视黄酸可控的Fas/RARα融合基因表达载体构建

目的：构建带有视黄酸反应元件（Retinoic acid response element,RARE)的Fas/RARα融合基因表达载体，为研究肿瘤细胞凋亡的可调控性奠定理论与实验基础。方法：采用常规DNA分子克隆方法，借助相关计算机软件，设计融合基因各片段引物，经PCR扩增后重组真核表达载体pRARE-tk-eGFP-Fas/RARα。结果：成功构建融合基因真核表达载体，与预期设计路线相符；检测DNA序列与原始片段相一致。结论：本实验成功构建了pRARE-tk-eGFP-Fas/RARα融合基因表达载体，为进一步在哺乳动物细胞中表达新型融合蛋白、探讨其未来在临床上的应用奠定实验基础。     

二十碳五烯酸联合视黄酸对HL-60细胞凋亡相关基因表达的影响

目的 研究二十碳五烯酸(EPA)是否协同视黄酸(RA)影响HL-60细胞的凋亡及相应分子机制。方法 流式细胞仪(FCM)检测细胞周期相分布以测定细胞增殖和凋亡功能；Western blot法分析bcl-2和caspase—3表达。结果 与单独应用相比，EPA和RA联合应用可增强HL-60细胞的调亡效应，以及下调节bcl—2和增强caspase-3基因表达。结论 EPA和RA联合应用对HL-60细胞凋亡的增强效应，可能与它们增强caspase-3和降低bcl—2基因表达相关。     

hp450RAI质粒转染对HL—60细胞功能及IFN—α表达的影响

目的探讨细胞内一种细胞色素 P45 0 (hp45 0 RAI,也称 CYP2 6 )表达、视黄酸 (RA)代谢与细胞增殖功能的相互关系。方法采用脂质体介导的质粒转染、流式细胞仪分析、逆转录 - PCR及高效液相色谱 (HPL C)分析等实验技术方法做有关分析研究。结果 12 .5× 10 - 7m ol/ L 全反式 RA(ATRA)处理 HL- 6 0细胞 3d未诱导明显的 hp45 0 RAI表达 ,脂质体介导的质粒转染可使 HL- 6 0细胞稳定表达 hp45 0 RAI;2单纯 hp45 0 RAI转染未对 HL- 6 0细胞 ATRA代谢及 ATRA诱导的 HL- 6 0细胞增殖抑制产生显著影响 ,而联合应用 P45 0酶抑制剂 Ketoconazole或 IFN- α则使 HL- 6 0细胞 ATRA代谢减慢 ,ATRA增殖抑制作用增强。结论 RA敏感 HL- 6 0细胞中影响 RA代谢的主要细胞色素 P45 0可能并非 hp45 0 RAI,P45 0酶抑制剂或IFN- α能协同 ATRA抑制细胞增殖 ,后者可能与 HL- 6 0细胞 ATRA代谢减慢及 IFN- α表达增强有关。     

IFNα高表达对视黄酸诱导HL-60细胞增殖、分化的影响

目的　探讨IFNα基因转移与ATRA对HL 6 0细胞增殖抑制和诱导分化的协同作用。方法　选择对视黄酸类药物比较敏感的HL 6 0细胞株作为实验对象 ,以逆转录病毒载体pLXSN IFNα5经PA317细胞包装后感染HL 6 0细胞 ,RT PCR检测有IFNαmRNA表达 ,用ELISA检测IFNα分泌量 ,再以 2 .5× 10 - 7mol LATRA处理转染和未转染细胞 ,用流式细胞仪和NBT还原实验观察细胞的增殖、分化情况。结果　逆转录病毒载体介导IFNα在HL 6 0细胞中高表达 ,2 4h 10 6 个细胞的分泌量为95ng mL ,ATRA对IFNα高表达的HL 6 0细胞的增殖抑制及诱导分化作用显著增强。结论　通过逆转录病毒载体介导使IFNα在HL 6 0细胞中高表达 ,ATRA与HL 6 0细胞中高表达的IFNα具有协同作用。     

