罗格列酮对哮喘患者T淋巴细胞PPAR-γ-核因子-κB通路的调控机制

目的探讨罗格列酮对哮喘患者T淋巴细胞PPAR-γ-核因子-κB通路的调控机制。方法将10名哮喘患者外周血T淋巴细胞培养48 h,分哮喘未干预组、哮喘干预1组(在哮喘未干预组基础上在加终浓度为20μmol/L的罗格列酮)、哮喘干预2组(在哮喘未干预组基础上在加终浓度为20μmol/L的罗格列酮及终浓度为10μg/L的哮喘干预2组)。ELISA法检测T淋巴细胞培养上清液中IL-10浓度,细胞免疫化学染色检测T淋巴细胞NF-κB活化率。结果 IL-10浓度:哮喘干预1组哮喘未干预组哮喘干预2组(均P0.05)。NF-κB活化率:哮喘未干预组哮喘干预2组哮喘干预1组(均P0.05)。各组NF-κB活性分别与IL-10浓度成负相关。哮喘干预1组上清液中IL-10浓度明显高于哮喘未干预组,哮喘干预1组NF-κB活化率较哮喘未干预组及哮喘干预2组下降1倍,哮喘干预2组与哮喘未干预组NF-κB活化率相近,IL-10抗体可阻断罗格列酮对NF-κB活化率的抑制。结论罗格列酮对PPAR-γ-核因子-κB通路抑制作用与升高哮喘患者T淋巴细胞源性IL-10水平有关。     

基于PPAR-γ探讨人参皂苷Rg1对大鼠心肌缺血再灌注后心律失常的调节作用

目的基于过氧化体增殖物激活型受体γ(PPAR-γ)探讨人参皂苷Rg1对大鼠心肌缺血再灌注(I/R)后心律失常的调节作用。方法 72只SD大鼠随机分为假手术组(SO组)、缺血再灌注组(I/R组)、人参皂苷Rg1组(Rg1组)、人参皂苷Rg1+罗格列酮组(Rg1+ROS组),后三组采用冠状动脉左前降支结扎的方法建立I/R模型;SO组和I/R组给予生理盐水干预、Rg1组给予40 mg/kg人参皂苷Rg1干预、Rg1+ROS组给予40 mg/kg人参皂苷及6 mg/kg罗格列酮干预。再灌注6 h的过程中进行心电图监测,再灌注6 h后检测心肌I/R面积、心肌酶、炎症细胞因子的含量及核因子κB (NF-κB)、NF-κB抑制因子(I-κB)、PPAR-γ的表达水平。结果与SO组比较,I/R组的心律失常明显加剧,心肌I/R面积、磷酸肌酸激酶(CK)、磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、P选择素、E选择素含量及NF-κB、PPAR-γ表达水平均明显增加,I-κB表达水平明显减少。与I/R组比较,Rg1组的心律失常明显改善,心肌I/R面积、CK、CK-MB、LDH、TNF-α、IL-1β、P选择素、E选择素含量及NF-κB、PPAR-γ表达水平均明显减少,I-κB表达水平明显增加。与Rg1组比较,Rg1+ROS组的心律失常明显加剧,心肌I/R面积、CK、CK-MB、LDH、TNF-α、IL-1β、P选择素、E选择素含量及NF-κB、PPAR-γ表达水平均明显增加,I-κB表达水平明显减少(P均0.05)。结论人参皂苷Rg1通过抑制PPAR-γ介导的炎症反应来改善大鼠心肌I/R后心律失常。     

