧张肽受体及细胞内游离钙离子浓度的影响

目的 通过研究丹参酮ⅡA对腹主动脉缩窄的高血压大鼠肥厚心肌血管紧张肽Ⅱ受体(ATR)基因表达及细胞内游离钙离子浓度([Ca2 ]I)的影响,探讨丹参酮ⅡA逆转高血压左心室肥厚的分子生物学机制.方法 SD大鼠行腹主动脉缩窄术建立高血压左室心肌肥厚模型,术后4周将手术大鼠随机分为假手术组(A组)、手术组(B组)、丹参酮低剂量组(C组,10 mg·kg-1·d-1腹腔注射)、丹参酮高剂量组(D组,20 mg·kg-1·d-1腹腔注射)及缬沙坦组(E组,10 mg·kg-1·d-1灌胃).用药8周后检测各组尾动脉压,取左心室组织检测左心室质量指数(LVMI)、病理切片HE染色测量心肌纤维直径(MFD);采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、免疫印迹法(Western blot)分别检测AT1受体mRNA和蛋白的表达水平.利用激光共聚焦显微镜测定心肌细胞内游离Ca2 浓度的变化.结果 ①C、D组血压[(188±11、187±14)mm Hg]显著高于A组、E组[vs(117±8、136±15)mm Hg,P<0.01],C、D组与B组[(186±13)mm Hg]之间差异无统计学意义(P>0.05).②C、D组和E组LVMI、MFD均高于A组(P<0.05),显著低于B组(P<0.01).③B组的AT1R mRNA和蛋白的表达显著高于其他各组(P<0.01);C、D组间无差异(P>0.05),但均高于E组(P<0.05);C、D、E组的AT1R基因表达均未降至A组水平(P<0.05).④B组细胞内[Ca2 ]I明显高于其他各组(P<0.01);D组与A组之间差异无统计学意义(P>0.05);E组和C组仍高于A、D组(P<0.05).结论 丹参酮ⅡA可通过下调心肌细胞AT1基因表达、阻止心肌细胞的钙离子内流发挥逆转心肌肥厚的作用,该作用是非血压依从性的.     

丹参酮ⅡA对高血压肥厚心肌细胞游离钙离子及一氧化氮合酶基因表达的影响

目的 通过研究丹参酮ⅡA对腹主动脉缩窄的高血压大鼠肥厚心肌血管紧张肽Ⅱ受体(ATR)基因表达及细胞内游离钙离子浓度([Ca2 ]i)的影响,探讨丹参酮ⅡA逆转高血压左心室肥厚的分子生物学机制.方法 SD大鼠行腹主动脉缩窄术建立高血压左室心肌肥厚模型,术后4周将手术大鼠随机分为假手术组(A组)、手术组(B组)、丹参酮低剂量组(C组,10 mg·kg-1·d-1腹腔注射)、丹参酮高剂量组(D组,20 mg·kg-1·d-1腹腔注射)及缬沙坦组(E组,10mg·kg-1·d-1灌胃).用药8周后检测各组尾动脉压,取左心室组织检测左心室质量指数(LCMI)、病理切片HE染色测量心肌纤维直径(MFD);采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、免疫印迹法(Western blot)分别检测AT1受体mRNA和蛋白的表达水平.利用激光共聚焦显微镜测定心肌细胞内游离Ca2 浓度的变化.结果 ①c、D组的血压[(188±11、187±14)mm Hg]显著高于A、E组[Vs(117±8、136±15)EtlIn Hg,P＜0.01],C、D组与B组[(186±13)mm Hg]之间差异无统计学意义(P＞0.05).②C、D组和E组的LVMI、MFD均高于A组(P＜0.05),显著低于B组(P＜0.01).③B组的ATlR mRNA和蛋白的表达显著高于其他各组(P＜0.01);C、D组间差异无统计学意义(P＞0.05),但均高于E组(P＜0.05);C、D、E组的AT1R基因表达均未降至A组水平(P＜0.05).④B组细胞内[ca2 ]i明显高于其他各组(P＜0.01);D组与A组之间差异无统计学意义(P＞0.05);E组和C组仍高于A、D组(P＜0.05).结论 丹参酮ⅡA可通过下调心肌细胞AT1基因表达、阻止心肌细胞的钙离子内流发挥逆转心肌肥厚的作用,该作用是非血压依从性的.     