洛伐他汀影响HL-60细胞凋亡及其机制的研究

目的　探讨胆固醇合成抑制剂洛伐他汀 (Lovastatin ,LOV)对HL 6 0细胞凋亡的影响及其可能的分子机制。方法　采用光镜、透射电镜、DNA梯形带检测以及流式细胞仪分析等技术方法 ,观察LOV对HL 6 0细胞形态、超微结构和凋亡的影响 ,以及Fas抗原表达的改变。结果　LOV处理HL 6 0细胞 2d后 ,光镜下细胞数量明显减少 ,细胞形态发生不同程度的改变 ;透射电镜下 ,HL 6 0细胞呈现凋亡性变 ;有凋亡特征性的DNA梯形带出现 ;Fas抗原的平均荧光强度增加。结论　LOV不仅能抑制HL 6 0细胞增殖 ,而且可诱导HL 6 0细胞凋亡 ;LOV能上调HL 6 0细胞Fas抗原表达 ,可能是LOV抑制HL 6 0细胞增殖并诱导其凋亡的重要分子机制。     

IFN-α协同全反式视黄酸诱导HL-60细胞增殖分化及其机制的研究

目的:研究全反式视黄酸(ATRA)与IFN-α联合诱导HL-60细胞增殖分化的作用及其机制。方法:用5×10-7mol/L的ATRA以及2×106U/L的IFN-α单独和联合处理HL-60细胞后,采用POD-原位细胞凋亡检测试剂盒检测HL-60细胞的凋亡,通过计算细胞增殖的抑制率检测HL-60细胞增殖的抑制及诱导分化;用高效液相色谱(HPLC)检测细胞悬液中ATRA的含量;用原位杂交法检测细胞色素CYP26的表达。结果:ATRA和IFN-α均能诱导HL-60细胞分化、抑制其增殖并促进其凋亡,且二者具有明显的协同作用。IFN-α ATRA联合处理组的细胞悬液中,ATRA的水平明显高于单纯ATRA处理组(P<0.05)。ATRA处理组CYP26表达的水平明显高于IFN-α单独处理组(P<0.05)。结论:ATRA IFN-α诱导HL-60细胞的分化具有协同作用。其作用可能是由于IFN-α抑制了HL-60细胞内CYP26的表达,导致ATRA代谢速率减慢,使之保持了有效作用浓度所致。     

细胞凋亡基因Fas的研究进展

细胞凋亡的研究方兴未艾，日益引起人们的关注。本文扼要介绍了细胞凋亡相关基因Ｆａｓ的基因结构，表达调控，信号传导在细胞凋亡中的作用及与某些人类重大疾病的关系。     

人重组TFAR19蛋白对白血病细胞株HL-60的促凋亡效应

目的：对一种新发现的凋亡相关基因ＴＦＡＲ１９进行蛋白质水平的促凋亡效应研究,并对其作用机理进行初步的探讨。方法：利用离子交换层析对大肠杆菌表达的人重组ＴＦＡＲ１９蛋白进行纯化,将其加入到培养的白血病细胞株ＨＬ－６０,通过ＤＮＡ片段化,ＰＩ及Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ标记进行流式细胞仪分析,观察ＴＦＡＲ１９蛋白的促凋亡效应。利用ＦＩＴＣ标记ＴＦＡＲ１９蛋白,分析其与细胞的结合及定位。     

细胞凋亡基因Fas的研究进展

细胞调亡的研究方兴未艾，日益引起人们的关注。本文扼要介绍了细胞凋亡相关基因Ｆａｓ的基因结构、表达调控、信号传导和它在细胞凋亡中的作用及与某些人类重大疾病的关系。     

端粒酶在高三尖杉酯碱诱导HL-60细胞凋亡中的作用

目的 研究高三尖杉酯碱（homoharringtonine,HHT)对HL－60细胞端粒酶活性的影响及诱导凋亡作用。方法 采用端粒重复序列扩增法－酶联免疫吸附试验检测了HL－60细胞的端粒酶活性变化；用细胞形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳和DNA片段原位末端标记法检测了细胞凋亡现象。结果 0.005-0.50μg/ml HHT处理HL－60细胞0－48小时，HL－60细胞端粒酶活性呈剂量依赖性和时间依赖性下降。同时，HL－60细胞发生了凋亡。结论 HHT有效抑制HL－60细胞的端粒酶活性，诱导细胞凋亡。     

三七总皂甙诱导HL-60细胞凋亡的研究

目的 :观察三七总皂甙是否能诱导人白血病细胞株HL 60细胞凋亡及相关基因的关系。方法 :取 2 0 0～ 1 60 0ug/ml三七总皂甙处理HL 60细胞 ,光镜下观察细胞形态 ;MTT法测细胞生长抑制率 ;流式细胞仪检测细胞周期 ;免疫组化法检测 p5 3 ,bcl 2凋亡相关基因的表达 ,采用真彩色图像分析仪定量分析免疫组化的结果 ;其结果表明 2 0 0～ 1 60 0ug/ml三七总皂甙可抑制HL 60细胞生长 ,抑制率随着剂量的增加而增加。流式细胞仪检测凋亡峰随药物浓度增大而增加。80 0 ,1 60 0ug/毫升三七总皂甙可使 p5 3基因表达上调 ,bcl 2表达明显下降 ,这两种基…     