罗格列酮对日本血吸虫病肝纤维化小鼠肝组织核因子-κB和过氧化物酶体增殖物激活受体γ表达的影响

目的观察日本血吸虫病肝纤维化小鼠肝脏肝组织核因子-κB(NF-κB)的活性和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达,及PPARγ配体罗格列酮对其表达的影响.方法50只昆明小鼠,随机分为正常对照组、感染对照组、吡喹酮治疗组、罗格列酮治疗组及罗格列酮加吡喹酮治疗组.除正常对照组外,其余各组均建立血吸虫病肝纤维化小鼠模型.用HE染色观察肝组织光镜下的病理改变.用Western blot方法,实时荧光定量PCR反应观察小鼠肝组织NF-κB的活性变化与PPARγmRNA的表达.结果罗格列酮加吡喹酮治疗组小鼠肝脏的炎性反应和纤维化病理改变较其他模型组轻(P＜0.05).感染对照组NF-κB活性(141.11±15.37)最强,明显高于其余各组(正常对照组78.89±18.12;吡喹酮组112.89±20.17罗格列酮组108.89±20.47;罗格列酮加吡喹酮组88.89±19.34)(P＜0.05).感染对照组[-27.315±(-6.348)].及吡喹酮治疗组[-25.647±(-5.694)]PPARγ mRNA表达较正常对照组[-16.557±(.3.022)]及罗格列酮治疗组[-18.217±(-4.498)]、罗格列酮加吡喹酮治疗组[-18.212±(-3.909)]显著减弱(P＜0.05).结论PPARγ及NF-κB在血吸虫病肝纤维化形成中起一定作用.PPARγ配体罗格列酮有明显的抗日本血吸虫病肝纤维化效应,其抗纤维化机制与PPARγ配体激活PPARγ表达的同时抑制NF-κB的活性有关.     

过氧化物酶增殖物激活受体-γ调节体外诱导培养的人巨噬细胞表达基质金属蛋白酶-9及其抑制物-1的作用及机制

目的 探讨过氧化物酶增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)在调节急性冠状动脉综合征(ACS)患者外周血单核细胞源性巨噬细胞(MDM)表达基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)中的作用及可能机制.方法选取ACS患者48例(ACS组)、对照者28例(对照组),提取外周血单个核细胞,刺激培养为MDM.随机将ACS组及对照组MDM分别分为罗格列酮0、1、10和20 μmol/L亚组,分别于相应亚组加入血清、1、10和20 μmol/L浓度的罗格列酮干预.然后测定各亚组MDM上清液中MMP-9、TIMP-1浓度及MDM细胞中PPAR-γ、MMP-9、TIMP-1 mRNA表达强度,并用免疫组织化学法测定核因子-κB(NF-κB)蛋白表达变化.分析比较ACS组与对照组间不同浓度罗格列酮干预亚组表达PPAR-γ、MMP-9、TIMP-1 mRNA及MMP-9、TIMP-1、核因子-κ B P65(NF-κ B P65)蛋白水平上的差异.结果罗格列酮干预后,ACS组及对照组MDM中PPAR-γ mRNA表达明显上调[PPAR-γ mRNA,ACS组:0.25±0.05,0.26±0.07,0.74±0.12,0.86±0.12,1.16±0.26,1、10、20 μmoL/L亚组与干预前及0 μmol/L亚组比JP2较P均＜0.01;对照组:0.39±0.06,0.37±0.04,0.99±0.10,0.99±0.09,1.00±0.12,1、10、20μmol/L亚组与干预前及0 μmol/L亚组比较P均＜0.01;数据排列顺序为干预前、0、1、10、20μmol/L亚组,下同],在ACS组中表达强度与罗格列酮浓度呈正比关系.ACS组及对照组MDM上清液中MMP-9浓度下降[MMP-9浓度(mmol/L),ACS组:231±51,215±47,181±36,172±30,151±24,1、10、20 μmol/L亚组与干预前及0 μmol/L亚组比较P均＜0.01;对照组:138±15,127±15,119±13,112±17,107±18,1 μmoL/L亚组与干预前比较P＜0.05,10、20 μmol/L亚组与干预前比较P均＜0.01,10 μmol/L亚组与0 μmol/L亚组比较P＜0.05,20 μmol/L亚组与0 μmol/L亚组比较P＜0.01];MDM中MMP-9 mRNA表达下调[MMP-9 mRNA,ACS组:0.67±0.11,0.62±0.10,0.54±0.05,0.48±0.10,0.41±0.06,1、10、20 μmol/L亚组与干预前比较P均＜0.01,10、20 panoL/L亚组与0 μmol/L亚组比较P均＜0.01,1 μmoL/L亚组与0 μmol/L亚组比较P＜0.05;对照组:0.24±0.08,0.26±0.09,0.20±0.05,0.22±0.05,0.20±0.04,10、20μmoL/L亚组与干预前及0μmol/L亚组比较P均＜0.01,1 μmol/L亚组与干预前比较P＜0.05],ACS组中下调程度与罗格列酮浓度呈反比关系.ACS组和对照组上清液中TIMP-1浓度及MDM中TIMP-1mRNA的表达无明显变化.ACS组和对照组MDM中NF-κB P65表达下调[NF-κB P65 OD值,ACS组:0.42±0.09,0.41±0.09,0.34±0.04,0.34±0.04,0.32±0.05,1、10、20μmol/L亚组与干预前及0μmol/L亚组比较P均＜0.01;对照组:0.28±0.03,0.25±0.04,0.23±0.03,0.23±0.04,0.22±0.05,1、10、20 μmol/L亚组与干预前及0 μmol/L亚组比较P均＜0.05],不同浓度罗格列酮亚组问差异无统计学意义.结论罗格列酮可能通过上调PPAR-γ表达,减低ACS组NF-κB水平,而下调ACS患者MDM表达MMP-9,但TMPI-1表达小受此调节.罗格列酮町能具有稳定ACS患者动脉粥样斑块的作用.     