督脉电针对大鼠脊髓损伤后神经功能恢复的影响

目的探讨督脉电针治疗对大鼠脊髓损伤后神经功能恢复的影响。方法利用多中心急性脊髓损伤打击器建立大鼠T11脊髓损伤模型,建模成功后随机分为对照组(A组)和督脉电针组(B组)。脊髓损伤后1周,B组接受督脉电针治疗。两组大鼠于脊髓损伤后1、2、4、8周行BBB后肢运动功能评分,脊髓损伤后2、4、8周行体感诱发电位(SEP)检测,脊髓组织行HE染色与神经丝蛋白(NF200)免疫组化染色。结果 SCI后1周,两组大鼠BBB后肢运动功能评分无显著性差异(P>0.05);SCI后2、4、8周,B组BBB后肢运动功能评分较A组明显升高(P<0.01),SEP潜伏期明显缩短、波幅明显增高(P<0.01)。HE染色显示损伤区瘢痕组织及空洞形成,B组脊髓空洞比A组小;脊髓组织NF200阳性表达B组各时间点较A组明显增强(P<0.01)。结论督脉电针治疗可有效促进SCI大鼠神经功能恢复。     

大鼠缺血后肢局部应用bFGF对血管新生的影响

目的观察不同月龄大鼠缺血后肢肌肉内局部应用碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对血管新生的影响。方法Wistar大鼠40只,按月龄分为A组（4个月）和B组（16个月）,A组又分为A1、A2组,B组又分为B1、B2组,每组10只大鼠。40只大鼠均切断左股动脉,制作后肢缺血模型。成模后A1和B1组大鼠缺血后肢肌肉内多次注射重组牛bFGF蛋白;A2和B2组则给予等量生理盐水。术后4周,取各组大鼠内收肌组织行病理组织学检查,采用图像分析系统计算血管密度,免疫组化方法检测内收肌中VEGF阳性表达的血管数。结果各组大鼠缺血后肢肌内血管密度及VEGF阳性表达的血管数比较,A1组多于A2组,B1组多于B2组,差异均有显著意义（t=3.30～3.50,P〈0.05）;其他各组比较,差异无显著性（P〉0.05）。结论在不同月龄大鼠缺血后肢肌肉内注射bFGF蛋白可促进肢体血管新生,改善肢体缺血状态,且与月龄无关。     

rAAV-CD151基因促大鼠缺血后肢血管再生的功能评价

目的:观察肌肉转染腺相关病毒(AAV)介导的CD151基因在大鼠后肢缺血模型中促血管再生作用并进行功能评价。方法:实验于2003-01/2005-10在华中科技大学同济医学院附属同济医院心血管研究室暨基因治疗研究中心完成。①分别包装携带有CD151基因和GFP基因的重组腺相关病毒(rAAV-CD151,rAAV-GFP)。②Wistar大鼠12只,采用随机数字法分为实验组和对照组,每组各6只。③实验组大鼠右下肢肌肉注射局部转染rAAV-CD151,对照组注射rAAV-GFP(1×1010pfu/只)。④基因转染2周后行股动脉切除术建立右侧大鼠后肢缺血模型。心内注入红四氮唑观察大鼠下肢变化,根据组织染色的部位或染色的深浅程度判断后肢缺血模型建立是否成功。⑤于模型建立术前、术后2d、术后1,2,3,4周进行缺血后肢的损伤评分,分为0～3分,3分为患肢爬行托拽,或者肢体有缺血性坏疽;0分为抗牵拉时患侧足底与对侧肢体外观无明显区别。⑥采用Westernblot检测两组大鼠局部缺血肢体CD151的表达。⑦股动脉切除术4周后,采用非致冷红外热成像仪分别检测大鼠后肢皮肤温度、免疫组织化学检测缺血肌肉组织毛细血管密度,观察缺血肢体血管再生情况。结果:12只大鼠全部进入结果分析。①股动脉切除术4周(基因转染6周)后,实验组大鼠缺血后肢平均皮肤温度高于对照组((32.92±0.63),(31.22±0.87)℃,P<0.05)。②Westernblot检测结果显示实验组大鼠缺血侧肌肉组织CD151表达显著高于对照组。③实验组缺血后肢肌肉组织毛细血管密度显著大于对照组(609.00±83.89),(517.00±70.65)/mm2,P<0.05)。④术后4周肢体功能的损伤评分实验组显著低于对照组(0.67±0.21,1.67±0.32,P<0.05)。结论:局部高表达CD151基因能够提高缺血组织的血管再生能力,促进缺血肢体的血运重建和功能恢复。     

