不同浓度肿瘤坏死因子-α对肺腺癌A549细胞的影响

目的 观察不同浓度肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对肺腺癌A549细胞产生的保护、促炎、促细胞凋亡效应.方法 分别以0、1、10、25、50 ng/mL的TNF-α诱导肺腺癌A549细胞6h.采用MTT比色法观察细胞存活率;应用活性氧(ROS)荧光探针DCFH-DA检测ROS强度;RT-PCR法检测Nrf-2、NF-κB基因的表达;DAPI细胞核荧光染色法处理细胞,荧光显微镜下观察细胞凋亡.结果 0、1、10、25、50 ng/mL TNF-α对肺腺癌A549细胞存活率无影响(P均＞0.05);100 ng/mL TNF-α诱导后,与对照组比较,细胞存活率降低(P＜0.05).随着TNF-α浓度增加,肺腺癌A549细胞产生ROS的量随之增加(P均＜0.05),Nrf-2 mRNA表达减少(P均＜0.05),NF-κB mRNA表达增加(P均＜0.05),细胞凋亡率有上升趋势.结论 不同浓度TNF-α诱导肺腺癌A549细胞可产生保护、促炎、促细胞凋亡等不同细胞效应,且随TNF-α浓度增加,细胞损伤加重;其机制可能与ROS产生的量有关.     

诺帝对肺腺癌细胞系A549细胞凋亡的诱导作用

目的探讨化学合成物诺帝对人肺腺癌细胞系A549细胞凋亡和凋亡调控基因bcl-2蛋白表达的影响。方法采用自行合成的化合物诺帝（终浓度为100umol／L）处理A549细胞,于处理后12、24、48和72h用细胞培养、流式细胞仪、免疫组化及图像分析等方法检测诺帝对A549细胞凋亡和bcl-2蛋白的表达。结果一定浓度的诺帝处理A549细胞12～48h,均可诱导A549细胞发生凋亡,且随着作用时间的延长,凋亡细胞数增加越明显;诺帝处理A549细胞后,出现细胞bcl-2蛋白表达水平显著降低。结论诺帝诱导了A549细胞的凋亡,其作用可能与其下调了bcl-2蛋白的表达有关。     

白藜芦醇诱导肺腺癌A549细胞凋亡的机制

目的探讨白藜芦醇(Res)诱导肺腺癌A549细胞凋亡的机制。方法用不同浓度Res处理A549细胞24 h后,倒置显微镜观察细胞形态学变化,4,6-二氨基-2-苯基吲哚(DAPI)细胞核染色后荧光显微镜观察细胞凋亡特征,噻唑蓝(MTT)检测对于A549细胞的抑制生长作用,Western印迹法检测Res作用A549细胞后P53、Bax、Bcl-2、Cleaved-Caspase3蛋白的表达变化。结果 Res处理A549细胞后,细胞间隙变大,细胞核分裂,随着药物浓度的增加上述形态变化明显。25²00μmol/L浓度的Res可明显抑制A549细胞的增殖,具有剂量依赖性,24 h的IC50为100μmol/L,而且细胞内的P53、Bax、Cleaved-Caspase3蛋白表达量升高,Bcl-2蛋白被抑制,Bcl-2/Bax比值下降。结论 Res抑制A549细胞增殖,并通过P53途径诱导A549细胞凋亡,Bax、Bcl-2和Cleaved-Caspase3参与了凋亡过程。     

HPS-1对人肺腺癌A549细胞凋亡诱导作用的机制研究

目的 评价HPS-1对人肺腺癌A549细胞凋亡蛋白Caspase 3、8、9以及Bax、Bcl-2mRNA表达的影响,探究HPS-1抗肺肿瘤可能机制.方法 人肺腺癌A549细胞经低、中、高剂量HPS-1处理不同时间后,噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的增殖情况,流式细胞术(FCM)法检测各组细胞凋亡率及细胞周期比例,比色法检测各组细胞凋亡蛋白Caspase-3、8、9的表达,RT-PCR法检测各组细胞Bax、Bcl-2 mRNA的表达.结果 MTT结果显示,低、中、高剂量HPS-1对人肺腺癌A549细胞的增殖具有明显抑制作用,且具有时间、剂量依赖性;FCM法检测发现,低、中、高剂量HPS-1对人肺腺癌A549细胞的凋亡具有促进作用,且与剂量呈正相关;比色法检测各组细胞发现,HPS-1促进凋亡蛋白Caspase-3、8、9的上调,且HPS-1高剂量组凋亡蛋白上调更明显.结论 HPS-1具有抑制人肺腺癌A549细胞增殖、诱导其凋亡作用,且该作用可能与HPS-1阻滞细胞周期G1期,上调凋亡蛋白Caspase-3、8、9及Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达有关.     