罗格列酮对NASH大鼠肝组织IKK-β表达、NF—κB活性的抑制作用

IKK-β是核因子κB（NF-κB）抑制蛋白（IκB）磷酸化激酶，为促炎因子激活NF-κB必需的催化亚单位。过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）高亲和力配体罗格列酮，可通过抑制NF-κB活化和肿瘤坏死因子（TNF）-α等多种致炎基因表达，发挥抗炎及免疫调节作用。     

罗格列酮对重症急性胰腺炎大鼠肾组织中一氧化氮及NF-κB/p65表达的影响

目的研究罗格列酮对重症急性胰腺炎大鼠肾组织中一氧化氮(NO)及核因子(NF)-κB/p65表达的影响。方法试验动物分为模型组、对照组和罗格列酮组,模型组和罗格列酮组构建重症急性胰腺炎大鼠模型,对照组只翻动十二指肠,罗格列酮组用罗格列酮腹腔注射。取各组大鼠肾组织,硝酸还原酶法检测NO含量,酶联免疫吸附(ELISA)法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性,免疫组化法检测NF-κB/p65表达,Western印迹检测肿瘤坏死因子(TNF)-α和细胞间黏附分子(ICAM)-1表达。结果模型组和罗格列酮组肾组织中NO含量、iNOS活性、NF-κB/p65水平、TNF-α水平、ICAM-1水平较对照组明显升高(均P0.05),而罗格列酮组较模型组均明显降低(均P0.05)。结论罗格列酮能够降低重症急性胰腺炎肾组织中NO含量和NF-κB/p65、TNF-α、ICAM-1水平。     

罗格列酮对大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜及炎症因子的影响

目的观察罗格列酮对大鼠颈动脉损伤后新生内膜及炎症因子的影响。方法将SD大鼠随机分为3组(即对照组、手术组、治疗组)。手术组及治疗组均用球囊导管扩张法损伤左侧颈总动脉,治疗组给予罗格列酮灌胃治疗。术后4h,1d和7d,用放免法检测大鼠血浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平。2周后取损伤血管行苏木精-伊红染色、免疫组化染色及光镜观察,计算内膜面积(NIA)、内弹力板围绕面积(IELA)、管腔狭窄指数(SI)及核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达的光密度值。结果罗格列酮能抑制损伤动脉新生内膜的形成,抑制NF-κB的蛋白表达,降低血浆中TNF-α和IL-6水平。结论罗格列酮可以通过抑制损伤血管的炎症反应,减轻损伤血管的再狭窄。     

罗格列酮对日本血吸虫病肝纤维化小鼠肝组织核因子-κB和过氧化物酶体增殖物激活受体γ表达的影响

目的:观察日本血吸虫病肝纤维化小鼠肝脏肝组织核因子-κB(NF-κB)的活性和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达,及PPARγ配体罗格列酮对其表达的影响.方法:50只昆明小鼠,随机分为正常对照组、感染对照组、吡喹酮治疗组、罗格列酮治疗组及罗格列酮加吡喹酮治疗组.除正常对照组外,其余各组均建立血吸虫病肝纤维化小鼠模型.用HE染色观察肝组织光镜下的病理改变.用Western blot方法,实时荧光定量PCR反应观察小鼠肝组织NF-κB的活性变化与PPARγmRNA的表达.结果:罗格列酮加吡喹酮治疗组小鼠肝脏的炎性反应和纤维化病理改变较其他模型组轻(P＜0.05).感染对照组NF-κB活性(141.11±15.37)最强,明显高于其余各组(正常对照组:78.89±18.12;吡喹酮组:112.89±20.17:罗格列酮组:108.89±20.47;罗格列酮加吡喹酮组:88.89±19.34)(P＜0.05).感染对照组[-27.315±(-6.348)].及吡喹酮治疗组[-25.647±(-5.694)]PPARγ mRNA表达较正常对照组[-16.557±(.3.022)]及罗格列酮治疗组[-18.217±(-4.498)]、罗格列酮加吡喹酮治疗组[-18.212±(-3.909)]显著减弱(P＜0.05).结论:PPARγ及NF-κB在血吸虫病肝纤维化形成中起一定作用.PPARγ配体罗格列酮有明显的抗日本血吸虫病肝纤维化效应,其抗纤维化机制与PPARγ配体激活PPARγ表达的同时抑制NF-κB的活性有关.     

