环氧合酶-2抑制剂西乐葆诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡与线粒体途径的探讨

目的观察西乐葆对人胃癌SGC-7901细胞凋亡的诱导作用,并探讨其诱导凋亡的机制.方法采用噻唑蓝(MTT)法检测SGC-7901细胞的增殖活性,流式细胞仪测定细胞凋亡、线粒体膜电位和胞内游离Ca2+含量.结果 SGC-7901细胞经25、50、100、200μmol/L西乐葆处理4、8、12、24h后,细胞增殖均明显受到抑制,呈时间和剂量依赖性.50μmol/L西乐葆处理SGC-7901细胞4、8、12、24h后,实验组的凋亡率分别为9.2%±0.6%、16.7%±1.6%、20.4%±2.8%和23.9%±2.7%,明显高于对照组的6.8%±0.4%、7.2%±0.3%、7.6%±0.6%和8.3%±0.8%(P<0.05);实验组的线粒体膜电位呈下降的趋势,而胞内游离Ca2+含量则随着时间的延长逐渐增高.结论西乐葆诱导SGC-7901细胞凋亡可能涉及到线粒体途径.     

对胃癌和慢性萎缩性胃炎组织内细胞凋亡的检测与分析

对胃癌和慢性萎缩性胃炎组织内细胞凋亡的检测与分析李月娟刘耀清黄焰古庆阳马立人军事医学科学院放射医学研究所北京１００８５０李月娟，女，１９６３年２月生，博士，助理研究员细胞凋亡是由基因编程控制的细胞自杀过程，是多细胞动物生命现象的重要属性。近年来，人们...     

胃癌细胞中FasL表达及其与细胞凋亡的关系

Fas配体(Fas ligand,FasL)是一种介导细胞凋亡的膜蛋白,属TNF家族成员.目前研究认为FasL是死亡因子,Fas则是它的受体,当FasL与Fas结合时,Fas可向细胞传递"死亡信号",触发Fas所在靶细胞凋亡[1].过去认为人类只有激活的T淋巴细胞有FasL表达[2],但近来发现一些肿瘤细胞亦有FasL表达[3～6].为了解FasL是否在胃癌中表达及其在胃癌发病中的作用,作者采用免疫组织化学方法及脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术对胃癌组织中FasL表达状态及其与细胞凋亡的关系进行了研究.     

凋亡素的克隆及诱导HeLa细胞凋亡

目的：克隆凋亡素（apoptin)的全长基因,在肿瘤细胞HeLa中表达并诱导其凋亡,方法：从CAV病毒基因组TK5803中通过PCR技术扩增凋亡素基因,直接克隆至真核表达载体pCDNA3.1/His/Topo,序列测定证实其正确性,并克隆至pCIneo真核表达载体构建重组表达载体,采用脂质体转染HeLa细胞,转染3d后Honchest33258染色并于荧光显微镜下观察细胞状态,结果与讨论：核酸序列分析证实所克隆的凋亡基因与文献报道的一致,将其成功克隆至真核表达载体,pCDNA3.1/his/Topo和pCIneo,构建了真重组质粒pCIneo-apoptin和pCDNA3.1/His/Topo-apoptin,转染Hela细胞3d后可见明显的细胞凋亡,而只转染空质粒的对照组则较少,表明凋亡素能够有效地诱导HeLa细胞凋亡,本研究为进一步研究凋亡素诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制打下了基础。     

元宝草以RXRα为靶点诱导肺癌细胞凋亡

 目的 利用维甲酸受体(RXRα)为分子平台,从大量中草药提取物库中筛选可治疗肺癌的有效治疗药物,并深入研究其作用机制.方法 实验中使用肺癌细胞系H460.利用配体-受体亲和实验以及报告基因系统筛选可作用于RXRα有效组分或化合物,利用免疫荧光检测RXR在细胞内的分布,用MTT法检测药物对细胞的生长抑制,用DAPI检测细胞的凋亡情况.结果 发现元宝草中含有可结合RXRα并抑制RXRα转录活性的有效组分,这些组分为元宝草的醇提部位,在其馏分中主要位于氯仿萃取部位,这些有效部位可诱导肺癌细胞H460 RXRα出核,其作用依赖于细胞内RXRα的量,而且元宝草诱导RXRα出核在浓度上与细胞凋亡密切相关. 结论中药元宝草提取物中含有可以直接结合RXRα的有效部位,其作用通过诱导RXRα出核和抑制RXRα转录活性而引起肺癌细胞H460的凋亡,这将为分离和开发这一药物提供重要的依据.     