肿瘤坏死因子α通过丝裂原活化蛋白激酶激酶6诱导LA795肺腺癌细胞凋亡

目的：为了研究肿瘤坏死因子α（TNF－α）诱导肺癌细胞凋亡的分子机制，寻找肺癌基因治疗的新方法。方法：建立TNF－α诱导LA795肺腺癌细胞凋亡的细胞模型；使用人胚肾293包装细胞制备丝裂原活化蛋白激酶激酶6（mitogen-activated protein kinase kinase 6,MKK6)及其结构活性和无活性突变体的重组腺病毒；使用激酶活性测定法检测细胞内MKK6的激酶活性。结果：TNF－α刺激可明显诱导LA795肺腺癌细胞MKK6激活；用TNF－α刺激肺腺癌细胞可明显诱导细胞凋亡；MKK6结构活性突变体也可明显诱导LA795细胞凋亡；而MKK6无活性突变体可明显抑制TNF－α诱导的LA795细胞凋亡。结论：TNF－α诱导LA795肺腺癌细胞凋亡是通过MKK6发挥作用的，MKK6的重组腺病毒有希望用于肺癌的基因治疗。     

丙泊酚对脂多糖诱导的小胶质细胞肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的探讨丙泊酚能否通过抑制核因子(NF)-κB活化下调脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达。方法将BV2细胞分为4组即对照组、丙泊酚组、丙泊酚+LPS组和LPS组。在干预0 h和24 h时使用MTT法检测BV2细胞活性。在干预24 h后使用RTPCR法和Western印迹法对BV2细胞TNF-αmRNA和蛋白的表达水平进行检测;并使用Western印迹法对细胞NF-κB p65磷酸化水平(phospho-NF-κB p65/NF-κB p65比值)进行分析。结果在给予LPS干预24 h后BV2细胞活性明显降低(P均0.05);但丙泊酚+LPS组细胞活性较LPS组增加(P均0.05),同时对照组和丙泊酚组细胞活性无统计学差异(P均0.05)。与对照组相比较,在LPS干预24 h后BV2细胞TNF-αmRNA和蛋白的表达水平以及phospho-NF-κB p65/NF-κB p65比值均明显升高(P均0.05);但LPS组较丙泊酚+LPS组TNF-α表达的升高以及phospho-NF-κB p65/NF-κB p65比值的增加更加显著(P均0.05);同时对照组和丙泊酚组TNF-α表达水平和phospho-NF-κB p65/NF-κB p65比值无统计学差异(P均0.05)。结论丙泊酚可能通过抑制NF-κB的激活下调了BV2细胞TNF-α合成和释放。     

铁对人肺腺癌A549细胞凋亡的体外影响

目的了解加铁、去铁对体外培养人肺腺癌细胞株A549细胞凋亡的影响,探讨铁代谢与肺癌发生发展的关系。方法体外培养人肺腺癌细胞株A549细胞,采用不同浓度的去铁胺(DFO)及三氯化铁(FeCl3)以及生理盐水作用A549细胞,通过观察细胞形态学变化、流式细胞术(FCM)检测、TUNEL三种方法检测细胞凋亡的变化。结果①不同浓度的FeCl3作用于A549细胞后,在同一时间点随浓度升高细胞凋亡率(APO%)呈下降趋势;②不同浓度FeC l3作用于A549细胞后,仅150μmol/L组48 h出现凋亡梯带,其余浓度均无凋亡梯带出现。③流式细胞仪(FCM)检测各组APO%分别为:10μmol/L FeCl3组6.7%,50μmol/L FeCl3组4.7%,100μmol/L FeCl3组2.5%,150μmol/L FeC l3组12.6%。④浓度为100μmol/L DFO作用于A549细胞,6、12、24、48h FCM检测APO%为:5.2%、17.5%、42.9%、56.8%。浓度为10、50、100、150μmol/L 24hAPO%分别为10.4%,26.2%,42.9%,48.3%。结论三氯化铁可抑制A549细胞凋亡,去铁胺可诱导A549细胞凋亡,铁螯合剂可成为一种有效的抗肿瘤药物。     