腺病毒E1A蛋白对核因子-κB活化的影响及N-乙酰半胱氨酸的干预作用

目的 探讨腺病毒E1A蛋白(E1A蛋白)对转录因子核因子-κB(NF-κB)、活化蛋白-1(AP-1)转录活性的影响以及抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)干预作用.方法 构建稳定表达E1A蛋白的大鼠肺泡上皮细胞(E1A组)及对照质粒转染细胞(对照组),每组5×10~5个细胞,试验重复3次.采用脂多糖和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)进行刺激,NAC进行干预,荧光素酶报告基因检测系统分析核因子-KB和AP-1转录活性的变化,Western blot法检测核因子-κB和AP-1蛋白的表达.两个样本均数的比较采用t检验,多个样本均数的比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用ISD-t检验,结果荧光素酶活性(相对光单位):刺激前E1A组为9 698±98,在脂多糖和TNF-α刺激后分别为101 195±234和170 385±443,均明显高于对照组(2 077±107、67 846±332和95 743±211);刺激前转染AP-1的E1 A组为9 034±78,在脂多糖和TNF-α刺激后分别为26 343±398和31 731±332,均明显高于对照组(2 845±93、10 772±432和11 005±556).细胞内核因子-κB蛋白表达(积分吸光度值):刺激前E1A组分别为79.3±4.6和80.3±3.8,在脂多糖和TNF-α刺激后分别为81.8±3.9～89.9±1.6和94.1±1.9～99.8±1.6,均明显高于对照组(刺激前分别为68.3±3.8和69.4±4.3,刺激后分别为70.1±2.8～80.8±3.6和73.4±4.9～83.2 4±6.7);在脂多糖和TNF-α作用后E1A组细胞核内AP-1蛋白表达的积分吸光度值(72±4～73±4和83±4～86±8)与对照组(71±4～74±7和84±6～86±6)无明显差别.给予NAC预处理后再用脂多糖和TNF-α刺激,E1A组核因子-κB蛋白表达的积分吸光度值(1.98±0.20和1.90±0.20)明显低于脂多糖或TNF-α单独作用组(3.20±0.10和3.30±0.10).结论 腺病毒E1A蛋白持续表达可引起细胞内核因子-κB的过度活化,抗氧化物质NAC能明显拮抗E1A蛋白上调核因子-κB活化的作用,推测其机制可能与氧化应激有关.     

姜黄素通过抑制NF-κB信号活化减少类风湿关节炎破骨细胞生成

目的研究姜黄素(curcumin,Cur)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者破骨细胞生成的影响及可能机制。方法分离RA患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)诱导培养为破骨细胞,不同浓度Cur(0、2.5、5和10μmol/L)进行干预。培养14 d后行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色标记成熟破骨细胞并计数;Western blot法检测各组细胞中核因子-κB抑制蛋白α(inhibitor of nuclear factor kappa B,IκBα)、磷酸化IκBα(p-IκBα)蛋白的表达;Western blot法检测细胞质和细胞核中核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)p65的表达。结果 Cur2.5、5和Cur 10μmol/L组TRAP阳性细胞数(个/10个视野)分别为103.00±4.36、89.33±4.93和67.33±4.16,与Control组146.67±6.11相比均明显减少(P0.05);IκBα蛋白表达水平明显升高,p-IκBα的表达水平明显下降(P0.05);细胞质中NF-κB p65表达水平明显升高,细胞核中NF-κB p65表达水平明显下降(P0.05)。结论姜黄素通过抑制NF-κB信号活化减少RA破骨细胞生成。     