X射线诱导细胞凋亡的机制

细胞凋亡是在基因凋控下的细胞主动死亡过程。X射线作为一种电离辐射,其诱导细胞凋亡的机制目前仍未完全明了,可能存在着与P53、Cty-c、AIF、Bcl-2、Caspase酶等物质密切相关的传导系统。随着对此机制认识的不断深入,必能更好地指导临床对肿瘤等疾病的治疗。     

转化生长因子β1对胃腺癌细胞凋亡诱导的研究

为研究转化生长因子β１能否诱导人胃腺癌ＳＧＣ－７９０１细胞凋亡，运用透射电镜技术了解凋亡细胞超微结构改变，用流式细胞术分析细胞ＤＮＡ，周期变化ＤＮＡ片段改变采用琼脂糖凝胶电泳法，电镜下可见细胞核染色质浓缩，边集，核碎裂及凋亡小体形成，ＤＮＡ梯状电泳带出现ＤＮＡ周期分析显示在整个细胞周期峰群前端存在一个凋亡峰，表明转化生长因子β１可诱导人胃腺癌ＳＧＣ－７９０１细胞凋亡。     

地塞米松对TNF -α诱导的H460细胞增殖的影响

目的:观察地塞米松对TNF -α诱导的肺癌H460细胞增殖的影响.方法:体外培养H460细胞,经TNF -α刺激后,随机分为对照组和实验组,对照组用不含地塞米松的DMEM培养液培养,实验组则分别加入含不同浓度地塞米松的DMEM培养液.通过MTT比色实验观察各组的值.结果:TNF -α( 12.5～100 ng/ml)可...     

Oct4基因沉默对结直肠癌细胞凋亡的诱导作用及机制研究

目的 探讨Oct4基因沉默对人结直肠癌SW480细胞凋亡的影响及其可能机制.方法 将对数生长期SW480细胞分为3组.①空白对照(Con)组:不转染病毒;②阴性对照(NC)组:转染阴性对照病毒;③RNA干扰(RNAi)组:转染Oct4-shRNA慢病毒载体.采用实时荧光定量PCR检测Oct4 mRNA表达;采用Western blotting检测Oct4、p-Akt 蛋白表达;采用流式细胞仪测定Oct4+及CD44+细胞比例变化及肿瘤细胞凋亡情况.结果 与NC组比较,RNAi组Oct4 的mRNA(分别为1.00和0.19±0.02)和蛋白(分别为0.032±0.004和0.007±0.001)表达量均有明显下降(P＜0.0l),Oct4+细胞比例(分别为91.53％和10.70％)和CD44+细胞比例(分别为59.69％和23.58％)明显减少,p-Akt蛋白表达明显受抑(0.11+0.03和0.03±0.01),细胞凋亡明显增加(分别为l2.1％±1.8％和43.2％±4.5％,P＜0.01).结论 沉默Oct4基因可明显减少SW480细胞中Oct4+及CD44+细胞比例,增加细胞凋亡,其作用可能与PI3K/Akt通路有关.     

