青蒿琥酯诱导HL-60细胞凋亡的研究

本研究旨在研究青蒿琥酯体外诱导HL-60细胞凋亡及其过程中Bcl-2与ICAD蛋白表达的变化。采用MTT法测定青蒿琥酯对HL-60细胞的生长抑制作用;用光学显微镜检、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术观察和检测青蒿琥酯诱导HL-60细胞的凋亡;应用蛋白印迹法检测青蒿琥酯诱导HL-60细胞凋亡过程中Bcl-2与ICAD的表达变化情况。结果表明：青蒿琥酯对HL-60细胞有明显的生长抑制作用,并呈时间、剂量依赖性。48小时IC50值为18.33μg/ml,其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;Bcl-2和ICAD在HL-60细胞中均有表达,且随药物浓度的增高表达量逐渐降低。结论：青蒿琥酯可诱导HL-60细胞凋亡,Bcl-2和ICAD在青蒿琥酯诱导HL-60细胞凋亡的信号传导途径中可能是重要的调控因子。     

超声介入复方中药"99-克星"活性组分诱导肝癌细胞凋亡及机制

目的探讨超声引导瘤内注射用复方中药“99-克星”的活性组分AG-05诱导体外培养肝癌HepG2细胞凋亡作用及相关机制。方法不同浓度AG-05作用于体外培养肝癌HepG2细胞后,应用荧光显微镜观察细胞形态学改变,流式细胞术分析细胞凋亡率变化,Westernblotting方法检测细胞bcl-2、caspase-3蛋白表达的改变。结果AG-05作用48h后肝癌HepG2细胞出现染色质边集、凋亡小体形成等典型的凋亡形态学改变,细胞凋亡率明显升高,10、20μg/ml组分别为(13.5±2.1)%和(20.1±4.3)%;AG-05具有抑制肝癌细胞bcl-2表达,活化caspase-3的作用,并且呈一定的量效、时效关系。结论复方中药“99-克星”活性组分AG-05可诱导肝癌细胞凋亡,其作用机理与抑制bcl-2蛋白表达,活化caspase-3有关。     

青蒿琥酯对人胃癌SGC-7901细胞增殖与凋亡及Caspase 3蛋白表达的影响

目的研究青蒿琥酯对人胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡的作用及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase3)蛋白表达的影响。方法将终浓度为5×104个/ml的人胃癌SGC-7901细胞置于培养板孔中,单独(空白对照)或与20、40、80μg/ml浓度的青蒿琥酯培养,然后加入四唑氮蓝(MTT)溶液共同培育。采用MTT法检测青蒿琥酯对人胃癌SGC-7901细胞生长的影响。SGC-7901细胞在培养板中培养后,应用倒置显微镜、DNA琼脂糖凝胶电泳梯状条带法观察细胞的凋亡情况。Caspase3蛋白试剂盒检测Caspase3酶活性的变化情况。结果青蒿琥酯对人胃癌细胞SGC-7901细胞体外增殖有明显的抑制作用,其抑制率随时间延长(6、12、24h)和药物浓度增加(20、40、80μg/ml)而增强(21.89%、32.20%、47.85%,P<0.05);青蒿琥酯处理24h后,细胞形态学观察到细胞凋亡坏死;琼脂糖电泳观察到明显DNA片段化;Caspase3的酶活性伴随着药物浓度的增加(0、20、40、80μg/ml)而增高〔(2.57±0.32)、(5.58±0.49)、(6.87±0.73)、(10.21±0.57)U/ml,P<0.05〕。结论青蒿琥酯能够抑制人胃癌细胞SGC-7901的增殖,促进其凋亡。Caspase3蛋白的高表达在促进SGC-7901细胞凋亡中起着重要作用。     

Fe_3O_4磁性纳米粒子增强青蒿琥酯诱导SKM-1细胞凋亡(英文)

目的:研究磁性纳米粒子Fe_3O_4和青蒿琥酯共聚物对MDS细胞株SKM-1细胞的抑制作用和潜在的机制。方法:用蛋白质印记法检测用或不用共聚物治疗SKM-1细胞的BCL-2、BAX、Caspase-3和Survivin的蛋白表达水平。用流式细胞术检测共聚物诱导的SKM-1细胞的凋亡率。结果:共聚物组的细胞凋亡率明显高于磁性纳米粒子Fe_3O_4组和青蒿琥酯组,磁性纳米粒子Fe_3O_4可以增强青蒿琥酯诱导SKM-1细胞凋亡。蛋白质印记法结果显示,Survivin和BCL-2在青蒿琥酯组表达下调,并且这个下调在青蒿琥酯和磁性纳米粒子Fe_3O_4共聚物组更为明显。与对照组和磁性纳米粒子Fe_3O_4组相比,青蒿琥酯组和共聚物组的BAX水平增高。当青蒿琥酯结合磁性纳米粒子Fe_3O_4后活性Caspase-3水平明显上调。青蒿琥酯和磁性纳米粒子Fe_3O_4共聚物会激发SKM-1细胞凋亡相关基因表达水平的改变,其中BAX的上调与Survivin和BCL-2的下调是主要改变。结论:青蒿琥酯可以诱导SKM-1细胞的凋亡,磁性纳米粒子Fe_3O_4可增强青蒿琥酯诱导细胞凋亡的作用。     