吡格列酮对糖尿病大鼠肺组织TNF-α和NF-κB的影响

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)-γ激动剂吡格列酮对糖尿病大鼠肺部损害的保护作用及其机制.方法 腹腔注射链脲佐菌素(55 mg/kg)制成糖尿病动物模型.48只健康SD雄性大鼠随机分为4组:对照组、糖尿病组、高、低剂量吡格列酮治疗组.8 w后检测存活大鼠肺组织肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,取右肺组织,观察病理改变,并检测核因子(NF)-κB活性表达的变化.结果 糖尿病组大鼠肺组织TNF-α的水平和NF-κB活性较对照组显著增高(P＜0.05).给予吡格列酮处理8 w后,肺组织TNF-α的水平和NF-κB活性明显降低(P＜0.05).结论 PPAR-γ激动剂吡格列酮可有效减轻糖尿病大鼠肺部损害,其机制可能与抑制NF-κB过度活化和TNF-α的水平有关.     

二陈汤与苓桂术甘汤治疗非酒精性脂肪性肝病炎性损伤的机制研究

[目的]探讨经验方二陈汤与苓桂术甘汤对高脂饲料诱导大鼠非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)分子作用机制。[方法]以高脂饲料喂养40只雄性SD大鼠8周,随机分为正常组、模型组、罗格列酮组、二陈汤组、苓桂术甘汤组,于第9周起分别给予罗格列酮剂量1mg·kg-1、二陈汤4.52g·kg-1、苓桂术甘汤组3.31g·kg-1治疗4周。12周后将大鼠处死并观察药物对大鼠肝功能的影响,并对肝组织进行常规苏木精-伊红染色,观察病理改变;Western blot检测二陈汤与苓桂术甘汤以及两方含药血清对NASH大鼠肝组织以及经软脂酸刺激肝细胞的肿瘤坏死因子TNF-α与核转录因子NF-κB蛋白表达的影响。MTT法检测不同浓度软脂酸对大鼠肝细胞增殖的影响,以及二陈汤与苓桂术甘汤含药血清对软脂酸的拮抗作用。[结果]与模型组比较,罗格列酮和苓桂术甘汤可有效降低NASH大鼠血清ALT、AST(P0.05),同时改善肝脂肪变性的严重程度和降低TNF-α和NF-κB蛋白的表达(P0.05)。与模型组比较,虽然二陈汤治疗后NASH大鼠肝组织TNF-α和NF-κB蛋白表达显著性下降(P0.05),但是血清ALT、AST并未显著性降低(P0.05),苓桂术甘汤含药血清能明显改善软脂酸对肝细胞增殖的抑制(P0.05)。与模型组比较,二陈汤与苓桂术甘汤含药血清均能抑制软脂酸刺激的肝细胞TNF-α和NF-κB蛋白表达(P0.05)。[结论]罗格列酮、二陈汤、苓桂术甘汤能改善大鼠肝脏脂肪变性,降低TNF-α和NF-κB蛋白表达。软脂酸可以明显抑制肝细胞增殖率,罗格列酮与苓桂术甘汤含药血清能拮抗软脂酸对肝细胞增殖的抑制。苓桂术甘汤通过抑制NF-κB蛋白表达,减少TNF-α表达,从而减轻肝脏炎性损伤,进而达到治疗NASH的作用。     

COPD患者肺组织中NF-κB和GRP78的表达水平及意义

目的 探讨COPD患者肺组织中核因子κB (NF-κB)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、内质网应激标志蛋白葡萄糖调节蛋白78 (glucose-regulated protein 78,GRP78)的表达及其意义.方法 取22例COPD患者及20例非COPD患者肺组织标本,用免疫组织化学法检测肺组织NF-κB、TNF-α及GRP78的表达.结果 COPD组(12 963±863、62 333±1 161、37 182±1 211)与非COPD组(1 877±347、48 765±932、11 387±881)比较,肺组织NF-κB、TNF-α及GRP78表达均明显增强;肺组织NF-κB表达与TNF-α表达、TNF-α表达与GRP78表达、NF-κB表达与GRP78表达均呈明显正相关(r值分别为0.863、0.798、0.752,P值均＜0.01)、肺组织NF-κB表达与GRP78表达均与FEV1/FVC呈明显负相关(r值分别为-0.659、-0.640,P值均＜0.01).结论 COPD患者肺组织中NF-κB激活,可能通过引起炎症因子如TNF-α表达增加,使内质网负荷加重导致内质网应激,GRP78表达增加.     