人突变型TRAIL在大肠杆菌中的表达及诱导多种肿瘤细胞的凋亡

目的：研究突变型肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）的表达及体外诱导多种恶性肿瘤细胞的凋亡作用，为TRAIL临床治疗恶性肿瘤提供实验依据。方法：分段合成TRAIL寡核苷酸，并改变其中90个碱基，然后全长拼接，克服入原核表达载体pGEX-2T，转化E.coli DH 5a,丙基硫代－β-D－半乳糖苷诱导表达，亲和层析分离纯化融合蛋白，凝血酶酶切得到TRAIL蛋白。MTT法和流式细胞仪定量分析纯化产物对多种肿瘤细胞的诱导凋亡作用。结果：突变型TRAIL表达产物为可溶性，对人BGC823胃腺癌，A549肺腺癌，H69小细胞肺癌，KB鼻咽癌，A172人脑胶质细胞瘤，SKNSH人成神经细胞瘤株有明显的诱导凋亡作用，结论：原核表达突变型TRAIL具有明显的诱导多种恶性肿瘤细胞凋亡的作用。     

神经酰胺与辐射诱导细胞凋亡

神经酰胺作为神经鞘脂类的主要成员之一,是一个主要调节细胞活动的第二信使以转导细胞凋亡等细胞生长抑制活动信号为主,研究表明,神经酰胺通路不同水平的功能性变化直接影响细胞的药敏感性和辐射敏感性,肿瘤细胞神经酰胺缺陷可导致肿瘤细胞对药物和电射的敏感性下降。     

TNF-α对大鼠Leydig细胞的作用及机制研究

目的观察TNF-α对睾丸细胞功能的影响并探讨其可能机制。方法通过Percoll不连续密度梯度分离获取大鼠Leydig细胞进行原代培养。HE染色进行细胞形态学观察。Leydig细胞培养48h后在培养液中分别加入不同浓度的大鼠TNF-α,使其终浓度达到0.1、1、10、100ng/ml,分别在培养的第1、2、3、4天取上清,通过放免法测定上清液中睾酮的含量,应用MTT法测定细胞增殖情况,流式细胞术与丫啶橙(AO)染色检测及观察Leydig细胞凋亡情况。结果原代细胞通过提纯后的细胞纯度可达70%~80%。HE染色后可见细胞胞质含量丰富,含有分泌颗粒,胞核圆。TNF-α在0.1~100ng/ml浓度范围内能呈剂量依赖的方式抑制Leydig细胞睾酮的基础分泌。0.1、1、10、100ng/mlTNF-α作用24h后,对Leydig细胞睾酮分泌量的抑制率分别为22.03%、34.98%、52.95%、74.83%。各组Leydig细胞睾酮的分泌量随时间延长呈减少的趋势,但除100ng/ml组外,其他各组各时间点比较差异无统计学意义。高浓度TNF-α(10、100ng/ml)组具有抑制Leydig细胞增殖和促进其凋亡作用,其增殖抑制率分别达到38.35%±4.17%、76.35%±8.65%,而凋亡率分别为13.23%±1.11%、26.43%±5.82%,与对照组比较有统计学意义(P<0.01)。AO染色见高浓度TNF-α(10、100ng/ml)组出现明显的细胞凋亡。结论TNF-α对Leydig细胞睾酮的基础分泌具有抑制作用,在较高浓度时该作用可能与其抑制Leydig细胞增殖并促进细胞凋亡有相关。     

白介素-6对马法兰诱导多发性骨髓瘤细胞KM3凋亡的影响

目的探讨白介素-6（IL-6）在马法兰诱导人多发性骨髓瘤细胞株KM。凋亡效应中的作用及其可能的分子机制。方法运用流式细胞仪技术（FACS）、DNA片段化百分率、凋亡细胞的原位检测（TUNEL法）和Western blot分析，观察II；6对马法兰诱导KM。细胞凋亡的影响及其caspase-3、caspase-8蛋白表达的变化。结果IL-6作用可使马法兰诱导的KM3细胞凋亡减少，同时caspase-3蛋白表达降低。结论1176可通过调节caspase-3、caspase-8表达保护马法兰诱导的KM3细胞凋亡。     