青蒿琥酯诱导人急性白血病原代细胞凋亡、胀亡的作用机制研究

目的:探讨青蒿琥酯诱导人急性白血病(AL)原代细胞凋亡、胀亡作用的可能机制。方法:提取11例急性白血病患者骨髓液进行原代细胞培养,以对数生长期细胞为干预点,将不同浓度青蒿琥酯作用于细胞,分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测青蒿琥酯对人AL原代细胞增殖的影响;透射电子显微镜观察青蒿琥酯作用后细胞的形态变化;免疫印迹法检测凋亡相关蛋白。结果:与对照组比较,青蒿琥酯对人AL骨髓原代培养细胞有抑制作用;青蒿琥酯具有诱导人AL骨髓原代细胞凋亡和胀亡的作用,青蒿琥酯可下调凋亡抑制蛋白Bcl-2含量,同时促进凋亡蛋白Bax、细胞色素C的释放。结论:青蒿琥酯可诱导人AL原代细胞凋亡和胀亡,线粒体途径可能是青蒿琥酯诱导白血病细胞死亡的主要途径。     

青蒿琥酯对人胃癌SGC-7901细胞生长的影响

目的:研究青蒿琥酯诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡作用及其可能机制.方法:应用流式细胞术(FCM)、透射电镜(TEM)等方法检测不同浓度下青蒿琥酯对人胃癌SGC-7901细胞生长的影响,并应用Western Blot法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达水平.结果:经青蒿琥酯处理后,人胃癌SGC-7901细胞凋亡率升高,并具有时间浓度依赖性(P＜0.05),癌细胞被阻滞于G0/G1期;电镜观察肿瘤组织中散在凋亡细胞及凋亡小体;Western Blot法检测到凋亡相关基因Bcl-2表达减弱,Bax表达增强(P＜0.05).结论:青蒿琥酯能有效抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与下调凋亡相关基因Bcl-2、上调Bax表达有关.     

替吉奥胶囊对胃癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响及机制研究

目的探讨替吉奥胶囊对胃癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响及机制。方法 6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml的替吉奥处理人胃癌BGC823细胞,不加药物处理的作为空白对照组,48 h后,CCK8实验检测细胞增殖;Transwell小室检测细胞侵袭能力;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测Cleaved caspase3、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、Notch1、Hes1蛋白表达。结果 6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml的替吉奥处理的细胞的抑制率均显著高于对照组,且具有浓度依赖性(P0.01),选择115μg/ml的替吉奥作为后续实验的研究对象;与对照组比较,替吉奥组细胞抑制率显著升高,细胞侵袭数显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cleaved caspase3蛋白表达显著上调,MMP-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白表达显著下调(P0.01)。结论替吉奥胶囊可降低胃癌细胞的增殖及侵袭能力,促进细胞的凋亡,其机制与抑制Notch1信号通路有关。     