苦瓜蛋白通过阻止核因子κB核转位抑制炎性因子生成

目的 研究苦瓜蛋白对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠炎症因子核因子κB(NF-κB)蛋白核转位的影响,探讨苦瓜蛋白抗炎的分子机制.方法 40只6周龄雄性ApoE-/-小鼠,随机分为普食组、高脂高胆固醇组、高脂高胆固醇苦瓜蛋白组、普食苦瓜蛋白组.12周后眼球采血,ELISA测定血浆中炎性因子NF-κB、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6和γ干扰素(IFN-γ)及抗炎因子IL-10的水平,免疫组织化学检测主动脉壁IκB表达,RT-PCR和Western blot检测NF-κB和IκB表达.结果 ApoE-/-小鼠经高脂高胆固醇饲料喂养12周后,血液中炎症因子NF-κB、IL-1β、TNF-α、IL-6、IFN-γ水平均显著高于普食组(P＜0.01,n=5),但抗炎因子IL-10仍维持较高水平.经苦瓜蛋白干预后,血清中炎症因子水平下降,而抗炎因子IL-10水平并不上升.RT-PCR以及Western blot检测结果表明,苦瓜蛋白显著降低高脂高胆固醇饲料喂养小鼠动脉血管壁细胞核内NF-κB蛋白水平,阻止其核转位.与普食组比较,高脂高胆固醇组IκB被显著降解(0.19±0.05比0.74 +0.15,P＜0.05,n=5),但其经苦瓜蛋白干预后,这种降解作用得到显著的抑制(0.19±0.05比0.36±0.07,P＜0.01,n=5).结论 苦瓜蛋白通过减少IκB降解抑制NF-κB蛋白核转位而发挥抑制炎性因子生成的作用.     

CD137信号通过核因子κB影响小鼠主动脉平滑肌细胞活化T细胞核因子c1表达

目的 探讨CD137信号是否通过核因子-κB(NF-κB)调控小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T cells c1,NFATc1)表达.方法 采用组织块贴壁法对正常C57BL/6J小鼠的VSMC进行原代培养.以每孔2×105个VSMC接种于6孔板中培养,待其贴壁后,饥饿24 h,用含10％ FBS+肿瘤坏死因子(TNF-α,终浓度10 ng/ml)的DMEM培养基分别培养细胞0、4、8、12、24、36、48 h后,收获细胞用于CD137 mRNA和蛋白的检测,选取CD137表达最多的时间点进行下一步实验.细胞实验分为3组,即对照组[含10％ FBS、TNF-α(终浓度10 ng/ml)、DMEM培养基共同干预]、刺激组[对照组干预基础上加CD137 mAb激动剂(终浓度10 μg/ml)]和抑制组[对照组干预基础上加PDTC(终浓度30 μmol/L),然后加CD137 mAb激动剂(终浓度10 μg/ml)].加入不同干预因素后继续培养,分别于90 min时收集核内外磷酸化(p)-NF-κB p65、核因子κB抑制蛋白(IKB-α),24 h收集细胞总RNA和NFATc1蛋白备检.逆转录定量聚合酶链反应检测CD137和NFATc1 mRNA表达水平.流式细胞术检测CD137膜蛋白表达水平.蛋白印迹法检测IκB-α、NF-κB p65、p-NF-κB p65和NFATc1蛋白表达水平.结果 (1)TNF-α诱导VSMC表达CD137的结果:TNF-α刺激VSMC 4、8、12、24、36、48 h后,细胞CD137 mRNA表达均上调.RT-PCR结果示,以24 h组CD137 mRNA升高最为显著,以未刺激(即0h)组的细胞为对照进行比较,差异有统计学意义(40.00±2.83比1,P＜0.05).流式细胞术检测亦显示24 h组CD137膜蛋白升高最为显著.(2)各组VSMC中p-NF-κB p65蛋白表达水平的检测结果:刺激组VSMC胞浆中p-NF-κB p65蛋白表达水平高于对照组(8.34±0.28比1,P＜0.05),而IkB-α蛋白表达水平低于对照组(1比2.70±0.28,P＜0.05).抑制组VSMC胞浆中p-NF-κB p65蛋白表达水平低于刺激组(1.15 ±0.14比8.34±0.28,P＜0.05),而IkB-α蛋白表达水平则高于刺激组(1.78±0.74比1,P＜0.05).刺激组VMSC细胞核内p-NF-KB p65蛋白表达水平高于对照组(2.64±0.42比1,P＜0.05),而抑制组表达水平则低于刺激组(2.09±0.12比2.64±0.42,P＜0.05).(3)各组VSMC中NFATc1 mRNA和蛋白表达水平的检测结果:干预24 h后,刺激组VSMC中NFATc1 mRNA表达水平高于对照组(2.07±0.09比1,P＜0.05),NFATc1蛋白表达水平亦高于对照组(1.75±0.07比1,P＜0.05).而抑制组VSMC中NFATc1 mRNA表达水平低于刺激组(1.15±0.07比2.07±0.09,P＜0.05),蛋白表达水平亦低于刺激组(0.90±0.11比1.75±0.07,P＜0.05).结论 CD137信号通过NF-κB p65影响小鼠VSMC中NFATc1的表达.     