ZD1839对免疫效应细胞裂解人肺腺癌A549细胞作用的影响

ZD1839(Iressa^TM)是选择性表皮生长因子(EGF)受体酪氨酸激酶抑制剂，能阻断参与细胞增殖的信号转导通路，是目前实体瘤靶向治疗的重要药物。试验证明，ZD1839可以抑制肺腺癌的增殖。2003年ZD1839被美国FDA批准为铂类和紫杉类药物化疗失败，局部进展或者转移的非小细胞肺癌(NSCLC)的单方治疗药物。ZD1839抑制肺腺癌增殖的效果较好，其机制可能与上述各环节有关；但是，它能否通过影响机体免疫系统，尤其免疫效应细胞发挥抗癌作用尚不清楚。     

肉桂酸对人肺腺癌A549细胞相关基因表达的影响

目的探讨肉桂酸（CINN）诱导肺癌A549细胞分化的能力及其分子机制。方法采用原位杂交和完整细胞原位斑点印迹等技术,研究CINN对人肺腺癌A549细胞分化相关蛋白质分子CD15,相关基因c-myc、EGFR、wtp53、wtp16等表达的影响。结果CINN可上调wtp53、wtp16基因,抑制CD15、c-myc、EGFR基因表达。结论CINN的上述作用可能是其诱导肺癌A549细胞分化的机制之一。     

一氧化氮对肿瘤坏死因子-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞细胞间粘附分子-1表达的影响

为探讨肿瘤坏死因子－α介导单核细胞与血管平滑肌细胞粘附致动脉 粥样硬化及一氧化氮抗动脉粥样硬化的机制,用体外培养的大鼠血管平滑肌细胞,以硝普钠为一氧化氮供体,采用细胞粘附实验,流式细胞术和逆转录－聚合酶链反应观察一氧化氮对肿瘤坏死因子－α诱导的细胞间粘附分子－1在血管平滑肌细胞中的表达及其对单核细胞与血管平滑肌细胞粘附的影响。结果发现一氧化氮显著抑制肿瘤坏死因子－α诱导的单核细胞与血管平滑肌细胞的粘附及细胞间粘附分子－1在血管平滑肌细胞中的表达,减少血管平滑肌细胞表面的细胞间粘附分子－1,结果表明一氧化氮抑制细胞间粘附分子－1基因表达及降低单核细胞与血管平滑肌细胞之间的粘附率是其抗动脉粥样硬化的机制之一。     

肿瘤坏死因子-α对大鼠离体灌注肾血管收缩的影响

目的观察肿瘤坏死因子(TNF)-α对肾血管收缩的影响及机制。方法 56只大鼠制备离体灌注肾模型,随机分为8组(n=7):A1组:Kreb液灌流;A2组:Kreb液+TNF-α灌流;B1组:Kreb液+Verapamil灌流;B2组:Kreb液+Verapamil+TNF-α灌流;C1组:无钙Kreb液灌流;C2组:无钙Kreb液+TNF-α灌流;D1组:无钙Kreb液+2-APB灌流;D2组:无钙Kreb液+2-APB+TNF-α灌流。各组均在刺激期加内皮素(ET)。灌流结束后,计算肾脏水肿率,HE染色观察肾小球及肾小管形态、结构。结果各组基础灌注压比较无显著差异(P0.05)。A1、A2、B1、B2、C1、C2组ET刺激后,肾灌注压较基础压均明显升高(P0.05);A2、B2、C2组灌注压升高值分别显著高于A1、B1、C1组(P0.01)。D1、D2组ET刺激后,肾灌注压均略升高,但与基础灌注压比较无显著差异(P0.05);两组灌注压升高值比较无显著性差异(P0.05)。8组肾脏的水肿率均低于30%,灌流后肾脏标本切片均未发现明显的器质性损伤,与灌流前相符。结论 TNF-α可能通过上调1,4,5-三磷酸肌醇受体(IP3R)增强ET引起的肾血管收缩。     

抗肿瘤坏死因子-α治疗的研究进展

肿瘤坏死因子(TNF)-α的过量表达与很多疾病密切相关,研究表明:适量的TNF-α在宿主抵抗微生物入侵和抑制肿瘤产生的防御系统中起着关键作用,但过量的TNF-α与其它炎性因子一起产生多种病理性损伤.以TNF-α为靶点开发的药物包括:抑制TNF-α生成的药物和直接作用于TNF-α中和其活性的药物,这些药物从不同层次不同水平抑制TNF-α的产生和发生作用从而达到抗TNF-α治疗的目的.本文就这些抗TNF-α治疗的研究进展作一综述.     