碳离子射线诱导细胞凋亡的研究进展

碳离子射线治疗肿瘤是利用其剂量分布优势,将能量集中于肿瘤组织释放,同时尽量避免损伤周围正常组织。相较于常规光子射线,碳离子不仅表现出上述物理学优势,还具有优越的生物学特性。笔者概述了碳离子射线在物理、生物学方面的特点,并着重综述了其在诱导细胞凋亡方面的进展。     

miR-491-5p对缺氧诱导的滋养细胞凋亡的促进作用及其机制

目的 探讨microRNA-491-5p(miR-491-5p)在缺氧诱导的滋养细胞凋亡中的作用及其对子痫前期的影响。方法 选取人绒毛膜滋养层细胞,分为4组：对照组、缺氧组、缺氧+miR-491-5p mimic组和缺氧+miR-491-5p inhibit组。采用细胞活力染色检测滋养细胞凋亡情况,qRT-PCR检测miR-491-5p的表达,TargetScan数据库预测miR-491-5p的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证miR-149-5p与B-细胞淋巴瘤因子2样蛋白2基因(BCL2L2)的靶向关系。miR-491-5pmimic和inhibitor分别转染滋养细胞后,qRT-PCR检测miR-491-5p的表达,Westernblotting检测BCL2L2蛋白的表达改变,细胞活力染色、Western blotting、流式细胞术检测滋养细胞凋亡情况。结果 与对照组比较,缺氧组滋养细胞凋亡率明显增高(P<0.001),miR-491-5p表达明显增高(2.784±0.214 vs. 1.000±0.000,P<0.01);生物信息学预测与双荧光素酶检测报告实验显示...     

14-3-ξ与细胞凋亡

细胞凋亡的调控是一个复杂的过程，14-3-ξ作为凋亡抑制蛋白，近年来对其研究不断深入。本文介绍了14-3-ξ的结构特点以及抑制细胞凋亡的机制，同时简要介绍了该蛋白的配体类型及其拮抗剂的应用。     

肿瘤坏死因子-α诱导蛋白-8样分子2对小鼠调节性T细胞免疫调节功能的影响

目的 观察肿瘤坏死因子-α诱导蛋白-8样分子2(tumor necrosis factor -αinduced protein 8 like -2,TIPE2)在CD4+ CD25+调节性T细胞(CD4+ CD25 +Treg细胞)中的表达,并进一步分析其对CD4+ CD25+ Treg细胞免疫抑制活性的影响. 方法 免疫磁珠法分选正常BALB/c小鼠脾脏CD4+ CD25+ Treg细胞.采用RT - PCR和Western blot技术分别从mRNA和蛋白水平检测CD4+ CD25+ Treg细胞细胞内TIPE2表达.进一步应用小RNA干扰技术(siRNA)沉默TIPE2表达,流式细胞术观察TIPE2对T淋巴细胞毒性相关抗原(CTLA) -4及叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)表达的影响,ELISA法检测CD4+ CD25+ Treg细胞分泌IL - 10和转化生长因子(TGF)-β水平,并通过MTT比色试验观察效应T细胞增殖活性的改变. 结果 RT - PCR分析在CD4+CD25+ Treg细胞中检测到147 bp大小的特异性TIPE2目的基因条带.Western blot检测证实CD4+CD25+ Treg细胞中存在清楚的TIPE2条带,相对分子质量为21 000.siRNA处理CD4+ CD25+ Treg细胞后,经抗CD3/CD28刺激活化的CD4+ CD25+ Treg细胞培养24h时CTLA -4和Foxp3表达明显下降(P＜0.01),同时IL - 10和TGF -β生成量显著减少(P＜0.01);此外,CD4+ CD25+Treg细胞对CD4+ CD25 -T细胞的抑制功能明显减弱(P＜0.05). 结论 TIPE2作为一种重要的负向调控分子,在CD4+ CD25+ Treg细胞中表达并影响CD4+ CD25+ Treg细胞的免疫抑制功能.     