急性放射性肺损伤肺组织EGFR表达及视黄酸对其影响

[目的]研究通过视黄酸(RA)对大鼠急性放射性肺损伤的干预作用,阐明其对放射性肺损伤肺组织表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响.[方法]健康雄性Wistar大鼠80只随机分为4组:正常对照组(A组)、单纯给药组(B组)、单纯照射组(C组)和照射加给药组(D组),每组20只.C、D两组大鼠行6MV-X线15Gy全胸野照射,B、D两组大鼠给予20mg/(kg·d)RA制剂灌服.于照射后第1、2、4、8周取右肺组织行HE和Masson染色,免疫组化方法检测EGFR的表达.[结果]HE和Masson染色提示照射后的1周始肺泡腔有炎性细胞渗出,继之间质水肿.4及8周出现肺泡腔变小甚至结构破坏,局部实变,肺间质出现胶原纤维;B组与A组比各时间段的病理变化无明显差别,但D组与C组比较大鼠肺炎和肺水肿减轻,肺组织胶原纤维量减少.EGFR免疫组化染色显示C组与A组相比在各时间段EGFR表达均明显增强(P<0.001),D组与C组比第4、8周EGFR表达明显减弱(P<0.001).[结论]EGFR参与放射性肺损伤的发生、发展,而RA从蛋白质水平有效抑制EGFR表达,为治疗放射性肺损伤提供了实验依据.     

改良小鼠酒精性肝损伤模型的建立

目的探索建立简便和稳定的酒精性肝病（ALD）的动物模型。方法利用简易胃造漏的方法,将实验动物分为四组,A组为正常小鼠（n=12）;B组为胃造瘘后给予生理盐水（n=12）;C组为胃造瘘后给予酒精（18g·kg-1·d-1）（n=22）;D组小鼠给予自制的ZQ液（n=22）。实验动态观察12周,分别在第4周、6周、8周、12周测四组小鼠肝重、体重值并检测肝脏ALT和AST水平,同时收集肝脏标本经HE染色后光镜观察肝组织的结构变化。结果 C组模型与A组和B组比较也出现不同程度的肝脏损害,但损害的程度较D组轻。D组小鼠在4周开始出现了肝细胞脂肪变性,8周开始出现酒精性肝炎和轻度的肝纤维化,12周时出现肝脏纤维化的表现。结论简易胃造瘘法配合ZQ液可以建立简便和稳定的酒精性肝损伤模型。     

亚硒酸钠对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化及其氧化损伤的影响

目的探讨亚硒酸钠对单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠肾间质纤维化的作用及其对肾间质转化生长因子-β1(TGF-β1)表达及氧化应激指标变化的影响。方法以单侧输尿管结扎建立肾间质纤维化大鼠模型。将90只SD大鼠随机分为假手术组(A组)、UUO组(B组)、UUO+硒组(C组)、UUO+硒及维生素E组(D组)、UUO+贝那普利组(E组),每组18只。C、D、E组分别给予亚硒酸钠(0.2mg.kg-1.d-1)、亚硒酸钠(0.2mg.kg-1.d-1)+维生素E(200mg.kg-1.d-1)和贝那普利(10mg.kg-1.d-1)灌胃。A、B组给予同等剂量生理盐水灌胃。术后第7、14、21天各组随机处死6只大鼠,肾组织行HE、Masson染色评定各组肾间质纤维化程度,免疫组织化学半定量法检测各组肾间质TGF-β1的表达。化学比色法检测肾组织匀浆中氧化指标谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量。结果手术后第7、14、21天,C组肾间质纤维化程度较B组明显减轻(P<0.05),肾组织TGF-β1的表达强度明显低于B组(P<0.01或P<0.05),GSH-Px和SOD含量明显高于B组(P<0.05),MDA含量明显低于B组(P<0.05);而上述各项指标与D组和E组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论硒可能通过减轻肾组织氧化应激反应,下调TGF-β1表达,延缓肾间质纤维化,从而起到肾脏保护作用。