肿瘤坏死因子-α诱导肝细胞凋亡在暴发性肝衰竭中的作用

目的 研究肿瘤坏死因子－α（ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ－α,ＴＮＦ－α）诱导肝细胞凋亡细胞凋亡在暴发性肝衰竭中的作用机制。方法 分别注射脂多糖（ｌｉｐｏｐ ｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ,ＬＰＳ）和ＴＮＦ－α于Ｄ－氨基半乳糖（Ｄ－ｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ,ＧａｌＮ）致敏的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠造成暴发性肝衰竭模型,用脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口原位末端标记（ｉｎ ｓｉｔｅ ｅｎｄ ｌａｂｅ     

虫草多糖对肿瘤坏死因子α诱导肝细胞凋亡的影响

目的探讨虫草多糖对肝细胞凋亡的影响和作用机制。方法以人正常肝细胞L02作为研究对象,将不经任何药物处理的人正常肝细胞L02作为正常组;利用不同浓度的TNFα(5、10、20、40 ng/ml)进行干预24 h后筛选肝细胞凋亡模型的造模条件并作为模型组;根据实验设计,使用3种不同浓度的虫草多糖(50、100、200μg/ml)预作用12 h后给予或者不给予筛选后的TNFα模型浓度24 h作为实验组,收取样本进行检测,采用CCK8法检测细胞增殖活力;采用Annexin V/PI双染法检测肝细胞凋亡数;采用RT-PCR法检测细胞凋亡(Bax、caspase3、caspase8、caspase9、死亡受体Fas)的mRNA表达;采用蛋白免疫印迹法检测cleaved-caspase3、cleaved-caspase8蛋白表达。计量资料多组间比较采用单因素方差分析或Kruskal-Wallis H检验,进一步两两比较采用LSD-t检验或Dunnett-t检验。结果 CCK8法检测结果显示,40 ng/ml的TNFα诱导L02肝细胞24 h后,L02肝细胞增殖较正常组显著降低(73.54%±14.19%vs 100.00%±23.61%,P 0.01),3种不同浓度的虫草多糖在对肝细胞无明显细胞毒性的前提下,较模型组(93.02%±7.21%),细胞增殖均显著升高(P值均0.01),分别为108.10%±9.05%、114.30%±8.79%、117.70%±9.66%。Annexin V/PI双染法检测结果显示,与正常组细胞凋亡数量比较,模型组细胞凋亡数量显著升高(7.71%±1.20%vs 11.57%±1.41%,P 0.05),3种不同浓度的虫草多糖较模型组(18.91%±0.80%)均明显降低细胞凋亡数量,分别为15.16%±0.16%、13.28%±1.57%、16.91%±0.21%(P值均0.05)。RT-PCR法和蛋白免疫印迹检测结果显示,40 ng/ml TNFα造模后细胞凋亡相关的Bax、死亡受体Fas的mRNA表达较正常组均增强,差异均有统计学意义(P值均0.05),并且激活形式的cleaved-caspase3、cleaved-caspase8的蛋白表达显著增强(P值均0.05),与模型组比较,50μg/ml的虫草多糖可显著降低Bax、caspase3、caspase9的mRNA表达和cleaved-caspase8蛋白表达,100μg/ml的虫草多糖可显著降低Bax、caspase3、caspase8、Fas、caspase9 mRNA和cleaved-caspase8蛋白表达,200μg/ml的虫草多糖可显著降低caspase3、caspase8、Fas、caspase9 mRNA和cleaved-caspase3、cleaved-caspase8蛋白表达,3种虫草多糖浓度作用具有一定量效趋势。结论虫草多糖可以有效抑制TNFα诱导的L02正常肝细胞凋亡。     

大黄酸对肿瘤坏死因子-α诱导的脐静脉内皮细胞黏附作用影响的观察

目的 观察不同剂量的大黄酸(Rhein)对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)黏附作用的影响. 方法 将HUVECs分为单纯HUVECs组、单纯TNF-α 40 ng/ml(TNF-α)组、Rhein100 μg/ml+TNF-α 40 ng/ml(Rhein100)组、Rhein 50 μg/ml+TNF-α 40 ng/ml(Rhein50)组、Rhein 10 μg/ml+TNF-α 40 ng/ml (Rhein10)组.采用Western blot和RT-PCR检测HUVECs细胞间黏附因子-1(ICAM-1)的蛋白和mRNA的水平.采用人单核细胞株(THP-1)和HUVECs的黏附性实验检测内皮细胞的黏附功能. 结果 与TNF-α组比较,Rhein100、Rhein50、Rhein10组ICAM-1蛋白相对表达量下降[(2.88±0.04)vs(1.27±0.32),(1.28±0.17),(1.32±0.25),P＜0.05或P＜ 0.01];Rhein100和Rhein50组ICAM-1 mRNA的水平下降[(2.12±0.24)vs(1.19±0.17),(1.26±0.23),P＜0.05或P＜0.01];在黏附性实验中,Rhein100组HUVECs所黏附的单核细胞数目下降[(1.28±0.07)vs(1.07±0.14),P＜0.01]. 结论 Rhein能抑制TNF-α所诱导的HUVECs的ICAM-1的过度表达,可能是Rhein对HUVECs的保护机制之一.     