罗格列酮对大鼠非酒精性脂肪性肝炎逆转机制的研究

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR-γ）激动剂罗格列酮对库普弗细胞中LPS诱导的IκB激酶-β（IKK-β）表达以及对NASH大鼠肝组织核因子-κB（NF-κB）活性和环氧合酶-2（COX-2）表达水平的影响及意义。方法 采用Ⅳ型胶原酶消化和密度梯度离心的方法分离纯化正常Wistar大鼠库普弗细胞,并应用LPS（1μg／ml）及不同浓度的罗格列酮（10 nmol／L和50 nmol／L）干预培养,收集细胞及培养上清液。体内实验：健康雄性Wistar大鼠随机分为正常组和模型组,后者以高脂饲料（2％胆固醇＋10%猪油＋5％玉米油）喂养复制NASH大鼠动物模型,造模成功后,分别以1 mg·kg^-1·d^-1、4mg·kg^-1·d^-1剂量的罗格列酮和等容积等渗盐水灌胃,实验结束后采集大鼠血清和肝组织标本。RT-PCR检测库普弗中细胞IKK-β、肝组织中COX-2 mRNA的表达,Western blot和电泳迁移率改变分析（EMSA）分别检测库普弗细胞中IKK-β蛋白表达和肝组织NF-κB活性变化,ELISA检测细胞培养上清液及血清中TNFα水平。结果 LPS可显著增高体外培养库普弗细胞中IKK-βmRNA、蛋白的表达及上清液中TNFα水平。模型组大鼠肝组织COX-2 mRNA和蛋白的表达均较正常对照组增强,NF-κB活性与COX-2的表达和血清TNFα水平呈正相关。罗格列酮体外可抑制LPS诱导库普弗细胞中IKK-βmRNA和蛋白的表达,体内通过抑制肝组织NF-κB活化,减少COX-2表达,均表明罗格列酮可通过抑制炎症细胞活化,下调炎症介质基因表达,从而减少了NFα等炎症介质合成、释放,抑制肝脏炎症反应。结论 PPAR-γ特异性激动剂罗格列酮通过干预IKK-β／IκB／NF-κβB／TNFα信号通路而发挥抗炎作用,从细胞分子水平逆转NASH大鼠肝组织的炎症反应,这为临床上有效治疗NASH提供了新思路。     

孟鲁司特钠对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠NF-κB、TNF-α mRNA表达的影响

目的探讨孟鲁司特钠对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠核因子(NF)-κB、肿瘤坏死因子-α信使核糖核酸(TNF-αmRNA)表达的影响。方法选购清洁级SD成年雄性大鼠24只,以薰香烟法和气管注入脂多糖建立COPD大鼠模型,按随机数字表法分为模型组和用药组各12只。模型组给予10 ml/kg生理盐水灌胃,1次/d;用药组给予0.2 ml孟鲁司特钠灌胃,1次/d,两组均连续灌胃4 w。末次给药结束,检测两组支气管肺泡灌洗液白细胞总数和中性粒细胞(PMN)、单核巨噬细胞(AM)绝对计数及NF-κB、TNF-α、TNF-αmRNA表达情况。结果与模型组相比,用药组白细胞总数、PMN、AM计数较低(P<0.05);模型组与用药组TNF-α表达强度分别为(3.30±0.51)、(2.70±0.67),NF-κB表达强度分别为(2.90±0.61)、(2.30±0.71),差异有统计学意义(P<0.05);用药组TNF-αmRNA表达(0.50±0.07)低于模型组(0.63±0.09)(P<0.05)。结论孟鲁司特钠治疗COPD模型大鼠,能抑制NF-κB、TNF-α活性和TNF-αmRNA表达,孟鲁司特钠对COPD具有一定的疗效。     

核因子MF-KB活化和肿瘤坏死因子-α表达在大鼠心肌梗死后心力衰竭中的作用

目的探讨心肌梗死(MI)后大鼠心肌核因子-kB(NF-κB)活化、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达在心室重塑和心力衰竭进展中的作用. 方法结扎大鼠冠状动脉前降支复制MI模型,同时设假手术组(SH)组,4、8、12周后检测血流动力学指标,称取心脏组织湿重.对左室非梗死区心肌组织采用Western-blot法检测TNF-α蛋白表达,电泳动度迁徙率法(EMSA)检测NF-κB活性.     