熊果酸对体外胃癌细胞Mcl - 1基因表达的影响

目的：观察熊果酸（ursolic acid）对体外胃癌细胞凋亡相关基因Mcl-1表达的影响。方法：胃癌细胞株（SGC-7901）分为对照组和熊果酸不同浓度组,将终浓度分别为1、5、25p,mol／L的熊果酸加入培养液中,观察胃癌细胞形态学变化,测定各组熊果酸作用2、8、24h后细胞凋亡率（流式细胞术）、Mcl-1转录及蛋白表达变化（RT—PCR法和Westernblot法）。结果：与对照组比较,熊果酸不同浓度组出现细胞皱缩、脱壁、细胞漂浮及细胞破碎现象,细胞凋亡率增加,Mcl-1转录及蛋白表达水平下降,有明显的药物作用时间和浓度依赖关系。结论：熊果酸能提高胃癌细胞凋亡发生率,降低Mcl-1基因的表达。     

敲低细胞角蛋白18对氧化应激诱导细胞凋亡的影响

目的研究氧化应激条件下中间纤维蛋白细胞角蛋白(cytokeratin)的抗凋亡作用。方法利用RNA干扰(RNAi)技术敲低细胞内细胞角蛋白18(CK18)的表达,免疫印迹法检测细胞角蛋白的表达水平,并通过A549细胞建立细胞角蛋白敲低稳定细胞系。利用免疫荧光染色技术观察细胞角蛋白对细胞骨架的影响。利用流式细胞技术检测细胞角蛋白对细胞内ROS(reactive oxygen species)水平及氧化应激诱导细胞凋亡的影响。结果筛选获得3个干扰效果较好的RNAi序列,成功利用A549细胞建立细胞角蛋白敲低的稳定细胞系(A549-KD)。CK18表达敲低导致细胞内多种细胞角蛋白表达广泛下调,并破坏细胞微丝及微管骨架结构。氧化应激条件下A549-KD细胞抗凋亡活性显著降低。结论细胞角蛋白参与维持细胞骨架结构,对抗ROS诱导的细胞凋亡,提示其在细胞的氧化应激过程中发挥保护作用。     

衣霉素对顺铂诱导人宫颈癌细胞凋亡的影响

目的 探讨内质网应激在顺铂诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡中的作用.方法 取人宫颈癌HeLa细胞作为研究对象,实验分为衣霉素(5mg/L)组、顺铂(6mg/L)组、衣霉素(5mg/L)与顺铂(6mg/L)联合给药组、阴性对照组,处理12h后采用MTT法观察细胞生长情况,Hoechst荧光染色检测细胞核形态的变化,免疫印迹法检测凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-4活化情况,间接免疫荧光法检测蛋白质二硫键异构酶(PDI)、磷酸化H2AX组蛋白(γ-H2AX)的表达变化.结果 MTT法检测显示衣霉素组、顺铂组、联合给药组和阴性对照组的细胞增殖抑制率分别为2.65％±2.71％、19.60％±4.34％、44.69％±7.07％、0,除衣霉素组与对照组外其余各组间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).Hoechst染色显示,阴性对照组荧光较弱且均匀,顺铂组和联合给药组部分HeLa细胞核明显变小并呈现致密强荧光,部分细胞核呈碎块状,联合给药组核碎裂细胞比例(44.5％±5.1％)显著高于顺铂组(22.7％±3.9％,P＜0.05).免疫印迹法检测显示,顺铂组裂解Caspase-3、Caspase-4蛋白表达明显高于对照组和衣霉素组,但显著低于联合给药组(P＜0.05).间接免疫荧光法检测显示:顺铂组胞质内无PDI表达,荧光较弱;衣霉素组、顺铂组PDI蛋白均呈颗粒状,分布于核周,荧光较强;联合给药组大部分细胞内PDI呈现明显强荧光,荧光强度明显高于衣霉素组和顺铂组.阴性对照组和衣霉素组细胞核内未见γ-H2AX表达,而顺铂组与联合给药组均可见部分细胞核内出现明显绿色荧光,但两组无明显差异.结论 衣霉素可增加内质网应激水平,促进顺铂诱导HeLa细胞发生凋亡.