诺帝对肺腺癌细胞系A549细胞增殖的影响

目的 探讨化学合成物诺帝对人肺腺癌细胞系A549细胞增殖的影响.方法 采用自行合成的化合物诺帝(终浓度为100 μmol/L)处理A549细胞,处理后12、24、48和72 h,用细胞培养、流式细胞仪检测、免疫组化及图像分析等方法检测诺帝对A549细胞的影响.结果 诺帝可使A549细胞增殖受抑制,对细胞周期抑制作用主要表现于G1→S期;诺帝处理后,A549细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达明显减弱.结论 诺帝对A549细胞的增殖有显著抑制作用,这种作用与其抑制PCNA有关.     

程序化细胞死亡因子5对肿瘤坏死因子-α诱导大鼠关节软骨细胞损伤的影响

目的研究程序化细胞死亡因子(PDCD)5对肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导的大鼠关节软骨细胞损伤的影响。方法以实时聚合酶链反应(PCR)和Western印迹分别测定关节软骨细胞经TNF-α诱导后细胞中PDCD5表达水平。用PDCD5 siRNA慢病毒感染关节软骨细胞,检测细胞中PDCD5表达水平。噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖,流式细胞术测定细胞凋亡,Western印迹检测细胞中剪切型Caspase(Cleaved Caspase)-3、-9蛋白水平,试剂盒检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮合酶(NOS)活性。结果 TNF-α诱导后的关节软骨细胞中PDCD5 mRNA和蛋白水平升高。PDCD5 siRNA慢病毒感染能够下调TNF-α条件下关节软骨细胞中PDCD5表达。关节软骨细胞经TNF-α诱导以后,细胞增殖能力降低,细胞凋亡率升高,细胞中Cleaved Caspase-3、-9蛋白水平升高,细胞中SOD活性降低,NOS活性升高,与未经TNF-α诱导的细胞比较,差异有统计学意义(P0.05)。沉默PDCD5后的关节软骨细胞经TNF-α诱导以后,细胞的增殖能力升高,细胞凋亡率降低,细胞中Cleaved Caspase-3、-9蛋白水平降低,细胞中SOD活性升高,NOS活性降低,与没有沉默PDCD5的细胞比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论沉默PDCD5能够减少TNF-α诱导的关节软骨细胞凋亡,减少细胞损伤。     

肿瘤坏死因子-α对心脏交感神经节的影响

目的探究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对心脏交感神经节的影响。方法 14只成年犬随机分为两组:实验组7只,将0.1ml TNF-α(0.1mg/ml)分别局部微量注射进入左侧心脏交感神经节(LSG)、右侧心脏交感神经节(RSG);对照组7只,将同等量的生理盐水分别局部微量注射进入LSG和RSG。电压递增式高频电刺激(频率20Hz,脉宽0.1ms)作用于LSG、RSG可分别引起血压升高、心率加快,以最大收缩压(SBP)改变代表LSG功能,以心率变化代表RSG功能。微电极固定在LSG、RSG之后,使用labChart Pro软件记录并分析神经活性的频率和振幅。分别记录基础状态和干预30min后LSG、RSG的神经功能和活性。结果与基础状态相比,实验组30min后LSG和RSG功能及神经活性显著升高(P0.05),而对照组以上指标未见显著性改变(P0.05)。30min后,实验组LSG、RSG功能和神经活性均明显高于对照组(P0.05)。结论 TNF-α可显著增强心脏交感神经节的功能和活性。     

抗肿瘤坏死因子-α治疗类风湿关节炎

类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)是一种由免疫、内分泌、感染、遗传、环境等多因素参与的全身性自身免疫性疾病。该病呈全球分布,我国患病率为0.32%～0.36%,西方国家为1%。迄今为止,针对RA临床上尚缺乏根治方法和预防措施。由于它最终导致关节畸形及功能障碍,增加社会和经济负担,因此对它的研究也就变得更加迫切。近年来从细胞因子的角度在分子和细胞水平上对RA发病机理的研究已经取得了实质性进展,其中发现肿瘤坏死因子(tumour necro-sis factor,TNF)在RA的发病中起着重要作用,以TNF/TNFR为治疗靶向的抗TNF治疗也取得了令…