环磷酰胺诱导的Fas／FasL依赖的鼠胸腺细胞凋亡

环磷酰胺(Cyclophosphamide,CPA)是具有抗肿瘤及免疫抑制双重药理作用的药物。研究已发现其对肿瘤细胞的杀伤作用是通过诱导细胞调亡而实现的[1],胸腺作为中枢性免疫器官,在免疫疫系统中起重要作用,本研究探讨CPA能否在体内诱导大鼠胸腺细胞调亡及其作用途径。1　材料和方法1.1　材料　雄性SD大鼠,重375～400g,白求恩医科大学动物中心喂养。细胞调亡原位末端标记试剂盒为美国Oncor公司产品,P53、Fas多克隆抗体及ABC试剂盒为Vector公司产品。环磷酰胺为奥地利ASTA药厂产品。1.2　动物处理　实验分两大组:第一组大鼠经灌胃给予0、2、7…     

rhLIF与IL-24基因协同诱导HL-60细胞的凋亡

目的：构建能稳定表达白血病抑制因子（LIF）的转基因细胞,并研究所表达的LIF与IL-24基因在诱导HL-60细胞凋亡方面的协同作用。方法：用真核表达质粒pcDNA3-LIF转染ECV304细胞,G418筛选阳性细胞,收集阳性细胞和培养上清,RT-PCR检测LIFmRNA的表达。同时在已转化重组腺病毒质粒的大肠杆菌中抽提质粒pAdEasy-1-pTrack-CMV-IL-24,用PacI酶切使重组腺病毒质粒线性化,脂质体转染QBI-293A细胞,收获Ad-IL-24腺病毒子。将重组病毒子（Ad-IL-24）感染HL-60细胞,同时加入含LIF的培养上清,并设对照组,RT-PCR检测IL-24 mRNA表达,光镜下观察HL-60细胞形态的变化,激光扫描共聚焦显微镜观察细胞凋亡改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫细胞化学分析凋亡因子的改变。结果：成功构建能稳定表达LIF蛋白的转基因细胞;获得高滴度的重组腺病毒Ad-IL-24,用它感染HL-60细胞后,能检测到IL-24 mRNA的表达。各种检测方法表明LIF、IL-24基因都能抑制HL-60细胞生长、诱导凋亡,且两者具有协同作用。结论：LIF、IL-24基因都能抑制HL-60细胞生长,诱导凋亡,两者具有协同作用。     

hp450RAI质粒转染对视黄酸诱导的HL—60细胞凋亡的影响

目的探讨细胞内细胞色素氧化酶 p45 0 (CYP)表达、视黄酸 (RA)代谢与细胞凋亡的相互关系。方法采用脂质体介导的质粒转染和逆转录 - PCR等实验技术方法做有关分析检测。结果野生型 HL- 6 0细胞 hp45 0 RAI表达微弱 ,脂质体介导的 hp45 0 RAI质粒转染可使 HL- 6 0细胞稳定表达 hp45 0 RAI;hp45 0 RAI转染对 ATRA诱导的 HL- 6 0细胞增殖能力无明显影响 ;野生型 HL- 6 0细胞有较强 Bcl- 2表达 ,ATRA处理抑制未转染细胞 Bcl- 2表达 ,但单纯 hp45 0 RAI转染、hp45 0 RAI转染 CYP抑制剂或加用 IFN- α均能增强 Bcl- 2表达 ,其中以加用 ketoconazole作用更为显著。结论 RA敏感 HL- 6 0细胞中影响 RA代谢的主要 CYP并非 hp45 0 RAI,hp45 0 RAI转染能增强 Bcl- 2表达 ,但对 HL - 6 0细胞增殖能力无明显影响 ,CYP抑制剂、IFN-α可能通过抑制细胞内 RA代谢 ,而增加 HL - 6 0细胞Βcl- 2表达。     

bcl—2癌基因反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸诱导HL60细胞凋亡

目的 不同浓度ｂｃｌ－２癌基因反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸９ＡＳ－ＰＳ－ＯＤＮ,ＡＳＰＯ）对ＨＬ６０细胞凋亡的诱导作用。方法 ＡＳＰＯ与ＨＬ６０细胞共培养后,用吖啶橙（ＡＯ）染色法,流式细胞仪ＤＮＡ倍体分析,电镜观察、ＤＮＡ片段电沪等方法进行观察。结果 ＡＳＰＯ组与正义组比较能特异诱导ＨＬ６０细胞的凋亡,且于培养２４５小时即可出现,此时ＡＳＰＯ５、１０、２０μｍｏｌ／Ｌ浓度各组的凋亡率分别为：（９．７     