罗格列酮对非酒精性脂肪性肝炎大鼠环氧合酶-2的调节

目的 探讨罗格列酮在治疗非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠中对过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)、核因子(NF)-κB、环氧合酶(COX)-2的影响.方法 将30只SD大鼠均分为正常组、模型组和罗格列酮治疗组,除对照组外,其余两组予高脂连续饲养12周复制非酒精性脂肪性肝炎(NASH)模型.从第12周开始治疗组每天给予罗格列酮4 mg/kg灌胃8周.第20周末处死动物,收集血清和肝组织,检测肝功能、血脂、糖代谢、氧化还原指标.采用HE和Masson染色观察肝脏病理变化.ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α和前列腺素E2水平.免疫组化法观察肝组织PPARγ、NF-κB和COX-2表达,荧光定量PCR和Western印迹法检测肝COX-2基因和蛋白表达变化.结果 与模型组相比,治疗组脂肪变性、炎性反应和纤维化改善明显(P值均<0.05).同时模型组空腹血糖、血清胰岛素、胰岛素抵抗指数(HOMA-IRI)升高,血清和肝组织脂代谢紊乱,总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、游离脂肪酸(FFA)升高,高密度脂蛋白胆固醇下降.治疗组在罗格列酮治疗后上述指标均明显好转.与模型组相比,治疗组丙氨酸转氨酶和天冬氨酸转氨酶明显下降,血清和肝组织总抗氧化能力、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶明显升高,丙二醛明显下降.免疫组化显示模型组肝PPARγ表达下降、NF-κB和COX-2表达升高.定量PCR和Western印迹法显示模型组肝COX-2表达(0.57±0.08和2.83±0.24)较正常组(0.38±0.03和1.00±0.03)升高(P值分别=0.000和0.004),治疗组COX-2基因和蛋白均明显下降(1.84±0.13和0.55±0.06,P值均<0.01).结论 罗格列酮可减轻氧化应激和胰岛素抵抗,可用于治疗NASH.其机制可能是通过激活PPARγ后抑制NF-κB和COX-2表达实现.     

罗格列酮对非酒精性脂肪性肝炎小鼠肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ mRNA及其蛋白表达的影响

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(pemxisome pmliforator-activated receptor gamma,PPARγ)激动剂罗格列酮对非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)小鼠肝组织PPARγ mRNA及其蛋白表达的影响及其在NASH进展中的作用.方法 健康雄性C57BL/6J小鼠15只,随机分为对照组、模型组和罗格列酮干预组.酶法检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和甘油三酯(TG)水平;光镜下观察肝组织脂肪变程度、炎症活动度和纤维化程度;采用RT-PCR和Western印迹法检测PPARγ和TNF-a mRNA及其蛋白的表达.结果 对照组小鼠肝脏未出现明显的脂肪变、炎症和纤维化,而模型组肝脂肪变及炎症明显,罗格列酮干预组肝脂肪变及炎症均明显减轻.罗格列酮干预组、模型组和对照组肝组织PPARγ mRNA及其蛋白表达依次为0.83±0.01、0.75±0.01、0.72±0.01和0.77±0.00、0.69±0.02、/0.49±0.01(P＜0.01).模型组、罗格列酮干预组、对照组TNF-a mRNA及蛋白表达依次为1.11±0.01、0.99±0.02、0.91±0.00和0.99±0.01、0.60±0.01、0.47±0.01(P＜0.01).结论 在高脂、胆碱一蛋氨酸缺乏饮食诱导的小鼠NASH模型中,肝组织TNF-α活性与NASH的进展有关;PPARγ特异性激动剂罗格列酮可通过上调PPARγ水平而抑制TNF-α表达,进一步阻止NASH的进展,为NASH的靶向性治疗药物的选择提供了新思路.