佐剂性关节炎模型大鼠滑膜组织凋亡因子Fas／FasL及Bcl-2／Bax表达与青蒿琥酯的干预

背景:类风湿关节炎的发病与细胞凋亡过程异常密切相关,其滑膜细胞过度增生源于滑膜细胞凋亡的相对不足,诱导滑膜细胞凋亡对治疗类风湿关节炎有积极意义。青蒿素及其衍生物可诱导多种细胞凋亡。目的:观察青蒿琥酯对佐剂性关节炎滑膜组织中凋亡因子Fas/FasL及Bcl-2/Bax表达的影响。设计:随机对照观察。单位:三峡大学第一临床医学院。材料:实验于2005-09/2005-11在三峡大学免疫实验室及形态动物学实验室完成,选用50只生后8周雄性Wistar大鼠,体质量(150±21)g,清洁级,由华中科技大学同济医学院动物实验中心提供。完全Freud佐剂为美国SIGMA公司产品,青蒿琥酯注射液购自桂林南药股份有限公司。兔抗鼠Fas(SC-716)、兔抗鼠FasL多抗(SC-834)、山羊抗小鼠IgG抗体-HRP多聚体、兔抗鼠P53(M3566)多抗、Bcl-2(sc-7382)多抗、兔抗鼠Bax(sc-7480)多抗以及ABC复合物试剂盒和DAB显色试剂盒均为美国SantaCruz公司产品;甲氨蝶呤由上海华联制药有限公司生产;德国Leica生物应用显微镜及图象分析系统;德国Leica切片机。方法:摸球法随机将大鼠分为6组:空白组(n=8),模型组(n=8),青蒿琥酯高剂量组(n=10),青蒿琥酯低剂量组(n=8),青蒿琥酯加甲氨蝶呤组(n=8),甲氨蝶呤组(n=8)。①实验干预:按照文献叙述的模型构建方法,除空白组外,余5组每只右足跖处给予注射0.1mL完全Freud佐剂,致炎成佐剂性关节炎模型,空白组注射生理盐水0.1mL。致炎后第13天开始给药,青蒿琥酯高剂量组、青蒿琥酯低剂量组分别注射40,20mg/(kg·d)青蒿琥酯注射液,青蒿琥酯加甲氨蝶呤组注射20mg/(kg·d)青蒿琥酯注射液,0.4mg/(kg·3d)甲氨蝶呤注射液。甲氨蝶呤组给予注射0.4mg/(kg·3d)甲氨蝶呤注射液,模型组腹腔注射1mL/d生理盐水。各组给药方式均为腹腔注射。②实验评估:给药前及给药后13d分别评价大鼠关节肿胀指数;免疫组织化学法检测给药后13d大鼠滑膜组织中Fas/FasL、Bcl-2及Bax的表达情况。主要观察指标:各组关节肿胀指数及滑膜组织中凋亡相关因子Fas/FasL,Bcl-2/Bax的表达。结果:纳入大鼠50只均进入结果分析。①给药后13d,各实验组关节肿胀指数明显低于给药前,差异有统计学意义(P<0.01),各实验组关节肿胀指数均明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01)。②青蒿琥酯高剂量组、青蒿琥酯低剂量组和青蒿琥酯加甲氨蝶呤组滑膜组织中FasL及Fas均上调,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01),甲氨蝶呤组与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05);青蒿琥酯高剂量组、青蒿琥酯低剂量组、青蒿琥酯加甲氨蝶呤组及甲氨蝶呤组Bcl-2表达下调,Bax上调,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:实验证实青蒿琥酯具有诱导佐剂性关节炎病情缓解的作用,上调滑膜组织中Fas/FasL及Bax,下调Bcl-2的表达而诱导滑膜细胞凋亡可能是其机制之一。     

藤梨根乙酸乙酯制剂诱导食管癌细胞凋亡机制的观察

目的：探讨藤梨根（Actinidia arguta）乙酸乙酯制剂促进人食管癌Eca-109细胞凋亡的机制。方法采用MTT比色法,检测藤梨根乙酸乙酯药液在不同浓度（1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml等）及不同时间（24h、48h、72h等）对Eca-109细胞生长抑制作用;采用TUNEL法检测其对癌细胞生长的诱导凋亡效应;采用免疫组化SP法,检测凋亡相关蛋白Bax 、Bcl-2及caspase的表达。结果藤梨根乙酸乙酯药液对人食管癌Eca-109细胞的生长抑制作用,随着药物浓度的升高和作用时间的延长而增强,其生长抑制率可达87.2%。藤梨根制剂对瘤细胞有明显的凋亡效应,而在对照组,未见有明显凋亡现象。瘤细胞作用24h、48h、72h后分别与对照组比较,用药组Bax蛋白表达明显增强（P〈0.01）;同时伴有Bcl-2表达减弱,72h后最明显,差异有统计学意义（P〈0.01）。藤梨根药液促进caspase-3、caspase-9表达明显增强,而对caspase-8表达影响较小。结论藤梨根可通过下调Bcl-2表达,激活caspase-9、caspase-3诱导Eca-109细胞凋亡。     

青蒿琥酯对脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响

目的:观察青蒿琥酯对脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cells,GMC)凋亡的影响。方法:用不同浓度的青蒿琥酯刺激脂多糖诱导增殖的大鼠肾小球系膜细胞,HE染色观察凋亡细胞形态,DAPI荧光染色观察细胞核凋亡情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:青蒿琥酯对系膜细胞凋亡有明显诱导作用,呈一定剂量依赖性。结论:青蒿琥酯能够剂量依赖性地诱导大鼠系膜细胞凋亡。