转染反义Fas阻断T细胞凋亡及对肿瘤的治疗意义

目的 通过阻断Ｔ细胞的Ｆａｓ信号传递途径,探讨消除肿瘤对Ｔ细胞的攻击及其对肿瘤的治疗意义。方法 流式细胞术、ＲＴ－ＰＣＲ方法检测卵巢癌细胞表达Ｆａｓ和ＦａｓＬ。构建ｐｃＤＮＡ３－反义Ｆａｓ真核表达载体,经脂质体转染Ｊｕｒｋａｔ细胞,流式细胞仪检测Ｆａｓ表达变化。以Ａｎｎｅｘｉｎ－Ｖ和ＭＴＴ法检测转染反义Ｆａｓ基因对Ｊｕｒｋａｔ细胞凋亡的影响。采用ＭＴＴ体外杀伤实验观察３ＡＯ对Ｊｕｒｋａｔ细胞杀伤变化。结果 ６种卵巢癌细胞均表达Ｆａｓ和ＦａｓＬ。ｐｃＤＮＡ３－反义Ｆａｓ基因可以使Ｊｕｒｋａｔ细胞表达Ｆａｓ量下降并部分阻断Ｆａｓ单抗诱导的Ｊｕｒｋａｔ细胞凋亡,３ＡＯ对其杀伤减弱。结论 卵巢癌细胞表达ＦａｓＬ可能是其逃逸免疫监视并产生对淋巴细胞攻击的原因之一;应用反义技术阻断Ｆａｓ表达,可部分阻断Ｆａｓ单抗诱导Ｊｕｒ     

Fas／Apo—1（CD95）系统与细胞凋亡研究新进展

Ｆａｓ／Ａｐｏ－１（ＣＤ９５）系统与机体免疫功能和细胞凋亡的关系十分密切，近几年来一直是免疫学家和临床医师关注的热点。本文综述了Ｆａｓ／Ａｐｏ－１在Ｉｐｒ突变小鼠和胸腺Ｔ细胞发育中研究的新进展，重点阐述了Ｆａｓ／Ａｐｏ－１系统诱导凋亡的分子机理。     

视黄酸对pRARE4-IFNα表达载体转染细胞增殖与凋亡的影响及其机制研究

目的：探讨视黄酸（RA）及其诱导的外源性α－干扰素（TFNα）抗肿瘤的协同效应及其可能分子机制。方法：通过构建的含视黄酸反应元件（RARE）的IFNα表达载体（pRARE4-IFNα)，转染肿瘤细胞后，使外源性IFNα基因的表达受RA的诱导。运用MTT比色法，流式仪分析和RT－PCR等技术方法，观察RA对pRARE4-IFNα转染和未转染的HL－60和MCF－7细胞的体外增殖能力，细胞周期分布和细胞凋亡的影响，以及IRF－1，STAT1和Fas抗原表达的改变。结果：pRARE4-IFNα转染和未转染的HL－60和MCF－7细胞经RA处理后，生长减慢，细胞周期被阻滞在G1／G0期，细胞凋亡率增加，DNA片段化百分率升高，IRF－1和STAT1 mRNA水平明显增高，其中，以pARE4-IFNα转染细胞经RA处理后变化更明显，结论：RA及其诱导的外源性INFα具有协同抗肿瘤作用，上调节IRF－1和STAT1基因表面可能是其主要分子机制。     

病毒感染与Fas／Apo—1和TNF—α介导的肝细胞凋亡

Ｆａｓ／Ａｐｏ－１和ＴＮＦ－α与其相应的受体结合后通过介导复杂的信号传导而表现生活学活性。本文对病毒感染与Ｆａｓ／Ａｐｏ－１和ＴＮＦ－α的关系，Ｆａｓ／Ａｐｏ－１和ＴＮＦ－α介导的肝细胞凋亡的作用机制等进行了综述，为更进一步研究病毒性肝炎提供了新思路。